Summary
Her præsenterer vi en protokol for at implantat brystkræftceller i den mammary fedt pad i en enkel og mindre invasive, og nem at håndtere måde, og denne mus orthotopic bryst kræft model med en ordentlig brystkirtler fedt pad miljø kan bruges til at undersøge forskellige aspekter af kræft.
Abstract
En ordentlig dyremodel er afgørende for en bedre forståelse af sygdomme. Dyre modeller etableret ved hjælp af forskellige metoder (subkutane injektioner, xenografts, genmanipulation, kemiske reagenser induktion, etc.) har forskellige patologiske tegn og spiller en vigtig rolle i at undersøge visse aspekter af sygdomme. Selv om ingen enkelt model kan helt efterligne hele den menneskelige sygdomsprogression, spiller orthotopic organer sygdomsmodeller med en ordentlig stromale miljø en uerstattelig rolle i at forstå sygdomme og screening for potentielle lægemidler. I denne artikel beskrives vi implantat brystkræftceller i den mammary fedt pad i en enkel og mindre invasive, og nem at håndtere måde, og følg metastaser til fjerntliggende organer. Med de korrekte funktioner af primær tumorvækst, brystet og brystvorten patologiske ændringer, og en høj forekomst af andre organer metastase efterligner denne model maximumly humane bryst kræft progression. Primær tumor vækst i situ, lange-Fjern metastaser og tumor mikromiljø af brystkræft kan undersøges ved hjælp af denne model.
Introduction
Brystkræft er den hyppigste årsag til kvindelige dødelighed på verdensplan. Med sin gradvis stigende forekomst, er brystkræft blevet en alvorlig udfordring til folkesundheden1. Murine kræftmodeller er god bro mellem prækliniske og kliniske undersøgelser, og en god efterligne murine sygdom model vil øge nøjagtigheden af forskning i sygdom og medicin.
Primær tumorvækst begynder udviklingen af maligne sygdomme, mens metastaser og komplikationer er hovedårsagerne til dødsfald og fattige liv kvaliteter i de fleste kræftpatienter. Flere murine modeller bruges til at efterligne patologi af menneskelige bryst kræft2,3,4. Xenograft modeller er almindeligt brugt til kræft undersøgelse at forstå de patologisk tegn og skærmen narkotika til sikkerhed og effektivitet5,6,7. Gensplejsede mus (GEM) genereres hen til efterligner human brystkræft ved at målrette visse onkogener eller tumor suppressor gener8. PERLE har en forholdsvis enkel og uniformerede baggrund at forstå rollen af gener i kræft fremskridt; kunstige miljø og baggrunden er dog begrænset til at undersøge for metastaser patologi og beslægtede behandlingsformer9. Menneskelige kræftceller, men med menneskelige patologiske funktioner, kan kun være implanteret i immun-mangelfuld mus, og insufficiens af tumor-vært immun interaktion kan føre til partisk resultater10.
Hvor solid tumor indleder har en direkte indflydelse på de biologiske og patologisk tegn på sygdom11,12,13. Da kræft fremskridt er kompliceret resultatet af interaktioner mellem tumorceller, stromale celler, immunologi celler, inflammatoriske celler, vækstfaktorer og proteaser, primære tumorer implanteret i situ vil give bedre indsigt og efterligne den kræft processen celler mere præcist end tumorer induceret af kemiske agenser eller en subkutan injektion af tumor. Kemiske agenser, der anvendes til at inducere tumorer kan være skadelige for forskere og miljø og er endda forbudt i nogle lande. På grund af fravær af et brystkirtler fedt pad miljø, kan patologiske status for en subkutan injektion afvige med at i virkelige brystkræftpatienter, hvis kræft stammer og irriterer fra brystkirtler fedt pad. Ulemperne ved subkutane injektioner fremme anvendelsen af orthotopic modeller at studere tumorvækst. I tidligere forskning angivet meget metastatisk MDA-MB-231 tumorer, udviklet efter syv orthotopic transplantationscentre, betydningen af injektion placering14. For nylig var orthotopic implantation af brystkræftceller i den mammary fedt pad med kirurgi rapporteret15,16. Med brystkirtler pad miljø, tumorvækst og migration til fjerntliggende organer dækker hele processen af brystkræft på patologisk relevante websteder, hvilket gør denne model en miniature af forløbet af sygdomme hos mennesker. Men efter kirurgi, huden forsøger automatisk at helbrede sig selv, som kan bringe den potentielle risiko for at forstyrre normale bryst kræft opkaldsoprindelse og bias resultaterne.
Vi har sammenlignet med nogle breast cancer modeller og etableret en minimalt invasiv orthotopic model til at undersøge den potentielle virkningen af lægemidler på bryst kræft progression17,18. I denne undersøgelse, en video protokol om, hvordan man orthotopically injicere brystkræftceller i den mammary fedt pad i en enkel, mindre invasiv måde præsenteret. Denne orthotopic injektion metode uden kirurgi er fordelagtige på mange måder. Først, operationen er enkel og hurtig, om 1 minut pr. mus. For det andet med primær tumor foci startende fra de lige patologiske websteder, det dækker hele tumorfremkaldende processen med bryst kræft progression fra tumorvækst til andre organer metastase, som giver en god eksperimentelle dyremodel for at studere den samspillet mellem tumorceller og tumor mikromiljø. Derudover kan det være en værdifuld model til at vurdere effekterne behandling på alle stadier af brystkræft. Målet med denne metode er at give en dyremodel til maximumly efterligne menneskelige bryst kræft progression.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyreforsøg blev gennemført i overensstemmelse med bestemmelse og generelle anbefaling af kinesiske eksperimentelle dyr Administration lovgivning og blev godkendt af den Institution af Animal Care og brug Udvalget af Capital medicinske universitet (Ref ingen. AEEI-2014-052). Balb/c hunmus i alderen 6 til 8 uger blev brugt.
1. forberedelse af celler og dyr
- En dag før operationen, barbere hår omkring de fjerde brystvorter til at udsætte det operationelle område.
- Brug én hånd til at holde musen tæt på bagsiden for at sikre musen ikke vil bevæge sig frit, slå op den mus hen til afsløre dens mave til operatøren, og derefter bruge en anden hånd til at barbere pels omkring de fjerde brystvorter med en elektronisk shaver.
- Lægge et tyndt lag af hårfjerning fløde omkring brystvorterne for 30-60 s, rydde væk creme med destilleret vand og derefter tørre mus med blødt papir.
- På dagen for operationen, indsamle murine brystkræftceller (4T1-luc2), tælle antallet celle og justere celle tæthed til 2 x 105 celler/mL i fosfatbufferet saltopløsning (PBS) i sterilt microcentrifuge rør og holde dem på is. For hver mus, er 1 x 104 celler/50 µL i en 1 mL sprøjte parat.
2. Orthotopic injektion
-
Anæstesi af mus
- Fremkalde anæstesi. Sætte mus i en gennemsigtig beholder og drej på 2% isofluran gas til bedøver mus i ca 5 min, indtil de alle ligge ned og falder i søvn.
- Vedligeholde anæstesi. Overføre mus fra beholderen til enkelte anæstesi masker, sætte nogle vet salve på deres øjne for at undgå tørhed, holde musene dvask med deres brystvorter udsat for operatøren, og lad dem fortsætte med at indånde isofluran gas for et par minutter, indtil den injektion er blevet udført.
- Bekræft succes af anæstesi ved manglen på en tå knivspids tilbagetrækning refleks.
- Anvende oftalmologiske salve for øjnene af musene at undgå øjet tørhed.
Bemærk: Ifølge container størrelse og antallet af individuelle anæstesi masker til rådighed, en gruppe af mus kan være bedøvede sammen og injiceres én efter én under enkelte anæstesi.
-
Udførelsen af injektion
- Bruge en hånd til telt op huden omkring fjerde brystvorten med pincet, til at konfigurere en opløftet "tunnel" for sprøjten til følge. Bruge anden hånden til at holde sprøjten med nålen vendte opad for at komme ind i huden subkutant på 5-10 mm fra brystvorten; derefter følger "tunnel" indtil nål spidsen kommer tæt på brystvorten, omhyggeligt flytte nålen tip i den mammary fedt pad indtil nål-øjet kommer under brystvorten tip, kassere pincet, og injicere cellerne langsomt.
- Drej rundt om nålen lidt og trække sprøjten langsomt; Brug en vatpind til at trykke på nål sår for 10-20 s sørge for der er ingen væske nedsivning.
- Observere den fjerde nippel at bekræfte en vellykket injektion: en hvid gennemsigtig flade kugle med brystvorten som centrum kan observeres (figur 1).
- Holde musene bedøvede for et minut til at undgå at lade mus inddrive og flytte alt for hurtigt, hvilket medfører, injektion sår for at åbne og tumorceller til at lække.
3. analyse af tumorvækst og metastaser
Bemærk: Primære tumorer er identificeret som gennemsigtige eller blister-lignende bump efter injektioner og sfæriske eller ellipsoide solid klumper med brystvorten et par dage senere. Tumorvækst er evalueret af tumor volumen og tumor bioluminescens.
- For at etablere tumor volumen, hold musen med den ene hånd. Udsætte sin mave til operatøren og bruge anden hånden til at caliper tumor længde (L) og bredde (W). Tumor volumen (V) beregnes som følger.
V = (L x W2) / 2 - For at fange tumor bioluminescens, injicere 150 mg/kg D-luciferin på bagsiden af musens hals, 10 min før billeddannelse. Bedøver mus med 2% isofluran gas til 5 min og overføre dem til enkelte anæstesi masker til at lade dem indånde isofluran gas for 5 min længere. Efter producentens anvisninger, fange bioluminescens billeder af den primære tumor og metastase, med auto eksponeringstid, medium binning og f/stop på 1.
4. høst af den primære Tumor og metastase organer for analyse
Bemærk: Når at opnå formålet med dette eksperiment, eller at nå de humane slutpunkt, den primære tumor kan høstes til yderligere undersøgelse. I denne undersøgelse fjernes tumorer på 4-5 uger efter injektionen, når tumor volumen når omkring 800 mm3. Lungerne er fjernet i uge 8.
-
Høst af den primære tumor
- Udfør operationen i en steril hætte til at opretholde en steril atmosfære. Bedøver dyrene af isofluran. Bekræft succes af anæstesi ved manglen på tå knivspids tilbagetrækning reflekser. Anvende oftalmologiske salve for øjnene af mus til at forhindre udtørring.
- Adskille tumor fra huden med en saks, dråbevis painkiller (1 mg/mL tramadol, 1 dråbe af omkring 50 µL pr. mus) for at lindre postoperative smerter.
- Sy i huden med en kirurgisk sutur, afskære overskydende sutur, drapere ned indsnittet.
- Halveret den primære tumor med en skalpel, sætte 1/2 af tumor i 4% PARAFORMALDEHYD for yderligere hæmatoxylin og eosin (H & E) farvning og immunhistokemi, og straks fryse de andre 1/2 med flydende nitrogen til western blotting eller en RNA isolation undersøgelse senere.
- Efter suturering, varme mus med en lampe indtil de inddrive, holde musene i enkelt bure indtil fuldt tilbagebetalt. Løbende administrere 10 mg/kg tramadol med en mundtlig sonde til 3 d efter operationen.
-
Høst af metastaser organer
- Aflive mus med en overdosis af pentobarbital, åbne deres kister med saks, forsigtigt tage ud i lungerne og vaske dem med PBS. Lunge metastase foci kan identificeres som hvide gennemsigtige bump, der er morfologisk forskellig og adskiller sig fra normale pink lungevæv.
- Sætte lungerne i 4% PARAFORMALDEHYD at kontrollere metastaser af H & E farvning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter en vellykket indsprøjtning, en hvid gennemsigtig flade kugle med brystvorten som den ud overflade rundt center kan observeres (figur 1). Primær tumorvækst kan måles ved tumor volumen og levende tumor celle bioluminescens (figur 2). Både tumor volumen og den samlede flux steg under eksperimentet før resektion. På et tidligt tidspunkt, kan ikke metastaser findes, fordi ingen sekundær tumor er sket eller de stærke en bioluminescerende signaler af den primære tumor hindre påvisning af små metastaser foci med svage signaler. Efter resektion, kan en bioluminescerende signalet fra de metastatiske foci af fjerntliggende organer opdaget og analyseret. Morfologi af både primære bryst tumor og afsnittene lungekræft var undersøgt med H & E farvning, mens angiogenese blev undersøgt af farvning tumor med fartøjet markør CD31 for microvessel tæthed (MVD) (figur 3).
Figur 1: billeder før og efter orthotopic injektion på brystkirtler fedt pad for Balb/c hunmus. Handlingen blev udført, og billederne var taget mens musene var under isofluran anæstesi. A, før injektion, B, efter injektion.
Figur 2: volumen og samlede flux af den primære tumor blev målt fra 7 dage efter implantation. Celle suspension implantation genereret en øget primær tumor i volumen, hvilket blev visualiseret og bestemmes ved hjælp af calipre, og samlede flux, som blev målt ved spektrum system. Figuren viser en bioluminescerende billeder af primære tumorer og metastaser observeret på forskellige tidspunkter efter dag 7 af implantation. p/s = fotoner/sekund. Dette tal er blevet ændret fra Zhang et al. 17. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: H & E farvning og immunhistokemisk farvning analyse af primære tumorer og lunge metastase. Væv var fast i 4% PARAFORMALDEHYD, indlejret i paraffin og farves. (A og B) afsnittene var plettet med hæmatoxylin og eosin (H & E). (C og D) afsnit var farves med antiCD31 antistof. Brunlige pletter angivet CD31 + fartøjer. Paneler A og C nuværende primære tumor væv, bedømmelseskomite B og D præsentere lunge metastaser. CD = klynge af differentiering. Forstørrelsen brugt = 200 X. Skalalinjen = 50 µm. Dette tal er blevet ændret fra Zhang et al. 17. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De celler, der anvendes i denne undersøgelse er 4T1-luc2, murint triple-negativ brystkræftceller med luciferase mærkning, som er et nyttigt værktøj til at investere antitumor og antimetastatic virkninger af stoffer på grund af deres meget invasiv art2,19 . Luciferases, stabil til den næste celle generation, bruges til at angive den levende tumor celler, både på mælkekirtlen og andre fjerntliggende organer20. I nogle tilfælde er hypoxi og næringsmangel inden for tumor resultere i et fald i en bioluminescerende signalet, og omfanget af den primære tumor ikke uforeneligt med en bioluminescerende signalet på et senere stadium af tumor progression. Teknik af cellulære orthotopic injektion (COI) af celle suspensioner kan også udføres med andre breast cancer cellelinjer, såsom menneskelige celler MDA-MB-231 (ikke-offentliggjorte data). I denne undersøgelse, med mælkekirtler, og som dens miljø, det er en ordentlig dyremodel til at studere tumor mikromiljø, krydser taler mellem tumorceller og stromale celler. I løbet af tumor fremskridt, i nogle mus kan brystvorten ulcerate, skurv, vokse røde granulationsvæv, flade eller endog forsvinde, svarende til hvad der sker i menneskets brystvorter under brystkræft. Mus kan opleve ubehag med ulcerationer; Human pleje bør tages. Flere brystvorte ændringer er blevet fundet i mus ved hjælp af denne COI teknik end med mikro-invasiv kirurgi teknik. Kirurgisk orthotopic implantation (SOI) histologisk intakt menneskelige tumor væv, sammenlignet med cellulære orthotopic injektion (COI) af celle suspensioner, viser højere ondartet kræft i blæren, lungekræft, mave, nyre og kolon21 efterligne, hvad der er set i patienter22.
Med en høj forekomst af metastaser, især lunge metastase, murine bryst kræft model etableret i denne undersøgelse er en god syngeneic kræft model til at udforske den spontane migration og invasion, sammenlignet med en kunstig metastase model, som en hale vene injektion. Tumor celle aktiviteter og tegn også spille en vigtig rolle i metastaser. Andre cellelinjer, har såsom menneskelige bryst kræftcelle MCF-7, selv implanteret ved en orthotopic indsprøjtning på brystkirtler fedt pad af immun-mangelfuld Balb/c mus, en lavere metastatisk evne. Med ændringen af celler eller mus, som den overdrevne udtryk eller ned-udtryk for et bestemt gen, kan denne teknologi anvendes på flere forskningsområder.
Den afgørende handling af denne injektion er forsigtigt og langsomt flytte op nål-spids fra subkutant i den mammary fedt pad. Når sprøjten spidsen kommer tæt på brystvorten, vil operatøren føler insisteren fra vævet. Da musen kirtel er meget små, kun lidt mere pres er nødvendig for at lade sprøjte spidsen passere gennem insisteren. For meget pres vil resultere i spidsen gennem kirtel og bryde huden, hvilket resulterer i en fejl i injektionen. Logaritmisk-fase celler, en enkelt celle suspension, standard operation protokol (SOP) og operatorer er alle forpligtet til at reducere variation blandt mus. Tumor celle adfærd er vigtige for dannelsen og repeterbare af tumor modeller. Høst logaritmiske fase celler, når de vokser til omkring 80% - 90% sammenløb; for lavt eller for højt celle tætheder vil forstyrre tumor modellen og resultere i variationer mellem eksperimenter. Encellede suspension er også vigtige, da celle klumper resultat i fejlberegninger af celle nummer. Trypsin, et EDTA-oploesning eller andre egnede metoder er valgt at løsrive celler efter eksperiment mål og målene forskeren er interesseret i. Afhængig af sprøjten skala og celle tæthed, injektionsvolumen kan variere fra 25 til 100 µL. Mængden af 1 x 104 til 1 x 106 celler er almindeligt anvendt til at irritere tumorvækst ifølge forskellige celletyper. Trypan blå farvning bruges til at skelne levedygtige celler fra dem, der døde. Mere end 95% cellernes levedygtighed er betragtet som en god situation til at fremkalde en hurtig tumor vækst og metastase i vivo. Disse er også velegnet til eventuelle andre tumor modeller under udarbejdelsen af tumorceller. At korrekt caliper primær tumorstørrelse og få en præcis en bioluminescerende signal, bør pels omkring brystvorten fjernes igen når det gror ud igen. Når den primære tumor vokser til en stor masse og dens en bioluminescerende nalet er for kraftigt for forskere at observere andre organ metastaser (f.eks.lunge metastase), dække det med sort elektrisk tape før bioluminescens billeder er taget, eller fjerne den ved kirurgi. En smertestillende medicin kan bruges til post-operative smerter.
Vellykket podning kan resultere i lunge metastase: med en forekomst på mere end 90%, metastatiske foci på ikke-indsprøjtning bryster, knogle eller lymfeknuder er ganske almindeligt, mens cøliaki metastaser er sjældne. De sekundære tumorer er en gennemsigtig masse og kan skelnes fra det omgivende normale væv. En upræcis anvendelsen af injektionen kan føre til eksperimentel fejl i tumor størrelse og form og metastase steder. Enhver lækage fra det flade område efter injektionen vil reducere tumorstørrelse, enhver lækage fra mælkekirtlen ind i "tunnel" vil resultere i en lang cylindrisk tumor, som vil hindre bestemmelse af tumor volumen, når vi bruger en digital skydelære til måle det. Subkutane injektioner omkring den brystkirtler fedt pad sjældent føre til lunge metastaser og er ikke egnet til fjern metastase-associerede undersøgelse. For at gøre podning stabil og reducere risikoen for udsivning, kan Matrigel bruges når suspendere tumorceller. Men Matrigel er ikke en enkelt opløsningsmiddel, det betragtes som en slags ekstracellulære matrix (ECM), og nogle typer af gel indeholde selv faktorer, som kan forstyrre eksperimenterne. I forsøget sigter mod tumor mikromiljø, ECM, krydser taler blandt tumorceller eller med stromale celler, er det bedre at undgå at bruge Matrigel. For injicerede celler med luciferase tag D-luciferin, substrat af luciferase sprøjtes for at binde levende tumorceller i mus. I denne undersøgelse, dynamikken i bioluminescens i vivo foreslog at en bioluminescerende signalet på 10 minutter efter D-luciferin injektion, nå toppen og kan være stabile i omkring 10-15 minutter (varierende mellem forskellige mus), om med en intraperitoneal injektion eller en subkutan injektion. I betragtning af de testede stof sprøjtes intraperitoneal, at undgå interaktion mellem de testede stof med D-luciferin og reducere irritation af peritoneal er en subkutan injektion foreslået.
Sammenfattende er orthotopic injektion af brystkræftceller skitseret i dette papir en meget nyttig og kraftfulde værktøj i studerer af patologi og progression af brystkræft. Det er let at håndtere og kan udføres hurtigt. Den primære tumor stammer i mælkekirtlen med en høj forekomst af metastaser, der maximumly efterligner den patofysiologiske proces af menneskelige bryst karcinom.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne takke den National Natural Science Foundation of China (grant no. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), Beijing Natural Science Foundation (grant no. 7172095, 7162084, 7162083), og Xu Xia Foundation Beijing Hospital af Traditionel kinesisk medicin (indrømme ingen, xx201701). Vi takker Prof. Chang-Zhen Liu, fra Experimental Research Center, Kina Academy of kinesiske medicinske videnskaber, for en bioluminescerende billeder.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al.
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
