Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Anbürlerde Ovaryalı Izleme ve kontrol için üreme teknikleri

Published: May 12, 2019 doi: 10.3791/58675
Automatic Translation
1,2, 3, 2, 2, 4
1Reproductive Sciences, San Diego Zoo Institute for Conservation Research, 2Recovery Ecology, San Diego Zoo Institute for Conservation Research, 3Menagerie du Jardin des Plantes, Museum National d'Histoire Naturelle, 4Cincinnati Zoo & Botanical Garden, Center for Conservation and Research of Endangered Wildlife

Summary

Amfitiyoloji biyolojisinin incelenmesi, birçok taksononomik grubun organizmalarını kullanan üreme, fizyolojik, embriyolojik ve gelişimsel süreçler hakkında değerli bilgiler sağlar. Burada, biz ayı kontrol ve amfitezya izleme incelemek için kullanılabilecek farklı metodolojiler üzerinde kapsamlı bir rehber sunuyoruz.

Abstract

Anfasya 'da ovaryalı kontrol ve izleme çok yönlü bir yaklaşım gerektirir. Başarılı bir şekilde üreme davranışlarını ve fizyolojik veya moleküler araştırmalar için gamet ve embriyoların satın alınmasına neden olabilecek birkaç uygulama vardır. Anobiyanlar vertebrat araştırma bir-12:45-üçte katkı ve bu bağlamda ilgi bilimsel toplumun üreme süreçleri ve embriyolojik gelişim bilgisine katkılarından biridir. Ancak, bu bilginin çoğu türlerin az sayıda türetilir. Son zamanlarda, dünyanın dört bir yanından amfibiler Decimation muhafazakar tarafından artan müdahale gerekli. Yok olma riskine yanıt olarak ortaya çıkmaya devam eden kurtarma ve güvence kolonileri, mevcut araştırma ve klinik uygulamaları insan bakımı altında tutulan amfitinyalılar için değerli hale getirmek ve yeniden üreme açısından paha biçilmez yapar. Herhangi bir esir nüfusun başarısı, sağlık ve üreme ve onların türünün en farklı genetik temsili ileri taşıyan uygun yavru geliştirmek için yeteneği üzerinde kurulmuştur. Araştırmacılar ve veterinerler için, yumurtalı gelişimi ve sağlığını izleme ve kontrol etme yeteneği, bu nedenle, zorunludur. Bu makalenin odağı izlemek için kullanılan farklı destekli üreme teknikleri vurgulamak için ve, nerede uygun veya gerekli, amfitezya içinde kontrol ovaryalı fonksiyonu. İdeal olarak, herhangi bir üreme ve sağlık sorunları uygun esir yetiştiriciliği ile azaltılmalıdır, ancak, herhangi bir hayvan gibi, sağlık ve üreme patolojileri sorunları kaçınılmaz. Non-invaziv teknikler davranış değerlendirmeleri, görsel muayene ve palpasyon ve vücut durumu endeksleri ve ultrason hesaplanması için morfometrik ölçümleri içerir. İnvaziv teknikler arasında hormonal enjeksiyonlar, kan örnekleme ve cerrahi sayılabilir. Yumurtalı kontrol, gerekli uygulamaya ve ilgi türlerine bağlı olarak bir dizi şekilde kullanılabilir.

Introduction

Amfitisyalılar uzun araştırma disiplinlerinin geniş bir yelpazede tarafından önemli biyolojik ve tıbbi modeller olarak tanınmıştır. Xenopus laevis ve X. Tropicalisgibi belirli türler okurken elde edilen veriler, leopar kurbağası (Lithobates (formerly Rana) pipiens) ve Axolotl insanlar da dahil olmak üzere diğer omurga türleri, bir dizi. Bu ve diğer amfitolans okuyan ortaya çıkmıştır veteriner, Hayvancılık ve yardımlı üreme teknikleri bu başarılı bakım, bakım ve koruma nadir nüfusun sürdürülebilirliği geliştirme ile görevli yardım sağlar 1 , 2 , 3 ' ü , 4' ü yapın.

Faiz in ve ex situ koruma tabanlı yaklaşımlar eşzamanlı kullanımı için risk amfitbian türleri1,2birçok için yok olma gelgit ters kazanıyor. Bu makale anurans ve caudates modeli türlerinde amfibi yumurtalık fonksiyonunu izlemek ve kontrol etmek için şu anda kullanılabilir metodolojileri sağlar. Ayrıca, yumurta tutma ortak üreme patolojisini ele almak için mevcut teknikler sunulmaktadır.

Birçok taksononomik gruplarda olduğu gibi, amfitojen ovaryalı kontrol çevre ve Fizyoloji arasında sıkı senkronize etkileşimler bir dizi içerir. Sıcaklık ve fotoperiod (sıra sinyalleri olarak bilinir), hızla genetik, hormonal ve sirkadiyen süreçlere (Ultimate sinyaller)3,4' e dönüştürüldüğü göz ve beyin tarafından çözülür. Bu makalede yer alan ovaryalı fonksiyonu izlemek ve kontrol etmek için yöntemler invazif ve non-invaziv teknikler içerir. Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (IACUC) araştırma ve öğretim gereksinimleri, hiçbir fiziksel ağrı veya zihinsel sıkıntı için minimal neden olacak ve ağrı giderici ilaçlar5gerektirmez gibi non-invaziv teknikleri tanımlayın. Burada, non-invaziv teknikler görsel muayene ve palpasyon, davranışsal gözlemler, morfometrik değerlendirmeler ve ultrason içerir. Aksine, kan toplama teknikleri, hormon yönetimi ve cerrahi (ovariektomi ve tutulan yumurtaların çıkarılması) bazı ağrı veya rahatsızlık neden olabilir ve anestezi veya sonrası-prosedürel ilaç tedavisi gerektiren invaziv olarak sınıflandırılır.

Non-invazif ovaryalı izleme teknikleri, çoğu esir amfitezya için günlük bakım rutinine kolayca eklenebilir. Türe bağlı olarak, yumurtalık gravida genellikle basit görsel muayene (cam kurbağa) tarafından belirlenebilir. Diğer durumlarda, palpasyon bir dişi Gravid olup olmadığını gösterebilir. Çeşitli vücut durumu Endeksleri (BCI) gibi ağırlık, burun urostyle uzunluğu (Sul), burun-Vent uzunluğu (SVL) ve standart kitle endeksi (SMI) yumurta varlığı veya yokluğunda tahmin etmek için kullanılabilir4,6,7, 8,9. Ancak, çoğu yaş, vücut şekli veya kompozisyon (örneğin, su Over kütle veya yağ)6göz önünde bulundurmayın gibi sonuçların yorumu ile bakım alınmalıdır. Kesin üreme tanılar, yumurtalar döngüsü4,7ile ilgili yumurta gelişimi ve evreleme ile ilgili kazanılan derinlik bilgisi ile ultrason yoluyla elde edilebilir. Ultrason da onaylamak ve üreme patolojileri ve ilişkili fizyolojik koşullar4,8izlemek için bir yol sağlar.

Sağlık durumu ile ilgili bilgi sağlamaya ek olarak, kan örnekleme üreme hormonları ölçmek için kullanılabilir. Eğer hormon profil oluşturma son hedeftir, sistemik steroid veri konabilir stres ile ilgili etkileri önlemek için önemlidir. Potansiyel olarak güçlü bir izleme aracı olmakla beraber, herhangi bir amfitiyolojik türün eksojen hormon yönetimine doğuştan gelen endokrinolojik tepkiler gösteren bir çalışma henüz bulunmamaktadır. Kan güvenle çeşitli sitelerinden alınabilir; kurbağalar bu ventral karın ven içerir, dilli plekbe, femoral ven ve kalp9,10. Caudates 'de kan ventral kuyruk damarından toplanır. İnvasiveness derecesi, gerekli kısıtlama miktarı, anestezi için ihtiyaç, organ hedeflenmekte olan incelik, ve hayvanın büyüklüğü, amfitiye hasta için bir toplama tekniği seçerken dikkate alınması gereken faktörlerdir. Bu makalede, ilk olarak Forzan ve ark.9tarafından açıklanan kurbağaların yüz maksiller veya muskülokutan ven kan toplama tekniği sunacak.

Ovaryalı kontrol türlere özeldir ve hormon protokolleri test edilip optimize edilmelidir. Mevsimsellik ve ilişkili dolaşım hormonu ortamı dışında, yumurtalık kontrolü de sıkıca yaşa bağlı olabilir, zaman esaret ve tekrarlayan hormon yönetimi maruz harcanan, literatürde az bilgi olduğu için11 , 12 tane , 13. üreme davranışları, gamet üretimi, olgunlaşma ve yumurtlama engelleyici için hormon terapilerinin uygulanması, esaret4ile ilişkili ortak üreme sorunlarının çözülmesi için yaygın olarak bildirilen bir yaklaşım haline gelmiştir, 8,14,15,16. Omurgadan üreme kontrol mekanizmaları son derece güvenli olduğundan, çeşitli hormonlar, nöropeptit ve ticari olarak kullanılabilir ilaçlar da güvenilir bir dizi kullanılabilir diğer taksonomik gruplar halinde kullanılan (Tablo 1). Gonadotropin serbest hormon (GnRH) ve insan koryononik gonadotropin (hCG) (veya varyasyonları, yani, pMsg ve eCG)17,18, ya da bireysel olarak ya da kombinasyon halinde, yaygın olarak kullanılmıştır amfitiyoton esir dahil üreme programları: Güney kayalık dağ Boreal (anaxyrus Boreas Boreas)4,19,20; kurbağa, Dusky Gopher kurbağa, Rana sevosa (Langhorne ve ark., yayımlanmamış)7; Gulf Coast waterdog, necturus Beverinin20; Wyoming Toad, Anaxyrus baxteri18; Bullfrog, Rana catesbiana21; Amerikan kurbağası, Anaxyrus americanus22; çim kurbağa, Lymnodyaster tasmaniensis23; Coqui, Eleutherodactylus Coqui24; Xenopus, Xenopus laevis25; Gunther 's toadlet, Pseduophryne guentheri26; Kuzey leoparı kurbağa, Lithobates pipiens; Arjantin Horned-kurbağa, Ceratophrys süslü; Cranwell 'in boynuzlu kurbağa, C. cranwelli; Amerikan toprak-kurbağa, odontophrynus americanus27; ve yangın Salamander (Salamandra)228. Steroid hormonları, progesteron gibi (P4), daha az yaygın olarak bildirilmiştir ama anurans bazı türler ovülasyon ve yumurtlama engelleyici sergileyen iyi bir etkinlik göstermiştir16,18,29. Prostaglandinler (özellikle prostaglandin 2-Alpha (PGF2α)), kortikosteroidler ile birlikte ovulasyona katılıyor30,31,32,34 ve sırasında yüksek seviyelere ulaşmak ovulatuar faz31.

İn vitro çalışmalarda, PGF2α ovülasyon31güçlü bir İndükleme olduğunu, In vivo o Rana muscosaiçinde tutulan yumurta yumurtlama engelleyici teşvik edebilir4,30,32. Hipofiz özler de ovülasyon etkili indükleyiciler vardır15,16,34; Ancak, Biyogüvenlik ve hastalık iletimi için potansiyel çevreleyen endişeleri genellikle bu yaklaşım35göz önüne alındığında esir ıslahı koloniler için caydırıcı vardır.

Bu makalenin son bölümünde cerrahi prosedürler detayları ve yumurtalı çalışmalar veya üreme patolojileri çözünürlüğü ile yardım genişletmek için alternatif yaklaşımlar sağlar. Ovariectomies en yaygın embriyolojik araştırma için oosit elde etmek için amfitiyosit gerçekleştirilir. Ancak, başka bir seçenek başarısız olduğunda da tutulan yumurta için bir çare sağlayabilir. Bu prosedür invazif olmasına rağmen, yumurta kitlelerini açığa çıkarmak için tam anestezi ve kesikler gerektiren, ötenazi gerektirmez. Ayrıca, kısmi ovariektomi sonrası, hayvanlar tam bir iyileşme yapabilir ve yeniden ameliyat sonrası aktif olmaya devam edebilir8,36.

Aşağıda açıklanan protokoller anurans ve Caudates 'de ovaryalı kontrol ve izleme için invaziv ve non-invaziv yöntemleri özetliyor. Anurans teknikleri göstermek için seçilen belirli türler R. mukoza ve X. laevisiçerir. Necturus maculosus, n. Beverinin, n. alabamensis, ve A. mexicanum benzer şekilde caudates teknikleri açıklamak için kullanılan türler içerir.

Protocol

Salamander prosedürleri Cincinnati Zoo & Botanik Bahçesi (CZBG) kurumsal bakım ve kullanım Komitesi (ıesuc) protokolleri 11-106, 13-110, 14-133 ve 15-138 tarafından onaylanmıştır. Tüm kurbağa ve kurbağa prosedürleri San Diego Zoo Global (SDZG), kurumsal bakım ve kullanım Komitesi (ıDIUC) protokolleri tarafından onaylanmıştır: 15-001, 16-005 ve 18-003.

Hayvanların bakımı ve tedavisi, Ulusal Doğal Tarih Müzesi (Paris) (Müze Ulusal d 'Histoire Naturelle-Ménagerie du Jardin des Plantes (MNHN)) Etik Komitesi tarafından onaylanmış, kurumsal ve ulusal yönergelere uygun olarak (Komisyon de génie Génétique, Direction Départementale des Services vétérinaires, Avrupa Birliği Direktifi 2010/63/EU, anlaşma kararı No. C75-05-01-2, deneysel ve diğer bilimsel amaçlarla kullanılan vertebrat hayvanları için Avrupa Sözleşmesi. Bu çalışmada kullanılan tüm protokoller 68-037 referans numarası altında onaylandı.

1. Non-invazif ovaryalı izleme teknikleri

  1. Görsel muayene ve palpasyon
    1. Dişi Anuran 'da aşağıda açıklanan üç yoldan birini tutun.
      1. Kurbağa veya kurbağa bacaklarını halka ve küçük parmağınızla sabitleyin, kurbağa vücudunun dorsal tarafını (karın) indeks ve orta parmak ile ventral tarafı başparmak ile destekler (Şekil 1a).
      2. Kurbağa veya kurbağa karın üzerinde bir başparmak ve hayvanın arkasına güvenli parmaklarının geri kalanı ile baskın elinde tutun. Hayvan karın palpe için baskın olmayan el kullanarak, subdermal kabartmayı olup olmadığını hissediyorum (Şekil 1B).
      3. El avuç üzerinde kurbağa veya kurbağa karın dinlenin, ön kollar indeks parmağı üzerinde drapeli ve üst arkası bir başparmak.
    2. Caudates doğanın tam olarak Akuatik olduğundan, aşağıda açıklanan iki yöntemden biri ile görsel muayene gerçekleştirin.
      1. Hayvan tank suyu içeren ayrı bir 4 L konteyner taşıyın. Kap (kapak güvenli) yukarı tutun ve alt taraftaki el feneri parlıyor, yumurtaların varlığını/yokluğunda görselleştirmek için.
      2. Anestezize içinde MS222 (0,5 g/L; Trigren methanesulfonate, 0,5 M NaHCO ile tamponlu3). İndüksiyon takipte, hayvanı arkasına döndürün ve karını inceleyin.
  2. Morfometrik değerlendirmeler
    1. Semih çınar
      Not: anestezi gerekli değildir.
      1. Kaliperleri kullanarak, kuyunun ucunda vücudun merkezi boyunca, SUL ve SVL (Şekil 2a, B) elde etmek için kuyruk ucunu hayvan ölçmek.
      2. Dijital hassas ölçekte plastik bir konteyner Dara. Hayvanı tarlanmış bir kabın içine yerleştirin ve tartın (Şekil 2C).
      3. Bullkurbağa gibi daha büyük hayvanlar için, ya da alanda ağırlık elde ederken, bir asılı ölçek kullanın (Şekil 2D).
      4. Birçok hikaye türlerinde olduğu gibi, R. muscosa yetişkin kadınlarını erkeklerden daha büyük büyüklüğü ve eller üzerinde düğün (başparmak) pedleri eksikliği ile ayırt (Şekil 3).
      5. Aşağıdaki formül ile genel sağlık temel bir değerlendirme olarak, vücut durumu hesaplayın:
        Fulton 'un indeksi: K = kütle ÷ uzunluk3
        Not: Fulton 's Index kütle ve uzunluk ile ilgili boyutlu bir hacim dengesi kullanır burada 3 kitle ve uzunluğu izometrically ilişkili ölçekleme üs olduğu.
    2. Uyarı tarihi
      1. İçinde anestezileştirilmemiş hayvan yerleştirmeden önce boş bir torba ile Dara ölçeği. Aşırı su (Şekil 2D) tanıtmak değil ve hızlı bir stres tepki olarak hayvanlar salgılar mukus olarak hareket dikkatli olun.
      2. Yeniden mühürlenebilir plastik torba veya genişletilmiş kaliperleri barındırabilir ayrı bir plastik kap altında düz bir konumda bireyler immobilizing tarafından yetişkin önlemleri elde.
      3. Gövde uzunluğunu kaliperlerle ölçün (Şekil 2E).
      4. Büyüme izlemek için kuyruk ucunu (SVL) için burun ucunu ölçmek uyarı.
  3. Davranışsal gözlemler
    1. Fiziksel olarak gerçek zamanlı olarak hayvanları gözlemlemek veya davranış kaydetmek için bir video kamera kullanın.
    2. Hayvanlara yönelik gözlemler, davranışları kategorilere ayırır ve bir ethogram oluşturur (Şekil 4).
    3. Üreme davranışlarını sınıflandırmak
      Not: Şekil 4 anurans gözlenen üreme davranışları bir tür örneklendirir.
  4. Ultrason
    Not: ultrason dönüştürücü seçim, bu durumda, 7,5 mHz doğrusal veya Multi-Frequency (10-6 mHz) Mikro-konveks, Necturus ve 10 MHz prob ve su çözünebilir, R. muscosaiçin tuz içermeyen jel için tavsiye edilir. Semenderler üzerinde ultrason gerçekleştirme anestezi gerektirebilir (talimatlar için bkz. Bölüm 1,5).
    1. Semih çınar
      1. İki kişi kullanarak R. muscosa 'da ultrason gerçekleştirin (Şekil 5A).
      2. İlk kişi: baskın el ile hayvan tutun ve su çözünür, hayvan karın için tuz ücretsiz jel uygulayın.
      3. İkinci kişi (Ultra-sonographer): baskın elinde 10 MHz prob almak ve prob ve jel arasında iyi bir temas yapmak için emin olmak için karın uygulayın.
      4. Tüm yumurtlık görselleştirmek için hayvan karın orta çizgi merkezine doğru kol çukurunun hemen altında aşağı kaydırın.
      5. Ultra-sonographer: çerçeve dondurmak ve ultrason üzerinde istenen görüntüleri yakalamak için baskın olmayan el kullanın.
      6. 4 (Tablo 2, şekil 5B-F) cinsi için kurulan sınıflandırma sistemi ile ovaryalı döngüsünün aşamasını kategorilere ayırın.
      7. Prosedürün sonunda herhangi bir jel hayvan kapalı durulayın.
    2. Uyarı tarihi
      1. Anestezi içermeyen Necturus 'A 2 l tank suyuyla dolu 4 l dikdörtgen konteynırı aktarın.
      2. Oda ışıkları kapalı ve/veya kupa bir el hayvan başı üzerinde çevirerek hayvan hareketini minimize.
      3. Dönüştürücü 1-2 cm 'lik bir mesafeden gövde duvarından konumlandırın.
      4. Ön ayakları için ventral orta çizgi düzeyinde kalp bulun ve sonra distale dönüştürücü taşımak ve yumurtalı doku7incelemek.
      5. Kadınlarda sınıflandırma sistemine göre sınıflandırın4 cins için kurulan (Şekil 6a, B, C).
      6. Hayvanın vücudu dönüştürücü için bir açıyla (yani, doğrusal değil, ama hafif yay ise görüntüleri yakalayarak orta-geç Gravid aşamasında yumurta doğru önlemler elde; Şekil 6B). Aksi takdirde, çakışan foliküller, bireysel yumurta boyutunu ayırt etmek zorlaştırır.
  5. Anestezik indüksiyon ve iyileşme
    1. Semih çınar
      1. Anestezize içinde MS222 (0,5 g/L; Daha önce açıklandığı gibi trigren methanesulfonate (0,5 M NaHCO3) tamponlu.
      2. Hayvan anestezize haline gelmiştir derecesi birincil göstergesi olarak nişan refleks kullanın. Tam refleks kaybı derin anestezinin bir durumunu gösterir.
      3. Hayvan kaldırmak su banyo bazlı anestezi (MS-222) bir kez nişan refleks kaybolur.
      4. Hayvan ıslak (anestezik-ücretsiz de-chlorinated su) havlu ile yerleştirin.
      5. Tüm cerrahi prosedür sırasında hayvan nemli tutmak için emin olun.
      6. Kırmızı kauçuk kateter, unuffed tüpler veya klasik kelepçeli endotrakeal tüpler ile manşet küçük akübyalılar manşonu şişirme olmadan.
      7. Düşük oksijen debisi (0.5-0.75 L/dak) 0.5-1% Isoflurane sağlar.
      8. Prosedürden sonra Isoflurane durdurun ama oksijen akışını 1 dakika tutun.
      9. Hayvanı uzatabilir ve iki dakika boyunca anestezik olmayan adl su ile hayvanı iyice durulayın.
      10. Hayvanı sığ bir miktarda de-chlorinated su veya ıslak bir havluyla koyun.
      11. Yavaşça bir arka ekstremite üzerinde çekerek hayvan kurtarma değerlendir. Ekstremite herhangi bir tepki geri çekilme refleks gösterir.
      12. Diğer geri kazanım göstergelerini (Boğaz hareketi) ve nişan reflekslerini izleyin.
      13. Tüm refleksleri geri döndü ve kalp ve solunum oranları ön anestezik değerlere geri döndü zaman kurtarılan amfitiye düşünün.
    2. Uyarı tarihi
      1. MS222 yılında anestezize Necturus ve amonkül (0,5 g/L tricaine methanesulfonate, 0,5 M NaHCO3ile tamponlu, (MS222) 4 L dikdörtgen tank.
      2. Tank içine bir hava taşı (1 inç) ve hava pompası yerleştirin ve yeterli oksijen sağlamak için sabit bir akışa açın.
      3. Ekstremite fonksiyonu ve nişan refleks kaybolduğunda, hayvan su-banyo tabanlı anestezi (MS-222) çıkarın ve ıslak (anestezik-ücretsiz de-chlorinated su) havlu ile hayvan koymak.
      4. Cilt ve güneş nemi bir sıkma şişesi tank suyu ile koruyun.
      5. Hayvanı kurtarmak için, dikkatle bir hava taşı ile 2 L tank suyu ile dolu 4 L plastik kap içinde ventral yan yere yerleştirin.
        Not: kurtarma güneş ışığı ile başlar, kuyruğunu hareket ettirme ve ileri ve son olarak ekstremite fonksiyonel hareketini ilerletme yeteneği izledi.
      6. Hayvanı orijinal konut tankına geri dönün ve sonraki 24 saat boyunca yakından izleyin.
        Not: amfitidyalılar için diğer anestezi yöntemleri var ve bunlar Wright ve Whitaker8' de açıklanmıştır.

2. invaziv ovaryalı monitör ve kontrol teknikleri

Not: Bu prosedür Forzán et al.10' dan uyarlanmıştır.

  1. Baskın elinde kurbağa tutun ve steril bir silme veya gazlı bez ile kurbağa yüzünün damara tarafı kuru DAB.
  2. Cilt üzerinde çok fazla dispersiyon kan önlemek için yüz kuru.
  3. İğne (26 G 1/2 "ve 27 G 1/2"), eğim yukarı bakacak şekilde, göz çevresindeki yükseltilmiş cilt ve üst çene sırtının bir üçgen (sarı anahat) noktası oluşturmak için bir araya gelen cilt yoluyla (şekil 7a) yakın vena facialis erişim vena veorbitalis posterior.
  4. Yüz damarı sağ gözün altında ve üst çene tepesinin üzerinde delinme, 1-2 arasında başlayarak göz orta çizgisinin geri mm (şekil 7a).
    Not: küçük kurbağalar Için (20 g altında), ekleme noktasını göz orta çizgisinin hemen altındaki bir pozisyona yaklaştırın.
  5. Açı mikrohematokrit tüp aşağı tüp içine kan akışına yardımcı yerçekimi sağlamak için. Kan delindikten hemen sonra akmalıdır (şekil 7b, C).
  6. Kan akışının ilk belirtisi olarak, delinme bölgesinde mikrohematokrit tüpünün ucunu yerleştirin ve 1-2 tam mikrohematokrit tüplerini toplama için uygun kaplarda kan ve yer tüpleri toplamak (şekil 7b, C).
  7. Kan kolayca akmaz, ya da hacim çok düşüktür, hafifçe iğne ekleme vardiya veya yüz diğer tarafına iğne takın.
  8. En az 20 s için delinme sitesine sıkıca gazlı bez basarak kanama durdurun.
  9. 10 dakika boyunca kurbağayı suyun dışında bırakın ve delinme sitesini yeniden açmayın.
  10. Her kurbağa örneklenen için yeni bir iğne ve yeni mikrohematokrit tüpler kullanın.

3. hormon indüksiyon

  1. Hormon hazırlama
    1. Maksimum etkiyi sağlamak için hemen önce hormon enjeksiyonları hazırlayın.
    2. Tablo 1' de listelenen seçimden bir hormon seçin.
    3. Bir μL veya mL/g vücut ağırlığı16kullanılarak enjekte edilecek hormon konsantrasyonu belirleyin.
    4. Aşağıdaki bir hormonun seyreltilmeli: su, fosfat tamponlu tuz (PBS), tuzlu lofibi ringer çözeltisi (SARS) veya tuzlu.
    5. 30-70 g ve 300 μL ağırlığında kurbağalar için 80-110 g (kişisel gözlem)16tartılması Için 200 μL enjeksiyon hacmini aşmayın.
    6. 10-100 g arasında değişen herhangi bir hayvanın hormon yönetimi sırasında bir hayvanın doğru tutma için, Bölüm 1,1 açıklanan tutmak için uygun yöntemlerden herhangi birini kullanın.
  2. Semih çınar
    1. Her bir gram vücut ağırlığı hesaplaması (g/vücut ağırlığı) kullanılarak birey başına gerekli konsantrasyonu hesaplayın.
    2. Hemen önce yönetim, tercih steril seyreltilme yeniden oluşturur.
    3. Enjeksiyondan önce şırıngaya hiçbir kabarcıklar bırakılmadığından emin olun.
    4. Baskın olmayan elinde hayvan güvenli tutun ve baskın el ile enjeksiyon yönetmek.
    5. Hormon özelliklerine göre enjeksiyon yönetin. Anurans en yaygın enjeksiyonları alt-kutanöz vardır, intra periton veya intra kas (Şekil 8).
    6. Karın alt kısmında veya arka bacak yakın vücudun dorsal tarafındaki alt bölümünde IP enjeksiyonları yönetin (Şekil 9).
    7. İntra-kas enjeksiyonları tercihen arka bacaklara yönetin.
  3. Caudates (Necturus)
    1. Yukarıda açıklanan vücut ağırlık yöntemine göre gram başına steril suda tercih edilen hormonu yeniden oluşturur.
    2. Necturus durumunda, 1.7-2.3 μg GnRH/g vücut ağırlığının dozlarını kullanın.
    3. Anestezi odasından Necturus kaldırın ve 45 ° yüzey cerrahi örtü ile kaplı bir yere yerleştirin.
    4. Kafasını aşağı doğru işaret eden hayvanı konumlandırın.
    5. Bir 15-20 ° açısında karın (arka bacak caudal) arka çeyreği yaklaşım. Şırıngaya hava tanıtmamaya dikkat edin.
    6. Bir insülin şırınga ve 27-30 G iğne kullanarak enjekte (IP).
    7. İnsülin şırınga ve 27-30 G iğne kullanarak hormon enjekte.

4. cerrahi

  1. Genel cerrahi hazırlık ve prosedür
    1. Aseptik prosedürleri korumak için, cerrahi site izole etmek için temiz steril plastik perdeler kullanın. Çevreleyen cildi nemli tutarak buharlaşma azaltın.
    2. Hayvan cildi steril su ile temasa geçecektir herhangi bir malzeme nemlendirin. 15 veya 11 numaralı neşter bıçağı ile cilt kesi yapın.
      Not: soğuk çelik, radyocerrahi veya Diode lazer kombinasyonu. Hafif hemorajik prosedürde hemostaz electrocauter veya Diode lazer ile elde edilebilir.
    3. Küçük damarlara kan kaybını takip etmek için lokalize basınç uygulanması için pamuk uçlu mızrak veya apilatörler kullanın.
    4. Küçük sınırlı alanları yerine standart gazlı bez kareler yönetmek için pamuk uçlu mızraklar veya aptiyörler kullanın.
    5. Göz molojik enstrümanlar gibi Micro-Instruments kullanın, ince, küçük ipuçları, hayvanlar üzerinde ameliyat yaparken ' 1 kg 'dan daha az tartım.
    6. Farklı boyutlarda kesikler sığdırmak için plastik, kendinden istinat retraktörler (örneğin, Lone Star RETRACTOR) kullanın.
    7. Koelomik kesikler geri çekilerek için göz kapağı retraktörler kullanın.
    8. Daha küçük hastalarda ameliyat yapmak için gerektiğinde büyütme araçlarını kullanın.
      Not: analjeziye herhangi bir cerrahi prosedür ile ihtiyaç duyulur. Cerrahi sırasında yeterli analjezi yönetmek için başarısızlık normal fonksiyonların gecikmeli dönüş ile ilişkilidir. Dahası, analjezi anestezik ilaçların etkilerini güçlendirir (Tablo 3)34.
  2. Semih çınar
    1. X. laevis , adım 1.5.1 ' de açıklandığı gibi anestezi yaptıktan sonra hayvanı dorsal vurgulanmakla (Şekil 10A, C) olarak konumlandırın.
    2. Cerrahi alan aseptik seyreltik povidone ile nemli steril gazlı bez silerek hazırlayın-iyot çözeltisi (1/10) için sitede 10-15 s veya% 0,75 klorheksidin solüsyon cerrahi sitede en az 10 dakika ameliyat önce35.
    3. Orta koelom (omuz ve Cloaca arasında) bir 3 mm paramedian cilt kesi yapmak bir kalın inme bir No. 15 veya No. 11 neşter kullanarak temiz bir kesi bırakarak.
      Not: bir diyot lazer de cilt kesikler için kullanabilirsiniz.
    4. Karın membranı yükseltin, yapmak ve kesi ve dikkatle bir No. 15 veya No. 11 neşter kullanarak gözden. (Şekil 10B, D).
    5. Koelomik kesikler göz kapağı retraktörler (veya herhangi bir uygun ekipman) ile geri çekin.
    6. Herhangi bir kan damarına bağlanmadan yumurta kitlesi bir kısmını biriktir.
    7. Tam ovariektomi için, çevre kan damarlarını elektrootografya veya lazer diyot ile dağlamak et (Şekil 11).
    8. Monofilament sütür kullanarak, kesilen, çevirici dikiş deseni ile yakın celiotomi kesi.
  3. Uyarı tarihi
    1. Bir kez. mexicanum anestezize edilmiştir, sağ lateral recumbency yerleştirin, sol pelvik ekstremite ile sadece kuyruk tabanına karşı yerleştirilir.
    2. Cerrahi alan aseptik seyreltik povidone ile nemli steril gazlı bez yerleştirerek hazırlayın-iyot çözümü (1:10) 10-15 s için sitede. alternatif olarak,% 0,75 klorheksidin çözeltisi içinde ıslatılmış steril gazlı bez ve cerrahi sitede en az 10 dakika boyunca yer kullanın Ameliyattan önce (Şekil 12A)36,37 .
    3. Vücudu üç eşit parçaya bölmek için omuz ve arka ekstremite arasında bir çizgi çizin (Şekil 12B).
    4. İkinci ve üçüncü parçalar arasında kesi site olun.
    5. Temel kas kavramak ve coelomic Viscera uzak yükseltir.
    6. Küçük hemoistatistikleri, coelomik kas yoluyla ve koelomik boşluğa yavaşça zorlayın.
    7. Koelomik kesikler göz kapağı retraktörler (veya herhangi bir uygun malzeme) ile geri çekin (Şekil 12C).
    8. Tam ovariektomi için, çevre kan damarlarını elektrootografya veya lazer diyot ile dağlamak et (Şekil 12D).
    9. Monofilament sütür kullanarak, kesilen, çevirici dikiş deseni ile yakın celiotomi kesi.

Representative Results

Morfometrik ve üreme

Amfitolojiler kadın üreme statüsü görselleştirme türe bağlı olarak değişir. En etkili yöntem ultrason; Ancak, bazı türler cilt şeffaflık farklı derecelerde gösterebilir (Şekil 13A, B, C). Görsel muayene genellikle, n. alabamensis ve n. maculosus (Şekil 13A, B) ' de gözlenen gibi cilt yarı saydam olduğunda bir Gravid ve olmayan-Gravid dişi arasındaki farklılıkları açıkça göstermektedir; veya cam kurbağa (Şekil 13C) tarafından gösterildiği gibi saydam. N. Beverinin 'nin karın üzerindeki karanlık lekeli deri renklenme bu değerlendirmeyi yasaklamaktadır. R. muscosa'da, cilt saydam değildir, ancak cildin flaccid olduğu için son zamanlarda oviposited olanlar ile karşılaştırıldığında Gravid olan kadınlar arasında belirgin farklılıklar tespit edilebilir, ve hayvan bir göre daha ince (sarı çizgi) görünüyor kadın bu Gravid (mavi çizgi) (Şekil 13D). Tecrübe ile işleyici büyük bir kadın ve bir Gravid bir ama Gravid aşaması onayı ultrason gerektirir arasındaki farkı kendilerini tanımak olabilir. Amfitinyalılar vücut kitle endeksleri bir dizi formül kullanılarak hesaplanabilir, ancak çoğaltılması için öngörü aracı olarak uygulama tartışmalı bir uygulamadır. R. muscosa'daki durumda, Fulton 'un indeksi, sağlık ve üreme durumu arasındaki korelasyon belirsiz kalır.

Üreme davranışları ve ultrason

Sonuçlarımız, yumurtlama engelleyici tahmini için R. muscosa 'da üreme davranışlarını nasıl karakterize ettiğini gösterir (Şekil 4). Birkaç saatten birkaç haftaya kadar süren birkaç aşama, bir erkeğin bir dişi (Şekil 4A) aktif olarak kovalayan, Erkek bağlar ve sıkıca dişi sırt üzerine Tolar, adlandırılan Amplexus (Şekil 4b) Kur dahil. Bir kez amplexed, çifti için Amplexus kalabilir 1 – 5 hafta ve çifti Amplexus ek olarak diğer davranışları gösterecektir. Amplexus erkek yumuşak pompalama şekilde (Şekil 4c) dişinin sıkma içeren çok aktif bir davranıştır; kadın etrafında hareket ve zaman zaman el standı davranışlarını görüntülemek için başlayan (Şekil 4d, E); ve daha yakın oviposition zaman, kadın, bir el-standı, o üzerine yumurta sopa yüzeylere karşı yalın olacak erkek pompa karın şiddetle (Bu örnekte aynı zamanda altında onun karın aşağı sürtünme kadın gözlemlemek mümkündür kolu Cloaca 'ya doğru çukurlar. Bu hangi ile ovalar aşağı yumurta itmek için mekanik bir yol olabilir) (Şekil 4F, G).

Bu çalışmada, ultrason kadın R. muscosa ve necturus üreme statüsü tespit hangi bilgi sağlayabilir gösterilmektedir. Dört gelişme aşaması R. muscosa 'da (Şekil 5c, D, E, F) temsil edilir ve benzer şekilde necturus4 (Şekil 6a, B, C) ile karakterize edilir. Buna ek olarak, kalan yumurta yumurta tutma yol açan atılmak için başarısız olabilir (Şekil 5g, Şekil 15A, B). 1. aşama, foliküllerin görselleştirmek zor olduğu ovanın ardından doğrudan bir yumurtayı gösterir (Şekil 5c). 2. aşama, yumurtalar boyunca dağılmış olan (beyaz flecks), ekjenik noktaların görünümü ile temsil edilir (Şekil 5D). Aşama 2 ve 3, büyük folikülleri (Şekil 5e, F) kaplanmış orta temsil eden karanlık merkezlerle daha büyük, yuvarlatılmış ekojenik noktalarla temsil edilir. 2013-2017 itibaren, esir dişi Necturus aylık bazda ultrasonografi ile incelenmiştir. Her sınav bireylerinde cins için kurulan üreme kriterlerine göre bir not puanı atanmıştır (Tablo 2). Her yıl yeni yumurta geliştiren kadınların yüzdesi 88,2 ± 3,01 (Tablo 5) ortalaması aldı. Yumurta gelişimi yüksek iken, yumurtlama engelleyici sağlanmadı (Şekil 16). Yumurtlama Engelleyici yapılan kadınların çoğunluğu yumurtaların tam tamamlayıcı yatırıldı, bazı bireyler geliştirilen yumurtaların sadece bir kısmını yatırırken. Bu R. muscosa ve necturus dişi, vücut boşluğunda sıvı kazancı ile birlikte tutulan yumurtalar ile dış görünüşüne göre, cilt üzerinde kırmızı yamalar ile genişlemiş kan damarlarıyla tutarlı bir şekilde görsel olarak büyütüldü (Şekil 14A, B ) . Sıvı tutma derecesi daha fazla ultrason yoluyla değerlendirilebilir (Şekil 15B). Her iki tür de, tutulan yumurtalar atrezide yapıldı veya daha fazla ekojenik bir görünüme sahipti (Şekil 14C, D, Şekil 15A).

Hormon yönetimi

Enjeksiyon türünün derinliğine bağlı olarak iğne açısı ve derinliği farklılık gösterecektir. Çoğu enjeksiyon için iğne derinliği R. muscosa gibi türler ile çalışırken ama penetrasyon açısında değişecektir kadar 1 -2 mm derin olmamalıdır. Prostaglandin enjeksiyonları, intra-periton (ip) enjeksiyonları, intra-kas enjeksiyonları benzer bir derinlik ile, R. muscosa arka bacak içine 90 ° ' de açılı bir intra-kas (im) iğne ekleme gerekli, bölgede uygulanan 45 ° ' de koelomik kavite (Şekil 10). Amphiplex yönetimi, kontrol (p = 0,547) ile karşılaştırıldığında hormon tedavi edilen kadınlarda yatırılan yumurtaların sayısını arttırmada önemli bir etkiye sahip değildi, ne de orada (p = 0,673) ya da iribaş için kurtuldu embriyo sayısında herhangi bir fark vardı (p = 0,629) (Tablo 4). Genellikle, kadınlarda yavrular yüzdesi 80% 2011 ' den 2014 ' de% 28 ' e düşürüldü. 2015 yılında yavrular dişi sayısı, 2013 (p = 0,0002), 2013 (p = 0,0001) ve 2014 (p = 0,0026) ama 2011 (p = 0,0885) ' den önemli ölçüde daha yüksektir, bu türün kadınların her yıl doğurmak olmayabilir ve hormonal protokoller refi gerektirir fikri tazeleyen konstrüksyon. Yumurta tutma belirtileri ile R. muscosa kadın IÇIN, PGF2α intra-kas enjeksiyonları dejenere yumurtaların atılmasına indükleme bir% 60 başarı oranı vardı. Ancak, 1 5 kadın enjekte, PGF2α tam atılmasına neden yeterli değildi ve bazı yumurta aşağıdaki üreme sezonu kadar dişi içinde kaldı. Seventeen Necturus dişi alınan LHRH/(GnRH) ve 13 bir kontrol olarak hizmet vermek için steril su bir sahte enjeksiyon aldı (Tablo 5). Toplam olarak, yedi kadın necturus (n = 4 alabamensis, n = 2 Beverinin, n = 1 maculosus) her iki GnRH tedavi (n = 6) ve kontrol (n = 5) bireylere atfedilen onbir tam debriyajlar yumurtlamaya için gitti. Üç kadın (n = 2 Beverinin, n = 1 maculosus) beş kısmi debriyajlar (Şekil 13) oviposited. Bu fenomen üç kontrol dişi benzer şekilde kısmi debriyajlar yatırılmış olarak eksojen hormon tedavisi ile ilişkili görünmüyor (Tablo 5). Oviposition, beş yıl (Tablo 5) boyunca 37 gün (3/31-5/7) Zaman dilimi boyunca meydana gelmiştir. LHRH/GnRH tedavi (41 ± 13,08%, Aralık% 17-67) arasında yumurtlama engelleyici oranlarında fark (P = 0,194) yoktu ve kontrol (66,75 ± 11,79%, Aralık% 50-100) Kadın. LHRH/GnRH tedavi kadınlar yumurta ortalama 7,44 ± 1,41 (Range 3-13) gün sonrası enjeksiyon yatırılır. Türler ve yetersizlik el ile anestezi olmadan dizginlemek için tam su doğası göz önüne alındığında, IP hormonu enjeksiyonları yapmadan önce sedasyon uygun bir seviyede sağlamak için gerekli oldu (bkz Bölüm 3,2 anestezi talimatları için).

Kan toplama, anestezi ve cerrahi

Bu makaledeki kan örnekleme tekniği Forzan ve al. 201310 ' dan alınmıştır ve minimal invaziv ve stres ile R. muscosa 'dan kan toplamak için etkili bir yol kanıtladı. Mikrohematokrit tüpleri kullanarak, yaklaşık 35-45 μL plazma veya serum 70 μL başına tüm kan (Şekil 7) için toplanabilir. R. muscosa maksimum toplama hacmi 1 tam microhematocrit tüp başına 10 g kurbağa, kadar 4 kurbağalar için kurbağa başına tüpler 40 g ve daha büyük. Bu bir muhafazakar toplama hacmi 0,7 mL başına 100 g, 70% maksimum tavsiye 1,0 mL başına 100 g (Allender ve Fry tarafından uyarlanmış, 2008)13.

Anbürlerde anestezi ve cerrahi nadiren bildirilmiştir, ancak dozlarda ve etkinliğinin türe özgü bir şekilde değişebileceğini dikkate almak önemlidir. Örneğin bombina orientalis , MS222 yüksek dozlarda (1 g/l) olsa bile, Boreal toads, Anaxyrus Boreas, 1 g/l hızlı (dakika madde) ve uzun ömürlü (3 + h) (Calatayud, kişisel gözlem) çok düşük bir etkiye sahiptir. R. muscosa 'da anestezi, A. Boreas Boreas için bildirilen dozları gerektirir ve benzer etki ve iyileşme süreleri vardır. Anesteziden önce açlık amfitisküler genellikle genel anestezi altında bile sıkıca kapalı kalması gibi gerekli değildir. Ancak, gerekli görüldüğü takdirde, özellikle anestezik prosedür celomik cerrahi dahil etmek ise, hayvanlar anestezi öncesinde 24 saat tutturulur.

Cerrahi sırasında, nişan refleks hayvan anestezize haline gelmiştir birincil göstergesidir. Nişan refleksliği, bir hayvanın arkasına yerleştirildikten sonra dik pozisyona dönebilmek için yeteneği ve kolaylığidir. Refleks kaybı anestezinin ışık aşamasını göstermektedir. Bir cerrahi uçak, hafifçe onu düzeltmek için ekstremite üzerinde çekerek ve hayvan artık7geri çekebilen olma yeteneğine sahip çekme refleks kaybı ile belirtilir. Üreme cerrahisi hiçbir ezici engelleri ve amfitide hastalar ağırlıklı olarak iyi kan kaybı daha yüksek omurgalı daha fazla toliye iyileşir. Cerrahi hızlı bir şekilde devam etmelidir, başından sonuna kadar yaklaşık 15 dakika sürecek. Adımlar aşağıdaki gibi zamanlanmalıdır: < 1 dakika ilk kesi ve < 2 dakika için celiotomi ve retraktör ekleme, < 2-3 dakika boyunca yalıtım için yumurtalı ve < 1 dakika damar sütür veya Koterizasyon ve cilt sütür < 4 dakika. MS222 protokolleri ile ameliyattan sonra toplam kurtarma süresi yaklaşık 45 dakika ancak bu türler-özel olabilir. A. Boreas Boreas ve R. muscosa kurtarma süreleri 1 – 2 h 'ye kadar daha uzun olabilir. Ameliyat yapılırken, akciğerleri, gastrointestinal sistemi veya damarlı bir mesane delmesini önlemek ve makroskopik bezlere, lenf kalplerine ve kan damarlarına zarar vermemek için özellikle orta ventral ven bakım alınması gerekir. Mevsime bağlı olarak, büyük yağ organları varlığı diğer organların görselleştirme zor yapabilirsiniz. Bir kez gözle görülür bir şekilde uyanık, bir hayvanın yanıt ekstremite stimülasyon, yumuşak bir arka ekstremite germe direnci gibi veya göz çevresindeki alan uyarıldığında yanıp sönen (kişisel gözlem), geri çekme yanıtları olarak sınıflandırılır. Çekim refleksleri ve guler hareketler de dahil olmak üzere diğer kurtarma göstergeleri ile birlikte nişan refleks, iyileşme önemli göstergelerdir.

Yönetim
Ortak ad Tür Hormon Yordam Astar bileşik Astar doz bildirdi Astar dozları sayısı Zamanlama (ovulatuar dozdan önce hr) Son ovulatory/oviposition için uygulanan bileşik (ler) Doz Başvuru
Porto Riko 'da Crested Toad Peltophryne lemur GnRH & hCG ıp Hcg 1,5 ıU/g ile ilgili 2 hCG-48 GnRH HCG GnRHa + hCG 0,2 μg; 4 ıU; 0,5 μg + 4 ıU Calatayud ve ark. yayımlanmamış
Dağ sarı bacaklı kurbağa Rana muscosa Amphiplex, Lut ıp GnRHa (des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9-GnRH) 0,4 μg/g 1 24 GnRH + MET 1 x 0,4 μg/g + 10 μg/g Calatayud ve ark., 2018
PGF2α Im PGF2α 5 NG/g 1 48 PGF2α 5 NG/g
Güney Rocky Dağı Boreal Toad Anaxyrus Boreas boreas hCG, GnRH ıp Hcg 3,7 ıU/g ile ilgili 2 96, 24 hCG + GnRHa 13,5 ıU/g + 0,4 μg/g Calatayud ve ark., 2015
Kuzey kriket kurbağa Acris krepitan Amfiteks suya eklendi (10 mL) Hiçbiri Hiçbiri 0 Na GnRH + MET 0,17 μg + 0,42 μg/μL Snyder et al., 2012
Kuzey leopar kurbağa Litobates pipiens Amfiteks ıp Hiçbiri Hiçbiri 0 24 GnRH + MET 1 x 0,4 μg/g + 10 μg/g Trudeau ve ark., 2010
Arjantinli boynuzlu kurbağa Ceratophyrs ornata Amfiteks ıp Hiçbiri Hiçbiri 0 24 GnRH + MET 1 x 0,4 μg/g + 10 μg/g
Cranwell 'in boynuzlu kurbağa Ceratophrys cranwelli Amfiteks ıp Hiçbiri Hiçbiri 0 24 GnRH + MET 1 x 0,4 μg/g + 10 μg/g
Amerikan toprak kurbağa Odontophrynus americanus Amfiteks ıp Hiçbiri Hiçbiri 0 24 GnRH + MET 1 x 0,4 μg/g + 10 μg/g
Dusky Gopher kurbağa Mehmet sevin hCG, GnRH ıp Hcg 3,7 ıU/g ile ilgili 2 96, 24 GnRH + hCG 1 x 0,4 μg/g + 13,5 ıU/g Graham et al., 2018
Ortak Coqui Eleutherodactylus Coqui Balık, kuş, memelice & GnRH (D-ala, des-GLY, ETH LHRH), hCG Sc Hayır, hayır.  aLHR; fLHRH; GnRHa Hcg Hiçbiri 0 Na Hayır, hayır.  aLHR; fLHRH; GnRHa Hcg 7μg, 33 μg; 28μg; 7μg, 20μg; 5, 10, 15, 20 μg; 165-ıU Michael ve Al 2004
Gunther 'ın toadlet Pseudophryne guentheri GnRH GnRHa 0,4 μg/g 1 26 GnRHa ile veya Prime olmadan 0,4 μg/g Silla 2010
Güvenlik kurbağası Pseudophryne güvenlik Lucrin Sc Lucrin 1 μg 1 26 Lucrin 5 μg Byrne & Silla, 2010
Kuzey corroboree kurbağa Pseudophryne pengilleyi Okan GnRH (D-ala, des-GLY, ETH LHRH) TA Hiçbiri Hiçbiri 0 Na GnRHa 0,5-2,0 μg/g Silla ve ark., 2017
Gulf Coast waterdog Necturus Beverinin [des-Gly10, D-Ala6]-LhRH-RH ethylamide asetat tuz hidrat ıp Hiçbiri Hiçbiri 0 Na LHRH 100 μg/500 μL Stoops ve ark., 2014
Güney çan kurbağa/çimen kurbağa hırırtılı Mehmet aytuğ des-Gly10, D-Ala6-[LHRH] Sc Hiçbiri Hiçbiri 0 Na des-Gly10, D-Ala6-[LHRH] 50 Mann et al., 2010
Fowler 'ın kurbağası Anaxyrus fowleri GnRH, hCG, P4 ıp Hcg 3,7 ıU/g ile ilgili Browne ve al., 2006
Axolotl (Meksika Salamander) Uğur aykan Folikül uyarıcı hormonlar Im Hiçbiri Hiçbiri 0 Na Fsh 400ıU Trottier ve Armstrong, 1974
Afrika pençeli kurbağa Xenopus laevis hCG & P4 su eklendi; ıp PMSG, hCG Marcec, 2016
Kaplan sancak Ayhan erçelik hCG, LH
Wyoming kurbağa (Anaxyrus baxteri) hCG, GnRHa, P4 ıp hCG + GnRHa 100 ıU + 0,8 μg 1 72 hCG + GnRHa 100 ıU + 0,8 μg Browne ve al., 2006
Kuzey leopar kurbağa Litobates pipiens Hipofiz ekstresi (PE), P4, testosteron (T), kortikoone [C], Amphiplex, domperidon (D) SC, ıP Hiçbiri Hiçbiri 0 Na PE, PE + T, PE + P4, PE + C; Amphiplex, GnRH + D ~ 100 ıU (LHRH) 1 mL; PE + 0.002 μg/μL; PE + 0.01 mg/50mL; PE + 0.1 mg/50mL; 0,4 μg/g + 10 μg/g;  0,4 μg/g + D Wright, 1961; Fort, 2000; Trudeau ve ark., 2013
Toprak kurbağa Lenfnodynastes tasmeniensis Hipofiz özler, hCG, GnRHa, PZ ıp GnRHa 0.9-1.2 μg/g + PZ 10 μg/g 1 20 PE PE + hCG; GnRH + PZ PE Vol; PE Vol + 100 ıU hCG; GnRH (0.9-1.2 μg/g) + PZ (10μg/g) Clulow ve al., 2018
Yeşil ve altın çan kurbağa Ozan GnRH ıp GnRHa 10 μg 1 72 GnRHa + hCG 20 μg + 300 ıU Clulow ve al., 2018
Büyük barred kurbağa Mixophyes fasciolatus hCG & PMSG Sc PMSG, hCG 50 ıU & 25 ıU; 1x100 ıU 2 2 PMSG-144 & 96;  hCG-24 Hcg 100 ıU Clulow ve al., 2012
Daha fazla hormon protokolleri ve türler için Wright ve Whitaker, 2001 bakın

Tablo 1: amfitinobi türleri ve bazı eksojen hormonlar literatürde bildirilen olarak onlara test. İnsan koryononik gonadotropin (hCG); Gonadotropin serbest hormon (GnRH); Lutenizing hormon serbest hormon (LHRH); harf m, a ve f ' memeli ', ' kuş ' ve ' balık ' temsil; hamile kısrak serum gonadotropin (PMSG); progesteron (P4); Folikül uyarıcı hormon FSH); Hipofiz ekstresi (PE); testosteron (T); kortikoone (C). Listelenen dopamin antagonistleri şunlardır: domperidon (D); Pimozid (P); Metoklopramid (MET). Amphiplex GnRH ve Metoclopramide27 oluşan bir bileşine verilen adıdır. Lucrin, aktif maddenin Leuprorelin asetat olması ile ticari olarak kullanılabilen bir GnRH agonisti. 4 , 7 , 17 , 18 , 19 , 20 tane , 26 , 27 , 38 , 39 , 40 , 41 , 42 , 43 , 44 , 45

Sınıf Üreme durumu Açıklama
0 Gravid olmayan Yumurta görünmez.
1 Erken Gravid Yumurta görünür (1-2mm boyutunda) yumurta ile ilişkili farklı bir ekojenik çizgi.
2 Orta Gravid Yumurta 2-3mm boyutunda, farklı ekojenik çizgi (ler) her yumurta ile ilişkili.
3 Geç Gravid Yumurta 4-5mm boyutunda, ekojenik çizgiler hala görünür, yumurta anekoik görünümde artış işaretlenmiş.
4 Tutulan yumurta İç yumurta yapısında mevcut olan farklı derece ekojenik malzeme, amorfik şekli ele alır. Bazı çok ekojenik olabilir ve Vücut boşluğunda sıvı tutma ile ilişkili.

Tablo 2: sınıflandırması sistemi esir kadın Nekturus üreme durumu puan için kullanılan ve Rana muscosa ultrasonografi ile.

Uyuşturucu Dozaj ve rota Yorumlar-referans
Buprenorphin 50 mg/kg (hücre içi) Doğu kırmızı lekeli bir Newt (Notophthalmus viridescens) deneysel çalışma. Analjeziye ameliyattan önce verilmelidir. (Koeller, 2009)
Butorphanol 1 – 10 mg/kg (ım veya hücre dışı) Çeşitli özel Respons vardır. 1 mg/kg 'da başlamaları tavsiye edilir.
Butorphanol 0,5 mg/L (banyo) Doğu kırmızı lekeli bir Newt (Notophthalmus viridescens) deneysel çalışma. (Koeller, 2009)
Fentanil 1 mg/kg Analgesia > 4 h, Naltrekson tarafından antagonize (Stevens, 1997)
Meloksikam 0,1 ila 0,2 mg/kg (IM) (Minter, 2011)

Tablo 3: amfitibonların analjezi için protokoller.

Rana muscosa
Yıl 2014 2015
Hayır, ♀ 18 18
Yumurta gelişimi 61% 94%
Kontrol ♀ 4 6
Amphiplex ♀ 4 7
Ortalama gün sonrası amphiplex yumurtlamaya için 10,5 10,9
Oviposition oranı (Amphiplex) 22,20% 33,33%
Oviposition oranı (kontrol) 22,20% 38,88%

Tablo 4: amphiplex arasında üreme parametrelerinin bir karşılaştırma-kontrol esir kadın karşılaştırıldığında tedavi Rana muscosa 2014 ve 2015.

Necturus SP.
Yıl 1 2 3 4 5
Hayır, ♀ 6 7 7 7 7
Yumurta gelişimi 83% 100% 86% 86% 86%
LHRH ♀ 3 5 3 6 0
Kontrol ♀ 2 2 3 0 6
Gün sonrası LHRH için Oviposit 5 7 5,5 (Aralık 3-8) 13 Yok
Ovpozisyon oranı (LHRH) 60% 20 67% 17 Yok
Oviposition oranı (kontrol) 50% 50% 100% Yok 67%
* n = 1 ♀ yumurta gelişimi yok

Tablo 5: LHRH arasında üreme parametrelerinin karşılaştırılması ((GnRH) -tedavi ve kontrol (steril su) esir kadın Necturus 5 yıllık bir süre boyunca üç türden (2012-2017).

Figure 1
Şekil 1: bir kurbağa tutan üç yöntem. (A) prosedür 1. (B) prosedür 2. (C) prosedür 3. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2: morfometrik değerlendirmeler. (A, B) SVL/SUL (C, D). Ağırlık, R. muscosa ve D. necturus. (E). kaliperlerle boyut ölçümü. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: Cinsel dimorfizm, kadınlara kıyasla yetişkin R. muscosa erkeklerde düğün başparmak pedleri ile ayırt edilir. (A) kadın (B) erkek. Alt panel erkek vs kadın uzunluğunu gösterir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: R. muscosa 'da yumurtlama engelleyici 'a kadar uzanan üreme davranışlarını karakterize etme (A) Kur. (B) Amplexus. (C) Amplexus iken erkek sıkma dişi. (D, E) El standında bir kadın. (F, G) Abdominal kasılmalar ve oviposition. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: gelişen evre4' e göre üreme durumu ile R. muscosa A-B üzerinde ultrason yapılmıştır. (A, B) Rana muscosa üzerinde ultrason gerçekleştirme. (C) Sınıf 0. (D) Sınıf 1. (E) Sınıf 2. (F) sınıf 3. (G) sınıf 4 (yumurtalı ve tutulan yumurta) Bu rakam daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 6
Şekil 6: Necturus ultrason görüntüleri. (A) Sınıf 1. (B) Sınıf 2. (C) sınıf 3 yumurta. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7: R. muscosa 'Da kan toplama. (A) vena veorbitalis 'in yörüngenin ortasındaki çene hattının hemen üstündeki yüz damarını delerek kan toplama. (B, C) Kan cildin yüzeyine serbest bırakılır ve bir heparinize kılcal tüp ile toplanır. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 8
Şekil 8: amfitidblerde enjeksiyon yöntemleri. Enjeksiyon türünün derinliğine bağlı olarak iğne açısı ve derinliği farklılık gösterecektir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 9
Şekil 9: R. muscosa 'Da hormonal enjeksiyon. Rana muscosa kadınlarda hormonal tedavi ile yumurtlama engelleyici indüksiyon intra-peritoneally amphiplex enjekte. Yumurtalıklar coelomik boşlukta bulunabilir Bu rakam daha büyük bir sürümünü görüntülemek Için lütfen buraya tıklayın.

Figure 10
Şekil 10: ameliyattan önce hazırlık. (A) cerrahi alanın seyreltmeli povidone-iyot çözeltisi (1/10), Trachycephalus resinifictrix kullanarak aseptik hazırlanması. (B) bir Xenopus laevis veya, (C) lazer-Diode cilt kesi, lithobates catesbeianusiçinde temiz neşter kesi. (D) orta ventral ven zarar önlemek, Trachycephalus resinifictrix. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 11
Şekil 11: Xenopus laevis 'de ovariektomi. (A) yumurta kütlesini ortaya çıkarmak için büyük yağ organları ortaya çıkarın ve taşıyın. (B) herhangi bir kan damarına bağlanmadan yumurta kütlesinde bir kısmı eksiz. (C) tam ovariektomi için elektroautery tarafından kan damarlarını çevreleyen cauterize. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 12
Şekil 12: A. mexicanum 'da cerrahi öncesi hazırlık ve ovariektomi. (A) steril gazlı bez, cerrahi siteye uygulanan% 0,75 klorheksidin çözeltisi (B) ile ıslatılır. Omuz ve arka ekstremite arasında bir çizgi, üç eşit parçaya hayvan böler ve mavi spot kesi üzerinde site işaretler. (C) koelomik kesmeleri göz kapağı retraktörler ile geri çekin. (D) tam ovariektomi için, çevredeki kan damarlarını elektrorootasyon ile dağlamak et. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 13
Şekil 13: üreme aşamalarında görsel değerlendirme. (A, B) Yarı saydam deri, Necturus ile üreme aşamasında görsel değerlendirmeler. (C) saydam cilt, Hyalinobatrachium (cam kurbağa). (D) R. muscosa 'nın (sağ, mavi çizgi) ve sonra da (sol-sarı çizgi) görsel olarak değerlendirilmesi. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 14
Şekil 14: yumurta tutma. (A, B) Kadın Rana muscosa ağır yumurta tutma vakası ile. (C) ultrason eski dejenere gösterir, yumurta (üst) ve daha büyük yumurta (orta ve alt panel) yumurtladı ve koelom sıkışıp. (D) el sıyırma ile alınan yumurta tutulur. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 15
Şekil 15: (A) görünüşte (Daire) ekojenik oldu ve (B) Vücut boşluğunda sıvı tutma (ok) Ile Ilişkili olduğu necturus içinde tutulan yumurtaların ultrason görüntüleri . Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Figure 16
Şekil 16: tam veya kısmi debriyajlar (2013-2017) oviposit değil olanlar ile karşılaştırıldığında ovposited esir dişi Necturus yüzdesi. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Discussion

Doğrudan taşıma, görsel gözlem ve morfometrik önlemler non-invaziv teknikler sağlar ve kadın üreme aşamasının belirlenmesi için ilk değerlendirme kriterlerdir. Ancak bu çalışmada, Gravid yumurtalıkların her zaman palpasyon ile güvenilir bir şekilde tanımlanamaz olduğunu gösterir. Türe bağlı olarak, Gravid yumurtalıkları bazen yarı saydam (Şekil 13A, B) veya hayvanın ventral tarafında tamamen saydam cilt aracılığıyla görsel olarak tespit edilebilir (Şekil 13c). Yumurtalarını tamamlayan kadın, Gravid dişilere kıyasla görünüşlerinde belirgin değişiklikler gösterebilir (örn., gevşek cilt ve vücut kütlelerinin% 30 ' una kadar kaybı, Şekil 13D). Üreme sırasında, erkek ve kadın yumurtlama ve oviposition yakınlığı hakkında bilgi sağlayan bazı davranışlar gösterecektir. R. muscosa ENDİKASYONUNDA, bir dişi ovada yakın olduğunu belirtmekte olan kadın, el stantlarına girerek başlar.

Bir ultrason teknolojisinin anurans ve caudates uygulamasına uygulanması, yumurtaların varlığı veya yokluğu ve yumurtlama engelleyici 'in geliştirilen yumurtaların tam veya kısmi salınımı ile ilişkili olup olmadığına dair tanıya izin verir. Böylece, bu yöntem, abdominal cilt saydamlığına göre değişen bir görselleştirme tekniği yoluyla Gravid/non-Gravid durumunun belirlenmesi ile sınırlı kalmadan üreme durumunun daha eksiksiz ve doğru bir şekilde değerlendirilmesi sağlar, ya da arasında epidermal tutarlılık farklı amfitbiya türleri. Ultrason bağıl kolaylığı ile yapılabilir ve hayvanlar için az stres ile (Şekil 5 ve Şekil 13) ve üreme döngüleri karakterize etmek ve üreme durumu belirlemek için kullanılabilir4. Bu tür aşina olmak için önemlidir; Ancak bu çalışmada, Necturus ve R. muscosa 'nın üreme aşamasında benzer sınıflama aşamalarına izin veren ortak gelişim belirtileri olduğunu gösterdi (Şekil 5). Bu teknoloji sayesinde, yumurta gelişiminin esir Necturus ve R. muscosa 'da yüksek olduğunu ve bu türlerin her ikisi de mevsimsel bir deseni takip ettiğini kanıtıdır. Bu fenomen nedenleri bilinmiyor ve daha fazla soruşturma gerektirir rağmen, ultrason kullanmadan, yumurta tutma ve kısmi oviposition gibi yumurtalı disfonksiyon, çeşitli alanlarda, tespit edilmemiş gitmiş olurdu. Bu tekniğe gelecek uygulamalar, kadınların herhangi bir yıl içinde üreme için seçilip belirlenmeyeceğini ve yumurtlama engelleyici 'in tam olup olmadığını belirlemek için kullanılacaktır.

Bu R. muscosasunulan gibi bir kan toplama protokolü, hem etkili ve hayvan en az sıkıntı nedenleri, esir ve vahşi yakalandı anurans (Calatayud, yayımlanmamış) hormon profillerini incelemek için idealdir. Bugüne kadar, hiçbir bilgi esir R. muscosa yıllık hormon profilleri ile ilgili var ve bu nedenle, hormonlar sağlık ve üreme nasıl etkilediğini hakkında hiçbir bilgi. Dahası, bu türlerin kadınların yıllık yetiştiriciler olmayabilir kanıtlar ile, hormonal profil yumurtlama döngüleri izlemek için başka bir yöntem olacaktır. Ultrason ile birlikte, hormon Analizi kadın oviposition için hazır olacak ne daha iyi tahmin neden olabilir. Ayrıca, geçtiğimiz yıl, esir R. muscosa nüfusunun iki interseks vakası belgelenmiştir. Buna ek olarak, başparmak pedleri gelişimi bazı eski kurucu kadınlarda belirtilmiştir. Bunun nedenleri şu anda soruşturma altında ancak ilk sonuçlar bu testosteron düzeyleri (Calatayud, yayımlanmamış) değişikliklerle ilgili olabilir önerir. Farklı çağların kadınlarda yüksek hormonal döngüleri bize neden kadın erkek ilişkili ikincil cinsel özellikleri ve bu bir yaşlanma nüfusu beklenecek olup olmadığını anlamak yardımcı olacaktır.

Eksojen hormon tedavisi sıklıkla esir amfitiyoslarında karşılaşılan üreme işlevlerinin üstesinden gelmek için kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu çalışmada hem R. muscosa hem de necturus nüfusu için, sırasıyla 2 ve 5 yıllık bir süre içinde hormon tedavi edilen ve kontrol eden kadın arasındaki yumurtlama engelleyici üzerinde önemli bir fark saptanmadı. Bu hormon Yönetim Protokolü, dozlar, astar ve hormon kombinasyonu kullanılan türü için yeterli değildi gösterebilir. Bireysel kadın üreme geçmişlerin Closer Analizi R. muscosa da tedavi edilen kadınlarda gözlenen hormonal etkisi eksikliği için hesap olabilir yıllık üreme, deneyim olmayabilir öneriyor. Çünkü kadınların belirli bir yüzdesi sürekli olarak her yıl üreme atlandı, türlerin doğal tarihini anlamak eksojen hormonlar için bir ihtiyaç olup olmadığını belirlemek yardımcı olabilir ve ne zaman en etkili olabilir. Bu makalede özetlenen prosedürler türlerin bir dizi uygulanabilir, (Tablo 1) ve 5 g 150 g arasında değişen anurans için; daha büyük hayvanlar farklı şırıngalar ve iğne göstergeleri gerektirebilir. Enjeksiyon yeri intra-kas gerektiren bazı hormonlar ile değişir, intra-peritoneal, alt-Kutanöz veya intradermal enjeksiyon (Şekil 7).

Ovariektomi amacıyla cerrahi, embriyolojik çalışmalar için oositler elde etmek için çeşitli amfitiyosit türlerinde kullanılan ortak bir yöntemdir. Ovariektomi de nüfus kontrolü ve yumurta tutma gibi tıbbi konularda endikasyon olabilir. Kısmi ovariectomies durumunda, oocayt hasat araştırma amacıyla gerçekleştirilir, cerrahi hayvan üreme kalmasını sağlamak gerekir. PGF2α yönetimi, dişi R. muscosa'da yumurta tutulumu çözmede bazı söz gösterdi. Birkaç bireyde, PGF2α daha önce tutulan yumurtaların tam birikmesini ortaya çıkarmıştır, ancak diğerlerinde sadece kısmi biriktirme, tüm yumurtaları kaldırmak için manuel sıyırma gerektiriyordu. PGF2α , R. muscosa'da yumurta tutma ameliyatı için alternatif olarak hizmet verirken, diğer amfitobilerde benzer patolojik koşulları gidermek için türlerin spesifik doğrulama gerektirecektir. Cerrahi müdahale Anuran veya caudate hasta için görevlendirilmiş olduğunda, kesikler yapılmadan önce yeterli bir anestezi uçağı sağlamak için gereklidir. Her taxa için bu çalışmada özetlendiği gibi normatif indüksiyon ve kurtarma yanıtlarını değerlendirmek ve izlemek için Astute gözlem becerileri gereklidir. Bir kez spesifik anatomi, uygun bir cerrahi yaklaşım, hemostaz, nazik doku manipülasyon ve yeterli postoperatif yönetimi aşina, üreme ameliyatları ezici bir engel teşkil.

Disclosures

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Acknowledgments

Natalie Calatayud, SDZG 'deki araştırma ortağı pozisyonuna finansal yardım ödüllendirilmesi için ultrason ve Exploradora de ımmuebles, S.A. (EıSA) ile ilgili eğitim ve yardım için Dr. Barbara Durrant 'a teşekkür etmek istiyor. Dr Kylie Cane ve resmi yorumcular (kim onlar olabilir) hakkında yorum için teşekkür ederiz. Jonathan Dain bizim 2018 yaz Fellow, San Diego Zoo Enstitüsü koruma araştırma için fotoğraf sağlamak için teşekkürler (Şekil 1a, B). Monica Stoops, esir Necturus nüfusunun kurulması için mali destek sağlamak Için Hayvanat Bahçeleri ve Akvaryumlar koruma Bağış Fonu ve Disney Worldwide koruma fonu Derneği takdir uzatır. Ayrıca, destek de amfitisli savunucusu Bayan Iris de La Motte özel bağış yoluyla alındı. Teşekkürler, Bay Christopher DeChant ve Dr Mark Campbell araştırma için önemli katkıları için verilir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
GE logiq Book XP and 8C-RS probe 4e10 MHz GE Medical Systems GE medical systems GE logiq Book XP Ultrasound
Aloka 500 7.5mHz linear or IBEX multi-frequency (10-6mHz) micro-convex GE medical systems 8C-RS (10 MHz) Ultrasound probe
BD disposable U-100 insulin syringe (28-29 G needle) Mettler Electronics Corp CA Sonigel Ultrasound gel (water soluble, salt-free)
Hormone
Gonadotropin releasing hormone BACHEM 4012028 synonym: [Des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9]-GnRH acetate
abbreviation: GnRH
Lutenizing hormone releasing hormone BACHEM, Sigma-Aldrich 4033013;     L1898 synonym: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 acetate salt;
[D-Ala6}-LHRH acetate salt hydrate
abbreviation: LHRH
Human chorionic gonadotropin BACHEM, Sigma-Aldrich 4030270, 4018894; C1063, CG5, CG10 synonym: Chorionic gonadotropin-β (109-145)(109-119); Choriogonin, HCG (2,500IU, 5,000IU, 10,000IU)
abbreviation: hCG
Prostaglandin 2α Sigma-Aldrich P40424; synonym: (5Z,9α,11α,13E,15S)-9,11,15-Trihydroxyprosta-5,13-dienoic acid tris salt, PGF2α−Tris;
abbreviation: PGF2α
Follicle-stimulating hormone Sigma-Aldrich F4021, F8174 synonym: porcine, sheep
abbreviation: FSH
Progesterone Sigma-Aldrich 46665;      P7556 synonym: Vetranal; P4 water soluble
abbreviation: P4
Pituitary extract na synonym: Check papers for amphibian species derivation
abbreviation: PE
Pregnant Mare Serum Gonadotropin Prospec;       Lee Biosolutions; Sigma-Aldrich HOR-272;    493-10; 9002-70-4 synonym: Pregnant Mare Serum Gonadotropin
abbreviation: PMSG
Metaclopromide Sigma-Aldrich M0763 synonym: 4-Amino-5-chloro-N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-methoxybenzamide, Methoxychloroprocainamide
abbreviation: MET
Lucrin BACHEM; Sigma-Aldrich 4033014;   L0399 synonym: Leuprorelin acetate
abbreviation: Lucrin
Lutalyse Pfizer synonym: PGF2α - Dinoprost tromethamine
abbreviation: Lut
Pimozide Sigma-Aldrich P1793 synonym: 1-[1-[4,4-bis(4-Fluorophenyl)butyl]-4-piperidinyl]-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one
abbreviation: PZ
Amphiplex see above synonym: Gonadotropin releasing hormone + metoclopramide
abbreviation: GnRH + MET
Ovopel Ovopel na synonym: GnRHa + dopamine receptor antagonist (administered 1 pellet/ kg)
abbreviation: Ovo
Ovaprim Pentair aquatic eco-systems Ova10 synonym: Salmon gonadotropin + domperidone
abbreviation: Ova
Domperidone Sigma-Aldrich D122 synonym: 4-(5-Chloro-2-oxo-1-benzimidazolinyl)-1-[3-(2-oxobenzimidazolinyl)propyl]piperidine
abbreviation: DOM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Conde, D. A., Flesness, N., Colchero, F., Jones, O. R., Scheuerlein, A. An emerging role of zoos to conserve biodiversity. Science. 331 (6023), 1390-1391 (2011).
  2. Conde, D. A., et al. Zoos through the Lens of the IUCN Red List: A Global Metapopulation Approach to Support Conservation Breeding Programs. PLoS ONE. 8 (12), e80311 (2013).
  3. Morrison, C., Hero, J. -M. Geographic variation in life-history characteristics of amphibians: a review. Journal of Animal Ecology. 72 (2), 270-279 (2003).
  4. Calatayud, N. E., Stoops, M., Durrant, B. S. Ovarian control and monitoring in amphibians. Theriogenology. , 70-81 (2018).
  5. National Research Council. Institutional Animal Care and Use Committee Guidebook. , (2010).
  6. Peig, J., Green, A. J. New perspectives for estimating body condition from mass/length data: the scaled mass index as an alternative method. Oikos. 118 (12), 1883-1891 (2009).
  7. Graham, K. M., Langhorne, C. J., Vance, C. K., Willard, S. T., Kouba, A. J. Ultrasound imaging improves hormone therapy strategies for induction of ovulation and in vitro fertilization in the endangered dusky gopher frog (Lithobates sevosa). Conservation Physiology. 6 (1), coy020 (2018).
  8. Wright, K. M., Whitaker, B. R. Amphibian Medicine and Captive Husbandry. , Krieger Publishing Company. (2001).
  9. Forzán, M. J., Vanderstichel, R. V., Ogbuah, C. T., Barta, J. R., Smith, T. G. Blood collection from the facial (maxillary)/musculo-cutaneous vein in true frogs (family Ranidae). Journal of Wildlife Diseases. 48 (1), 176-180 (2012).
  10. Allender, M. C., Fry, M. M. Amphibian hematology. Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice. 11 (3), 463-480 (2008).
  11. Green, S. L., Parker, J., Davis, C., Bouley, D. M. Ovarian hyperstimulation syndrome in gonadotropin-treated laboratory South African clawed frogs (Xenopus laevis). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 46 (3), 64-67 (2007).
  12. Jorgensen, C. B. External and internal control of patterns of feeding, growth and gonadal function in a temperate zone anuran, the toad Bufo bufo. Journal of Zoology. 210 (2), 211-241 (1986).
  13. Jørgensen, C. B. Growth and reproduction. Environmental Physiology of the Amphibians. , 439-466 (1992).
  14. Vu, M., Trudeau, V. L. Neuroendocrine control of spawning in amphibians and its practical applications. General and Comparative Endocrinology. 234, 28-39 (2016).
  15. Clulow, J., Trudeau, V. L., Kouba, A. J. Amphibian declines in the twenty-first century: why we need assisted reproductive technologies. Reproductive Sciences in Animal Conservation. , 275-316 (2014).
  16. Kouba, A., et al. Assisted reproductive technologies (ART) for amphibians. Amphibian Husbandry Resource Guide. 2, 60-118 (2012).
  17. Clulow, J., et al. Optimisation of an oviposition protocol employing human chorionic and pregnant mare serum gonadotropins in the Barred Frog Mixophyes fasciolatus (Myobatrachidae). Reproductive Biology and Endocrinology. 10 (1), 60 (2012).
  18. Browne, R. K., Seratt, J., Vance, C., Kouba, A. Hormonal priming, induction of ovulation and in-vitro fertilization of the endangered Wyoming toad (Bufo baxteri). Reproductive Biology and Endocrinology. 4 (1), 34 (2006).
  19. Calatayud, N. E., et al. A hormone priming regimen and hibernation affect oviposition in the boreal toad (Anaxyrus boreas boreas). Theriogenology. 84 (4), 600-607 (2015).
  20. Stoops, M. A., Campbell, M. K., Dechant, C. J. Successful captive breeding of Necturus beyeri through manipulation of environmental cues and exogenous hormone administration: a model for endangered Necturus. Herpetological Review. 45 (2), 251-256 (2014).
  21. Mc Creery, B. R., Licht, P. Induced ovulation and changes in pituitary responsiveness to continuous infusion of gonadotropin-releasing hormone during the ovarian cycle in the bullfrog, Rana catesbeiana. Biology of Reproduction. 29 (4), 863-871 (1983).
  22. Johnson, C. J., Vance, C. K., Roth, T. L., Kouba, A. J. Oviposition and ultrasound monitoring of American toads (Bufo americanus) treated with exogenous hormones. Proceedings of the American Association of Zoo Veterinarians. 299, 301 (2002).
  23. Herbert, D. Studies of assisted reproduction in the spotted grass frog Limnodynastes tasmaniensis: ovulation, early development and microinjection (ICSI). , (2004).
  24. Michael, S. F., Buckley, C., Toro, E., Estrada, A. R., Vincent, S. Induced ovulation and egg deposition in the direct developing anuran Eleutherodactylus coqui. Reproductive Biology and Endocrinology. 2, 6 (2004).
  25. Ogawa, A., Dake, J., Iwashina, Y., Tokumoto, T. Induction of ovulation in Xenopus without hCG injection: the effect of adding steroids into the aquatic environment. Reproductive Biology and Endocrinology. 9 (1), 11 (2011).
  26. Silla, A. J. Effects of luteinizing hormone-releasing hormone and arginine-vasotocin on the sperm-release response of Günther’s Toadlet, Pseudophryne guentheri. Reproductive Biology and Endocrinology. 8 (1), 139 (2010).
  27. Trudeau, V. L., et al. Hormonal induction of spawning in 4 species of frogs by coinjection with a gonadotropin-releasing hormone agonist and a dopamine antagonist. Reproductive Biology and Endocrinology. 8 (1), 36 (2010).
  28. Krause, E. T., von Engelhardt, N., Steinfartz, S., Trosien, R., Caspers, B. A. Ultrasonography as a minimally invasive method to assess pregnancy in the fire salamanders (Salamandra salamandra). Salamandra. 49, 211-214 (2013).
  29. Browne, R. K., Li, H., Seratt, J., Kouba, A. Progesterone improves the number and quality of hormone induced Fowler toad (Bufo fowleri) oocytes. Reproductive Biology and Endocrinology. 4 (1), 3 (2006).
  30. Bramucci, M., et al. Different modulation of steroidogenesis and prostaglandin production in frog ovary in vitro by ACE and ANG II. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 273 (6), R2089-R2096 (1997).
  31. Gobbetti, A., Zerani, M. Possible roles for prostaglandins E2 and F2α in seasonal changes in ovarian steroidogenesis in the frog (Rana esculenta). Journal of Reproduction and Fertility. 98 (1), 27-32 (1993).
  32. Gobbetti, A., Zerani, M., Carnevali, O., Botte, V. Prostaglandin F2α in female water frog, Rana esculenta: Plasma levels during the annual cycle and effects of exogenous PGF2α on circulating sex hormones. General and Comparative Endocrinology. 80 (2), 175-180 (1990).
  33. Guillette, L. J. Jr, Dubois, D. H., Cree, A. Prostaglandins, oviducal function, and parturient behavior in nonmammalian vertebrates. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 260 (5), R854-R861 (1991).
  34. Clulow, J., Mahony, M., Browne, R., Pomering, M., Clark, A. Applications of assisted reproductive technologies (ART) to endangered anuran amphibians. Declines and Disappearances of Australian Frogs'. Campbell, A. , 219-225 (1999).
  35. Browne, R. K., Wolfram, K., García, G., Bagaturov, M. F., Pereboom, Z. Zoo-based amphibian research and conservation breeding programs. Amphibian and Reptile Conservation. 5 (3), 1-14 (2011).
  36. Chai, N. Surgery in amphibians. Veterinary Clinics: Exotic Animal Practice. 19 (1), 77-95 (2016).
  37. Gentz, E. J. Medicine and surgery of amphibians. Ilar Journal. 48 (3), 255-259 (2007).
  38. Snyder, W. E., Trudeau, V. L., Loskutoff, N. M. 168 a noninvasive, transdermal absorption approach for exogenous hormone induction of spawning in the northern cricket frog, Acris crepitans: a model for small, endangered amphibians. Reproduction, Fertility and Development. 25 (1), 232-233 (2012).
  39. Kouba, A. J., et al. Emerging trends for biobanking amphibian genetic resources: the hope, reality and challenges for the next decade. Biological Conservation. 164, 10-21 (2013).
  40. Michael, S. F., Buckley, C., Toro, E., Estrada, A. R., Vincent, S. Induced ovulation and egg deposition in the direct developing anuran Eleutherodactylus coqui. Reproductive Biology and Endocrinology. 2 (1), 6 (2004).
  41. Fort, D. J. Frog reproduction and development study 2000 rana pipiens reproduction and development study. , Environmental Protection Agency. (2003).
  42. Clulow, J., et al. Differential success in obtaining gametes between male and female Australian temperate frogs by hormonal review: A Review. General and Comparative Endocrinology. 265, 141-148 (2018).
  43. Trottier, T. M., Armstrong, J. B. Diploid gynogenesis in the Mexican axolotl. Genetics. 83 (4), 783-792 (1976).
  44. Marcec, R. M. Development of assisted reproductive technologies for endangered North American salamanders. , Mississippi State University. (2016).
  45. Wright, M. L. Melatonin, diel rhythms, and metamorphosis in anuran amphibians. General and Comparative Endocrinology. 4, (2002).

Tags

Biyoloji sayı 147 Circadian yumurta tutma celiotomi eksojen hormonlar ultrason ve ovariektomi.
Anbürlerde Ovaryalı Izleme ve kontrol için üreme teknikleri
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Calatayud, N. E., Chai, N., Gardner, … More

Calatayud, N. E., Chai, N., Gardner, N. R., Curtis, M. J., Stoops, M. A. Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians. J. Vis. Exp. (147), e58675, doi:10.3791/58675 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter