Summary
Under infektion er Listeria monocytogenes i stand til at krydse blod - hjerne barrieren for at kolonisere hjernen. I denne protokol vise vi, hvordan man skal vurdere bakteriel kolonisering af organer efter infektion af mus. En procedure til at udføre hele orgel perfusion for specifikke bestemmelse af bakteriel numre i hjernen parenkym er fastsat.
Abstract
Listeria monocytogenes er en intracellulær bakteriel patogen, der er ofte knyttet til fødevarebåren infektion. L. monocytogenes evne til at passere blod - hjerne barrieren (BBB) er om da det kan føre til livstruende meningitis og encefalitis. BBB beskytter hjernen mikromiljø fra forskellige toksiske metabolitter og mikrobielle patogener i blodet efter infektion, og støtter derfor hjernen homøostase. De mekanismer, hvorved L. monocytogenes stede i blodbanen cross BBB kan forårsage hjernen infektioner ikke er fuldt forstået og der mangler også en robust modelsystem at studere hjernen infektioner af L. monocytogenes. Her præsenterer vi en simpel mus infektion model til at bestemme, om bakterier har krydset BBB og at kvantificere byrden af bakterier, der har koloniseret hjernen in vivo. I denne metode, dyr blev smittet intravenøst med L. monocytogenes og var humant aflives af eksponering til CO2 efterfulgt af cervikal dislokation. Hjerte perfusion af dyr blev udført før høst inficeret organer. Blodet blev indsamlet før perfusion og antal bakterier pr. orgel eller mL blod blev bestemt ved plettering fortyndinger af blod eller orgel homogeniseret på agar plader og tælle antallet af kolonier dannet. Denne metode kan bruges til at studere roman receptor-ligand interaktioner, der forbedrer infektion i hjernen af L. monocytogenes og nemt kan tilpasses for studiet af flere bakterielle patogener.
Introduction
Den Gram-positive bakterien Listeria monocytogenes er en fakultativ intracellulære patogen og en af de mest dødbringende levnedsmiddelbårne patogener på verdensplan. Indtagelse af L. monocytogenes forurenet fødevarer kan føre til listeriose i mennesker, en svær invasiv sygdom rettet mod det meste gravide kvinder, nyfødte, ældre og immunsvækkede personer1. L. monocytogenes er blandt de førende dødsårsager ved en levnedsmiddelbårne patogener i USA og sag trafikdræbt priser fra listeriose er så høje som 20-30%, det højeste til alle levnedsmiddelbårne patogener2. For L. monocytogenes findes der i øjeblikket ingen vaccine og evnen af bakterier til effektivt sprede sig til distale organer og hjernen ved at krydse blod - hjerne barrieren (BBB) kan føre til livstruende meningitis og kolonisering af hjernen3 , 4 , 5 , 6. bakteriel meningitis er typisk svær; mens de fleste mennesker, der modtager behandling genoprette, kan infektioner forårsage alvorlige komplikationer, fx, hjerneskade, høretab eller indlæringsvanskeligheder hos børn. L. monocytogenes er forudsagt for at tegne sig for mindst 10% af alle Fællesskabets erhvervede meningitis i USA 's7.
En vigtig rute for bakteriel formidling til hjernen og meninges er gennem blodbanen. Bakterier i omløb i blodkarrene i hjernen er i stand til at krydse BBB for at forårsage hjernen infektion. BBB er en yderst vaskulariserede barriere system, der beskytter hjernen mod fremmede partikler cirkulerer i blodet. Endotelceller udgør et lag, der linjer den indvendige overflade af blodkar8,9. Ud over L. monocytogeneser flere bakterielle patogener som Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coliog Haemophilus influenzae type b (Hib) i stand til at koloniserer hjernen ved at krydse BBB3,4,5,6. Når du undersøger bakteriel byrder i hjernen hos inficerede mus, er det imidlertid vigtigt at afgøre, om bakterier har krydset BBB, ellers den bakterielle byrde i hjernen kan repræsentere bakterier, der er stadig i blodkarrene i hjernen. Det er således nødvendigt at perfuse mus af blod før bestemmelse af kolonidannende enheder (CFU) af hjernen homogeniseret.
I denne undersøgelse beskriver vi i vivo metoder til at undersøge L. monocytogenes infektion i hjernen. For de metoder, der beskrives her, brugte vi L. monocytogenes stamme 10403S. L. monocytogenes 10403S er en af de mest udbredte laboratorium stammer at studere systemisk listeriose i musemodel af infektion10. Denne protokol er baseret på standard intravenøs injektion af L. monocytogenes efterfulgt af perfusion af mus. En skematisk oversigt over infektion protokol i mus er vist i figur 1. L. monocytogenes-inficerede hjerne og andre organer fra ikke-perfunderet eller perfunderet mus blev indsamlet og bakteriel orgel byrde fastlagt. Disse metoder er nyttige til at ikke kun bestemme samlede bakteriel kolonisering af hjernen i inficerede dyr, men er også gavnlig for at afgøre, om bakterier har trængt BBB i vivo at mægle invasion af hjernen. Det er vigtigt at understrege at dette laboratorium protokollen bør gennemføres efter samråd med de relevante institutionelle biosikkerhed udvalget og dyr bygningsforvaltning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr, der skal bevares og håndteres med største omhu at minimere ubehag i løbet af proceduren. Proceduren er at blive gennemført i overensstemmelse med den institutionelle Animal Care og brug udvalg og alle føderale, statslige og lokale love. Bemærk også at laboratorieforsøg skal udføres efter biosikkerhedsniveau 2 som retningslinjer.
1. vækst af L. monocytogenes for musen infektion undersøgelser
-
Autoklave 500 mL af hjernen hjerte Infusion (BHI) agarsubstratet i en 1 liter erlenmeyerkolben at forberede solid media plader. Tillad media afkøles i vandbad 56 ° C og derefter tilføje streptomycin i en endelig koncentration på 100 µg/mL.
- Hæld 25 mL af medier/petriskål i petriskålen plader. Tillad pladerne tørre ved stuetemperatur (22 oC-25 ° C). Hvis det er nødvendigt, kan pladerne tørres ved 37 ° C indtil fuldstændig tør.
-
Ved hjælp af en steril vaccinere loop og aseptisk teknik, opnå en løkke fuld af frosne L. monocytogenes stamme 10403S11,12 fra en stamkultur frosset i BHI media plus 30% glycerol og vedligehold i et-80 ° C fryser.
- Streak L. monocytogenes på en BHI agar/streptomycin plade så enkelt bakteriel kolonier kan være isoleret. Læg pladerne i et 37 ° C inkubator natten (18 h 24 h) for at vokse L. monocytogenes kolonier.
- Ved hjælp af en steril inoculating sløjfen, vælge en enkelt L. monocytogenes koloni fra BHI agar plade og podes kolonien i en steril reagensglas med 5 mL af BHI bouillon indeholdende 100 µg/mL streptomycin.
-
Inkuber L. monocytogenes kultur rør lidt på skrå på 30 ° natten over i en statisk inkubator.
- Den følgende dag, Inspicér visuelt L. monocytogenes kultur for vækst (BHI medier bliver grumset) og vortex kort for at sikre en ensartet suspension af kultur.
- Aseptisk fjerne en 1 mL alikvot af bakteriekulturen og måling af ekstinktionen på 600 nm (OD600) ved hjælp af et spektrofotometer.
Bemærk: Sterile BHI bouillon bruges som tomt for spektrofotometrets læsning før måling af Ekstinktionen af L. monocytogenes kultur. L. monocytogenes kultur kan også fortyndes (to til fem gange) i BHI før læsning ekstinktionen. - Bestemme antallet af L. monocytogenes koloni danner enheder (CFU) pr. mL af BHI kultur ved plettering 10-fold serielle fortyndinger af kultur. Dette er nyttigt til at oprette en relation mellem Ekstinktionen af L. monocytogenes kultur og antal bakterier pr. mL af kultur. Generelt en OD600 af 1.0 til en L. monocytogenes kultur er lig med ca 1 x 109 CFU af bakterier pr. mL.
2. forberedelse af L. monocytogenes for infektion af mus
- Atten til tyve-fire timer før dyreinfektioner, vokse L. monocytogenes kulturer i BHI bouillon indeholdende 100 µg/mL streptomycin og bestemme OD600/ ~ CFU pr. mL som angivet i trin 1.
Bemærk: Mus er generelt bestilt en uge forud for infektion og er akklimatiseret til Dyrefacilitet før infektionen undersøgelser er udført. I denne undersøgelse, 6-8 uger gamle BALB/c hunmus (5 mus pr. gruppe) har været opstaldet i en barriere miljø i Harvard Medical School BSL2-niveau animalske indeslutning facilitet og leveres mad og vand ad libitum. - Stoerrelsen af L. monocytogenes kultur forpligtet til at inficere hver mus baseret på den ~ CFU pr. mL af bakteriekulturen. Lave en fortynding af L. monocytogenes kultur i steril fosfatbufferet saltvand pH 7,2 (PBS) til den passende koncentration af bakterier. Mus er typisk inficeret intravenøst med 200 µL af PBS, som indeholder 1-2 × 104 CFU af bakterier og dyr.
- Kontroller antallet af L. monocytogenes i inokulat ved plettering 10-fold serielle fortyndinger på BHI agar plader der indeholder 100 µg/mL streptomycin. Inkuber plader i et 37 ° C inkubator natten til at bestemme antallet af L. monocytogenes podes pr. mus som følger:
Inokulum (CFU) = (antal kolonier x fortyndingsfaktoren) / mL forkromet x volumen (mL) injiceres
3. infektion i mus med L. monocytogenes via intravenøs injektion af hale vene
-
Fjern låget og mad placeringerne fra buret indeholdende mus, og placere bur under en 250 W infrarød varmelampe i 5 min.
Bemærk: Denne metode tillader hale vener til at spile, sikre, at injektioner er nemmere at udføre.- Omhyggeligt placere dyret i en passende størrelse mus fastholdende enhed for at sikkert begrænse dyret under halen vene injektioner.
- Bland L. monocytogenes inokulum (trin 2.2) og indlæse inokulat i en 1 mL sprøjten udstyret med en 26 G kanyle.
- Find en lateral hale vene af musen og rense injektionsstedet med en alkoholserviet eller en 75% ethanol spray.
-
Forsigtigt injicere musen med 200 µL af L. monocytogenes suspension i en lateral hale vene ved hjælp af sprøjten med 26 G kanyle.
- Bruge bomuld gaze til kortvarigt pres på injektionsstedet til at standse eventuelle blødninger, og placere dyret i en ny bur.
Bemærk: Udføre denne proces for alle mus injiceres og markere bur med passende etiketter. For at bestemme den post injektion koncentration af L. monocytogenes inokulum, Gentag trin 2.3 ved hjælp af det resterende beløb af inokulum. Intravenøs L. monocytogenes infektion inokulum pr. mus er rapporteret som den gennemsnitlige CFU måles fra før og efter indsprøjtning inokulum prøver.
- Bruge bomuld gaze til kortvarigt pres på injektionsstedet til at standse eventuelle blødninger, og placere dyret i en ny bur.
- Overvåge de smittede dyr dagligt og Bemærk eventuelle åbenlyse tegn på sygdom (f.eks., pjusket pels, foroverbøjet kropsholdning, træg bevægelse, vægttab). Fjerne dyr, der synes at være betydeligt døende inden 72 h efter infektionen (f.eks., 24, 48 timer efter infektionen) fra undersøgelsen og humant ofre. Fortsætte daglige overvågning, indtil alle øvrige dyr ofres på 72 h efter infektionen.
Bemærk: 50% dødelig dosis (LD50) til L. monocytogenes stamme 10403S i BALB/c mus er ~ 1 – 2 x 104 CFU/dyr. Mus inficeret med LD50 doser af L. monocytogenes bruger denne protokol kan udvise tegn på sygdom, som anført ovenfor, og efterforskere kunne forvente mus til at begynde at bukke under for infektion efter 72 h efter infektionen.
4. dissektion og hjerte Perfusion af mus inficeret med L. monocytogenes
-
På 72 h efter infektionen (eller for en tidligere ønskede tidspunkt), aflive de inficerede mus ved hjælp af en protokol, der er godkendt af den institutionelle dyr etisk komité, som CO2 kvælning efterfulgt af cervikal dislokation.
Bemærk: Hvis blodet samling er der skal udføres, minimere rive i blodkarrene under udførelse af cervikal dislokation.- Bekræfte mus har været aflivet ved fravær af en pote-twitch svar.
Bemærk: Hvis hjerte perfusion skal udføres, oprette en automatiseret pumpe/perfusion system med en væskehastighed på 4 mL volumen/min.
- Bekræfte mus har været aflivet ved fravær af en pote-twitch svar.
- Placere dyret på ryggen i en dissektion pan og anvende 75% ethanol på abdominal pels/hudens overflade.
- Ved hjælp af saks, gøre et snit i maveskindet og udvide indsnittet til lige under brystkassen.
- Udsætte mellemgulvet og viscerale organer.
Bemærk: Pas på ikke at lacerate enhver viscerale organer. - Åbn brysthulen ved at skære mellemgulvet og skære brystkassen bilateralt at eksponere venstre hjertekammer af hjertet.
- Bruger stump pincet, forsigtigt forstå hjerte og Indsæt en 21 G sommerfugl nål forbundet til en perfusion system ind i venstre hjertekammer og derefter omhyggeligt skåret højre atrium for at indsamle blod (~0.2 mL) i et 2 mL rør indeholdende 10 mM ethylendiamintetra syre (EDTA) at forhindre koagulation. Et skematisk diagram over hjertets perfusion i musen er vist i figur 2.
Bemærk: Hvis perfusion er ikke at blive udført, blod kan indsamles af cardiac punktering ved hjælp af en 1 mL sprøjte og hurtigt overføres til en 2 mL rør indeholdende 10 mM EDTA at forhindre koagulation. L. monocytogenes -inficeret organer er så høstes som beskrevet (trin 5.1). - Begynde perfusion og perfuse dyr i 4 min. med 15-20 mL PBS, som indeholder 10 mM EDTA.
Bemærk: Vurdere perfusion ved at observere blod og PBS-EDTA-oploesning, der flyder gennem højre atrium og i dissektion gryden. Hjernen og leveren vises blancheret efter komplet perfusion sikrer, at resterende bakterier fra høstet organer og ikke den cirkulerende blod.
5. orgel høst og fastsættelse af bakteriel byrder
- Følgende perfusion, høst organer (fx, leveren, milten) ved omhyggeligt at fjerne enhver vaskulatur og ledbånd knyttet og placere organer separat i en steril 15 mL konisk slange der indeholder 5 mL sterilt kolde (4 ° C) PBS. Gemme prøver på is, indtil videre forarbejdning sker.
-
At høste hjernen, halshugge hovedet bag ørerne ved hjælp af saks og klippe hovedbund huden mellem dyrets øjne ned midterlinjen. Hvis det er påkrævet, trim overskydende væv holder saksen presset mod kraniet.
- Forsigtigt indsætte en spidsen af saksen i foramen magnum (hul i bunden af kraniet hvorigennem rygmarven passerer) og skære sideværts ind i kraniet på begge sider.
- Forsigtigt skære kraniet mellem de gnaver øjne ned midterlinjen, Sørg for at anvende sideværts pres. Undgå undertrykkelse af netbårne af hjernen og opretholde minimum kontakt mellem hjernevæv og saksen.
- Brug fin spids pincet, åbne kraniet for at afsløre hjernen og placere en spatel mellem undersiden af hjernen og bunden af kraniet til at fjerne hjernen.
Bemærk: Dette resulterer i rivning af hjernen nervefibre. - Omhyggeligt overføre hjernen til en 15 mL konisk slange der indeholder 5 mL sterilt kolde PBS.
- Kassér mus slagtekroppen, og gentage disse trin for de resterende dyr.
Bemærk: Når alle organer er blevet høstet, rense området procedure og forberede orgel homogenisering at bestemme bakteriel byrder.
- Rengøre og sterilisere spidsen af en væv homogeniseringsapparat placeret i en biosikkerhed kabinet ved at indsætte spidsen og kører homogeniseringsapparat for 10 s sekventielt i 5% blegemiddel, sterilt vand, 75% ethanol, sterilt vand hver indeholdt i en separat 15 mL konisk slange.
-
Homogeniseres inficerede hjernen (~ 20 s på indstilling 6, maksimale rpm) i 15 mL konisk røret indtil ingen synlige væv fragmenter tilbage.
- Ren fremførsel homogeniseringsapparat som beskrevet i trin 5.3 at forhindre bakteriel forurening til eksemplet næste orgel.
- Udføre homogenisering proces for alle andre organer (fx, leveren, milten).
- Når homogenisering processen er afsluttet, rense homogeniseringsapparat som beskrevet i trin 5.3 og butikken indtil videre brug.
-
Forberede 10-fold serielle fortyndinger af orgel homogeniseret i steril PBS og plade fortyndinger på BHI agar/streptomycin plader til at bestemme CFU pr. orgel.
Bemærk: En lignende metode udføres for at bestemme CFU pr. mL blod.- Når alle fortyndinger er forgyldt, overføre pladerne til en 37 ° C inkubator natten over.
- Den følgende dag, tælle antallet af kolonier på hver plade til at bestemme det samlede antal bakterier pr. orgel eller mL blod som følger:
CFU/orgel = (antal kolonier x fortyndingsfaktoren) / mL af homogenatet forkromet x 5
CFU/mL blod = (antal kolonier x fortyndingsfaktoren) / mL blod forkromet
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hjernen er meget vaskulariserede og L. monocytogenes er kendt for at inficere celletyper i blod3,13. Den beskrevne protokol bruges til at vise L. monocytogenes evne til at krydse blod - hjerne barrieren (BBB) fører til infektion i hjernen hos mus. For at bestemme, hvis bakterier har krydset BBB i vivo, er perfusion af blod i musen udført før bestemmelse af bakteriel byrder i hjernen. Ellers, CFU fremstillet kan indeholde bakterier, der er til stede i blodkarrene i hjernen. L. monocytogenes inficeret hjerner (figur 3A) og Leverne (figur 3B) før eller efter perfusion på 72 h efter infektionen er vist. Figur 4 viser de bakterielle byrder i L. monocytogenes -inficerede mus organer og illustrerer antallet af bakterier til stede i hjerne, blod, lever og milt for hver mus. Disse data tyder på, at perfusion af dyr ikke væsentligt påvirkede den bakterielle byrde i mus organer undersøgt i denne undersøgelse (figur 4).
Figur 1 : Skematisk oversigt over de L. monocytogenes in vivo infektion protokol. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Skematisk diagram af proceduren hjerte perfusion. Perfusion gennem mus hjertet viser indsættelse af perfusion nålen i den venstre hjertekammer (trin 4.6). Efter nål indsættelse, en umiddelbar snit er lavet i højre atrium at starte proceduren perfusion. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Høstet mus organer efter infektion med L. monocytogenes. BALB/c mus blev smittet intravenøst via lateral hale vene injektion med vildtype L. monocytogenes 10403S, (1-2 x 104 bakterier og dyr). På 72 timer efter infektionen, mus blev aflivet og mus organer blev indsamlet eller aflivede mus var perfunderet gennem hjertet med 15-20 mL PBS, som indeholder 10 mM EDTA før orgel høst. Repræsentative hjerner (A) og Leverne (B) er vist fra ikke-perfunderet eller perfunderet mus. Bemærk, at musen organer vil vises hvid/bleg (blancheret) efter perfusion forsikrede at bakteriel CFU er fra høstede orgel væv og ikke den cirkulerende blod i vævet. Dette tal er blevet ændret fra Ghosh et al., 201814. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 : Bakteriel byrder i inficerede mus organer. BALB/c mus blev smittet intravenøst med vildtype L. monocytogenes 10403S som beskrevet i figur 3. På 72 h efter infektionen, hjerne, blod, lever og milt for hver mus blev indsamlet og de bakterielle byrder bestemmes. I separate eksperimenter, hele kroppen perfusion af mus blev udført og den bakterielle byrde inden for hvert organ fastsættes. Vandrette linjer angiver median værdier. * Denne gruppe blev blod indsamlet umiddelbart før starten af cardiac perfusion. Dette tal er blevet ændret fra Ghosh et al., 201814. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
L. monocytogenes kan forårsage livstruende meningoencephalitis hos mennesker. Tidligere undersøgelser har vist evne til bakterier til at krydse blod-hjerne-barriere (BBB) og at kolonisere hjernen. Tre ruter af hjernen invasion har foreslået under infektion: direkte penetration af BBB af bakterier, stealth transport af bakterier indeholdt inde i mononukleære celler3og cytoskeletale migration af L. monocytogenes stammer, der forårsager rhombencephalitis15. Da hjernen er meget vaskulariserede og L. monocytogenes vides at cirkulerer i blodet under systemisk infektion, bestemmelse af omfanget L. monocytogenes er i stand til at trænge igennem blodkarrene til at kolonisere det centrale nervesystem og hjernen er kritisk.
I den beskrevne protokol, intravenøs hale vene injektion bruges til at etablere en systemisk L. monocytogenes infektion i mus. Denne metode er nyttig til at omgå den intestinale barriere og vurdere specielt bakterielle invasion af BBB fra blodbanen. Protokollen beskriver flere vigtige parametre. En vigtig parameter er brugen af passende bakterieinfektion dosis under i vivo eksperimenter. Dette er afgørende for at kunne sammenligne bakteriel CFU fremstillet af forskellige dyregrupper inficeret med L. monocytogenes. Et andet vigtigt aspekt at overveje er L. monocytogenes stamme anvendes til eksperimentel undersøgelse. Flere rapporter har antydet forskelle blandt forskellige L. monocytogenes stammer i deres sygdomsfremkaldende evne og evnen til at inficere hjernen10,16.
Protokollen beskrevet her kan ændres for at lette undersøgelsen af andre aspekter af L. monocytogenes infektion biologi. L. monocytogenes inficeret organer kan behandles yderligere til histopatologisk analyser at observere synlige inflammatoriske forandringer i de inficerede mus organer i forhold til ikke-inficerede kontroldyr. De beskrevne metoder kan anvendes til at yderligere karakteriserer sygdommen fænotyper relevante L. monocytogenes stammer involveret i infektioner hos mennesker samt stammer husly definerede mutanter i potentielle virulens determinanter. Sådan ansøgning blev for nylig udført for at afsløre en roman receptor-ligand interaktion, der forbedrer infektion i hjernen af L. monocytogenes og fremmet fremhævet betydningen af vært celle overflade vimentin i vært-patogen interaktioner 14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ikke konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af US Public Health Service give AI103806 fra National Institutes of Health.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion media | Becton Dickinson | 237200 | |
| Streptomycin sulfate | Amresco | 0382-50G | |
| Petri dishes | VWR | 25384-342 | |
| Glycerol | VWR | 97062-832 | |
| IKA T18 ULTRA-TURRAX Basic Homogenizer | IKA | 3352109 | Model: T18BS1 |
| Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 800 series | |
| BALB/c mice | Jackson Laboratory | Model #000651 | |
| 1 mL syringes | Becton Dickinson | 309659 | |
| 26 G needles | Becton Dickinson | 305115 | |
| 21 G butterfly needles | Becton Dickinson | 367281 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma-Aldrich | 60004 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| Round-bottom test tubes | VWR | 60819-546 | |
| Phosphate-buffered saline | Corning | 46-013-CM | |
| Stainless steel spatula | VWR | 82027-520 | |
| Stainless steel scissors (6.5 in) | VWR | 82027-592 | |
| Stainless steel scissors (4.5 in) | VWR | 82027-578 | |
| Stainless steel blunt forceps (4.5 in) | VWR | 82027-440 | |
| Stainless steel fine tip forceps (6 in) | VWR | 82027-406 |
References
- Radoshevich, L., Cossart, P. Listeria monocytogenes: towards a complete picture of its physiology and pathogenesis. Nature Reviews Microbiology. 16 (1), 32-46 (2018).
- de Noordhout, C. M., et al. The global burden of listeriosis: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Infectious Diseases. 14 (11), 1073-1082 (2014).
- Drevets, D. A., Leenen, P. J., Greenfield, R. A. Invasion of the central nervous system by intracellular bacteria. Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 323-347 (2004).
- Huang, S. H., Stins, M. F., Kim, K. S. Bacterial penetration across the blood-brain barrier during the development of neonatal meningitis. Microbes and Infection. 2 (10), 1237-1244 (2000).
- Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. Epidemiology, diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis. Clinical Microbiology Reviews. 23 (3), 467-492 (2010).
- Thigpen, M. C., et al. Bacterial meningitis in the United States, 1998-2007. New England Journal of Medicine. 364 (21), 2016-2025 (2011).
- Durand, M. L., et al. Acute bacterial meningitis in adults. A review of 493 episodes. The New England Journal of Medicine. 328 (1), 21-28 (1993).
- Disson, O., Lecuit, M. Targeting of the central nervous system by Listeria monocytogenes. Virulence. 3 (2), 213-221 (2012).
- Daneman, R., Prat, A. The blood-brain barrier. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (1), a020412 (2015).
- Becavin, C., et al. Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity. MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).
- Kirchner, M., Higgins, D. E. Inhibition of ROCK activity allows InlF-mediated invasion and increased virulence of Listeria monocytogenes. Molecular Microbiology. 68 (3), 749-767 (2008).
- Grubaugh, D., et al. The VirAB ABC transporter is required for VirR regulation of Listeria monocytogenes virulence and resistance to nisin. Infection and Immunity. 86 (3), 901-917 (2018).
- Vazquez-Boland, J. A., et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants. Clinical Microbiology Reviews. 14 (3), 584-640 (2001).
- Ghosh, P., et al. Invasion of the brain by Listeria monocytogenes is mediated by InlF and host cell vimentin. MBio. 9 (1), e00160-e00118 (2018).
- Henke, D., et al. Listeria monocytogenes spreads within the brain by actin-based intra-axonal migration. Infection and Immunity. 83 (6), 2409-2419 (2015).
- Maury, M. M., et al. Uncovering Listeria monocytogenes hypervirulence by harnessing its biodiversity. Nature Genetics. 48 (3), 308-313 (2016).
