Summary
감염, 동안 Listeria monocytogenes 는 두뇌를 식민지로 혈액 뇌 장벽을 교차 수 있습니다. 이 프로토콜, 쥐의 감염에 따라 장기의 세균성 식민지를 평가 하는 방법을 보여 줍니다. 뇌 실질에 세균 숫자의 특정 결정에 대 한 전체 기관 살포를 수행 하는 절차를 제공 합니다.
Abstract
Listeria monocytogenes 식품을 매개로 감염와 자주 연결 되는 세포내 세균성 병원 체 이다. L. monocytogenes 의 교차 하는 혈액-뇌 장벽 (BBB) 기능은 관련으로 생명이 수 막 염 및 뇌염 발생할 수 있습니다. BBB 다양 한 독성 대사 산물 및 미생물 병원 체 감염, 다음 혈액에서 발견에서 두뇌 microenvironment를 보호 하 고 따라서 뇌 항상성 지원. 기계 장치는 뇌 감염 완벽 하 게 이해 되지 않는다을 BBB를 교차 하는 L. monocytogenes 는 혈액에 존재 하 고 L. monocytogenes에의해 뇌 감염을 연구 하는 강력한 모델 시스템의 부족이 있다. 여기, 우리는 간단한 마우스 감염 모델 박테리아 BBB 교차 하는지 여부를 확인 하 고 뇌 비보를 식민지 화 하는 박테리아의 부담을 quantitate 제시. 이 방법에서는, 동물 L. monocytogenes 와 함께 정 맥 감염 되었다 하 고 CO2 뒤에 자 궁 경부 전위에 노출에 의해 euthanized 고통 없이 했다. 동물의 심장 관류 감염 된 장기를 수확 전에 수행 되었다. 혈액 관류 전에 수집 하 고 기관 당 박테리아의 수 또는 mL의 혈액 한 천 배지에서 혈액 또는 기관 homogenates의 희석을 도금에 의해 결정 되었다 형성 식민지의 수를 계산. 이 메서드는 L. monocytogenes 에 의해 뇌의 감염을 강화 하 고 여러 세균성 병원 체의 연구에 대 한 쉽게 적응 시킬 수 있다 비 발한 수용 체 ligand 상호 작용 연구를 사용할 수 있습니다.
Introduction
그람 양성 박테리아 Listeria monocytogenes facultative 세포내 병원 체 이며 대부분 치명적인 식품을 매개로 병원 체 전세계 중 하나. L. monocytogenes 오염 된 식품의 섭취 listeriosis 인간, 주로 임산부, 신생아, 노인, 그리고 immunocompromised 개인1타겟팅 심각한 침략 적인 질병 발생할 수 있습니다. L. monocytogenes 는 미국에서 식품을 매개로 병원 체에 의해 죽음의 주요 원인 중 하나입니다 그리고 케이스 사망자 listeriosis에서 요금은 높은 20-30%, 모든 식품을 매개로 병원 체2에 대 한 최고. 아니 백신 L. monocytogenes 현재 존재 하 고 박테리아의 능력을 효과적으로 혈액-뇌 장벽 (BBB)를 횡단 하 여 말 초 장기 및 뇌 확산 생명이 수 막 염 및 뇌3 의 식민으로 이어질 수 있습니다. , 4 , 5 , 6. 세균성 수 막 염은 일반적으로 심한; 치료를 받은 대부분의 사람들을 복구 하는 동안 감염 아이 들에 있는 심각한 합병증, 예를 들면, 뇌 손상, 청력 상실, 또는 학습 장애를 일으킬 수 있습니다. L. monocytogenes 모든 커뮤니티의 적어도 10%를 차지 하는 미국7에 수 막 염 인수 전망 이다.
두뇌와 meninges 세균성 보급을 위한 주요 경로 혈 류를 통해 이다. 뇌의 혈관에 순환 하는 박테리아 뇌 감염을 BBB를 교차 수 있습니다. BBB는 혈액에서 회람 하는 외국 입자에서 뇌를 보호 하는 매우 vascularized 배리어 시스템. 내 피 세포는 혈관8,9의 내부 표면 라인 레이어를 구성 합니다. L. monocytogenes, 뿐만 아니라 Neisseria meningitidis, 구 균, 대장균및 Haemophilus 함께 b 형 (Hib) 등 여러 세균 병원 균은 정착 할 수 BBB3,4,,56을 횡단 하 여 두뇌. 그러나, 조사 하면 감염 된 쥐의 뇌에 부담을 세균, 박테리아는 BBB 넘어, 여부 그렇지 않으면 두뇌에 있는 세균성 짐을 아직도 뇌의 혈관에 있는 박테리아를 나타내는 수 있습니다 중요 하다. 따라서, 그것은 두뇌 homogenates의 콜로 니 형성 단위 (CFU)를 결정 하기 전에 모든 혈액의 쥐 perfuse 필요가 있다.
이 연구에서 우리 두뇌의 L. monocytogenes 감염 검사 vivo에서 방법을 설명 합니다. 여기 설명 하는 방법, L. monocytogenes 스트레인 10403S 사용 했습니다. L. monocytogenes 10403S 감염10의 마우스 모델에서 조직의 listeriosis 공부를 가장 널리 사용 되는 실험실 변종 중 하나입니다. 이 프로토콜은 L. monocytogenes 뒤 쥐의 관류의 표준 정 맥 주입을 기반으로 합니다. 마우스에서 감염 프로토콜의 개요 개요는 그림 1에 표시 됩니다. L. monocytogenes-감염 된 두뇌 및 다른 기관 끼얹는다 비 또는 끼얹는다 쥐에서 수집 하 고 세균성 기관 부담 결정. 이러한 메서드는 뿐만 아니라 감염 된 동물에서 뇌의 총 세균성 식민지를 결정 하는 데 유용 하지만 BBB에는 vivo에서 두뇌의 침공을 중재 박테리아가 침투 여부를 결정 하는 데 도움이 있습니다. 그것은이 실험실 프로토콜 관련 기관 biosafety 위원회 및 동물 시설 관리 협의 따라 실시 해야 하는 것을 강조 하는 것이 중요.
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Protocol
모든 동물은 유지 하는 절차의 과정에서 불편을 최소화 하기 위해 최대한 신중 하 게 처리입니다. 기관 동물 관리 및 사용 위원회 및 모든 연방, 주 및 지방 법에 따라 실시 하는 절차. 또한 유의 하십시오 실험실 실험 Biosafety 수준 2 지침에 따라 실시 하는.
1. L. monocytogenes 마우스 감염 연구의 성장
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단단한 미디어 접시를 준비 하는 1 L 삼각 플라스 크에 두뇌 심 혼 주입 (BHI) 한 천 매체의 500 mL 압력솥. 56 ° C 물 욕조에 냉각 한 후 100 µ g/mL의 최종 농도에 스를 추가 미디어 하실 수 있습니다.
- 페 트리 접시 접시에 미디어/페 트리 접시의 25 mL를 붓으십시오. 실 온 (22 oC-25 ° C)에서 건조 격판덮개를 허용 한다. 필요한 경우, 판 37 ° C까지 완전히 건조에서 건조 수 있습니다.
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살 균 접종 루프 및 무 균 기술을 사용 하 여 얻을 전체 루프 냉동된 L. monocytogenes 의 변형 10403S11,BHI 미디어 플러스 30% 글리세롤에 냉동 주식 문화에서12 -80 ° C 냉장고에서 유지.
- 행진 BHI 천/스에 L. monocytogenes 접시는 단일 세균성 식민지 고립 될 수 있다. L. monocytogenes 식민지 성장 하는 37 ° C 배양 기 하룻밤 (18 h 24 h)에 접시를 놓습니다.
- 살 균 inoculating 루프를 사용 하 여 단일 선택 BHI agar에서 L. monocytogenes 식민지 접시와 100 µ g/mL 스 포함 된 BHI 국물의 5 mL를 포함 하는 살 균 테스트 튜브에 식민지를 예방.
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약간 정적 인큐베이터에서 하룻밤 30 ° 기울어져 L. monocytogenes 문화 관을 품 어.
- 다음 날, 시각적으로 성장 (BHI 미디어 혼 탁 한 것) 및 문화의 균일 한 현 탁 액을 되도록 짧게 소용돌이 L. monocytogenes 문화를 검사 합니다.
- Aseptically의 세균성 문화 약 1 mL 수를 제거 하 고 600에서 광학 밀도 측정 nm (OD600)는 분 광 광도 계를 사용 하 여.
참고: 살 균 BHI 국물 L. monocytogenes 문화의 광학 밀도 측정 하기 전에 독서 분 광 광도 계에 대 한 빈으로 사용 됩니다. L. monocytogenes 문화 또한 묽 게 될 수 있습니다 (2에 5 배) 광학 밀도 읽기 전에 BHI에. - 문화의 10 직렬 희석을 도금 하 여 BHI 문화의 mL 당 L. monocytogenes 콜로 니 형성 단위 (CFU)의 수를 결정 합니다. L. monocytogenes 문화의 광학 밀도 문화의 mL 당 박테리아 수 사이의 관계를 설정 하려면 유용 합니다. 일반적으로, L. monocytogenes 문화에 대 한 1.0의 OD600 약 1 x 109 mL 당 박테리아의 CFU 같습니다.
2. L. monocytogenes 감염의 쥐에 대 한 준비
- 24 시간 동물 감염, 전 18 BHI 국물 포함 하는 100 µ g/mL 스 L. monocytogenes 문화를 성장 하 고 OD600결정 / ~ 1 단계에서 표시 된 mL 당 CFU.
참고: 마우스 감염 사전 1 주 주문 일반적으로 하 고 감염 연구 수행 전에 동물 시설에 acclimated 됩니다. 이 연구에서는 6-8 주 오래 된 여성 BALB/c 마우스 (그룹 당 5 쥐) 하버드의과 대학 BSL2-레벨 동물 제약 시설에서 배리어 환경에서 지 내게 했다 고 음식과 물 광고 libitum제공. - L. monocytogenes 문화에 따라 각 마우스를 감염 하는 데 필요한 양을 결정 합니다 ~ 세균성 문화의 mL 당 CFU. 멸 균 인산 염 버퍼 염 분 pH 7.2에에서는 L. monocytogenes 문화 (PBS)의 희석 박테리아의 적절 한 농도를 확인 합니다. 마우스는 일반적으로 정 맥 200 µ L 1-2 × 104 박테리아/동물의 CFU를 포함 하는 PBS의 감염.
- BHI 한 천 배지 100 µ g/mL 스 포함에 10 직렬 희석 도금으로 inoculum L. monocytogenes 수를 확인 합니다. L. monocytogenes 다음과 같이 마우스 당 주사의 수를 결정 하는 37 ° C 인큐베이터 하룻밤에 접시를 품 어.
Inoculum (CFU) = (희석 요인 x 식민지의 수) / mL 도금 볼륨 (mL) 주입 x
3. 통해 L. monocytogenes 꼬리 정 맥 주사와 쥐의 감염
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쥐를 포함 하는 새 장에서 뚜껑 및 음식 쓰레기통을 제거 하 고 5 분 동안 250 W 적외선 열 램프 아래에서 케이지를 놓습니다.
참고:이 방법은 수 팽창를 꼬리 정 맥 주사 쉽게 수행 하는 확인.- 신중 하 게 안전 하 게 꼬리 정 맥 주사 하는 동안 동물을 제 지 하는 장치를 억제 하는 적절 한 크기의 마우스에서 동물을 배치 합니다.
- L. monocytogenes inoculum (단계 2.2)를 혼합 하 고 1 mL 주사기 26 G 바늘으로 장착에 inoculum을 로드.
- 마우스의 측면 꼬리 정 맥을 찾아서 주사 사이트를 알코올 패드 또는 75% 에탄올 스프레이 사용 하 여 청소.
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부드럽게 26 G 바늘과 주사기를 사용 하 여 측면 꼬리 정 맥에 L. monocytogenes 정지의 200 µ L로 마우스를 삽입할.
- 면 거 즈를 사용 하 여 간단히 어떤 출혈을 멈추게 하는 사출 사이트에 압력을 적용 하 고 새 장에 동물을 배치.
참고: 모든 주입 하 고 적절 한 레이블 케이지 표시를 마우스에 대 한이 프로세스를 수행 합니다. L. monocytogenes inoculum의 포스트 주입 농도 확인 하려면 2.3 inoculum의 나머지 금액을 사용 하 여 단계를 반복 합니다. 정 L. monocytogenes 감염 inoculum 마우스 당 평균 CFU 측정에서 사전 및 사후 주입 inoculum 샘플으로 보고.
- 면 거 즈를 사용 하 여 간단히 어떤 출혈을 멈추게 하는 사출 사이트에 압력을 적용 하 고 새 장에 동물을 배치.
- 감염 된 동물을 매일 모니터링 하 고 질병의 어떤 명백한 표시 (예, 모피, 돌출된 자세, 느린 운동, 체중 감량 쓸). 표시 하는 이전 연구에서 72 h 후 감염 (예를 들어, 24, 48 h 후 감염) 크게 죽어가는 고통 없이 희생 동물을 제거 합니다. 매일 모니터링 모든 나머지 동물은 감염 된 후 72 h에 희생 될 때까지 계속 합니다.
참고: L. monocytogenes 변형 10403S BALB/c 마우스에 대 한 50% 치 사 량 (LD50) ~ 1-2 × 104 CFU/동물 이다. 위에 표시 된 대로 L. monocytogenes 이 프로토콜을 사용 하 여의 LD50 복용량으로 감염 된 쥐 질병의 증상을 보이기 있습니다 그리고 조사 시작 72 h 후 감염 다음 감염에 굴복 하는 쥐를 기대할 수 있습니다.
4. 절 개 및 심장 관류의 마우스에 감염 된 L. monocytogenes
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감염 된 후 72 h (또는 이전 시간에서), CO2 질 식 자 궁 경관 탈 구 뒤 등 기관 동물 윤리 위원회에 의해 승인 하는 프로토콜을 사용 하 여 감염 된 쥐를 안락사.
참고: 혈액 컬렉션 수행 될 경우, 자 궁 경부 전위를 수행 하는 동안 혈관의 찢기 최소화 합니다.- 쥐 발 트 위치 응답의 부재에 의해 안락사 되는 확인 합니다.
참고: 심장 관류 수행 하는 것입니다, 4 mL 볼륨/min 흐름 속도로 자동된 펌프/관류 시스템을 설정 합니다.
- 쥐 발 트 위치 응답의 부재에 의해 안락사 되는 확인 합니다.
- 해 부 팬에서 그것의 뒤에 동물을 놓고 복 모피/피부 표면에 75% 에탄올을 적용 합니다.
- 가 위를 사용 하 여 복 부 벽에 절 개를 확인 하 고 바로 흉 곽 아래를 절 개를 확장.
- 다이어 프 램 및 내장 장기를 노출 합니다.
참고: 있을 어떤 내장 장기를 괴롭히다 하지 않도록 주의 하십시오. - 횡 경 막을 절단 하 여 흉 강을 열고 양측 노출은 심장의 좌 심 실에 흉 곽을 잘라.
- 삽입 21 G 나비 바늘 왼쪽된 심 실에 관류 시스템에 연결 하 고 다음 신중 하 게 잘라 혈 (~0.2 mL) 오른쪽 아 트리 움 2 mL 튜브 10mm ethylenediaminetetraacetic를 포함 하 고 마음 잡고 부드럽게 무딘 집게를 사용 하 여, 산 (EDTA) 응고를 방지 하기 위해입니다. 마우스에 심장 관류의 회로도 그림 2에 표시 됩니다.
참고: 관류 수행을 하지 않으면 혈액 수 있습니다 심장 찔린 1 mL 주사기를 사용 하 여 수집 되며 신속 하 게 포함 하는 10 mM EDTA 응고를 방지 하기 위해 2 mL 튜브로 전송. L. monocytogenes-감염 된 장기는 다음 단계로 설명 (5.1) 수확. - 관류를 시작 하 고 10 mM EDTA를 포함 하는 PBS의 15-20 mL와 4 분에 대 한 동물을 perfuse.
참고: PBS-EDTA 솔루션 통해 오른쪽 아 트리 움 및 해 부 팬으로 흐르는 혈액을 관찰 하 여 재 관류를 평가 합니다. 두뇌와 간 완전 한 관류 수확된 장기 및 하지 순환 혈액에서 잔여 박테리아는 확인 후 blanched 나타납니다 합니다.
5. 장기 수확 및 세균성 짐의 결심
- 다음 관류, 신중 하 게 모든 맥 관 구조와 인 대를 제거 하 여 수확 장기 (예: 간, 비장) 연결 된 고 장기 별도로 살 균 냉 (4 ° C) PBS의 5 mL를 포함 하는 살 균 15 mL 원뿔 튜브 합니다. 추가 처리가 발생할 때까지 얼음에 샘플을 저장 합니다.
-
두뇌를 수확, 목을 벨가 위를 사용 하 여 귀 뒤에 머리 하 고 잘라 두 피 피부 중간 중간 선 아래로 동물의 눈. 필요한 경우 트림 초과 조직 유지가 위의 두개골에 대 한 누르면.
- 부드럽게 구멍 매그넘 (척수를 통해 전달 하는 두개골의 기지에서 구멍)에 위의 한 끝을 삽입 하 고 양쪽에 두개골 옆으로 잘라.
- 부드럽게 잘라 두개골 사이 측면 압력을 적용 해야 되 고, 중간 선 아래 설치류의 눈. 두뇌의 섭 동을 방지 하 고 뇌 조직과 위 사이 최소 접촉을 유지.
- 좋은 팁 집게를 사용 하 여 두개골 두뇌를 노출 하 고 뇌의 뇌 제거를 두개골의 기지 사이 주걱 장소을 엽니다.
참고:이 두뇌 신경 섬유의 찢 어에 발생 합니다. - 조심 스럽게 메 마른 차가운 PBS의 5 mL를 포함 하는 15 mL 원뿔 튜브에 두뇌를 전송 합니다.
- 마우스 시체를 버리고 고 나머지 동물에 대 한 이러한 단계를 반복 합니다.
참고: 모든 장기 수확 되어, 일단 프로시저 영역을 청소 하 고 세균성 부담을 결정 하는 기관 균질에 대 한 준비.
- 깨끗 하 고 조직 균질 화기 팁 삽입 10 s에 순차적으로 5% 표 백제, 살 균 물, 75% 에탄올, 살 균 물 각 별도 15 mL 원뿔 튜브에 포함 된에 균질 화기를 실행 하 여 캐비닛에 biosafety 배치의 끝을 소독.
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감염 된 뇌를 균질 (~ 20 설정에 s 6, 최대 rpm) 15 mL 원뿔 튜브 아니 보이는 조직 파편 남아 때까지.
- 깨끗 한 세균을 방지 하기 위해 균질 화기 단계 5.3에에서 설명 된 대로 다음 기관 샘플 오염 월.
- 다른 기관 (예를 들어, 간, 비장)에 대 한 균질 화 과정을 수행 합니다.
- 균질 프로세스가 완료 되 면 청소는 균질 화기 추가 사용까지 단계 5.3 및 저장소에 설명 된 대로.
-
살 균 PBS에 기관 homogenates의 10 연속 희석을 준비 하 고 결정 기관 당 CFU BHI 천/스 판에 희석 접시.
참고: 유사한 방법은 혈액의 mL 당 CFU를 결정 하기 위해 수행 됩니다.- 모든 희석은 도금 후 하룻밤 37 ° C 배양 기 격판덮개 전송.
- 다음 날, 기관 당 박테리아의 총 수 또는 혈액의 mL 다음과 같이 결정 각 접시에 식민지의 수를 계산:
CFU/기관 (x 희석 요소 식민지의 수) = homogenate의 mL 도금 x 5 /
CFU/mL의 혈액 (x 희석 요소 식민지의 수) = / mL 혈액의 도금
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Representative Results
두뇌는 매우 나가도록 하 고 L. monocytogenes 세포 유형 혈액3,13에 있는 감염으로 알려져 있다. 설명된 프로토콜 L. monocytogenes 의 능력을 감염 쥐에 있는 두뇌의로 이어지는 혈액-뇌 장벽 (BBB)을 통과 하는 데 사용 됩니다. 박테리아 vivo에서BBB 교차 하는 경우를 확인 하려면 마우스에서 혈액의 재 관류는 두뇌에 있는 세균성 짐을 결정 전에 수행 됩니다. 그렇지 않으면, 얻은 CFU는 뇌의 혈관에 존재 하는 박테리아를 포함할 수 있습니다. L. monocytogenes 감염 두뇌 (그림 3A)와 (그림 3B) 간 전이나 후 관류 72 h 감염 된 후에 표시 됩니다. 그림 4 에서는 세균 부담 L. monocytogenes-감염 된 마우스 장기 및 뇌, 혈액, 간, 그리고 각 마우스의 비장에 박테리아의 수를 보여줍니다. 이러한 데이터는 관류의 제안 동물 크게 미치지 않았다 마우스 장기 연구 (그림 4) 검사에서 세균 부담.
그림 1 :의 도식 개요는 L. monocytogenes vivo에서 감염 프로토콜. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 심장 관류 절차의 회로도. 관류 좌 심 실 (단계 4.6)에 관류 바늘의 삽입을 보여주는 마우스 마음 통해. 바늘 삽입, 다음 즉시 절 개가 이루어집니다 오른쪽 아 트리 움으로 관류 절차를 시작. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 마우스 장기 감염 다음 수확 L. monocytogenes. BALB/c 마우스 정 맥 감염 된 야생-타입 L. monocytogenes 10403S, (1-2x 104 박테리아/동물)와 측면 꼬리 정 맥 주입을 통해 . 72 시간 후 감염, 마우스 했다 안락사와 마우스 장기 수집 된 또는 안락사 마우스 했다 수확 하는 기관의 이전 10 mM EDTA를 포함 하는 PBS의 15-20 mL로 심장을 통해 끼얹는다. 대표적인 두뇌 (A)과 간 (B) 비 끼얹는다 또는 끼얹는다 쥐에서 표시 됩니다. Note 관류는 세균성 CFU 확보에서 수확된 장기 조직과 조직 내의 순환 혈액 하지 후 마우스 장기 화이트/창백 (blanched) 나타납니다. 이 그림은 Ghosh 외., 201814에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : 감염 된 마우스 장기에 세균성 부담. BALB/c 마우스는 그림 3에 설명 된 대로 야생-타입 L. monocytogenes 10403S와 정 맥 감염 되었다. 72 h 후 감염, 뇌, 혈액, 간, 그리고 각 마우스의 비장에 수집 되었고 세균 부담 결정. 별도 실험에서 쥐의 전신 관류 수행 하 고 각 기관 내에서 세균 부담 결정. 수평 라인 중간 값을 나타냅니다. * 이 그룹에 대 한 혈액 심장 관류의 시작 직전 수집 되었다. 이 그림은 Ghosh 외., 201814에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
L. monocytogenes 는 인간의 생명이 meningoencephalitis를 일으킬 수 있다. 이전 연구는 혈액 뇌 장벽 (BBB)을 통과 하 고 두뇌를 식민지 화 박테리아의 능력을 증명 하고있다. 감염 시 뇌의 3 개 노선 제안: BBB 박테리아에 의해, 안으로 단 세포3및 axonal 마이그레이션 L. monocytogenes 긴장 시키는 포함 하는 박테리아에 의해 스텔스 수송의 침투를 직접 rhombencephalitis15. 두뇌는 매우 나가도록, L. monocytogenes 조직의 감염 시 혈액에서 순환으로 알려져 정도 L. monocytogenes 의 결정 이므로 중앙 신 경계를 식민지로 혈관에 침투 수 및 두뇌는 중요 합니다.
설명된 프로토콜에서 정 맥 꼬리 정 맥 주입 체계를 설정 하는 데는 L. monocytogenes 감염 쥐에서. 이 방법은 장 배리어를 무시 하 고 혈 류에서 BBB의 특히 세균성 내 습 평가 유용 하다. 프로토콜 몇 가지 중요 한 매개 변수를 설명합니다. 한 중요 한 매개 변수는 vivo에서 실험 하는 동안 적절 한 세균 감염 복용량의 사용을 이다. 이것은 다른 동물 그룹 L. monocytogenes감염에서 얻은 세균 CFU 비교할 수 있을 중요입니다. 고려해 야 할 또 다른 중요 한 측면은 실험 연구에 사용 하는 L. monocytogenes 스트레인. 여러 보고서 pathogenicity 및 감염 뇌10,16수 다양 한 L. monocytogenes 변종 간의 차이 제안 했다.
L. monocytogenes 감염 생물학의 다른 측면의 시험을 촉진 하기 위해 여기에 설명 된 프로토콜을 수정할 수 있습니다. L. monocytogenes 감염 장기 장기 감염된 제어 동물에 비해 감염된 마우스에서 보이는 염증 성 변화를 관찰 하는 histopathological 분석에 대 한 추가 처리할 수 있습니다. 설명 하는 방법 L. monocytogenes 변종 인간 감염에 참여 뿐만 아니라 잠재적인 독성 결정에 정의 된 돌연변이 체를 은닉 하는 긴장 관련 병 고기 추가 특성에 적용할 수 있습니다. 이러한 응용 프로그램은 최근 호스트 세포 표면 vimentin 호스트 병원 체 상호 작용에서의 중요성을 강조 하는 L. monocytogenes 에 의해 뇌의 감염을 강화 하 고 발전 하는 비 발한 수용 체 ligand 상호 작용을 수행 14.
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Disclosures
저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.
Acknowledgments
이 작품은 미국 공중 보건 서비스에 의해 지원 되었다 국립 보건원에서 AI103806를 부여.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion media | Becton Dickinson | 237200 | |
| Streptomycin sulfate | Amresco | 0382-50G | |
| Petri dishes | VWR | 25384-342 | |
| Glycerol | VWR | 97062-832 | |
| IKA T18 ULTRA-TURRAX Basic Homogenizer | IKA | 3352109 | Model: T18BS1 |
| Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 800 series | |
| BALB/c mice | Jackson Laboratory | Model #000651 | |
| 1 mL syringes | Becton Dickinson | 309659 | |
| 26 G needles | Becton Dickinson | 305115 | |
| 21 G butterfly needles | Becton Dickinson | 367281 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma-Aldrich | 60004 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| Round-bottom test tubes | VWR | 60819-546 | |
| Phosphate-buffered saline | Corning | 46-013-CM | |
| Stainless steel spatula | VWR | 82027-520 | |
| Stainless steel scissors (6.5 in) | VWR | 82027-592 | |
| Stainless steel scissors (4.5 in) | VWR | 82027-578 | |
| Stainless steel blunt forceps (4.5 in) | VWR | 82027-440 | |
| Stainless steel fine tip forceps (6 in) | VWR | 82027-406 |
References
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