Summary
I denne protokol beskriver vi den fulde proces af eksperimentelle nærsynethed tilskyndelse i mus med nydesignede briller og den teknik, der er nødvendige for at opnå stabil og reproducerbare resultater i okulær parameter målinger.
Abstract
Murine model af nærsynethed kan være et effektivt redskab for nærsynethed forskning på grund af den forholdsvis let genmanipulation. Én måde at fremkalde nærsynethed i dyr er at sætte klare minus linser foran øjnene for uger (linse-induceret nærsynethed, LIM). Men bevarede protokoller for tilskyndelse og evaluering varierer fra laboratorium til laboratorium. Her, beskrevet vi en meget praktisk og reproducerbar metode til at fremkalde LIM i mus med nydesignede briller. Metode rettelser linse stabilt foran musen øjet samtidig giver mulighed for linsen at være taget ud til rengøring eller aktuelle medicin administration. Fænotype er robuste og effektive, og afvigelsen er lille. Metoden beskrives her kan anvendes på mus lige efter fravænning, som udvider den mulige varighed for eksperimenter. Vi gav også teknisk rådgiver for reproducerbare resultater i brydning og aksial længde målinger. Vi håber den trinvise protokollen beskrevet her og detaljeret artiklen kan hjælpe forskerne med at udføre nærsynethed eksperimenter med nærsynethed mere smidigt og gøre dataene sammenlignelige på tværs af laboratorier.
Introduction
Forekomsten af nærsynethed er steget dramatisk for nylig, mens mekanismen af dens debut og progression er stadig i vid udstrækning unknow1. Den mest karakteristiske Fænotypen af nærsynethed er strækning af aksial længde (AL), hvilket øger risikoen for retinal komplikationer eller endda blindhed2. For bedre at forstå patogenesen af nærsynethed og udvikle effektive behandlinger, er robust nærsynet dyremodeller og stabil fænotype evaluering nødvendig.
Kort, to metoder eksisterer for at fremkalde nærsynet stater i dyr: form-afsavn Nærsynethed (FDM) og linse-induceret Nærsynethed (LIM)3. Førstnævnte steder diffusorer foran øjet eller sutures øjenlåg for at sløre billedet, som påvirker den normale udvikling af øjeæblet, hvilket resulterer i en nærsynethed fænotype. De sidstnævnte steder minus linser foran øjet flytte omdrejningspunkt bag nethinden. Nethinden registrerer en forskydning af fokus og elongates øjeæblet for at justere nethinden og omdrejningspunkt. For FDM, efter øjenlåget er lukket eller diffuser har været fast foran øjet, er næsten ingen yderligere vedligeholdelse nødvendig. Linsen skal tages af for rensning for at holde det gennemsigtige for LIM. FDM er således relativt let at være induceret teknisk. Men mekanismerne af FDM og LIM er forskellige, og hvilken metode efterligner nærsynethed i menneskelige bedre er stadig under debat3. En af styrkerne ved LIM er stærkere fænotype sammenlignet med FDM, i det mindste i forbindelse med mus4.
Dyr, der har været anvendt for at fremkalde nærsynethed omfatter kyllinger5, aber6, tree spidsmus7, marsvin8og mus4. I betragtning af muligheden for genmanipulation, rigelige tilgængelige antistoffer og lave omkostninger til avl, kunne mus have været førstevalg som dyremodel for nærsynethed. Sammenlignet med andre større dyr, er fastsættelse linser eller diffusorer foran musen øjet dog relativt vanskeligt især for unge mus som lige efter fravænning. For de eksperimenter, der har brug for aktuel drug administration eller flere mellemliggende øje målinger, er det også nødvendigt, at rammen skal være flytbare. En anden udfordring er den lille morfologisk ændring af mus øjeæblet, som har bør for avancerede teknik og enheder til at evaluere. Til dato har forskellige inducerende og måling af protokoller, der bruges i forskellige forskningsgrupper gør det svært at sammenligne og gentage resultaterne på tværs af laboratorier. En standardprotokol med detaljer er nødvendig.
Tidligere værker beskrives flere metoder til at løse linser eller diffusorer foran musen øjet, såsom limning9, syning10 og hoved-monteret goggle frame11,12. Vi kombineret exist hovedmonteret goggle technics11,12,13 med vores nydesignede ramme til at udvikle en afhjælpes protokol for at fremkalde robust og effektiv eksperimentelle nærsynethed i mus. Protokollen kan anvendes til unge mus snarest efter fravænning på postnatal dag 21 (p21). Vi har også optimeret processerne for stabil og præcis vurdering af fænotyper herunder brydning og AL. Vi håber, denne standardiseret protokol kan bidrage til at gøre nærsynet mus en mere lettilgængelig model for nærsynethed forskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer blev godkendt af den etiske komité på Animal forskning af Keio University School of Medicine fulgt atomteknologileverandørernes sætningen ARVO brug af dyr i Ophthalmic og Vision forskning, den institutionelle retningslinjer på dyret eksperimenter på Keio Universitet, og dyret forskning: rapportering af i Vivo eksperimenter (kommer) retningslinjer for brug af dyr i forskning.
1. montering af briller til mus
- Forberede dele nødvendige for montage briller (figur 1a). For hver mus, forberede alle followings: en hovedmonteret nylon stick, en højere og en lavere titanium stel, to objektiver med ordentlig beføjelser ifølge Formålet med forsøget, én M1.4 størrelse skrue med længde på 10 mm, en møtrik for M1.4 størrelse skrue, en almindelig skive til M1.4 størrelse skrue med 0,3 mm tykkelse, og to kunstige negl tip (Tabel af materialer).
Bemærk: To slags rammer findes med forskellige højder. For en mus bruges en højere ramme og en nederste ramme som et sæt. Højere rammer bør sættes over de lavere dem for at gøre felterne vision symmetrisk. Stel og linser er specielt designet og fremstillet af forfatternes forskergruppe. Disse fås ved at kontakte de tilsvarende forfatterne til denne artikel. Andre dele kan findes i detailhandlen værktøj. - Samle rammen til den højre og venstre øje separat.
- Arrangere Fingernegl tip til ansigt retning for at opnå den bedste beskyttende virkning. Justere vinklen mellem Fingernegl tip og ramme til at være omkring 130° at undgå maskering feltet mus vision (figur 1b). Overhold de kunstige negl tips til rammen ved hjælp af ren klæbemiddel.
Bemærk: Fingernegl tip kan hjælpe med at beskytte linsen mod at blive ridset af musen. Retning af Fingernegl tip skal være modsatte fordi de højere ramme og den nederste ramme bruges til det højre øje og venstre øje, hhv. - Vent i mindst 12 timer at lade limen tørre helt, så brug et søm clipper for at justere formen af Fingernegl tips til at være ca 1 cm × 1 cm ved at skære og trimning.
- Overholde linse til rammen ved hjælp af ren klæbemiddel. Sætte linsen på rammen i hånden og hold rammen vandret. Injicere ren limen fra kanten af linsen og lade de selvklæbende spredning af overfladespænding.
Bemærk: Limen vil erodere linsen og påvirke dets gennemsigtighed, så sørg for limen kun berører den perifere del af linsen. Brug 0 diopter (D) plano linse som kontrol og minus linse til at fremkalde nærsynethed. Effekten af forskellige beføjelser minus linser (–10 D til –50 D) har været beskrevet andetsteds4. For at maksimere nærsynethed tilskyndelse, anbefales – 30 D linse for at fremkalde nærsynethed. FDM kan også induceres med den samme enhed blot ved at ændre linsen ind i hætten af 1,5 mL microtube som diffuser.
- Arrangere Fingernegl tip til ansigt retning for at opnå den bedste beskyttende virkning. Justere vinklen mellem Fingernegl tip og ramme til at være omkring 130° at undgå maskering feltet mus vision (figur 1b). Overhold de kunstige negl tips til rammen ved hjælp af ren klæbemiddel.
- Spænd skruen i nylon stick sammen med skive fra den flade side af pinden. Forberede briller og stave før forsøget henholdsvis og lager for yderligere brug (figur 1 c).
Bemærk: Protokollen kan pause her.
2. målinger af brydning og AL Baseline.
- Påfør en dråbe af Mydriatisk agent som indeholder 5 mg/mL tropicamid og 5 mg/mL phenylephrin hydrochlorid på hver side af øjeæblet spile eleven. Vent i mindst 5 min. før generel anæstesi.
Bemærk: Spile eleven under general anæstesi vil forårsage reversible katarakt, som påvirker målingen bagefter. Altid spile eleven før generel anæstesi og vente mindst 5 min. En dråbe (ca. 0,05 mL) af Mydriatisk agent er nok dilatere elev af musen øjet, mens flere agent vil gøre nogen skade til følgende trin. - Sætte musen under generel anæstesi. Forstå bagsiden huden af mus sagte til at holde musen fra at støde sit øje, indtil det er helt bedøvet. Bedømme dybden af generel anæstesi være nok, hvis musen ikke flyttes når det er lagt på bordet frit.
Bemærk: En kombination af midazolam (40 μg/100 μL), medetomidine (7,5 μg/100 μL) og butorphanol tartrat (50 μg/100 μl) anvendes her for generel anæstesi for mus med et volumen på 0,01 mL/g intraperitoneal injektion. Generelt, mindre end 5 min er nødvendig for mus til at falde i søvn. Lang tid af generel anæstesi forårsager lav kropstemperatur og langsom hjerterytme. For at undgå potentielle påvirkning af generel anæstesi til måling, efterbehandling alle målinger inden for 10 min efter injektion af anæstesi anbefales. Butorphanol i den bedøvende cocktail giver ca 4 timer af analgesi. Ordentlig opskrift for generel anæstesi kan forskellige institutioner. - Måle brydningen af musen øjet ved hjælp af en infrarød photorefractor4,9,14. Justere retningen af en mus øjne til at holde det første Purkinje billede i midten af eleven og måle refraktion langs den optiske akse. Efter måling, måle det modsatte øje med de samme procedurer (fig. 2a).
Bemærk: Værdien målt for brydning er stærkt påvirket af placeringen af musen øjet langs den optiske akse. Sikre det første Purkinje billedet justeres inden for ±3 grader fra midten af elevens. Workbench spektrale domæne optisk kohærens tomografi (SD-OCT) system kan anvendes til finjustering af retning af elev i brydning målinger4. - Måle AL af musen øjet ved hjælp af et SD-okt system4,15,16. Definere AL som afstanden fra den hornhinde vertex til den lyseste grænse i nærheden af den optiske nerve (figur 2b).
Bemærk: I lighed med måling af brydning, AL er stærkt påvirket af retning af musen øjet. Den hornhinde vertex kan bekræftes af punkt-lignende refleksion på overfladen af hornhinden. Grænsen for nethinden side vil være meget diset på optiske nerve. Justere retningen lidt at lade grænsen være klart nok til at måle, men ikke alt for langt fra den optiske nerve.
3. fiksering af rammen på musen kranium.
- Påfør en dråbe af 0,1% renset natrium hyaluronate øjendråber til at forhindre tørhed på hvert øje.
Bemærk: Øjendråber på øjet overflade vil påvirke værdierne af brydning og aksial længde målinger. Brug ikke øjendråber efter anæstesi, indtil alle målinger er udført. - Sætte hagen af bedøvede musen på en skråning, lavet af ler eller noget kan bruges som en pude til at gøre upfront flyet af kraniet være vandret.
- Sterilisere håret og hovedbund mellem ører og øjne med vatpind med 70% ethanol.
- Skær huden mellem ører og øjne til at eksponere kraniet til omkring 0,8 cm2 ved hjælp af kirurgiske saks og pincet. Brug dental ætsning væske og bomuld bomuldsklud til at fjerne periosteum. Sterilisere kirurgisk saks og pincet med 70% ethanol før operationen af hver mus.
Bemærk: Klipning af hår og bære sterile handsker kan være påkrævet. Check bestemmelserne i relevante dyrs pleje udvalg inden denne procedure. I de fleste tilfælde, kan dental ætsning væske findes som en af de vedhæftede filer i den selvstændige helbrede dental selvklæbende system. Hvis dental ætsning væsken ikke er tilgængelig, skal du bruge 70% ethanol. - Samle et sæt rammer uden linse til at hjælpe med at løse pinden ind på den rigtige position. Sætte rammer på musen hovedet. Nøje justere placeringen af rammer for at sikre begge øjne er midt i den tomme ramme.
- Bruge en selvstændig helbrede dental selvklæbende system til at vedhæfte stick på musen hoved. Pas på ikke at lade adhere system flow ind i musen øjet væske.
Bemærk: Metode til at bruge den selvstændige helbrede dental selvklæbende system er forskellige mellem produkter. Henvise til instruktionen omhyggeligt.
Forsigtig: Nogle af reagenser i dental klæbende systemet kan være giftige. - Vent i ca 5 min og tag rammen og møtrikken omhyggeligt uden at ændre placeringen af stick (figur 3a).
- Injicere 0,75 mg/kg Atipamezol hydrochlorid intraperitoneal for at hjælpe mus hen til opsving fra anæstesi hurtigere. Sætte musen i en individuel buret indtil fuldt tilbagebetalt. Efterlad ikke musen uden opsyn indtil den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed for at opretholde brystbenet recumbency. Protokollen kan være midlertidigt her.
4. indledning af nærsynethed induktion og vedligeholdelse bagefter
- Vent i mindst 24 timer efter operationen at lade musen tilbagesøge anæstesi helt. Forstå stick og sætte på rammer med linser. Tilskyndelse begynder på dette tidspunkt (figur 3b).
Bemærk: For at minimere ubehag under genoprettelse fra anæstesi og giver tid nok til at koagulere dental klæbende systemet, er det anbefales at sætte på rammen, når musene fuldt tilbagebetalt fra anæstesi. Harpiks cement af den selvklæbende system vil fuldt ud dække nedskæring på hovedbunden. Derfor, ingen specifik post-kirurgisk behandling er nødvendig for at forebygge infektion og mildne post-operative smerter. Lige efter første gang at sætte på rammen, vil mus være over bevidst at eksistensen af linsen og ridse det en masse. Grov opførsel vil være tilbage til normal efter et par timer. Mus med linser kan holdes med de samme tæthed til normale mus. - Fjerne rammen og rengøre linser og Fingernegl tip med bomuld svaberprøver mindst to gange om ugen for at opretholde gennemsigtigheden af linsen.
Bemærk: Det er ikke nødvendigt at sætte musen under anæstesi for at fjerne og sætte på rammen. Støtte for mus til at sidde på, i stedet for at lade dem hænge mens arbejder med dem kunne reducere nød.- Hvis en foreløbig måling er nødvendigt, sætte musen under anæstesi og måle musen som tidligere beskrevet. Tilskyndelse kan fortsættes efter musen inddrive fra anæstesi.
- Ren buret mindst to gange om ugen.
Bemærk: Denne hjælp at bevare linse klarhed. At sætte et net mellem musen og cage bund til filtratet madrester kan også være nyttige. - Overvåge kropsvægt og grov opførsel. Sammenligne dem med de samme alder uberørt mus under hele eksperimenterende proces.
NOTE: Bortset fra noget skrabe opførsel, ingen væsentlig ændring herunder kropsvægten er fundet mellem eksperiment mus med ubehandlede mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
At kontrollere først, hvis alle de nødvendige dele er udarbejdet (figur 1a). Et eksempel på et stykke af samlet briller er vist i figur 1b. Bortset fra hoveddelen af rammer og møtrikken er alle andre dele disponible for hvert mus. Et sæt af færdige briller er vist i figur 1 c. Ændre vinklen mellem de to billeder til at passe med musen med forskellige aldre.
Et eksempel på brydning måling er vist i figur 2a. Dette er en mus øjne induceret af en-30 D linse for 3 uger med start fra p21. Bemærk at blik kontrolleres tæt på 0 grader i både x og y akse, hvilket betyder, at musen er ser lige foran kamera9. Figur 2b viser et eksempel på en hele øjet billede taget af en SD-okt system tunet til mus og definitionen af hver del af øjet. Generelt, SD-okt systemer præsentere faktisk målte værdi direkte.
Et billede af stokken overholdt musen hoved er vist i figur 3a. Cut kant skal være mindst 3 mm fra øjet til at undgå at påvirke funktionen af øjenlåget. Stokken forbliver på musen hovedet indtil udgangen af tilskyndelse og danner grundlag for at fastsætte briller. Klæbestyrke af dental klæbende systemet formodes for at være nok til fiksering af briller under hele eksperimentet i ca 3-4 uger. Saml briller, som vist på figur 3b. To stykker af briller bør være forholdsvis symmetrisk.
Presentative resultater er vist i figur 4. I dette eksperiment, 0 D plano linser var fast foran de venstre øjne som interne kontroller og -30 D linser var fast foran det højre øje til at fremkalde Nærsynethed (C57B6/J mus, tilskyndelse startede fra p21, n = 4). Brydninger og ALs blev målt en gang om ugen efter begyndelsen af tilskyndelse for tre uger. Sammenlignet med 0 D plano linser, induceret-30 D en stærk nærsynet skift i både refraktion og AL. Ændringen af brydning nåede til toppen i den første uge og opholdt sig flad for de følgende to uger. Forskellen mellem ændring af nærsynet øjne og kontrol øjne i AL var signifikant fra den første uge og blev større og større i de følgende to uger.
Figur 1: design af kraniet monterede briller. (en) alle dele nødvendige for montage mus briller. (b) et eksempel på placeringen af rammen og negle tip til højre side af øjet. (c) et eksempel på et sæt samlet briller. Justere den fælles del for at ændre vinklen på rammer til at passe til mus i forskellige aldre. Dette tal er blevet ændret fra Jiang, X. mfl4, tilgængelige under en Creative Commons Attribution 4.0 International licens. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: prøve billeder af måling af brydning og AL. (en) et billede af brydning måling for et nærsynet øje ved hjælp af en infrarød photorefractor. (b) en prøve billede af en AL måling af musen øjet ved hjælp af et SD-okt system og definitionen af hver del af øjet bolden. Dette tal er blevet ændret fra Jiang, X. mfl4, tilgængelige under en Creative Commons Attribution 4.0 International licens. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: et billede af en mus efter operationen. (en) et eksempel på en mus efter operationen for at overholde pinden. (b) en mus med briller i begge sider. Dette tal er blevet ændret fra Jiang, X. mfl4, tilgængelige under en Creative Commons Attribution 4.0 International licens. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Presentative resultater af en tre-ugers opfølgning af nærsynethed tilskyndelse i fire mus bruger-30 D linser og 0 D objektiver som interne kontrolelementer. (en) ændringer af brydninger i tre uger. En pludselig ændring kan iagttages en uge efter tilskyndelse. (b) derimod ændringer i AL var forholdsvis milde. Stjernen markerer viste de statistiske betydninger mellem øjnene iført 0 D og -30 D linser i hver uge, henholdsvis. p < 0,05, **p < 0,01. Student t-test. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: anbefalet rutediagram for at fremkalde nærsynethed i mus. Rutediagrammet viste her repræsenterer en mulig mønster for at fremkalde nærsynethed i mus. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
For at sikre, at briller skal fastsættes stabilt på musen hovedet, skal flere trin i denne protokol være stor opmærksomhed. Periosteum skal fjernes helt før ved hjælp af dental selvklæbende system. Blod på kraniet skal også renses op med omhu. Mens en lille finjustering er acceptabelt lige efter påføring af limen, Flyt ikke stick ofte før den selvklæbende system tørre op. Følg instruktion af den selvklæbende system omhyggeligt, især forholdet mellem hver enkelt komponent af den endelige blanding. Hvornår forstå musen under vedligeholdelse af briller eller de opfølgende målinger efter operationen ikke fatter pind med krop af musen sammen. Det relative bevægelsesforløb mellem kraniet og stokken er den hyppigste årsag til falder ned af pinden. Med ordentlig kirurgi og grådige færdighed, ville antallet af individer, der falde ned stokken være mindre end én i en 3-ugers forsøg herunder 20 individer.
Hår og madrester kan glide ind i intervallet mellem øjet og linsen. Dette vil ikke kun påvirke gennemsigtighed af linsen, men også potentielt skade hornhinden overfladen fysisk. Det er nødvendigt for at holde gennemsigtighed af linsen, mindst to gange af rengøring hver uge. Dette vil også give mus chancen for at nette ansigtet for at reducere forekomsten af komplikationer til hornhinden. Efterlad et mellemrum for ca 1 mm mellem rammen og huden til at tillade musen til at blinke. Rammen kan gøre det svært for mus at nå mad uden for buret gennem gitteret ovenfor. Det anbefales derfor, at sætte mad på gulvet i buret direkte. Ændring i buret i ren sig nemlig om to gange om ugen vil også bidrage til at holde linserne ren. Beskidte linser blive diffusorer inducerende nærsynethed gennem form-afsavn mekanisme. Dette kan vrides data og gøre resultatet være svært at fortolke da beviserne viste, at FDM og LIM er forskellige modelsystemer i ætiologi3.
På grund af den lille størrelse af øjet, mus, målte øje parametre har tendens til at være ustabile. Vi anbefaler den infrarøde photorefractor udviklet af Dr. Schaeffel for brydning måling9 og et SDOCT system for AL4 (Se Tabel af materialer). Begge systemer præsentere tilstrækkelige oplysninger til at bedømme pålideligheden af den målte værdi for repeterbarhed af målingen. For brydning, som argumenteret i forrige rapporter, er det yderst vigtigt at bevare måling på akse4,14. At holde blik kontrol inden for ±3 grader kunne modtage stabile resultater. For at opnå denne præcise måling, kan tube af SDOCT systemet være nyttigt når tweaking retning af musen øjet. For AL måling, det reflekterede lys på cornea vertex og den lyseste grænse i nærheden af den optiske nerve er to pålidelige anatomiske mærker, der sikrer repeterbarhed af denne måling.
Protokollen beskrevet her induceret betydelig nærsynet stater i mus inden for en uge. Selv om mekanismen er stadig ukendt, ændringen i brydning og AL er ikke nødvendigvis parallel. Da AL holdt stigende nærsynet efter en uge, anbefales måling at gøre tre gange i alt: før, én uge og tre uger efter tilskyndelse. En af eksempel rutediagrammer for nærsynethed induktion er viste i figur 5. Baseret på tidligere rapport4, startende fra p21 og bruger - 30 D linser er anbefalet for LIM. eksperimenter sidst for over 4 uger kan have høj forekomst af svær hornhinden komplikationer, der påvirker den målte værdi og fremskynde forbrug af linser . Den hyppigste komplikation er cornea ardannelse. Mus kan ikke rense deres ansigter og øjenlåg iført rammen, som kan være årsagen til komplikation.
Den enhed, der beskrives i denne protokol kan anvendes til mus lige efter fravænning (p21). Dette kan delvis bidrager til stærk fænotype observeret4. Rammen er flytbare uden generel anæstesi. Dette giver ikke kun forsker til at rense linserne nemt, men også gøre aktuel drug delivery muligt4. En anden styrke er, at linserne kan let ændres til diffusorer eller linser med forskellige dioptrier (fx., plus linser), der udvider mulighederne for denne metode. En begrænsning af denne metode er, at operationen behov nogle praksis, før rammerne kan overholdes stabilt for hele eksperimentet. Målingerne skal også tålmodighed til at indsamle pålidelige data.
Mus er uerstattelige dyremodel med sin muligheden for genetisk manipulation og de lave omkostninger til avl. Vi håber, at protokollen beskrevet her kunne gøre den eksperimentelle nærsynethed i mus en mere praktisk model for nærsynethed forskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Design af musen monokel har ansøgt om et patent (ansøgning nr. 201741349).
Acknowledgments
Vi takker M.T. Pardue for rådgivning om SDOCT, F. Schaeffel for rådgivning på målinger af brydning og hornhinde krumning, Mr. Sanshouo for at genskabe den tre-dimensionelle rammedata, M. Miyauchi; K. Tsubota; Y. Tanaka; S. Kondo; C. Shoda; M. Ibuki; Y. Miwa; Y. af洼田空穂麦草句碑Hagiwara; A. Ishida; Y. Tomita; Y. Katada; E. Yotsukura; K. Takahashi; og Y. Wang for kritiske diskussioner. Dette arbejde blev støttet af tilskud inAid for videnskabelig forskning (KAKENHI, nummer 15K 10881) fra ministeriet for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi (MEXT) til TK. Dette arbejde er også støttet af tilskud for nærsynethed forskning fra Tsubota laboratorium, Inc. (Tokyo Japan).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| screw | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| washer | MonotaRO | 42166397 | |
| nut | MonotaRO | 42214243 | |
| stick | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| frame | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| lenses | RAINBOW CONTACT LENS | none | customized for mice use by the company |
| cyanoacrylate glue | OK MODEL | MP 20g | |
| dental adhesive resin cement | SUN MEDICAL | super bond | contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull |
| infrared photorefractor | Steinbeis Transfer Center | none | designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen |
| Spectral domain OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | components for the anesthetic |
| medetomidine | Orion Corporation | Domitor | components for the anesthetic |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | components for the anesthetic |
| 0.1 % purified sodium hyaluronate | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
References
- Dolgin, E.
- Ohno-Matsui, K.
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. Form deprivation and lens-induced myopia: are they different. Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).
- Jiang, X., et al. A highly efficient murine model of experimental myopia. Scientific Reports. 8 (1), 2026 (2018).
- Torii, H., et al. Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression. EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).
- Smith, E. L. 3rd, et al. Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).
- Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews. Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).
- Wu, Y., et al. Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis. Molecular Medicine Reports. , (2018).
- Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice. Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).
- Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. Mouse experimental myopia has features of primate myopia. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).
- Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia. Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).
- Gu, Y., et al. A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia. Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278 (2016).
- Siegwart, J. T. Jr, Norton, T. T. Goggles for controlling the visual environment of small animals. Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).
- Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice. Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).
- Chou, T. H., et al. Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).
- Park, H., et al. Assessment of axial length measurements in mouse eyes. Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).
