Summary
이 프로토콜에서 우리 실험 근 유도 사용 하 여 마우스에 새롭게 설계 된 안경, 눈 매개 변수 측정에 안정적이 고 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 필요한 기술의 전체 과정을 설명 합니다.
Abstract
근 시의 murine 모델 비교적 쉬운 유전자 조작으로 인해 근 연구를 위한 강력한 도구를 수 있습니다. 동물에서 근 시를 유발 하는 한 가지 방법은 주 (유도 하는 렌즈 근 시 임) 눈 앞에서 렌즈 뺀 분명 넣어 하는 것입니다. 그러나, 유도 및 평가 대 한 현존 프로토콜 연구실 실험실에서 다릅니다. 여기, 우리가 새로 설계 하는 마우스를 사용 하 여에 임 안경 유도를 매우 실용적이 고 재현 가능한 방법을 설명 합니다. 방법 수정 하면서 마우스 눈 앞 안정적으로 렌즈 수 있습니다 국 소 또는 청소를 위해 이륙 하는 렌즈 관리 마약. 표현 형 강력 하 고 효율적 이며 분산 작습니다. 여기 설명 하는 방법은 마우스는 실험에 대 한 가능한 기간 연장 이유 후 바로 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 준 기술 굴절 및 축 길이 측정에서 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 조언. 우리 여기에서 설명 하는 단계별 프로토콜 희망과 상세한 기사 myopia 근 시 실험을 더 원활 하 게 수행 하 고 데이터 비교 연구소에서 연구원을 도울 수 있다.
Introduction
근 시의 보급 최근에 극적으로 증가 했다, 그것의 발병 및 진행의 메커니즘은 여전히 크게 unknow1. 근 시의 가장 특징적인 표현 형의 축 길이 (알), 망막 합병증 이나 심지어 실명2에 대 한 위험 증가 신장 이다. 근 시의 병 인을 이해 하 고 효과적인 치료법을 개발에 강력한 근 시 동물 모델 및 안정적인 표현 형 평가 필요 하다.
짧게, 두 가지 방법을 유도 하는 동물에서 근 시 상태에 대 한 존재: 모양 박탈 근 시 (FDM)와 렌즈 유도 근 (임)3. 전 눈 앞 디퓨저를 장소 또는 근 표현 형에 따른 안구의 정상적인 발전을 좌우 하는 이미지를 보이지 않게 하기 위해 눈 꺼 풀 sutures. 렌즈는 망막 뒤에 초점을 이동 하는 눈 앞에 마이너스 후자의 장소. 망막 초점의 변화를 감지 하 고 망막 및 초점을 다시 맞추고 하 안구 elongates. FDM, 눈 꺼 풀 닫히거나 디퓨저, 눈 앞에서 수정 되었습니다 후 거의 추가 정비 필요 합니다. 임, 렌즈 투명 유지 하기 위해 청소를 위해 이륙 해야 합니다. 따라서, FDM 기술적으로 유도를 상대적으로 쉽습니다. 그러나, FDM과 임의 메커니즘은 서로 다른, 그리고 어떤 방법을 모방한 인간의 근 시 더 나은 아직 논쟁3. 임의 장점 중 하나는 마우스4의 경우 적어도 FDM, 비해 강한 표현 형.
근 시 유도에 사용 된 동물 등 여자5, 원숭이6, 트리 shrews7, 기니 돼지8, 마우스4. 유전자 조작, 풍부한 제공 항 체, 그리고 번 식에 대 한 낮은 비용의 가능성을 고려 하면 쥐 되었을 수 있습니다 첫 번째 선택 myopia의 동물 모델. 그러나, 다른 더 큰 동물에 비해, 렌즈 또는 마우스 눈 앞 디퓨저 수정은 상대적으로 젊은 마우스 오른쪽 등 특히 어려운 이유 후. 국 소 의약품 안전 청 또는 여러 중간 아이 측정을 필요로 하는 실험, 이동식 수 프레임에 필요한 이기도 합니다. 또 다른 도전은 정교한 기술 및 평가 하는 장치는 마우스 안구의 작은 형태학 변화 이다. 날짜 하려면, 다른 유도 및 다른 연구 팀에서 사용 되는 프로토콜을 측정 그것은 어렵게 만들 비교 하 고 결과 반복 하 여 실험실에서. 세부 표준 프로토콜은 필요 합니다.
이전 작품 렌즈 또는 확산 기9,10 및 머리 거치가 글 프레임11,12바느질을 붙이는 등 마우스 눈 앞에서 해결 하기 위해 여러 방법을 설명 합니다. 쥐에 강력 하 고 효율적인 실험 근 시 유도 위한 ameliorated 프로토콜을 개발 하기 위해 우리의 새롭게 설계 된 프레임에 함께 존재가 글 헤드 장착 기술11,12,13 하 고. 프로토콜은 출생 후 하루 21 (p21) 이유 직후 젊은 쥐에 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 고기 굴절 등 알의 안정적이 고 정확한 평가 위해 프로세스를 최적화 합니다. 우리는이 표준화 된 프로토콜 근 쥐 근 시 연구에 대 한 더 쉽게 접근할 수 있는 모델을 만들 수 있습니다 바랍니다.
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Protocol
모든 절차는 게이오 대학의 학부의 동물 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 ARVO 문을 안과 및 비전 연구, 동물 실험에서 게이오에 기관 지침에 동물의 사용에 대 한 준수 대학, 그리고 동물 연구: 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침.
1. 쥐에 대 한 안경 조립
- 안경 (그림 1a) 조립에 필요한 부품을 준비 합니다. 각 마우스에 대 한 모든 다음 준비: 머리 거치 한 나일론 스틱, 하나 더 높은 및 1 낮은 티타늄 프레임, 실험, 10 m m의 길이와 M1.4 크기 나사 하나, M1.4 크기 나사 한 너트, 하나의 일반의 목적에 따라 적절 한 능력을 가진 두 개의 렌즈 0.3 m m의 두께와 M1.4 크기 나사 세탁기 그리고 2 개의 인공 손톱 팁 (테이블의 자료).
참고: 프레임의 두 가지 서로 다른 높이와 존재. 1 마우스에 대 한 높은 프레임 및 낮은 프레임 집합으로 사용 됩니다. 높은 프레임 비전 필드 대칭 수 있도록 낮은 사람 위에 넣어 되어야 합니다. 프레임과 렌즈는 특별히 설계 및 저자의 연구 그룹에 의해 제조. 이러한이 문서의 해당 저자에 연락 하 여 사용할 수 있습니다. 다른 부분 소매 도구 상점에서 찾을 수 있습니다. - 별도로 오른쪽과 왼쪽 눈에 대 한 프레임을 조립 한다.
- 최고의 보호 효과 달성 하기 위해 외부 방향으로 얼굴을 손톱 끝을 정렬 합니다. 손톱 팁과 마우스 비전 필드 (그림 1b) 마스킹 피하려고 약 130 ° 되도록 프레임 사이의 각도 조정 합니다. 인공 손톱 팁 cyanoacrylate 접착제를 사용 하 여 프레임을 준수 합니다.
참고: 손톱 팁 마우스에 의해 긁힘을 렌즈를 보호 하기 위해 도울 수 있다. 손톱 끝의 방향 반대 해야 높은 프레임과 하단 프레임은 오른쪽 눈과 왼쪽된 눈 각각 사용 하기 때문에. - 적어도 12 h 건조, 다음 사용 하 여 손톱 깎기는 손톱의 모양을 조정 하는 접착제를 위한 대기 팁 절단과 트리밍에 의해 1 cm × 1 cm에 대 한 것.
- Cyanoacrylate 접착제를 사용 하 여 프레임에 렌즈를 준수 합니다. 프레임에 렌즈를 넣어 손으로 누르고 프레임 가로. 렌즈의 가장자리에서 cyanoacrylate 접착제를 주입 하 고 표면 장력에 의해 접착제 확산.
참고: 접착제 것 이다 침식 렌즈의 투명도 영향을 미칠, 그래서 접착제는 렌즈의 주변 부분에만 지 다는 것을 확인. 사용 0 디 옵 터 (D) 렌즈 렌즈 제어 및 근 시를 유발 하는 렌즈 빼기. 렌즈 (–50 D에 –10 D) 마이너스의 다른 힘의 효과 있다4설명 되어. 근 시 유도 최대화 하기 위해 –30 D 렌즈 근 시 유도 대 한는 것이 좋습니다. FDM 1.5 mL microtube 디퓨저로의 뚜껑에 렌즈를 변경 하면 동일한 장치와 유도 될 수 있다.
- 최고의 보호 효과 달성 하기 위해 외부 방향으로 얼굴을 손톱 끝을 정렬 합니다. 손톱 팁과 마우스 비전 필드 (그림 1b) 마스킹 피하려고 약 130 ° 되도록 프레임 사이의 각도 조정 합니다. 인공 손톱 팁 cyanoacrylate 접착제를 사용 하 여 프레임을 준수 합니다.
- 막대기의 편평한 측에서 세탁기와 함께 나일론 막대기에 나사를 조입니다. 안경 및 실험 전에 막대기를 각각 준비 하 고 더 사용 (그림 1c)에 대 한 재고.
참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.
2. 굴절 및 알 기준선의 측량.
- Mydriatic 에이전트 5 mg/mL tropicamide 및 안구의 각 측에 5 mg/mL phenylephrine 염 산 염을 포함 하는 눈동자를 팽창의 한 방울을 적용 합니다. 전신 마 취 전에 적어도 5 분 기다립니다.
참고: 일반 눈동자 팽창 마 취 이후에 측정을 좌우 하는 가역 백 내장을 일으킬 것입니다. 항상 일반 마 취 전에 눈동자를 팽창 하 고 적어도 5 분 기다립니다. Mydriatic 에이전트의 한 방울 (약 0.05 mL) 더 많은 에이전트는 다음 단계를 해 할 것입니다 하는 동안 마우스 눈의 눈동자를 dilating 충분 하다. - 전신 마 취 아래 마우스를 넣어. 부드럽게 완전히 anaesthetized 때까지 그것의 눈을 지원 해주에서 마우스를 유지 하는 마우스의 뒤로 피부 파악. 충분할 때 그것은 테이블에 자유롭게 마우스 주위에 이동 하지 않습니다 경우에 전신 마 취의 깊이 판단 한다.
참고: 조합의 midazolam (40 μ g/100 μ), medetomidine (7.5 μ g/100 μ) butorphanol 주석산 (50 μ g/100 μ)는 여기 쥐 0.01 mL/g 복 주사의 볼륨에 대 한 일반적인 마 취에 대 한 사용 됩니다. 일반적으로, 5 분 미만 잠들 마우스 필요 합니다. 전신 마 취의 장시간 낮은 체온 및 느린 심장 박동을 발생합니다. 전신 마 취 제 주사 후 10 분 이내 모두 측정을 마무리 하는 측정에의 잠재적인 영향을 피하기 위해 하는 것이 좋습니다. 마 취 칵테일에 butorphanol 진통의 약 4 시간을 제공 합니다. 전신 마 취에 대 한 적절 한 조리법은 기관에 의해 다른 수 있습니다. - 적외선 photorefractor4,,914를 사용 하 여 마우스 눈의 굴절을 측정 합니다. 눈동자의 센터에서 첫 번째 Purkinje 이미지를 유지 하 고 굴절 광학 축 따라 측정을 마우스 눈의 방향을 조정 합니다. 측정 후 같은 절차 (그림 2a)와 반대 눈을 측정 합니다.
참고: 굴절에 대 한 측정 값은 광학 축을 따라 마우스의 위치에 의해 강하게 좌우 된다. 첫 번째 Purkinje 이미지 눈동자의 중앙에서 ± 3도 내 맞춤 확인 하십시오. 굴절 측정4에 있는 눈동자의 방향으로의 미세 조정에 대 한 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월) 시스템의 작업 대를 사용할 수 있습니다. - SD-10 월 시스템4,,1516를 사용 하 여 마우스 눈의 알을 측정 합니다. 광학 신경 (그림 2b) 근처 밝은 경계에 각 막 정점에서 거리로 알을 정의 합니다.
참고: 유사한 굴절의 측정으로, 알은 강하게 영향을 마우스 눈의 방향으로. 각 막 정점 각 막의 표면에 점 모양의 반사에 의해 확인할 수 있습니다. 망막의 경계는 매우 광학 신경 순간 헷갈리는 될 것입니다. 방향 측정을 위해 충분히 명확 하지만 광학 신경에서 너무 멀리 경계를 조금 조정 합니다.
3. 마우스 두개골에 프레임 고정.
- 각 눈에 건조를 방지 하기 위해 0.1% 정화 나트륨 hyaluronate 눈 방울 한 방울을 적용 합니다.
참고: 눈 방울 눈 표면에서 굴절 및 축 길이 측정의 가치를 좌우할 것 이다. 모든 측정 할 때까지 마 취 후 눈 방울을 사용 하지 마십시오. - 찰 흙의 사면에 마 취 마우스의 턱을 넣어 또는 아무것도 두개골의 초기 비행기를 만들기 위해 베개 가로 수로 사용할 수 있습니다.
- 머리를 소독 하 고 귀와 눈을 70% 에탄올과 면봉을 사용 하 여 두 피.
- 귀와 눈을 위한 두개골 수술가 위 핀셋을 사용 하 여 0.8 c m2 에 대 한 노출 사이의 피부를 잘라. 치과 에칭 액체 및 면 면봉을 사용 하 여 여과 제거. 수술가 위, 핀셋 각 마우스의 수술 전에 70% 에탄올 소독.
참고: 클리핑 머리 하 고 멸 균 장갑을 착용 해야 합니다. 이 절차를이 수행 하기 전에 관련 동물 보호 위원회의 규정을 확인 하십시오. 대부분의 경우, 자체 치료 치과 접착제 시스템에 첨부 파일 중 하나로 치과 에칭 액체를 찾을 수 있습니다. 치과 에칭 액체를 사용할 수 없는 경우 대신 70% 에탄올을 사용 합니다. - 올바른 위치에 메모리를 수정할 수 있도록 렌즈 없이 프레임 세트를 조립 한다. 마우스 머리에 프레임을 넣어. 조심 스럽게 빈 프레임 중간에 두 눈은 되도록 프레임의 위치를 조정 합니다.
- 자기 치료 치과 접착제 시스템을 사용 하 여 연결 마우스 머리에 스틱. 수 마우스 눈에 adhere 시스템 흐름의 액체를 하도록 하지 않도록 주의.
참고: 자체 치료 치과 접착제 시스템을 사용 하기 위한 방법을 제품 사이 다르다. 신중 하 게 지시를 참조 하십시오.
주의: 일부 치과 접착제 시스템에 시 약의 독성이 있을 수 있습니다. - 약 5 분을 기다립니다 고 프레임과 너트에서 신중 하 게 스틱 (그림 3a)의 위치를 변경 하지 않고.
- Intraperitoneally 수 있도록 마우스 마 취에서 회복을 더 빠르게 0.75 mg/kg atipamezole 염 산 염 주사. 으로 개별 완전히 복구 될 때까지 마우스를 넣어. 두지 마십시오 마우스 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 프로토콜 여기 일시 중지 될 수 있습니다.
4. 근 시 유도 및 나중에 유지 보수 개시
- 마우스 마 취에서 완전히 복구할 수 있도록 수술 후 적어도 24 시간을 기다립니다. 지팡이 잡고 하 고 렌즈와 프레임에 넣어. 유치는이 시간 포인트 (그림 3b)에서 시작 됩니다.
참고: 마 취에서 회복 하는 동안 불편을 최소화 하 고 치과 접착제 시스템 응고에 대 한 충분 한 시간을 주고, 그것은 좋습니다 쥐 완전히 마 취에서 회복 후 프레임에 넣어. 수 지 시멘트 접착 시스템의 완전히 두 피 컷을 다룰 것입니다. 따라서, 구체적인 수술 후 치료 필요 감염을 방지 하 고 수술 후 통증 장황 합니다. 프레임에 처음으로 후 바로 마우스 끝날 렌즈의 존재를 의식 하 고 그것을 많이 긁어. 총 동작 몇 시간 후 정상으로 다시 것입니다. 정상적인 쥐에 동일한 밀도와 렌즈와 마우스를 보관할 수 있습니다. - 프레임을 제거 하 고 청소 렌즈와 손톱 팁 면봉으로 적어도 일주일에 두 번 렌즈의 투명도 유지 하기 위해.
참고: 그것는 마 취를 제거 하 고 프레임에 대 한 마우스를 넣어 필요가 없습니다. 고통을 줄일 수 있습니다 그들과 함께 작업 하는 동안 걸어 그들을 않고 앉아 쥐에 대 한 지원을 제공 합니다.- 임시 측정은 필요한 경우, 마 취에서 마우스를 넣어 하 고 앞에서 설명한 마우스를 측정 한다. 유치는 마우스 마 취에서 회복 후 계속 될 수 있다.
- 일주일에 두 번 이상 감 금 소를 청소.
참고: 렌즈 선명도 유지 하는 것이 도움이 됩니다. 사이의 마우스 케이지 음식 찌 꺼 기를 여과 하는 그물을 퍼 팅도 도움이 될 수 있습니다. - 몸 무게와 총 동작을 모니터링 합니다. 비교와 같은 그들 전체 실험 과정에서 훼손 되지 않은 쥐 나이.
참고: 일부 긁 동작을 제외 하 고 몸 무게를 포함 한 중요 한 변화가 치료 쥐 실험 생쥐 사이 발견 된다.
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Representative Results
에 먼저, 모든 필요한 부품 (그림 1a) 준비 하는 경우 확인 합니다. 조립된 안경의 작품의 예는 그림 1b에서 표시 됩니다. 프레임과 너트의 본체를 제외한 모든 다른 부품은 각 마우스에 대 한 일회용입니다. 완성 된 안경의 집합 그림 1 c에 표시 됩니다. 다른 연령대와 마우스에 맞게 두 프레임 사이의 각도 변경 합니다.
굴절 측정의 예는 그림 2a에 표시 됩니다. 이것은 3 주 p21에서 시작-30 D 렌즈에 의해 유도 된 마우스 눈 이다. Note 마우스는 바로 카메라9앞을 보고 하는 것을 의미 하 고 x 및 y 축에는 0도 가까이 시선을 제어 한다. 그림 2b 전체 눈 이미지 마우스와 눈의 각 부분 정의 대 한 조정 SD 10 월 시스템에 의해 촬영의 예를 보여 줍니다. 일반적으로, SD-10 월 시스템은 직접 실제 측정 된 값 제시.
막대기의 이미지 머리 그림 3a에 표시 되어 마우스에 준수 됩니다. 컷의 테두리는 눈 꺼 풀의 기능에 영향을 미치는 것을 방지 하려면 눈에서 3 m m 이상 이어야 한다. 막대기는 유도의 끝까지 마우스 머리에 유지 하 고 안경을 해결 하기 위해 기초를 제공 한다. 치과 접착제 시스템의 접착 강도 약 3 ~ 4 주 동안 모든 실험 동안 안경의 고정에 대 한 충분 해야 합니다. 그림 3b와 같이 안경 조립. 안경의 두 가지는 상당히 대칭 이어야 한다.
Presentative 결과 그림 4에 나와 있습니다. 이 실험에서 0 D 렌즈 렌즈 내부 통제로 왼쪽된 눈 앞에서 고정 및-30 D 렌즈 근 시 유도를 오른쪽 눈 앞에서 고정 했다 (C57B6/J 쥐, p21, n에서 시작 하는 유도 = 4). 굴절 및 ALs는 3 주 동안 유도의 시작 후 일주일에 한 번 측정 했다. 0 D 렌즈 렌즈와 비교 하면,-30 D 굴절 및 알에 강한 근 변화 유도. 굴절의 변화는 첫 주에 절정에 도달 고 플랫 다음 2 주. 알에서 근 시 눈의 변화와 제어 눈 사이의 차이 첫 번째 주에서 중요 한 이었고 다음 2 주에 큰 되었다.
그림 1: 두개골 마운트 안경의 디자인. (a) 모든 부분에 필요한 마우스 안경 조립. (b) 프레임 및 못의 위치의 예는 눈의 오른쪽에 대 한 팁. (c) 조립된 안경의 한 세트의 예. 마우스에 대 한 다양 한 연령대에 맞게 프레임의 각도 변경 하려면 공동 부분을 조정 합니다. 이 그림 외4, 크리에이 티브 코몬즈 저작자 표시 4.0 국제 라이센스 사용할 수 X. 장에서 수정 되었습니다. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 굴절 및 여러분의 측정의 이미지 샘플 (한) 적외선 photorefractor를 사용 하 여 근 시 눈의 굴절 측정의 이미지. (b) A의 SD 10 월 시스템 및 각 부분의 눈 볼의 정의 사용 하 여 마우스 눈 알 측정의 샘플 이미지입니다. 이 그림 외4, 크리에이 티브 코몬즈 저작자 표시 4.0 국제 라이센스 사용할 수 X. 장에서 수정 되었습니다. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 수술 후 한 마우스의 이미지. (한) 한의 예 마우스 막대기 준수에 대 한 수술 후. (b) 한 마우스 양쪽에 안경으로. 이 그림 외4, 크리에이 티브 코몬즈 저작자 표시 4.0 국제 라이센스 사용할 수 X. 장에서 수정 되었습니다. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4: 내부 통제로-30 D 렌즈와 0 D 렌즈를 사용 하 여 4 개의 쥐에서 근 시 유도의 3 주 후속 Presentative 결과. 3 주 동안 굴절의 변화 (a). 갑작스런 변화는 1 주일 유치 후 관찰할 수 있습니다. (b) 반대로 변경 알에 비교적 온화 했다. 별표 표시는 각 주에 각각 0 D와-30 D 렌즈를 착용 하는 눈 사이 통계 significances를 보여주었다. p < 0.05 * *p < 0.01. 학생 t-테스트. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5: 마우스 근 시 유도 대 한 순서도 권장. 여기 보여 순서도 쥐 근 시 유도 대 한 하나의 가능한 패턴을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
있는지 확인 하려면 마우스 머리에 안정적으로 고정 될 안경,이 프로토콜의 여러 단계 큰 관심을 지불 될 필요가 있다. 과 치과 접착제 시스템을 사용 하기 전에 완전히 제거 되어야 합니다. 두개골에 피는 또한 주의 정리 될 필요가 있다. 약간 미세 하 게 조정 하는 것은 직후에 접착제의 응용 프로그램 허용, 접착 시스템을 건조 하기 전에 자주 메모리를 이동 하지 마십시오. 신중 하 게, 접착 시스템의 지시에 따라 특히 최종 혼합물의 각 성분의 비율. 때 마우스를 잡고 안경 또는 수술 후 후속 측정의 유지 보수 동안 할 파악 하지 마우스의 시체와 함께 스틱 함께. 두개골 지팡이 사이 상대 운동 막대기의 아래로 떨어지는의 가장 빈번한 원인입니다. 적절 한 수술 및 장악 기술, 개인 막대기를 드롭다운 수 20 개인을 포함 하 여 3 주 실험에서 1 미만 것입니다.
머리카락과 음식 찌 꺼 기는 눈과 렌즈 사이의 간격으로 풀 수 있습니다. 이것은 렌즈의 투명도 영향을 미칠 뿐만 아니라 또한 잠재적으로 각 막 표면을 물리적으로 손상. 유지 하려면 최소한 두 번 청소의 렌즈의 투명도 매주 필요 합니다. 이것 또한 쥐 각 막 합병증의 발생률을 줄이기 위해 얼굴을 신랑에 게 기회를 줄 것 이다. 프레임과 깜박 마우스 수 있도록 피부 사이 약 1 m m를 위한 공간을 남겨 주세요. 프레임 위의 그리드를 통해 케이지 밖에 서 음식에 도달 하는 마우스에 대 한 하드 만들 수 있습니다. 따라서, 직접 감 금 소의 바닥에 음식을 넣어 하는 것이 좋습니다. 변경으로 일주일에 두 번 정도 깨끗 한 케이지도 렌즈를 유지 도움이 됩니다 청소. 더러운 렌즈 디퓨저 양식 부족 메커니즘을 통해 근 시를 유발 된다. 이 데이터를 왜곡 하 고 이후 증거를 보였다는 FDM과 임 병 인3에서 다른 모델 시스템을 해석 하기를 결과 확인 수 있습니다.
마우스 눈 작은 크기 때문에 측정 된 아이 파라미터 불안정 하 경향이 있다. 적외선 photorefractor 굴절 측정9 알4 SDOCT 시스템에 대 한 Dr. Schaeffel에 의해 개발 된 것이 좋습니다 ( 재료의 표참조). 두 시스템은 측정의 반복성을 보장 하기 위해 측정 된 값의 신뢰성 판단에 대 한 충분 한 정보를 제시. 굴절에 대 한 이전 보고서에서 주장 그것 측정 축에4,14을 유지 하기 위해 매우 중요 하다. ± 3도 이내 시선을 컨트롤을 유지 하는 것은 안정적인 결과 받을 수 있습니다. 마우스 눈의 방향을 조정 하는 때이 정확한 측정을 얻으려면, SDOCT 시스템의 튜브는 도움이 될 수 있습니다. 알 측정을 위해 각 막 정점 및 광학 신경 근처 밝은 경계에 반사 된 빛이이 측정의 반복성을 보장 하는 두 개의 신뢰할 수 있는 해 부 표 이다.
여기에 설명 된 프로토콜 1 주일 이내 쥐에 상당한 근 시 상태를 유도 한다. 메커니즘은 여전히 알려진, 굴절의 변화 알은 반드시 병렬 아닙니다. 이후 알 근 1 주일 후 늘어, 좋습니다 총에서 세 번을 할 수 측정: 전에 1 주, 3 주 유치 후. 근 시 유도 대 한 예제 순서도 중 하나는 그림 5에 보였다. 이전 보고서4, p21에서 시작 및 사용 하 여에 따라-30 D 렌즈를 위해 추천 된다 임 실험 마지막 이상 4 주 측정된 값을 좌우 하 고 렌즈의 소비를 촉진 하는 심한 각 막 합병증의 발생률이 높은 있다 수 있습니다. . 가장 빈번한 합병증 각 막 흉터입니다. 그들의 얼굴 및 눈 꺼 풀 프레임, 합병증에 대 한 이유를 될 수 있는 착용 마우스 청소 수 없습니다.
이 프로토콜에서 설명 하는 장치 (p21) 이유 후 바로 마우스에 적용할 수 있습니다. 이 부분적으로 관찰4강한 표현 형에 기여할 수 있습니다. 프레임은 전신 마 취 없이 이동식. 렌즈를 쉽게 정리 하지만 또한 국 소 약물 전달 가능한4연구원을 뿐만 아니라 수 있습니다. 또 다른 힘은 렌즈 쉽게 확산 기 또는 다른 디 옵 터 렌즈에 변경 될 수 있습니다 (예., 렌즈 플러스),이 방법의 가능성 확장. 이 방법의 한 가지 한계 프레임 모든 실험에 대 한 안정적으로 붙어 있을 수 있습니다 전에 수술 연습을 해야 한다는 것 이다. 측정에는 또한 신뢰할 수 있는 데이터를 수집 하는 인내심이 필요 합니다.
마우스는 그것의 가능성이 유전자 조작 및 번 식에 대 한 저렴 한 비용으로 대체할 수 없는 동물 모델입니다. 여기에 설명 된 프로토콜 쥐 근 시 연구에 대 한 좀 더 실용적인 모델에 두 실험 myopia을 만들 수 있는 노력 하겠습니다.
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Disclosures
마우스 안경의 디자인 특허 (no. 201741349 응용 프로그램)에 대 한 적용 되었습니다.
Acknowledgments
우리는 SDOCT, 굴절 및 각 막 곡률, 3 차원 프레임 데이터, M. 미 야우 치; 재현 씨 Sanshouo의 측정에 대 한 조언 F. Schaeffel에 대 한 조언을 몬태나 Pardue 감사 합니다. K. Tsubota; Y. 다나카; S. 콘도; C. 마사다; M. 부; Y. 미; Y. 하기와 라; A. 이시다; Y. 토 미타; Y. Katada; E. Yotsukura; K. 다카하시; 그리고 중요 한 면담을 위해 Y. 왕입니다. 이 작품은 과학적 연구에 대 한 (KAKENHI, 숫자 15 K 10881) 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 (문 부 과학성)에서 TK. 보조금 inAid에 의해 지원 되었다 이 작품에서 Tsubota 실험실, Inc. (일본 도쿄) 근 시 연구에 대 한 권한을 부여 하 여 지원 됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| screw | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| washer | MonotaRO | 42166397 | |
| nut | MonotaRO | 42214243 | |
| stick | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| frame | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| lenses | RAINBOW CONTACT LENS | none | customized for mice use by the company |
| cyanoacrylate glue | OK MODEL | MP 20g | |
| dental adhesive resin cement | SUN MEDICAL | super bond | contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull |
| infrared photorefractor | Steinbeis Transfer Center | none | designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen |
| Spectral domain OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | components for the anesthetic |
| medetomidine | Orion Corporation | Domitor | components for the anesthetic |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | components for the anesthetic |
| 0.1 % purified sodium hyaluronate | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
References
- Dolgin, E.
- Ohno-Matsui, K.
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. Form deprivation and lens-induced myopia: are they different. Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).
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