Summary
여기, 선물이 휴대용 셀룰러 졸 노출을 수행 하 고 세포질 응답을 측정 하는 프로토콜. 메서드 사용 셀, vivo에서 생리학을 흉내 낸 공기 액체 인터페이스에서 성장 합니다. 구리 나노 입자에 어로 졸에 세포질 응답 반응성 산소 종 생성 및 세포 독성 젖 산 효소 방출으로를 통해 산화 긴장으로 관찰 되었다.
Abstract
이 프로토콜 소개는 새로운 체 외에 노출 시스템, 착용 되 고, 그것의 특성 및 성능을 포함 합니다. 공기 액체 인터페이스 (알리) 체 외에 노출 시스템은 종종 크고 부피, 어렵게 전송 필드 및 방출의 또는 호흡 영역 내 소스에서 운영. 이러한 시스템의 소형화를 통해 실험실 셀 문의 이전에 어로 졸을 변경 하지 않는 더 적절 한 노출 메서드를 제공 하 고 처리 시간을 신속 하 게 필드에 주어질 수 있다. 휴대용 노출 카세트 (PIVEC) 시험관에서 체 외에서 독성 전통적인 실험실 설정 이외의 테스트에 대 한 있도록 37mm 필터 카세트 적응. PIVEC 중량 측정에 따라 증 착 효율을 구리 나노 입자의 3 가지 크기를 사용 하 여 특징 이었다 및 입자 수 농도 분석. 초기 세포 독성 실험 노출된 폐 세포 세포 생존 능력을 유지 하면서 입자를 예금 하는 시스템의 능력을 결정 하기 위해 수행 되었다. PIVEC 사용 가능한 수직 흐름 체 외에 노출 장치에 비교할 때 비슷하거나 증가 증 착 효율을 제공 한다. 낮은 샘플 처리량에도 불구 하 고 작은 크기에 게 몇 가지 이점을는 현재 체 외에 알리 노출 시스템. 개인 모니터링에 대 한 착용 해야 포함 됩니다, 그리고 방출의 소스를 설정 하는 옵션은 실험실에서 이동성 낮은 사용자를 유지 하면서 공간 해상도 대 한 여러 시스템 비용. PIVEC 분야에서와 영역 내에서 호흡 한 공기 인터페이스, 생체 외에서 모델에 어로 졸을 수집 하는 시스템 이다.
Introduction
개인 샘플링 기술을 생체 외에서 사용 하는 직장에 어로 졸의 생물학적 효과 관한 포괄적인 정보를 제공할 수 있습니다. 1 공기 오염 물질에 노출 포함 어디 가스 도입 세포 현 탁 액을 간헐적으로 노출 로커, 또는 직접 장치를 사용 하 여 잠긴된 조건 하에서 수집 된 공기 샘플에 화학 물질 자체에 노출 공기 액체 인터페이스 (알리)에 노출 2 이러한 기술의 많은 세포 성장 정지 또는 각각 독물학 연구는에 어로 졸에 잠재적인 변경 영향을 미칠 수 노출 이전 샘플의 컬렉션에서 수행 됩니다. 3 이러한 변화를 피하기 위해, 실험실 주어질 수 있다 여러 생체 외에서 사용 하 여 필드에 문학,4,,56,7에서 사용 되는 알리 문화 노출 시스템 그러나 8,,910,11,,1213 , 몇 가지 상업적으로 사용할 수 있습니다. 8 , 9 , 12 이러한 시스템 들은 부피, 온도 습도 셀룰러 환경 샘플에 어로 졸의 유량을 조절 하는 계기를 포함 하는 경우에 특히 합니다. PIVEC를 사용 하 여 연 무질 노출 수행할 수 있습니다 전통적인 실험실 설정 또는 영역 내에서 호흡 흡입 조건을 흉내 낸 동안.
졸 증 착에서 체 외에서 의 결정 때문에 흡입에 건강 효과의 조사에 중요 하다. 호흡 영역 입과 코,14 에서 30 ㎝ 이내 지역 나노 입자에 노출 이해 및 폐의 생물학적 효과에 연결에 대 한 결정적 이다. 2 종종, 셀에 증 착으로 정의 된다 증 착 효율 입자에 입금 관리 시스템6,15 또는 동일한 금액의 대량 기초에 입자에 의해 분할 하는 세포에 의해 채택. 4 , 16 호흡 영역에 어로 졸 측정에 대 한 현재 메서드는 필터를 기반으로, 주어진된 샘플링 기간 동안 입자를 캡처 및 필터를 사용 하 여 추가 테스트를 수행 합니다. 17 개인 모니터링 적은 샘플의 거래와 함께 제공 되는 작은 시스템을 요구 한다.
연 무질에 노출에서의 건강 효과 결정에 많은 접근이 있다. 알리 모델 진짜 노출 시나리오에서 공기를 통해 셀에 직접 관리를 어로 졸에 대 한 수 있습니다 아직 더 비용 효율적 이며 같은 눈, 공기-액체 방 벽을 흉내 낸 동안 시간 비보에 보다 집중 연구 피부, 그리고 폐입니다. 폐 세포는 알리에서 성장 있다 편광된 방 벽 층,18,19 vivo에서 폐 상피, 점액 및 계면 활성 제 생산을 포함 하 여 특정에서 유사한 생리 적인 특성을 생성 하는 기능 기관지 또는 폐 포 셀 라인, 속눈썹 구타,19 꽉 접합,19,20 및 셀 분극. 18 같은이 독성 연구에서 측정 하는 세포질 응답에 영향을 미칠 수 변경 합니다. 21 또한, 알리 체 외 모델 결과 셀 보다 종종 더 민감한 서 스 펜 션 모델22 를 통해 노출 수와 흡입 독성 급성 vivo에서 모델. 23 , 24 그러므로 호흡 영역 내에서 측정을 수행할 수는 알리 노출 시스템은 자연적인 다음 단계입니다.
에 어로 졸 방출의 소스에서 직접 셀을 노출 하 여 모든 가스, 준 휘발성 화합물 및 혼합물에 관련 된 입자의 효과 발생 합니다. 필터에 혼합물을 수집 하는 때 가스와 휘발성 화합물 캡처되지 않습니다 그리고 전체 혼합물 조사 될 수 없습니다. 또한, 분말 또는 액체 현 탁 액으로 입자의 재구성 집계 또는 액체에 해산 등 입자-액체 상호 작용 될 수 있습니다. 25 , 26 연 무질 입자는 액체에 추가 되은 덩어리,25,27 형성 단백질 코로나,28 또는 증 착에 영향을 미칠 수 있습니다 액체에서 화합물과 상호 작용에 대 한 높은 잠재력과 생물학 응답에 영향을. 29 , 30
노출은 알리에 세 가지 주요에 어로 졸, 구름 안정화, 병렬 흐름, 프로필과 수직 흐름을 기반으로 합니다. 정착, 공기-액체 인터페이스 셀 노출 (앨리스)를 사용 하는 구름,4 일괄 처리 시스템 입자 중력 및 diffusional는 어로 졸은 하나의 단위로 취급 정착을 통해 입금. 노출 시스템 (처마)5 체 외에 정전기에 어로 졸 및 회관 노출 챔버 (MEC) II에서 사용 하는 병렬 흐름6 유량 프로 파일을 통해 브라운 모션의 추가 통해 증 착 할 수 있습니다. Microsprayer,7 체 외에서 독성 (NACIVT),11 및 상업 알리 시스템8,,910,12, 나노 졸 상공에서 사용 하는 수직 흐름의 impaction 추가 지역 내에서 증 착 입자입니다. 이러한 노출 시스템의 대부분은 크고 부피가 큰, 사전 조건 설정, 흐름, 펌프 또는 심지어 난방 셀의 보육에 대 한 챔버에 어로 졸에 대 한 초과 시스템 요구. 이 큰 크기는 시스템의 이동성을 감소합니다. 방출의 소스에서 직접 샘플링, 대신 이러한 시스템은 종종 샘플 분석을 위해 생성 하는 랩 또는 모델 연 무질에 있다. 방출 된에 어로 졸의 복잡성 실험실 분야에서 번역에 손실 될 수 있습니다. PIVEC 현재 시스템, 약 460 c m2 의 외부 표면적 보다 작은 이며, 매우 휴대용 장치에 대 한 수 있도록 시스템에 통합 열 및 습도 제어만 60 그램의 무게. 감소 크기와 무게를 착용 하거나 노출, 허용 하는 직접 샘플링의 소스에 찍은 시스템 허용.
현재 노출 시스템의 큰 크기 또한 농도에서 공간 그라디언트를 조사 하는 샘플링을 수행 하는 능력을 감소 시킵니다. 이 해상도 키 많은 잠재적인 환경 및 직업적 위험 차량 배기 미 립 자 물질 또는 직장 활동 등의 독성 효과 결정할 때 aerosolization 발생 합니다. 즉시 포스트 방출, 거기 입자 농도에 공간 분산이 된다. 이것으로 자 랍니다 시간 분위기를 통해 입자 분산 하 고 이러한 효과 변경할 수 있습니다 온도, 압력, 바람, 및 태양 등 주변 조건에 따라. 입자 나이 한 번 방출된31,32 산화를 시작할 수 있습니다 및 분산 요금; 지형에 의해 영향을 받습니다. 높은 농도 협곡 및 터널, 분산 효과 둔화, 그리고 낮은 농도 찾을 수 있습니다에서 찾을 수 것입니다 분산 큰 지역입니다. 33 분산 비율에 있는이 변화 인간의 건강에 중요 한 영향을 가질 수 있으며 천식 성인 시골 설정에서 대 도시에 살고 수를 비교할 때 볼 수 있습니다. 34 많은 노출 시스템은 한 번에 여러 샘플을 제공 하 고, 여러 시스템 공간 확인을 수행 하는 대형 장비에의 한 풍부한 필요 하다.
필드에 실험실을 가져와서 센서로 전체 셀을 사용 하 여 분석 시간을 감소 수 있습니다. 알려진된 생물 학적 메커니즘 및 끝점 졸 구성 및 크기의 결정에 도움이 됩니다. Mucociliary 안보와 먹어서, 전 좌를 포함 하 여 느린 정리 방법 때문이 입자는 종종 상호 작용 세포와 약 일 주3 생성 하는 산화 스트레스와 염증, 심지어 세포의 죽음에 대 한. 이러한 생물 학적 끝점 심혈 관 질환 또는 만성 폐쇄성 폐 질환에 대 한 불리 한 결과 경로 대 한 시작 지점이 될 수 있습니다. 또한, Wiemenn 그 외 다양 한 흡입 독성 vivo에서 짧은 기간에 대 한 문학의 가치와 비교 분석 실험 체 외에 수행. 35 Vivo에서 응답 두 젖 산 효소 자료, 티 감소와 과산화 수소 형성 및 릴리스 및 염증에서 잠재적인에서 산화 스트레스를 통해 세포 독성 테스트에서 4 개의 긍정적인 결과 예측 했다 종양 괴 사 인자 알파 유전자입니다. 10 nanosized 금속 산화물 테스트에서 6으로 테스트 활성 (산화 티 탄, 산화 아연, 및 4 개의 다른 세 륨 산화물) vivo에서확인 된 노출 시험관 을 사용 하 여.
산업 설정에서에 어로 졸의 효과 공부 하기 위하여 우리의 실험실 PIVEC 필드에 노출에 대 한 개발. 또한,는 PIVEC 모니터링 하 고 37mm 필터 카세트36 같은 흡입 노출 조사 개인 샘플링에 대 한 착용 수 있습니다 또는 특정된 영역 내에서 공간적 해상도 달성 하기 위해 여러 시스템을 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜에서 특성화 고는 PIVEC의 사용 설명 되어 있습니다. 노출, 생물학적 효과 세포 독성 분석 실험을 통해 관찰 된다.
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Protocol
연산자 때 개인 보호 장비 (예: 실험실 외 투, 장갑, 고글)을 착용 해야 합니다 1, 2, 3, 5, 및 6 단계를 수행.
1입니다. 자료의 준비
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반복성을 보장 하기 위해 시스템 어셈블리 및 노출에 대 한 자료를 준비 합니다.
- 사용 하 여 새로운 또는 70% 에탄올 청소 ¼"내경 전도성 튜브와 ¼" 외경 커넥터 시스템 어셈블리에 대 한 있는지 확인 합니다.
- 저장소 테스트 자료 필터, 등 PIVEC 구성 요소, 핀셋, 입자 분말 온도 및 습도, 실험 하기 전에 적어도 24 시간 잘 제어 된 환경에서.
참고: 온도 실내 온도, 약 20 ° C, 상대 습도 35% 미만 근처 이어야 한다. 이 실험 사이 반복성을 달성 하기 위해 매우 중요 하다. - 소 프로 파 놀을 사용 하 여 부품을 청소 하 고 스캐닝 이동성 입자 크기 조절기 (SMPS) 및 측정을 위한 광 입자 sizer (작전)를 포함 하 여 제조업체 권장 사항에 따라 시스템 워밍업에 대 한 허용 하는 입자 카운터를 준비 합니다.
2입니다. 건조에 어로 졸의 생성
참고: 연산자 연기 후드에에 어로 졸 생성을 수행 해야 합니다.
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건조에 어로 졸을 생성 하는 시스템을 조립
참고: 가스 또는 액체에서 입자의 현 탁 액 모델된 응용 프로그램 및 세포 문화에 적합 해야 합니다. 다음 메서드는 액체 기반의 어로 졸을 사용 하 여 수행할 수 있습니다. 임씨 외에서 건조에 어로 졸 시스템의 디자인이입니다. 37 건조 분산 시스템의 회로도 그림 1에 표시 됩니다.- 4"1/8 크기 스레드 파이프의 양끝을 연결 하는 볼 밸브,이 입자 호퍼로 될 것입니다. 1 밸브를 2"1/8 크기 파이프를 연결 합니다.
- 구리 나노 입자의 무게,이 연구에서는 각 입자 크기에 대 한 대량 농도 일정 하 게 유지 증 착 효율을 결정 하는 동안. 약 40 nm 구리 나노 입자의 7.5 mg, 100 nm 구리 나노 입자의 7 mg 및 노출 당 800 nm 구리 나노 입자의 13 mg을 사용 합니다. 오픈 엔드를 통해 입자 호퍼로 구리 나노 입자를 놓습니다.
참고: 무게 구리 나노 입자의 크기는 질량 관리 농도 기반으로 될 것입니다. - 장소 3"½" 외경 (OD) 튜브 2"파이프와 장소는 흐름 방향 볼 밸브를 통해이 짧은 튜브 안에 HEPA 필터의 조각.
- 스레딩 사용 하 여 다른 볼 밸브를 진공 발생기를 연결 합니다. 그것이 푸시-투-잠금 연결에는 5/16"OD 튜브를 삽입 하 여 공기 탱크 진공 발생기를 연결 합니다. ¼"OD 튜브를 사용 하 여 진공 발생기의 출구 위에 튜브를 삽입 하 여 실험 설정에 진공 발생기의 콘센트를 연결할.
-
건조에 어로 졸을 생성 하기 위해 건조에 어로 졸 시스템의 사용
- 메인 밸브를 선회 하 여 공기 탱크를 열고 시스템 공기 흐름을 허용 합니다. 공기 탱크에 밸브에 밸브 열고 되도록 시스템을 통해 흐름은 진공 펌프에 원하는 설정을 설정 합니다.
- HEPA 필터에 가장 가까운 볼 밸브를 열고 진공 발생기에 가장 가까운 볼 밸브를 엽니다. 약 3 뜨고이 입자는 공기 흐름으로 끌어올 수 있도록 s.
- 진공 발생기 다음 볼 밸브 HEPA 필터에 가장 가까운 가장 가까운 볼 밸브를 닫습니다. 필요에 따라 실험의 기간에 대 한 흐름을 탱크에서 공기를 허용 합니다.
- 흐름을 중지 하려면 공기 탱크에 메인 및 레 귤 레이 터 밸브를 닫습니다. 깨끗 한 볼 밸브 그리고 70% 에탄올을 사용 하 여 진공 발생기. 오토 클레이 브 살 균에 대 한 금속 파이프입니다.
3. 증 착 효율 측정 PIVEC를 사용 하 여
참고: 연산자 연 무질 노출 연기 후드에서 수행 해야 합니다.
- 2.2 사전 무게 필터에 단계에서 생성 된 구리 나노 입자에 어로 졸을 수집 하 여 증 착을 측정 합니다. 예금 된 복용량, 필터에 수집 된 질량을 사용 하 여 측정 및 증 착 효율을 결정 하기 위해 무게가 구리 입자의 금액을 사용 하 여 측정 관리 복용량을 사용 합니다.
- 낮은 습도 조건, 1.1.2, 적어도 24 시간 이전에 사전 노출 측정에 대 한 설명에서 1.00 µ m 기 공 유리 섬유 필터를 유지 합니다. 무게는 사용 하지 않는 필터 세 번 하 고 필터 무게를 기록 합니다. 장소 세포 배양에 사용 하지 않는 필터를 삽입 합니다.
- PIVEC 필터 셀 문화 삽입을 지원 하기 위해 적절 한 셀 문화 삽입 어댑터 (6 잘 또는 24 잘)을 선택 합니다. 장소 세포 배양 PIVEC, 어댑터의 기본은 상단 보다 넓은 그런 곳으로 설정의 기본 상단 어댑터 조각을 삽입 합니다.
- 필터 로드 셀 문화를 사용 하 여 족집게 어댑터 조각 내 삽입 합니다. 장소는 윗부분의 상단 보다 넓은 장소에 정착 하는 어댑터 조각 위에 상단 부분. 덕트 테이프의 단일 층으로 PIVEC 랩.
- 장소에 밀어 PIVEC의 상단과 하단에 37 mm 카세트 조각을 연결 합니다. 카세트 입구와 출구에 ¼"가시 어댑터를 놓습니다.
- 전선 기지에서 되도록 저항 히터 PIVEC 주위를 바꿈. 테이프 보안입니다.
- 단 열을 위한 알루미늄 호 일의 ~ 8 라운드와 PIVEC 랩. 테이프와 보안.
- 연결 2"1/2" 외경 유연한 튜브를 PIVEC 위에 어댑터의 긴 조각. 살 균 물과 PIVEC 위에 튜브 내에서 다공성 튜브를 제거 합니다.
- 링 받침대 및 클램프 내 PIVEC를 놓습니다. 진공 펌프, 파티클 카운터, 그리고에 어로 졸 설정 완벽 한 설정 했다.
참고: 숫자 기반 예금 된 복용량 입자 카운터는 PIVEC 전후 별도 실행에 PIVEC 배치 하는 경우에 확인할 수 있습니다. - 0.5 LPM에 10 분의 노출 시간 사용 되었다이 연구에서 단계 프로토콜 및 원하는 노출 시간과 흐름 속도의 2.2를 사용 하 여 필터를 표시 합니다. 설정에서 PIVEC를 제거 합니다. 셀 문화 삽입을 꺼내와 필터 홀더 측정 하기 전에 적어도 24 h에 대 한 낮은 습도 조건에서 노출된 필터를 놓습니다.
- 70% 에탄올 PIVEC 청소. 다음 실험 전에 적어도 30 분 동안 자외선으로 소독.
- 세 번 노출된 필터의 무게와 필터 무게 기록. 스토리지에 대 한 레이블된 필터 홀더에 노출된 필터를 배치 합니다.
4. 입금된 복용량 및 증 착 효율의 계산
참고: 증 착의 기술에 어로 졸 관리 및 세포질 응답의 해석에 대 한 중요 하다.
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질량 기반 측정에서 증 착을 계산
- 사전 노출 평균 무게와 사후 노출 평균 체중으로 필터에 예금 된 질량을 계산 합니다. 이 값은 실험에 대 한 질량 기반 예금 된 복용량.
- 사용 질량, m관리자, 관리 그리고 복용량 질량 기반 증 착 효율, ηm, 실험에 대 한 계산을 4.1.1, mdep에 결정 예금 대량 기반.
- 4.1.1와 4.1.2 증 착을 결정 하기 위해 최소 3 실험 및 입자 크기에 대 한 증 착 효율 PIVEC에 대 한 평균 값입니다.
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숫자 기반 측정에서 증 착을 계산
- PIVEC 전에 입자 농도 결정 하 고는 PIVEC 후 입자 카운터로 측정 카운터 수행 되는 확인 합니다. 입자 카운터는 시간이 지남에 입자 농도 통합 다음 총 결정 입자 직경 이상 통합 입자 측정.
- 관리 하는 입자와 입자 측정 게시물 PIVEC의 차이로 예금 된 입자 수를 계산 합니다. 이 값은 실험에 대 한 숫자 기반 예금 된 복용량.
- 관리 사용 입자, n관리자, 숫자 기반 예금 수 기반 증 착 효율, ηn, 실험에 대 한 계산을 복용량, ndep, 체적 유량, V, 및 시간, t.
- 4.2.2 및 증 착을 결정 하기 위해 최소 3 실험에 대 한 4.2.3 및 입자 크기에 대 한 증 착 효율 PIVEC에 대 한 평균 값입니다.
5. 연 무질 노출 셀의
참고: 셀에 대 한 공기-액체 인터페이스 독자 문화가 불린다 빈 외. 38 연산자 셀 문화 삽입 biosafety 내각 내에서 (단계 5.1.2-5.1.4)를 로드를 수행 해야 합니다. 연산자는 증기 두건에서 연 무질 노출을 수행 해야 합니다.
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공기 액체 인터페이스에 문화 세포
- A549 세포 문화 플라스 크에서 트립 신-EDTA, T75 플라스 크 또는 T25 플라스 크 1 mL 3 mL를 추가 하 여 고 37 ° c.에 5 분 동안 품 어 복구 된 셀 수를 최대화 하 T25 플라스 크를 플라스 크 및 린스 플라스 크 벽 셀 서 스 펜 션에 대 한 완전 한 미디어 T75 플라스 크 또는 완전 한 미디어의 4 mL의 7 mL를 추가 합니다. 살 균 15 mL 원뿔 튜브 다음 3 분 800 x g 에서 원심 분리기 세포에 세포 현 탁 액을 전송 합니다.
- 표면에 뜨는 포함 트립 신-EDTA를 제거 하 고 완전 한 미디어 10 mL에 셀 펠 릿 resuspend. 세포 현 탁 액의 10 µ L을 제거 하 고는 hemocytometer를 추가. 농도 세포의 총 수를 결정 하는 hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 합니다.
- 완전 한 미디어의 0.5 mL 24 잘 배지 내의 각 잘 배치 합니다. 웰 스에서 사용 되지 않는 셀 문화 삽입을 배치 합니다. 종자 세포 배양 1 x 105 셀/cm2 일 당 2 배 가까운 속도로 성장 하는 세포 유형 근처 셀 밀도에 꼭대기 쪽에 삽입 합니다. 씨앗 A549 세포 내에 24가 잘 삽입, 셀 문화 35000 셀을 추가 하 여 1 x 105 셀/c m2 의 조밀도에 씨 셀 삽입 합니다.
참고: 느린 성장 율을 가진 세포 증가 세포 조밀도에 시드할 수 있습니다. - (24 잘 플레이트 최종 볼륨은 0.25 mL)에 대 한 최종 볼륨을 연결할 셀 문화 삽입의 꼭대기 쪽에 완전 한 미디어를 추가 합니다.
- 잠긴된 조건, 대체 미디어 매 1-2 일에서에서 7 일에 대 한 문화. 7 일 후 basolateral 미디어만 교체 알리 조건에서 적어도 1 일 꼭대기 미디어와 문화를 제거 합니다.
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PIVEC 조립
- 적어도 24 시간 이전에 노출에 대 한 공기-액체 인터페이스 equilibrate를 셀 수 있습니다.
- PIVEC 필터 셀 문화 삽입을 지원 하기 위한 적절 한 세포 문화 삽입 어댑터를 선택 합니다. 장소 세포 배양 PIVEC 기본, 어댑터의 기본은 상단 보다 넓은 그런 곳으로 설정 위에 어댑터 조각을 삽입 합니다. PIVEC의 기지의 우물에 세포 배양의 4 mL를 추가 합니다.
- 세포 배양 장소 사용 족집게 어댑터 조각 단계 5.2.3에에서 배치 내에서 삽입 합니다. 장소는 윗부분의 상단 보다 넓은 장소에 정착 하는 어댑터 조각 위에 최고 조각. 신중 하 게, 덕트 테이프의 단일 층으로 PIVEC 랩.
- 장소에 밀어 PIVEC의 상단과 하단에 37 mm 카세트 조각을 연결 합니다. 카세트 입구와 출구에 ¼"가시 어댑터를 놓습니다.
- 전선 기지에서 되도록 저항 히터 PIVEC 주위를 바꿈. 테이프 보안입니다.
- 단 열을 위한 알루미늄 호 일의 ~ 8 라운드와 PIVEC 랩. 테이프와 보안.
- 1/2"외경 유연한 튜브의 짧은 조각 PIVEC 위에 어댑터를 연결 합니다. 살 균 물과 PIVEC 위에 튜브 내에서 다공성 튜브를 제거 합니다.
- 링 받침대 및 클램프 내 PIVEC를 놓습니다. 진공 펌프와에 어로 졸 설치 설치를 완료 합니다.
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에 알리는 PIVEC를 사용 하 여 셀을 노출
- 사용 하 여 증 착 효율 2 단계에서에서 결정 될 aerosolized 입자의 질량을 계산. 적절 한 질량의 무게 하 고 연기 후드 내에서 2 단계를 다음 설정에 어로 졸 시스템에 추가 합니다.
- 폭로 다음 단계 2.2 세포 생물학 끝점의이 연구에서는 셀 0.5 LPM의 유량과 구리 나노 입자의 약 3.5 m g에 노출 됐다, 10 분 제어 연구 수행의 노출 기간 사용 습도 공기를 결정 혼자 공기의 영향입니다. 설정에서 PIVEC를 제거 합니다. 셀 문화 삽입에 밖으로 가십시오 살 균 잘 접시에 놓고 CO2 인큐베이터 (37 ° C, 5% CO2, 90 %RH)를 반환 합니다.
- 미디어 PIVEC에서 발음 추가 실험을 수행 하는 경우 린스 하단 PIVEC의 인산 염 버퍼 솔루션 다음 반복 단계 5.1 및 5.2.
- 70% 에탄올 끝나면 PIVEC 청소. 다음 실험 전에 적어도 30 분 동안 자외선으로 소독.
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생물 학적 분석 결과 절차
참고:이 연구에서 수행 하는 분석 실험 했다 DCFH-다 분석 결과 통해 산화 긴장 생성 및 젖 산 효소 (LDH) 자료를 통해 세포 독성.- 1mm DCFH 다 솔루션 50 mL 메탄올에 DCFH-다의 24.4 mg을 디졸브. 이 솔루션은 최대 4 개월 동안-20 ° C에 저장할 수 있습니다. 9.9 mL 10 µ M의 10 mL를 만들려고 HBSS로 1 mM DCFH-다 솔루션의 0.1 mL를 혼합 하 여 1 mM DCFH-다 솔루션을 희석 DCFH 검사
- 세포 배양 및 세척 세포 문화 삽입 약 1 mL의 PBS로 제거 합니다. 교체 삽입 완료 되 면 각 음에 10 µ M DCFH-다 솔루션의 0.5 mL를 추가 합니다. 커버는 염료의 photoactivation를 방지 하 고 37 ° C 배양 기 1 시간에 대 한 반환을 알루미늄 호 일로 접시.
- 인큐베이터에서 셀을 제거 하 고 우물에서 DCFH 다 작업 솔루션 발음. 0.5 mL HBSS 우물을 추가 하 고 셀 문화 삽입 교체.
- 485/530의 여기/방출 파장을 사용 하 여 플레이트 리더와 측정 기준 형광에 잘 플레이트 로드 nm. 노출에 대 한 플레이트 리더와 부하 삽입 PIVEC에 플레이트를 제거 합니다.
- 원하는 노출 기간에 대 한 셀을 노출 합니다. PIVEC에서 삽입을 제거 하 고 잘 플레이트에 반환. 잘 플레이트와 화이트 96 잘 접시에 장소에서 basolateral 액체의 50 µ L을 제거 합니다. DCF 사용 하 여 485/530의 여기/방출 파장의 형광을 측정 nm 마다 30 분 2 시간에 대 한 사후 노출.
- 하자 basolateral 액체 LDH 시험 솔루션, 혼합된 다음 제조 업체 프로토콜의 20-30 분 추가 50 µ L에 대 한 실내 온도에 equilibrate, 잘 플레이트에서 basolateral 액체에 잘 정지 솔루션의 추가 25 µ L 10 분에 대 한 반응. 560/590의 여기/방출 파장을 사용 하 여 resorufin 제품의 형광을 읽고 nm.
- 추가 basolateral 액체를 제거 하 고 4 시간 및 24 시간 후 노출 5.4.6 단계를 반복.
6 통계적 방법
- 생물 학적 분석 결과 데이터의 분석
- 초기 측정 기준으로 치료 세포의 형광 강도 증가 보고서 선생님 생산. LDH 활동 치료 세포 치료 셀 기준의 형광 강도 증가 보고.
- 단일 요소 데이터 세트 간의 통계적 차이 결정 하는 ANOVA를 수행 합니다. 적절 한, 학생 t-값이 0.05의 중요성에서 테스트를 수행 합니다. 적어도 3 개의 노출 측정의 평균 ± 표준 편차로 데이터를 보고 합니다.
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Representative Results
직업 생체 외에서 독성 연 무질 노출 수행 하는 동안 세포 생존 능력을 유지 포함 한다. 그림 2, 온도 및 습도 제어 및 착용된 PIVEC PIVEC 시스템 표시 됩니다. 온도 배터리 전원 저항 히터를 사용 하 여 유지 되었다 그리고에 어로 졸을 사용 하 여 습도 증가 다공성, 유체 튜브를 통해 자연가 습. 실험실 내부 설정 제어 졸는 PIVEC 그림 1에 표시 된 노출에 대 한 일 수 있습니다. 시스템의 세포를 세포 응답에 그 때 상관 될 수 있는 예금 된 복용량의 결정에 대 한 수 있습니다.
증 착 효율 때문에 증 착 세력 등 impaction, 침전, 보급 시스템에 추가 하는 입자의 크기에 따라 달라 집니다. 또한, 증 착 유량, 노출 시간, 노출 시스템의 특성에 따라 달라 집니다. 이 정보를 증 착을 예측할 수 있습니다. 증 착 효율은 PIVEC의 두 가지 방법, 중량 측정 분석 및 입자 숫자 계산을 통해 결정 되었습니다. 식 1 및 2는 표 1 , 필터를 사용 하 여 스캔 이동성 입자 sizer (SMPS), 및 광학 입자 sizer (작전) 측정, 그림 3에서 증 착 효율을 결정 하기 위해 사용 되었다. 24 잘 디자인 보다는 6 잘 디자인 하 고 약간 100 감소 증가 증 착 전반적 관찰은 40에 비해 nm nm와 800 nm 구리 입자. 그러나 24 스에서 증 착은 삽입 동안 매우 균일 한,, 6 잘 디자인에 증 착 균일성 삽입의 중앙 입자 예금의 대부분으로 부족. 사후 노출 분석 37mm 필터와 셀 문화 삽입, 세포 노출 후 복용량을 결정 하는 필요성 감소 복용량 관계를 확인 하 여 빠른 수 있습니다. 그러나 37mm 필터 카세트와는 PIVEC 증 착의 비교는 0.7, 단지 800에 대 한 위의 피어슨 상관 관계와 함께 모든 크기와 웰 스에 대 한 강한 상관 관계를 보여줍니다 nm는 p로 중요 한 상관 관계는 < 0.05, 그림 4를 참조 하십시오. 문학을 통해 유사 시스템에 비해,11,12 테스트 입자 크기의 범위 PIVEC의 증 착 효율은 비교 하거나 증가 그림 5에서 관찰 보고 된 값. PIVEC 내 증 착 효율 시스템 설계는 PIVEC 정전 되는 낭비 적인 또는 전도성 플라스틱 또는 이와 유사한 재료를 사용 하 여 손실 최소화를 통해 개선할 수 있습니다.
경우 필터는 노출 전에 습도 제어 환경에서 잘 건조 되지, 초과 물 초기 질량을 증가 하 고 비 물리, 부정적인 예금 된 복용량을 생성할 수 있습니다. 가변 유량 또한 시스템 내에서 일관성 없는 예금 된 복용량을 홍보할 수 있습니다. 이러한 문제를 방지 하려면 이전 및 습도 제어 환경에서 건조 하는 필터에 대 한 노출 후 적어도 1 일 수 있습니다.
세포질 응답 예금 된 복용량에 의해 영향을 받을 것입니다 그리고는 셀 제대로 유지 관리 되지 않습니다 경우 노출 기간에 의해 달라질 수 있습니다. A549 세포, 폐 포 상피 암 세포 선, 0.5 LPM의 유량에서 구리 나노 입자의 다양 한 크기를 10 분 동안 노출 되었다. 이 방법은 빠른 노출 동안 적당 한 유량을 사용 하는 반면 다른 수직 지속적인된 노출 동안 0.005 LPM과 1.5 LPM 사이 노출 시스템 사용 흐름. 질량에 기초를 둔 증 착 효율을 사용 하 여 측정 복용량, 1.58 ± 0.04 mg/cm2 40 nm 구리, 100 nm 구리 입자의 0.30 ± 0.00 mg/cm2 의 관리와 800 nm 구리 입자의 0.32 ± 0.01 mg/cm2 셀에 예금 되었다. 세포 독성 및 산화 스트레스는 첫 24 시간 후 노출 내에서 관찰 되었다. 세포 독성 손상 된 세포를 즉시, 4 시간, 그리고 24 시간 후 노출에서 젖 산 효소 (LDH)의 릴리스를 사용 하 여 측정 했다. 노출, 그림 6b4 시간 이내 아무 중요 한 독성 1.62 mg/cm2 아래 구리 나노 입자에서 있었습니다. 24 시간 후 노출 거기 20%의 세포 생존 능력에 통계적으로 유의 한 감소 했다 구리 나노 입자에 노출 하는 셀에 대 한 생존 능력. 세포내 산화 스트레스는 처음 2 시간 후 노출, 그림 6a내에서 반응성 산소 종에 의해 DCFH의 산화를 통해 DCFH-다 분석 결과 사용 하 여을 조사 했다. 산화 긴장의 중요 한 수준의 모든 크기의 구리 나노 입자에 노출 하는 셀에 대 일 분 후 노출에서 측정 되었다. 산화 스트레스의 수준을 관찰 2 시간 테스트 모든 규모에 대 한 비슷한 비율로 증가 했다.
노출의 성공 세포질 응답의 반복성을 통해 확인할 수 있습니다. 세포 독성 분석 실험에 대 한 두 가지 합격 기준을 제안: 1) % 총 LDH 누설에 대 한 긍정적인 통제 한다 50%, 및 변이의 2) 긍정적이 고 샘플 복제 계수 보다 큰 50% 이내 이어야 한다. 39 경우 이러한 기준을 충족, 실험, 변경 된 증 착 금액, 또는 가난한 습도 나 온도 제어 등이 제안 차이점. 또한, 세포 독성 측정 관찰 실험 컨트롤의 이해로 이어질를 오류 결정에 도움이 됩니다. 흐름 속도가 너무 높은 세포 전단 응력의 다량에서 죽을 수도 있습니다. 흐름 속도 낮추어 흐름에서 셀 시 스트레스를 감소 수 있습니다.
그림 1입니다. 건조 분산 시스템 및 실험 설정의 도식. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2입니다. PIVEC 디자인. A) 전체 디자인 30 cm 키 큰 상자 비교 사진. B) 온도 및 습도 제어 PIVEC 30 cm 높이 상자 비교 사진. C) 착용된 PIVEC입니다. D) PIVEC 최고 조각입니다. E) 세포 문화 어댑터 24 잘 (왼쪽)와 6 음 (오른쪽). F) 하단 조각입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
| 숫자 따라 증 착 효율 (%) | 질량에 따라 증 착 효율 (%) | ||||||
| 6 잘 | 40 nm | 17.83 | ± | 32.13 | 5.85 | ± | 0.85 |
| 100 nm | 0.47 | ± | 4.06 | 5.11 | ± | 0.94 | |
| 800 nm | 3.70 | ± | 35.00 | 6.39 | ± | 1.01 | |
| 24 잘 | 40 nm | 1.43 | ± | 2.43 | 12.61 | ± | 1.34 |
| 100 nm | 1.37 | ± | 19.45 | 2.95 | ± | 0.75 | |
| 800 nm | 6.98 | ± | 3.93 | 15.95 | ± | 0.53 | |
표 1입니다. PIVEC 증 착 효율성입니다.
그림 3입니다. 구리 나노 입자에 어로 졸의 입자 수 농도. SMPS A) 측정입니다. B) 작전 측정입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4입니다. 셀 삽입에 증 착 및 SKC 37mm 필터 사이의 관계. 오류 ± 0.002 mg. A) 40 nm 구리 입자입니다. B) 100 nm 구리 입자입니다. C) 800 nm 구리 입자입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5입니다. 문학에서 수직 흐름 노출 시스템에 비해 PIVEC의 증 착 효율성. 문학 값 수직 흐름 노출 시스템에서 고체 표식에 그려집니다 및 PIVEC 값은 빈 마커. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6입니다. 구리 나노 입자 후 노출 (PE)에 세포질 응답. 모든 측정, n = 3, p < 0.05. DCFH-다 분석 결과 사용 하 여 결정 하는 A) 산화 긴장. B) 세포 독성 LDH 분석 결과 사용 하 여 결정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
필터 카세트 호흡 영역; 연 무질 수집의 간단 하 고 저렴 한 방법을 제공합니다 그러나, 졸 샘플 필터에서 추출 할 하지 전체 졸 (가스, 휘발성, 및 미 립 자)를 대표 하 고 따라서 제한 관련된 생물 효과의 평가. 37mm 필터 카세트의 초기 디자인을 사용 하는 PIVEC는 이동성을 유지 하 고 흡입에서 입자의 비보에 증 착을 모방 하도록 설계 되었습니다. PIVEC 현재 알리 노출 시스템, 포함 하는 온도 및 습도 제어와 티슈 상자의 대략 크기 보다 훨씬 작습니다. 크기는 또한는 어로 졸에 세포질 응답에 대 한 데이터를 제공 하면서 개인 캐스케이드 impactors 비슷합니다. PIVEC 다른 현재 노출 시스템에 비해 한 샘플에 대 한 공간을 포함, 소형 샘플 크기 증가 모니터링할 공간 배급 따라서, 여러 시스템을 한 번에 사용할 수 허용 합니다.
프로토콜에 몇 가지 중요 한 단계가 있다. 증 착 효율을 확인 하려면 1 단계에서에서 설명한 대로 제대로 된 필터 조건에 중대 하다. 또한, 제대로 노출 및 질량 기반 증 착 효율을 결정 하는 필터 게시물 노출 전에 구리 나노 입자의 무게에 중요 하다. 수 증 착 효율 차이 증 착 초기에 어로 졸 농도 및 입자 카운터를 사용 하 여 결정 하는 최종 농도 사용 하 여 결정 되어야 합니다. 증 착 효율 제대로 결정 되지 않습니다, 경우 졸 종류의 생물학 응답 차이 파악 하기가 어렵습니다. 증 착에 대 한 수정 증 착을 변경 포함 됩니다. 증 착 흐름 속도 노출 기간을 변경 하 여 늘릴 수 있습니다. 또한이 세포 밖으로 건조의 잠재력 세포 생존 능력 영향을 미칠 수 있습니다. 에 어로 졸의 컨디셔닝 체온과 기도에 습기 등의 생리 적 특성에 대 한 보상을 종종 수행 됩니다. 증가 습도 50% 이상, 흡입된 공기를 모방 하 고 차량 노출 때문에 세포 죽음을 감소. 43 때 온도 습도 잘 제어 되지 않습니다, 세포질 응답 영향을 받을 수 있습니다. 흐름 속도 줄임으로써 모든 규모의 추가적인 입자 증 착 증가 입금 합니다. 노출 기간 증 착, 입금 연장된 실험 기간 동안 더 많은 입자 수에 비례 이다. 세포 생물학 응답에 영향을 미칠 수 있는 밖으로 건조 하지 마십시오 있도록 노출 기간을 증가 하는 경우는 어로 졸의 컨디셔닝 중요 하다.
PIVEC 수직 흐름을 사용 하 여 셀을 흐름을 통해 세포 밖으로 건조 하 고 셀에 스트레스를 추가에 impaction, 침전, 그리고 보급을 통해 입자를 입금. 증 착 효율 증 착의 세력으로 인해 입자의 크기에 따라 달라 집니다. 수직 흐름 현재 노출 시스템의 많은 증 착 효율을 10%와 1% 가까이 많은 아래 있다. PIVEC 잘 문화 삽입 세포는 증 착 효율 중량 측정 분석의 3% ~ 16%는 24에 대 한 결정 하고있다. 입자 수 기반 증 착 효율은 약 1% ~ 7% 동일한 삽입에 대 한. 6 잘 사용 하는 경우 세포 배양 삽입,이 숫자 감소, 작은 입자 크기, 더 많은 입자 개발 흐름에 대 한 공간 없이 셀 문화 삽입에 국한 되 서는 어로 졸의 합리화 때문에 제외. 6 잘 셀 문화 삽입 증 착 하지 않아도 졸 스트림을 허용 합니다. 다른 수직 흐름 시스템 60 nm fluorescein 입자40, 80을 사용 하 여 대량으로 특징 되었습니다 있다 및 180 nm 구리 입자16및 60 nm 아디 산 입자41. 결과 증 착 효율은 일반적으로 0.05%와 11% 사이. 숫자 기준 폴리스 티 렌 입자12,15, 탄소 나노12, 실리 카 입자42를 저조한 효율성 0.2%와 11% 사이 사용 하 여 이러한 시스템의 특징 되었습니다 있다. PIVEC 제공 합니다, 사용 가능한 셀룰러 노출 장치에 비해 비슷하거나 증가, 증 착을.
세포 노출 40의 구리 나노 입자를 사용 하 여 수행한 nm, 100 nm와 800 nm. 세포 생존 능력은 4 시간 후 노출 내 생존 능력에 상당한 감소와 LDH 분석 결과 사용 하 여 정의 되었습니다. LDH 분석 결과와 사용 되었다 상업 노출 시스템 74 ng/cm2 시간 후에 2, 148 ng/cm2 9.2 nm 구리 산화물 입자44 와 1 µ g/c m2 의 4 시간 연속 노출 4 시간, 2 부 화 후 입금 후 시간, 다음 4 시간 25 nm 구리 산화물 입자의40, 세포 생존 능력에 두 측정 상당한 감소에 대 한 또 다른 노출. 세포 독성 trypan blue 염료 제외 하 여 구리 나노 입자16 측정 180 nm 입자의 1.6-7.6 µ g/c m2 에 대 한 다른 시스템에서 관찰 되었다. 15 분의 40-80 nm 구리 산화물 나노 입자에 노출 가능성 감소, 24 시간 게시물 노출 측정. 낮은 독성은 PIVEC를 사용 하 여 관찰 했다 10 분의 짧은 노출 시간 및 짧은 게시물 노출 측정 시간으로 인해. 4 시간 후 노출, 세포는 PIVEC에 노출의 가능성 감소. 셀 다른 연구 9,40,44,,4546와 아무 중요 한 세포 독성을 관찰 하는 습 한 공기 컨트롤에 노출. 산화 스트레스는 DCFH 다 분석 결과 사용 하 여 결정 했다. 과산화 수소 등 산소 급진 파, 반응성 산소 종의 생산 성장 검거 또는 세포 죽음으로 이어질 수 있는 스트레스의 양만큼 생성. 세포 노출 후 셀 컨트롤로 인큐베이터에 보관 하 고 습 한 공기에 노출 하는 셀에 대 한 산화 스트레스에 최소한의 증가 했다. 높은 산화 스트레스는 증가 하 고 30 분 후 노출 내 모든 입자 크기에 대 한 발생 했습니다. 한 연구, 9.2 nm 구리 산화물 입자44 25 nm 구리 산화물 입자 내에서40 도 카-DCFH-다 분석 결과 통해 측정 하는 산화 스트레스를 유발. 증가 노출 시간 2 시간에서 4 시간 동안 높은 산화 스트레스 9.2 nm 구리 산화물 입자44. 4 시간 후 노출, 9.2 nm 구리 산화물 입자 생산 비슷한 산화 응답 25 nm 구리 산화물 입자40, 노출을 제안 순차적 노출 기간 있다 산화 긴장 응답에 더 높은 영향 보다 입자 크기. 그러나 세포는 PIVEC 내 노출 그 연구에 비해 높은 산화 긴장,, 대체 시스템에 노출 하는 입자 구리 산화물 그리고 구리는 PIVEC 내 노출 보다 덜 신속 하 게 분해 됩니다. 구성에 따라 구리의 해체에 연구 수행 및 입자의 크기는 더 큰 입자와 금속 산화물 이온 금속 입자 또는 그들의 나노 대응16,47 보다 느린 릴리스 동의 , 48 , 49 습 한 공기 컨트롤 인큐베이터 제어에 비해 산화 스트레스의 상당수를 생산 하지 않았다, 산화 스트레스를 유발 하 구리 입자의 영향은 비슷한 체 외에 노출 PIVEC 내 시스템입니다. 생물학 응답은 PIVEC를 사용 하 여 관찰은 PIVEC 셀룰러 노출에 대 한 적절 한 시스템 제안.
특성화 고는 PIVEC의 세포 연구 동의 잘 문학,9,16,40,,4446 장치는 제한이 있습니다. 작은 디자인 다른 노출 시스템에 비해 단일 소자 내에서 동시에 노출 될 수 있는 샘플의 수를 줄입니다. 다른 체계는 동일한에 어로 졸9,12 복제 측정을 용이 하 게 적어도 3 개의 세포 노출에 대 한 허용 한다. 비록는 PIVEC 시스템 당 하나의 삽입에 대 한 허용, 소형 수 있습니다 쉽게 사용할 수, 여러 시스템에 대 한이 문제를 완화 하는 데 도움. 다른 개인 모니터링 시스템 팬 들은 셀의 정보를 사용 하지 않습니다, 하는 동안은 PIVEC 유지 되어야 한다 수직 셀 문화 미디어를 흘리 고 줄이기 위해 근처 세포 생존 능력을 유지 하는 데 필요한. PIVEC는 아직 최적화 되지 않아 특정 입자 범위 (예: 오후10, 오후2.5, 오후0.1)에 대 한, 비록는 PIVEC 입자 크기의 범위에 대 한 특징 되었습니다 했다. 마찬가지로 다른 수직 흐름 시스템는 PIVEC 보여줍니다 100 근처 입자 예금 감소 수 nm 직경 40 동안에 nm와 800 nm 입자 유사한 효율성으로 입금.
셀 후 노출의 분석은 PIVEC와 SKC 37 m m 필터 카세트에 어로 졸의 병렬 컬렉션을 수행 하 여 빠른 수 있습니다. 중량 측정 기반으로 증 착의 높은 상관 관계 수 있습니다 입자 질량의 예측에 대 한 수집 37 m m 필터를 사용 하 여 수집 된 데이터에서 셀에. 비교 필터 카세트 삽입의 추가 샘플 및 복용량을 결정 하기 위해 추가 측정을 수집 하는 필요를 감소 시킨다. 진행 중인 작업 세포 독성, 산화 스트레스, 또는 다른 생물학 끝점에 대 한 실시간 모니터링 시스템의 통합을 포함합니다. PIVEC의 작은 크기에서에서 사용할 다양 한 설정, 같은 본문에 개인 모니터, 화학 공장, 위에 무인 항공기에 수 또는 외부 공간 해상도 대 한 환경에서. 이 메서드는 알리에서 성장 하는 세포 배양에에 어로 졸 입자의 컬렉션에 대 한는 PIVEC의 사용을 보이고 있다. 졸 37 ± 1 ° C > 80% 상대 습도를 조절 하 여 급성 노출 시 세포 생존 능력을 유지할 수 있습니다. 이 방법은 액체 작은 물방울 및 단단한 입자 기반에 어로 졸에 대 한 적절 한 하 고 40 사이 입자 입금 표시 되었습니다 nm와 800 nm 셀 문화 삽입에. PIVEC의 다재 다능 한이이 메서드를 다양 한 생물 학적 끝점 여러 설정에서 사용할 수 있습니다.
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Disclosures
표지 페이지에 표시 된 저자의 소속이입니다. 저자는 버지니아 연방 대학, 일 리치몬드, 버지니아에 완성 되었다에 의해 재정적으로 지원 저자는 쓰기와이 문서의 내용에 대 한 단독 책임이 있다. 저자 아무 경쟁 관심사 다는 것을 선언 합니다.
Acknowledgments
저자는 보리스 Solomonov 및 버지니아 연방 혁신 기계 공장에 대 한 신속한 프로토 타입 장치 도움말 감사 합니다 싶습니다. 저자 또한 크리스티안 로메로-르윈스키 그룹의 푸 엔 테 스, 닥터 비탈리 Avrutin, 박사 드미트리 Pestov, 버지니아 커먼 웰 스 나노 소재 핵심 특성화 시설 그들의 도움에 대 한 입자 묘사와 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 버지니아 연방 대학에서 공학 대학 박사 르윈스키에 게 제공 하는 시작 자금에 의해 지원 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scanning mobility particle sizer (SMPS) | TSI, Inc. | 3910 | NanoSMPS |
| Optical particle sizer (OPS) | TSI, Inc. | 3330 | |
| Stainless Steel Pipe, 4" Long | McMaster-Carr | 4830K116 | Standard-Wall 304/304L, Threaded on Both Ends, 1/8 Pipe Size |
| Brass Ball Valve with Lever Handle | McMaster-Carr | 4112T12 | Compact High-Pressure Rating, 1/8 NPT Female |
| Steel Pipe, 2" Long | McMaster-Carr | 7753K121 | Standard Wall, Threaded on One End, 1/8 Pipe Size |
| HEPA filter | GE Healthcare | 09-744-12 | HEPA-Cap Disposable Air Filtration Capsule |
| Vacuum Generator | PISCO USA | VCH10-018C | |
| PIVEC | VCU | For design please contact authors | |
| Resistive heater | |||
| 1/4" barbed connectors | Zefon International, Inc. | 459743 | |
| Porous tubing | Scientific Commodities, Inc. | BB2062-1814A | Hydrophilic 10 um pores |
| Battery power bank | |||
| Cell culture insert | Fisherbrand | 353095 | 24 well plate insert |
| Filter Forceps | Fisherbrand | 09-753-50 | |
| Transfer Pipette | ThermoScientific | 13-711-27 | |
| Glass Fiber Filters | SKC | 225-7 | Binder-Free Type AE Filter 37 MM 1.00 um pore |
| Ultra Micro Balance | A&D | BM-22 | Housed in environmental chamber |
| 37 mm filter cassette | SKC | 225-3250 | Filter Cassette Blank, 37 mm, Clear Styrene |
| Variable flow vacuum pump | SKC | 220-5000TC | AirChek TOUCH, 5 to 5000 mL/min |
| Copper Particles | U.S. Research Materials, Inc. | US1090 | 40 nm |
| Copper Particles | U.S. Research Materials, Inc. | US1088 | 100 nm |
| Copper Particles | U.S. Research Materials, Inc. | US1117M | 800 nm |
References
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