Здесь мы предоставляем подробное описание экспериментальной установки для анализа оценки целостности ДНК в стволовых клеток до трансплантации клеток.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
* These authors contributed equally
Здесь мы предоставляем подробное описание экспериментальной установки для анализа оценки целостности ДНК в стволовых клеток до трансплантации клеток.
Стебель и стволовых клеток, полученных клетки имеют огромный потенциал как регенеративной терапии для различных дегенеративных заболеваний. ДНК является склад генетических данных во всех клетках, в том числе стволовых клеток, и ее целостность имеет основополагающее значение для его регенеративные способности. Стволовые клетки претерпевают быстрое распространение в лабораториях для достижения необходимого числа для трансплантации. Ускоренное клеточный рост приводит к потере целостности ДНК накопленных метаболитов, таких как кислорода, карбонил и алкилирующие агенты. Пересадка эти клетки приведет к плохой приживления и регенерации органов ухудшение. Кроме того, пересадке ДНК поврежденных клеток приводит к мутации, нестабильность ДНК и клеточного старения и возможно, угрожающих жизни заболеваний, как рак. Таким образом существует настоятельная необходимость для метода контроля качества для оценки пригодности клеток для трансплантации. Здесь мы предоставляем пошаговые протоколы для оценки целостности ДНК стволовых клеток до трансплантации клеток.
Экспериментальные и клинические данные показывают, что трансплантация клеток умеренно может улучшить левого желудочка сократительной производительность при отсутствии сердца1,2,3,4,5 ,6,,78,9. Последние достижения открыли дальнейшего обжалования возможности для сердечно-сосудистой системы регенерации; к ним относятся принудительный выражение перепрограммирования фактор....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
1. комета Assay
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Были искусственного человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, и повреждения ДНК и хвост момент, которые были использованы как мера целостности ДНК, были проанализированы пробирного кометы. ИПК клетки были встроенные в температура плавления агарозы и размещены на стеклянное скольжение. Клетки затем, лечили литического буфера, а затем щелочной раствор, чтобы получить supercoiled ДНК. Нуклеоидах были electrophoresed и кометы были визуализировать ДНК краситель (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Целостность ДНК изображает целостность клеток. Клетки с поврежденной ДНК часто в стресс и в конечном итоге потерять их целостность. Целостность стволовых стволовых клеток, полученных клеток, которые распространяются для целей трансплантации и основных ячеек для выполнения их требуемую функцию. Пересадка клетки с поврежденной ДНК приведет к плохой приживления скорость и производительность ячейки8,20. Таким образом изучение целостности ДНК до трансплантации клеток .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы не имеют ничего сообщать.
Эта работа частично поддержали национальные сердца, легких и крови института грантов RO1-HL-99507, HL-114120, HL-131017, HL138023 и UO1-HL-134764 (с J. Чжан) и американской сердца ассоциации научного развития Грант 17SDG33670677 (до р. Kannappan).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,25% трипсин | Corning | 25200056 | |
| 8-луночной камере | предметного стекла Millicell | PEZGS0816 | |
| Accutase | Stemcell Technologies | 7920 | Раствор для отслоения клеток |
| Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories | 711-545-152 (RRID: AB_2313584) | |
| Бычий сывороточный альбумин | Sigma-Aldrich | A7906 | |
| Cy3 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories | 711-165-152 (RRID:AB_2307443) | |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D9564 | |
| Gibco B-27 Добавка, без сыворотки,Gibco | 17504-044 | ||
| Фактор роста Matrigel снижен | Corning | 354230 | |
| mTeSR1 | Технологии стволовых клеток | 85850 | |
| ФаллоидинA488 | Технология жизни | A12379 | |
| Фосфо-гистон H2A. X (Ser139) Технология передачи сигналов антителами | 2577 (RRID: AB_2118010) | ||
| RPMI | Gibco | 11875-093 | |
| SYBR Зеленый I гелевый краситель для нуклеиновых кислот | Sigma-Aldrich | S9430 | |
| Triton X-100 | Fisher scientific | BP151-100 | |
| UltraPure Low Melting Point Agarose | Invitrogen | 16520050 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | Antifade |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.