Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

Published: March 1, 2019 doi: 10.3791/59078
Automatic Translation
*1,2,3,4,5, *6,7, 5
1Research Center of Translational Imaging, College of Medicine, Taipei Medical University, 2Radiogenomic Research Center, Taipei Medical University Hospital, Taipei Medical University, 3Department of Radiology, School of Medicine, College of Medicine, Taipei Medical University, 4Department of Medical Imaging, Taipei Medical University Hospital, Taipei Medical University, 5Department of Medical Research, Taipei Medical University Hospital, Taipei Medical University, 6Department of Surgery, School of Medicine, College of Medicine, Taipei Medical University, 7Division of General Surgery, Department of Surgery, Taipei Medical University Hospital
* These authors contributed equally

Summary

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

Abstract

במחקר זה, מודל העכבר חסימה בעורק האמצעי (MCA) הוא מועסק ללמוד איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion. מודל אמין הדירים העכבר הוא שימושי עבור חוקרים הפתופיזיולוגיה של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion וקביעת אסטרטגיות טיפוליות אפשריות עבור חולים עם קו. וריאציות באנטומיה של מעגל וויליס של C57BL/6 עכברים משפיע על נפח לאוטם שלהם לאחר פגיעה מוחית-איסכמיה-induced. מחקרים הראו הזה סגר MCA הדיסטלי (MCAO) ניתן להתגבר על בעיה זו, לגרום לאוטם יציב במידה. במחקר זה, אנו להקים מודל העכבר סגר שתיים, כלי של מוחי איסכמיה-פגיעה reperfusion דרך ההפרעה של זרימת הדם MCA הנכון. אנו יש מאתרים ומפסיקים את MCA נכון ולא נכון עורק תרדמני (המרכז לאמנות עכשווית), להחזיר את זרימת הדם לאחר תקופה מסוימת של איסכמיה. הפציעה איסכמיה-פגיעה reperfusion גורם לאוטם של גודל יציב של גירעון התנהגותית. תאים חיסוניים היקפיים לחדור איסכמי במוח במהלך תקופת הסתננות 24 שעות ביממה. בנוסף, אובדן העצבית באזור קורטיקליים היא פחות עבור משך זמן ארוך יותר פגיעה reperfusion. לכן, מודל סגר שתיים, כלי זה מתאים חוקרים את התגובה החיסונית ושחזור העצבית במהלך תקופת פגיעה reperfusion לאחר קליפתית.

Introduction

המודל העכבר איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion היא אחת הגישות ניסיוני הנפוצה ביותר עבור חוקרים הפתופיזיולוגיה של המוח הנגרמת איסכמיה פציעה1. בגלל איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion מעורר את המערכת החיסונית היקפיים, תאים חיסוניים היקפיים לחדור לתוך איסכמי במוח וגורמים נזקים עצביים2. לכן, מודל העכבר אמין לשחזור המחקה איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion נדרש להבין הפתופיזיולוגיה של שבץ.

C57BL/6J (B6) עכברים הם המתח הנפוצות ביותר בניסויים שבץ, כי הם יכולים בקלות להיות גנטית מניפולציה. שני דגמים נפוצים של MCAO/פגיעה reperfusion המחקים את התנאי של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion זמינים. הראשון הוא הדגם נימה intraluminal של MCAO הפרוקסימלית, איפה נימה מצופה סיליקון הוא מועסק כדי intravascularly occlude את זרימת הדם ב- MCA; חוט הלהט occluding תוסר לאחר מכן כדי לשחזר את זרימת הדם3. משך זמן קצר סגר גורמת פגיעה של האזור subcortical, ואילו משך זמן ארוך יותר סגר גורמת infarcts באזורים קורטיקליים ו subcortical. המודל השני הוא הדגם מצדו של MCAO הדיסטלי, שכרוך extravascular מצדו של MCA, המרכז לאמנות עכשווית כדי להקטין את זרימת הדם דרך MCA, אחרי אשר שוקמו זרימת הדם דרך הסרת תפרים, מפרצת סרטון4. במודל זה, לאוטם נגרמת באזורים קורטיקליים, שיעור התמותה הוא נמוך. כי מצדו של דגם MCAO/פגיעה reperfusion דורש craniectomy לחשוף את האתר של MCA הדיסטלי, האתר יכול להיות מאושרות בקלות, תוך בחינת השאלה זרימת הדם ב- MCA דיסטלי מופרת במהלך ההליך היא פשוטה.

B6 עכברים התערוכה וריאציות ניכר באנטומיה של שלהם מעגל ויליס; זה עשוי להשפיע על אמצעי האחסון לאוטם בעקבות איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion5,6,7. כיום, בעיה זו ניתן להתגבר באמצעות מצדו של MCA דיסטלי8. במחקר זה, אנו להקים שיטה occluding את זרימת הדם MCA ולאפשר פגיעה reperfusion לאחר פרק זמן מוגדר מראש של איסכמיה. שתיים, כלי סגר של המודל איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion גורם איסכמיה ארעית של השטח MCA דרך מצדו של MCA הדיסטלי הימני, נכון המרכז לאמנות עכשווית, עם זרימת דם משוחזרים לאחר תקופה מסוימת של איסכמיה. דגם MCAO/פגיעה reperfusion זה גורם לאוטם של גודל יציב, בכמויות גדולות של תאים חיסוניים הסתננות מוח איסכמי במוח, גרעון התנהגותית אחרי איסכמיה מוחית – פגיעה reperfusion4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

טיפול בבעלי חיים מוסדיים וועדות שימוש של אקדמיה Sinica, טייפה הרפואי האוניברסיטאי אושר פרוטוקול זה לשימוש של חיות ניסוי.

1. MCAO/פגיעה reperfusion מודל

  1. מספקים העכברים עם גישה חופשית לחדר האוכל והמים עד הניתוח.
  2. אוטוקלב כירורגי כלים, לנקות את שולחן הניתוחים וציוד באמצעות אתנול 70%. ללבוש מסכה כירורגית, כפפות סטריליות. השתמש מעקר חרוז יבש כדי לעקר מחדש כלים כירורגיים אם ריבוי ניתוחים העכבר ייערך בניסוי אחד.
  3. עזים ומתנגד של העכבר 8 ל 12-בת (המונים: 25-30 גרם) באמצעות 0.8% קלוראל-הידרייט, באמצעות הזרקה בקרום הבטן. ודא שהעכבר anesthetized לא קיים רפלקס פדלים (כפי נבדק באמצעות צביטה הבוהן המשרד) לאחר האסתטיזציה.
  4. להשתמש הוטרינר משחה למניעת יובש בעין אחר העכבר אמנם זה תחת הרדמה.
  5. השתמש מערכת לחץ דם לא פולשנית לנטר לחץ דם של העכבר.
  6. השתמש מערכת ניטור פיזיולוגיים לעקוב אחר טמפרטורה רקטלית וגזים בדם שלה. לשמור על טמפרטורת הגוף ב- 36.5 ± 0.5 מעלות צלזיוס.
  7. Subcutaneously להחדיר את העכבר מניעתי אנטיביוטי (25 מ"ג/ק"ג צפאזולין)8.
  8. הנח את העכבר במצב פרקדן על כרית חימום.
  9. להשתמש קוצץ חשמלי כדי לחשוף את העור על ידי גילוח הפרווה של העכבר על אזור הצוואר הגחון, וכן באזור שבין עין ימין אוזן ימין.
  10. השתמש epilating קרם כדי לנקות את הפרווה מהגוף של העכבר ולחטא באתר כירורגית לסירוגין scrbus עם povidione-יוד ו-70% אתנול.
  11. השימוש איריס מספריים לחתוך חתך 1 ס מ באורך קו האמצע בצוואר.
  12. השתמש איריס מלקחיים לנתח בזהירות את המרכז לאמנות עכשווית חופשי תועה מבלי לגרום פגיעה פיזית.
  13. השתמש התפרים משי 5-0 כדי לבודד את המרכז לאמנות עכשווית.
  14. עושים חתך 0.3 ס מ בקרקפת אל נקודת האמצע בין עין ימין אוזן ימין.
  15. השימוש microscissors לחתוך את השריר temporalis לחשוף את עצם העול, squamosal.
  16. תחת מיקרוסקופ ויבתר סטריאו, להשתמש microdrill כדי ליצור חור בקוטר מ מ 2 ישירות מעל MCA דיסטלי צד ימין.
  17. מאתרים ומפסיקים את המטען של MCA דיסטלי צד ימין באמצעות 10-0 בתפר.
  18. Occlude של המרכז לאמנות עכשווית צד ימין באמצעות סרטון מפרצת nontraumatic.
  19. לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה, להסיר את המפרצת קליפים התפר כדי להחזיר את זרימת הדם MCA, המרכז לאמנות עכשווית.
  20. השתמש קליפ תפירה לסגירת החתך בעור על הראש.
  21. חותם את החתכים עור צוואר הרחם באמצעות בתפר אחד ואחריו סגירת עור הצוואר עם תפרים או סיכות9.
  22. Subcutaneously להזריק הבופרנורפין (0.1 מ"ג/ק"ג) כאב הקלה9.
  23. לשמור על טמפרטורת גוף של העכבר-36.5 ± 0.5 מעלות צלזיוס על כרית החימום עד זה שיחזר מלאה מן ההרדמה. מחזירה את החיה עברה ניתוח החברה של בעלי חיים אחרים עד זה הוא החלים לחלוטין. אין להשאיר את החיה ללא השגחה עד זה להכרה מספקת.
  24. המקום העכבר לתוך הכלוב בלוק כך זה יכול לגשת מים ובחופשיות צ'או אחרי זה הוא החלים לחלוטין.

2. צביעת כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium

  1. עזים ומתנגד את העכבר עם 0.8% קלוראל-הידרייט באמצעות הזרקה בקרום הבטן.
  2. השתמש מספריים הפעלה כדי לערוף את החיה.
  3. לחשוף את הגולגולת באמצעות מספריים איריס לעשות חתך בעור של הראש.
  4. שימוש הפעלה מספריים כדי לגזור את החלק הפנימי. של העצם הקדמית.
  5. השימוש איריס מספריים לחתוך את הגולגולת לאורך התפר המשונן.
  6. השתמש rongeur של עצם לדחוף הצידה את הקדמית ואת עצם הקודקוד ולחשוף את המוח.
  7. השתמש איריס מלקחיים לנתח את המוח.
  8. להשתמש בעכבר המוח מטריצה סכיני גילוח כדי לקבל פרוסות הילתית 2 מ מ.
  9. מכתים את פרוסות המוח 10 דקות ב 37 ° C עם 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC) ב 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח.
  10. לשטוף את המוח 2 x עם 10% פורמלין.
  11. לתקן את המוח בפורמלין 10% בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות ביממה.

3. מדידה של גודל לאוטם

  1. לארגן את הסעיפים בשקופית פלסטיק נקי, אוריינט את הסעיפים מ rostral כדי סימטרית.
  2. סרוק את השקופית באמצעות סורק. הנח סרגל מטרי וודא כי היא מופיעה התמונה הסרוקה. נהפוך את השקופית ולסרוק לצד ההפוך.
  3. לחשב את השטח אוטם של כל מקטע באמצעות תוכנת ImageJ.
    1. לפתוח את קובץ התמונה ולהגדיר את קנה המידה של התמונה.
    2. השתמש ביד חופשית הבחירה כדי לבחור את האזור לאוטם.
    3. השתמש את האזורים של מנהל ריבית (ROI) כדי למדוד את השטח של עניין.
  4. לסכם את האזורים אוטם עבור כל מקטע, הכפל את התוצאה בהעובי מקטע כדי להעריך את אמצעי האחסון הכולל אוטם.

4. ניתוח סטטיסטי

  1. השתמש GraphPad מנסרה 6 כדי לקבוע את מובהקות סטטיסטית עם הסטודנט t-מבחן.
    הערה: קווי השגיאה על מגרפים מייצגים לשגיאות תקן של הממוצע (SEMs).
  2. שימוש G * 3.1 כוח לחשב את גודל המדגם המתאים ולבצע ניתוח כוח10.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

הליך MCAO/פגיעה reperfusion המיוצר לאוטם בקליפת המוח באזור MCA נכון וגרם גרעון התנהגותית. דרגות שונות של איסכמיה-induced לאוטם נפח (איור 1 א'ב') ואובדן עצביים (איור 1CD) נוצרו בקליפת של האזור MCA נכון דרך עלייה משך מצדו. הפציעה הזאת MCAO/פגיעה reperfusion ירד פעילות גינקולוגיות של החיה ב 48 שעות לאחר MCAO/פגיעה reperfusion (איור 2). בכמויות גדולות של תאים חיסוניים היקפיים (תאיםגבוה CD45) גם הסתננו איסכמי במוח (חולשת האונה) לאחר מוחי איסכמיה-פגיעה reperfusion (איור 3). בנוסף, אנו בהשוואה מודל זה שתיים, כלי סגר עם המודל MCAO, מצא כי אמצעי האחסון לאוטם של שני דגמים אלה היו לא שונה באופן משמעותי (איור 4). שיעור התמותה היה נמוך (< 5%) במודל עכבר סגר שתיים, כלי של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion. שללנו עכברים מניתוחי עוד יותר אם דימום יתר שהתרחש במהלך הניתוח. כאשר הניתוחים כראוי עקבו, שיעור של הדרה בבעלי חיים בשל דימום יתר craniectomy או MCA היה פחות מ- 15%. סגר של MCA נכון או המרכז לאמנות עכשווית לבד גרם שריר הלב.

Figure 1
איור 1: נפח לאוטם ואובדן עצביים נמצאים בקורלציה חיובית עם האורך של סגר כלי הקיבול. (א) נציג TTC כתמים של פרוסות המוח של עכברים, 24 שעות לאחר MCAO/פגיעה reperfusion. משך MCAO היה 10, או 40 דקות הנתונים המוצגים הם נציג של 3 ניסויים עצמאית. (B) כימות של אמצעי האחסון לאוטם. קווי השגיאה מייצגים SEMs; n = 8; p < 0.05. (ג) MAP2 הביטוי במוח B6-24 שעות לאחר MCAO/פגיעה reperfusion נקבע באמצעות אימונוהיסטוכימיה. MAP2-שלילי אזורים המוקפים קו מקווקו בדמות נציג MAP2 מכתים של המקטע המוח. (ד) כימות של האזור MAP2 שלילי. אזור MAP2-שלילי (%) = אזור MAP2-שלילי חולשת / contralateral האונה x 100; n = 3; * p < 0.05.

Figure 2
איור 2: פעילות גינקולוגיות ירד אחרי איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion. (א) פעילות גינקולוגיות נותחו 48 שעות לאחר MCAO/פגיעה reperfusion. משך MCAO היה 40 דקות. הנתונים נרשמו עבור 60 דקות ב וזמינותו בשדה פתוח. מרחקים מעקב של עכברים נותחו באמצעות CleverSys TopScan 1.0. קבוצת הביקורת שאם הייתה מורכבת עכברים שעברו את הניתוח ללא חסימה של MCA או המרכז לאמנות עכשווית. (B) כימות של המרחק יועבר באמצעות המזויף ואת MCAO/פגיעה reperfusion עכברים. הנתונים מוצגים אומר ± SEM; n = 7; p < 0.05. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: תאים חיסוניים היקפיים לחדור לתוך הכדור איסכמי אחרי איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion. (א) תאים חיסוניים המוח-infiltrating (תאיםגבוה CD45) בחצי הכדור חולשת ו contralateral, ב- 24 שעות לאחר MCAO/פגיעה reperfusion, נותחו על ידי flow cytometry. בידודו של הסתננות במוח תאים חיסוניים תואר המחקר הקודם4. משך MCAO היה 40 דקות (B) כימות של הסתננות במוח תאים חיסוניים בחצי הכדור חולשת ו contralateral, ב- 24 שעות אחרי MCAO/פגיעה reperfusion. הנתונים מוצגים אומר ± SEM; n = 4; p < 0.05.

Figure 4
איור 4: אמצעי האחסון לאוטם אינה שונה בין MCAO - MCAO/פגיעה reperfusion-induced פציעות. (א) נציג TTC כתמים של פרוסות המוח של עכברים, 24 שעות לאחר MCAO. בקבוצה MCAO ניסיוני, MCA נכון לצמיתות נחתך באמצעות cauterizer של כלי השיט, ואילו המרכז לאמנות עכשווית נכון היה מאתרים transiently למשך 40 דקות. קבוצת הניסוי MCAO/פגיעה reperfusion (MCAO/נציג), היה ההליך כמתואר בסעיף 1 של הפרוטוקול. משך MCAO היה 40 דקות (B) כימות של אמצעי האחסון לאוטם. הנתונים מוצגים אומר ± SEM; n = 7.

Table 1
טבלה 1: השוואה בין נפח לאוטם ולשינויים של ניסויים שונים. אמצעי האחסון לאוטם נקבע ב- 24 שעות לאחר MCAO/פגיעה reperfusion מ 3 ניסויים עצמאית. משך MCAO היה 40 דקות SD = סטיית תקן; n = מספר עכברים בשימוש לכל ניסוי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

המודל העכבר MCAO/פגיעה reperfusion הוא במודל חיה בדרך כלל המועסקים לחקות איסכמיה ארעי אצל בני אדם. מודל זה בעל חיים ניתן להחיל העכברים הטרנסגניים ו נוקאאוט זנים לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. מספר צעדים בפרוטוקול הם קריטיים במיוחד. (1) microdrill, אליו חייב לשמש בזהירות בעת יצירת חור בגולגולת, עם פעולה לא הולם בקלות לגרום לדמם MCA. (2 לא צריך להיות ניזוק MCA), דימום יש להימנע לפני ואחרי ההליך מצדו. נזק MCA משפיעה על הרמה של פגיעה reperfusion ב מוחי איסכמי7. יש לבדוק את מצב פגיעה reperfusion MCA לאחר MCAO. סגר ושחזור של זרימת הדם אל MCA ניתן לנתח באמצעות לייזר דופלר. (3 המרכז לאמנות עכשווית) לא צריך לדמם במהלך הבידוד המרכז לאמנות עכשווית. (4 העצב התועה) בוודאי לא ניזוקה במהלך הבידוד המרכז לאמנות עכשווית, כי זה יכול להגדיל את גודל לאוטם ואת סיכויי תמותה (5) טמפרטורת הגוף של העכבר צריך להישמר 36.5 ± 0.5 מעלות צלזיוס. היפרתרמיה מגבירה את סיכויי התמותה11וגודל לאוטם. היפותרמיה מפחיתה את עוצמת הקול לאוטם אחרי קליפתית12.

המשמעות של מודל זה MCAO/פגיעה reperfusion היא יכולה ליצור infarcts קורטיקלית מאוד לשחזור וחסרונות התנהגותיים4. לעומת מודלים MCAO שונים, כגון שתקבעו איסכמי (H / אני) שבץ דגם כפי שמתואר ב קודם ללמוד8, מודל סגר שתיים, כלי זה המניע השתנות קטן יחסית בכרך לאוטם (המקדם של וריאציה נע בין 0.11-0.17) (טבלה 1). מודלים חלופיים שבץ, כגון המודל הלהט intraluminal, עלולה לגרום אמצעי לאוטם בלתי צפוי בגלל המצב לא ברור של התנאי סגר, פגיעה reperfusion לאחר ניתוח13. בהשוואה עם שלושה כלי MCAO מודל (מצדו של הזכות MCA ו- CCAs מימין ומשמאל)14, המודל המוצע כולל את מצדו של כלי רק שני (MCA נכון ולא נכון המרכז לאמנות עכשווית) כדי להשיג קליפתית. כתוצאה מכך, זמן הניתוח קצר יותר נדרש יותר במודל MCAO 3-כלי. המגבלה העיקרית של דגם MCAO/פגיעה reperfusion זה הוא כי הוא דורש craniectomy לבצע MCA מצדו. מחקר אחד הראה שגולגולת הזה גורם לשינויים תעתיק המוח15. לכן, פקד שאם נדרש לקבוע את ההשפעות של MCAO/פגיעה reperfusion על ביטוי גנים.

אובדן העצבית באזור קורטיקליים הוא פחות כאשר משך זמן ארוך יותר פגיעה reperfusion הוא מועסק. מחקרים הראו כי האזור MAP2-שלילי הוא קטן יותר לאחר 7 ימים של פגיעה reperfusion, לעומת 2 ימים של פגיעה reperfusion4,16. עם זאת, אפקט זה שחזור סביר במוח עם איסכמיה המושרה על ידי מודל monofilament intraluminal MCAO17,18. בנוסף, הדגם monofilament intraluminal של MCAO יכול לקיים את גודל לאוטם לפחות 7 ימים.

עכברים B6 יש collateralization נרחב בין הורדתי את MCA19. כאשר אנחנו לצמיתות מקוצרים של MCA איסכמי במוח, מצאנו כי אמצעי האחסון לאוטם איננה שונה באופן מהותי מן העכברים עם MCA reperfused ב- 24 שעות לאחר MCAO (איור 4). לכן, אנו ממליצים כי זרימת הדם מן בהתקפה ולא הורדתי יכול לפצות על ההשפעות איסכמיה של הטריטוריה MCA כאשר MCA דיסטלי היא לצמיתות occluded.

במחקר זה, המודל MCAO/פגיעה reperfusion שתיים, כלי שנוצר פציעה איסכמיה-פגיעה reperfusion וגרם היקפיים תאים חיסוניים לחדור לתוך המוח איסכמי. מודל זה יכול להיות מועסק כדי לחקור את יחסי הגומלין בין המוח ומערכת החיסון. בנוסף, זה יכול לשמש כדי לבדוק neuroprotectants או תרופות לווסת את התגובה החיסונית אחרי איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion פוטנציאליים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי משרד המדע, הטכנולוגיה, טייוואן (ביותר 106-2320-B-038-024, רוב 105-2221-E-038-007-MY3 ו ביותר 104-2320-B-424-001) בית החולים האוניברסיטאי הרפואי טייפה (107TMUH-SP-01). כתב יד זה נערך על-ידי עריכה אקדמית וואלאס.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bone rongeur Diener Friedman
Buprenorphine Sigma B-044
Cefazolin Sigma 1097603
Chloral hydrate Sigma C8383
Dissection microscope Nikon SMZ-745
Electric clippers Petpro
10% formalin Sigma F5304
Germinator dry bead sterilizer Braintree Scientific
Iris Forceps Karl Klappenecker 10 cm
Iris Scissors Diener 9 cm
Iris Scissors STR Karl Klappenecker 11 cm
Microdrill Stoelting FOREEDOM K.1070
Micro-scissors-Vannas HEISS H-4240 blade 7mm, 8 cm
Mouse brain matrix World Precision Instruments
Non-invasive blood pressure system Muromachi MK-2000ST
Operating Scissors STR Karl Klappenecker 14 cm
Physiological Monitoring System Harvard Apparatus
Razor blades Ever-Ready
Stoelting Rodent Warmers Stoelting 53810 Heating pad
Suture clip Stoelting
Tweezers IDEALTEK No.3
Vetbond 3M 15672 Surgical glue
10-0 suture UNIK NT0410
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride Sigma T8877

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Woodruff, T. M., et al. Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke. Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).
  2. Chamorro, A., et al. The immunology of acute stroke. Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).
  3. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model. Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).
  4. Lee, G. A., et al. Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury. Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).
  5. Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).
  6. Kitagawa, K., et al. Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).
  7. Wellons, J. C. 3rd, et al. A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia. Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).
  8. Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit. Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).
  9. Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion. Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).
  10. Wayman, C., et al. Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability. Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).
  11. Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).
  12. Florian, B., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).
  13. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).
  14. Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting. Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).
  15. Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).
  16. Tachibana, M., et al. Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons. Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).
  17. Gan, Y., et al. Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).
  18. Li, M., et al. Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).
  19. Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation. Circulation Research. 107 (4), (2010).

Tags

רפואה גיליון 145 חסימה בעורק האמצעי איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד assay וזמינותו בשדה פתוח לאוטם נפח ImageJ
שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chen, C. Y., Chen, R. J., Lee, G. A. … More

Chen, C. Y., Chen, R. J., Lee, G. A. Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion. J. Vis. Exp. (145), e59078, doi:10.3791/59078 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter