Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Program Biochip Microfluidic teknologi for å oppdage Serum Allergen-spesifikke immunglobulin E (sIgE)

doi: 10.3791/59100 Published: April 21, 2019
* These authors contributed equally

Summary

Dette dokumentet presenterer en protokoll for å oppdage serum-spesifikke immunglobulin E med en microfluidic patron-basert chemiluminescence system og evaluering av nytten i allergi diagnoser.

Abstract

Allergisk sykdom er vanlig i både voksne og barn. Identifikasjon av forårsaker allergener er viktig i sykdom og forebygging. Imidlertid mangler en bestemt immunglobulin E (IgE) målesystem med en høy pris-ytelse i fastlands-Kina, særlig i primærhelsetjenesten sykehusene. Dette dokumentet beskriver prosedyrene prinsippet og drift av benytter en microfluidic patron-basert chemiluminescence system for å oppdage allergen-spesifikke IgE i serum. Resultatene ble sammenlignet med de fra ImmunoCAP (System 1), industristandard, og reproduserbarhet av systemet for å oppdage pasienter sensibilisert til vanlige allergener evalueres. Resultatene viste at med ImmunoCAP (System 1), den BioIC System (System 2) har god presisjon og følsomhet oppdage serum-spesifikke IgE mot ulike inhalant og mat allergener, men med en betydelig lavere kostnad. Det kan tjene som et godt alternativ til System 1 i primærhelsetjenesten sykehus i Kina som har lavere finansielle kostnader.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Utbredelsen av allergi økt jevnt de siste tiårene, og påvirker 20% - 30% av den globale befolkning1. Identifikasjon av forårsaker allergener har viktig betydning i å håndtere sykdommer. I Kina, siden registrert i vivo huden stikk tester er ikke tilgjengelig i landet, i vitro fastsettelse av serum-spesifikke IgE er den viktigste og brukte verktøy for type I-allergi diagnostiserer2. Dette ligner på praksis i den vestlige verden, men tross ImmunoCAP system (System 1), en fluorescens enzym knyttet immunosorbent base system, oppfattes som gullstandarden for i vitro allergi diagnose3, dets bruk i Kina er svært begrenset grunn til høy utstyr og reagens prisen. Derfor er en ny alternative allergi diagnose system med en høy pris-ytelsesforholdet sårt tiltrengt.

BioIC systemet (System 2) er et microfluidic patron-basert system basert på chemiluminescence for multiplex analyser av serum-spesifikke IgE. Med en størrelse på 7 cm x 4 cm, består microfluidic kassetten av tre lag med støpt plast. Den øvre delen er 3 mm tykt gjennomsiktig polykarbonat som bærer god stabilitet under termisk forsamlingen prosesser. Med 3 mm tykt botnlaget konstruert fra en kopolymer av akrylonitril og butadien styren (ABS), smørbrød det 0,5 mm tykt midterste laget laget av silikongummi. Som svart i fargen, tilbyr det midterste laget lavere bakgrunn under chemiluminescence-gjenkjenning. Over silica gel, er et tynt lag av nitrocellulose membran (NC membran) sprayet der tilsvarer sonen reaksjon, som lar den småblødninger av ulike allergifremkallende proteiner. Formålet med denne studien er å vurdere kliniske resultatene av det microfluidic systemet for multiplex fastsettelse av allergen-spesifikke IgE i serum.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne studien og bruk av koagulasjon ble godkjent av den etiske komiteen ved den første tilknyttet Hospital i Guangzhou medisinske universitet (GYYY-2016-73). Alle deltakere har gitt sitt skriftlige samtykke uavhengig eller gjennom deres foreldre (i tilfelle av barn).

1. grunnleggende informasjon av

Merk: Allergi informasjon oppbevaringssted for den staten nøkkel laboratorium av luftveissykdommer (AIR-SKLRD) er en stor serum sentralbank inne Guangzhou Institute av respiratoriske sykehuset (GIRH). Startet i det siste tiåret, har AIR-SKLRD allerede begynt å samle og lagre serumprøver fra pasienter med allergiske sykdommer, sammen med deres klinisk informasjon (tabell 1)4,5. Denne studien ble utført med sera fra AIR-SKLRD.

  1. Søk AIR-SKLRD databasen for sera samlet fra januar 2015 til juni 2018 og velg pasienter med allergiske sykdom, som ble funnet for å være følsomme for de vanlige allergener i regionen.
  2. Sikre at alle pasienter har allergiske-relaterte sykdommer, som allergisk rhinitt og astma, allergisk dermatitis eller urticaria, og at serum av disse pasientene inneholder flere serum allergen-spesifikke immunglobulin E (sIgE) sensitizations av vanlige allergener i denne regionen, oppdaget av System 1.
  3. Utelate pasienter med ufullstendig pasientjournal de tapte for oppfølging, de som nekter å gi samtykke om bruk av deres serumprøver for vitenskaplige formål, de med en identifisert immunsvikt, de er på immunterapi eller immunmodulerende agenter, eller har parasittiske.
  4. Sikre utydelige behandling eller stoffet ble gitt før samlingen serum for å minimere interferens til laboratoriet resultatene. Alle serumprøver som ikke oppfyller kriteriene ble avvist.

2. studere flyt og mål av interesse

Merk: Microfluidic systemet må 100 µL av serum for å bestemme 19 allergener. Venøst blod (5 mL) ble samlet inn fra hver pasient med et vakuum blod fartøy med skiller gel. Etter sentrifugering i 10 min 1000 x g, var øvre laget samlet for testing. Ubrukte serum ble lagret på-80 ° C. Før testing, serum ble holdt ved romtemperatur for 30 min og var rystet med en vortex mikser. Gjentatte fryse og tine sykluser ble unngått.

  1. Test primært serumprøver for sIgEs til hele allergener Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), katten dander (e1), hunden dander (e5), Bermuda gress (g2), timothy gress) G6), cockroaches (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), ragweed (w1), eggehvite (f1), melk (f2), hvete (f4), peanut (f13), soyabønner (f14), mandel (f20), krabbe (f23) og reker (f24). Følg instruksjonene i Seksjon 3.
    Merk: sIgE vilje ble gjort med allergen-spesifikke IgE analysen kit (se Tabell for materiale) og målt ved en chemiluminescence analysator.
  2. Tilfeldig velge tre prøvene fra prøvene med nok serum (minst 900 µL) for en reproduserbarhet studie. Holde alle betingelser uendret, måle de tre sera for allergen sIgEs daglig for 9 dager (dvs., totalt 100 x 9 = 900 µL av serum).

3. semi automatisering testprosedyren av microfluidic

NOTE System 2 er integrering av automatisk microfluidic teknologi, protein microarray, kaldt lys analyse, parallelle IgE analyse og behandlingsteknologi. Testing protokollen er delt inn i fire deler: klargjøring av utstyr, prøve lasting, inkubasjon og måling.

  1. Klargjøring av utstyr
    1. Slå på PC og analyserer makt.
      Merk: Strømbryteren er til venstre på basen.
    2. Start på LabIT på PCen. Hvis Mørke ramme advarselsvinduet dukker opp, klikker du OK for å kjøre lekkasjetest. Deretter velge center logoen og angi drift grensesnitt.
      Merk: Systemet vil minne brukeren kjøre lekkasjetest hvis den er inaktiv for mer enn 24 timer.
    3. Kontroller reaksjon Temp og CCD (kostnad - sammen enhet) Temp på nedre høyre hjørne av skjermen. Reaksjon Temp bør stige til 37 ° C ± 1 ° C i ca 10 min, og CCD Temp bør falle til-15 ° C ± 1 ° C.
    4. Kjøre lekkasjetest etter CCD Temp har falt til-15 ° C ± 1 ° C. Før du kjører lekkasjetest, kontroller at det er ingen andre elementer igjen inne i instrumentet og lukke døren. Klikk verktøy | Systemtest | Lekkasjetest. Ikke åpne døren under testing. Når testen er ferdig, vil vinduet dukker opp.
  2. Eksempel lasting
    1. Legge til 620 µL av vaskebuffer, 120 µL blokkerer bufferen, 60 µL av conjugates A og B, 60 µL av underlaget A og B og 100 µL av serumprøver tilsvarende reagens tanken på microfluidic kassetten.
  3. Inkubasjon
    1. Klikk på Kassetten ID, bruke strekkodeleser skanne serienummeret på kassetten, angi prøve-ID, kassetten inn analysatoren og lukke døren og klikk Analyzer og kjøre for å starte analysen.
  4. Måling
    1. Eksportere resultatene til statistisk programvare (f.eks Excel) etter måling.
      Merk: Etter 30 min med inkubering, analyserer automatisk utfører måling og rapporterer resultatet.
  5. Bytte av analysatoren
    1. For rutinemessig vedlikehold, etter testen, ta tonerkassetten og tørk analyzer interne oppvarming jern og elektromagnet lett med 75% alkohol.
      Merk: Ikke presse hardt eller riste elektromagnet.
    2. Lukk vinduet LabIT. Temperaturen overvåking vindu ville popmusikk opp. Den ville automatisk slutte når med CCD varmes til 5 ° C beskyttelsesmodus. Da vil det være trygt å slå av strømmen av analyzer og PC.
      Merk: Ikke manuelt lukke temperaturen overvåking vinduet før CCD Temp har steget til 5 ° C, og ikke slå av strømmen av analysatoren eller PC under CCD-oppvarming.

4. definisjon av sIgE reaktivitet

Merk: For en ufortynnet serum prøven, oppdagelsen System 2 er 0,21 – 100 IU/mL.

  1. Basert på terskelverdien 0,35 IU/ml, vurdere en sIgE nivå over 0,35 IU/mL for å være positiv6,7. Rangere reaktivitet sIgE testene som8: klasse 1 (≥0.35 og < 0,70 IU/mL), klasse 2 (≥0.70 og < 3,50 IU/mL), klasse 3 (≥3.50 og < 17.50 IU/mL), klasse 4 (≥17.50 og < 50.00 IU/mL), klasse 5 (≥50.00 og < 100.00 IU/mL) , og klasse 6 (≥100.00 IU/mL).

5. statistisk analyse

  1. Bruk et histogram viser positiv rate av 19 allergener (figur 1) og bruke Levey-Jennings kurven for å demonstrere repeterbarhet av oppdagelsen system (figur 2)9.
  2. Velg de tre vanligste innånding allergener og matallergener (i alt seks allergener) og sammenligner resultatene til jeg System 1 å vurdere sin kliniske diagnostiske ytelse10,11. Inkluder konkordans hastigheten, følsomhet, spesifisitet, positive og negative normalverdier og området under mottakeren fungerer karakteristisk (ROC) kurven (AUC) som evalueringskriterier.
  3. Bruke Spearmans korrelasjon analyse12 å beskrive sammenhenger mellom de to systemene og bruke kappa verdien for konsistens. Kategorisere kappa verdien som nesten perfekt (0,8-1.0), betydelig (0,6-0,8), moderat (0,4-0,6), fair (0,2-0,4) eller dårlig (< 0,2)13. Bruker SPSS 23,0 og MedCalc 11.0 statistisk analyse og definerer P < 0,05 som statistiske betydning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Positive priser for 19 vanlige allergener
Resultatene på 293 sera vises i Figur 3. Blant alle de pustet allergener, D. farinae hadde den høyeste positiv rate (80.89%, 273/293), etterfulgt av D. pteronyssinus (78.84%, 231/293). Blant matallergener, krabbe har den høyeste positiv rate (20.48%, 60/293), etterfulgt av 13.65% (40/293) for reker. Den totale positive rate for innånding allergener var høyere enn for matallergener.

Repeatability av microfluidic
Repeterbarhet resultater for katten dander, hunden dander og affinitet basert på ni runder med testing, ble 32.98 ± 8.94, 1.61 ± 0.48 og 0,76 ± 0,18, henholdsvis, og konsistens nivåene var 100% (9/9), 100% (9/9), og 67% (6/9). Distribusjon av resultatene vises med Levey-Jennings kurven i figur 2. Alle data er innenfor området for X ± 2 x SD, som er i samsvar med den maksimale tillatte kliniske feil14.

Sammenligning av to systemer
Kvalitative resultatene viste at katten dander hadde den høyeste konkordans System 1 (95.33%, 243/150). Den laveste konkordans ble sett i reker (40.75%, 88/216). Den totale overensstemmelse blant innånding allergener varierte fra 92.00% 95.33%. Matallergener var konkordans området 40.74%-72,39%. Høyest følsomheten for sniffestoffer ble sett i Dermatophagoides farinae (93.94%), en 100% spesifisitet. Blant matallergener, ble høyest følsomheten sett i peanut (54.55%), en spesifisitet på 80.65%. Tabell 2 viser også at alle evaluering resultatene for innånding allergener var overlegne til matallergener. Siden AUC verdiene viste området fra 0.613 til 0.984 og AUC for tre innånding allergener var større enn 0.950, kan det konkluderes at System 2 har en høy nøyaktighet med System 1.

Konsistens analyse for de to systemene viste at kappa verdiene for de tre sniffestoffer var mellom 0.727-0.876, med den høyeste verdien sett i katten dander som 0.876 (95% CI, 0.786-0.965). De var alle bedre enn kappa verdiene for matallergener som generelt falt < 0.400. Laveste kappa verdien var 0.112 i reker (95% CI, 0.062-0.162) (tabell 3). Spearmans korrelasjon analyse viste at den beste korrelasjonen ble sett i peanut og katten dander, med korrelasjonskoeffisienter som r = 0.942 (95% CI, 0.907-0.965; p < 0,0001) og r = 0.927 (95% CI, 0.900-0.947; p < 0,0001), henholdsvis.

I Figur 3et spredningsdiagram er konstruert med System 2 resultater langs x-aksen og System 1 langs y-aksen for å vise fordelingen av sIgE konsentrasjon resultatene fra de to systemene for D. pteronyssinus, D. Farina, cat dander, melk, reker og peanut. For en konkordans og discordance analyse, allergener som viste ± 1 klasse forskjellen var D. pteronyssinus (91.60%, 229 vs 250), D. farinae (81.25%, 91 vs 112) katten dander (98.00%, 147 vs 150), melk (83.58%, 112 vs 134) reker (59.72%, 129 vs 216), og peanøtter (76.56%, 49 vs 64). Den kombinerte totale konkordans hastigheten var 81.75% (757 vs 926).

Figure 1
Figur 1: positivitet tallene for påvisning av 19 vanlige allergener av microfluidic analysen. D1 - Dermatophagoides pteronyssinus, d2 - Dermatophagoides farinae, d201 - Blomia tropicalis, e1 - katten dander, e5 - hunden dander, g2 - Bermuda gress, g6 - timothy gress, i6 - cockroaches, m3 - Aspergillus fumigatus, m5 - Candida albicans, w1 - ragweed, f1 - eggehvite, f2 - melk, f4 - hvete, f13 - peanut, f14 - soyabønner, f20 - mandel, f23 - krabbe, og f24 - reker. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: Levey-Jennings grafer av tre allergener gjentatte ganger funnet av microfluidic systemet. (A) Cat hår, (B) hunden hår og (C) kakerlakk ble valgt for repeterbarhet evaluering. Svart, grønn, gul og rød linjene representerer gjennomsnittet (X), gjennomsnittlig ± standardavviket (X ± SD), gjennomsnittet + standardavviket ganger to (X ± 2SD), og gjennomsnittet + tidene standardavvik tre (X ± 3SD) av flere mål, henholdsvis. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: Scatter tomter seks allergen sIgE konsentrasjoner målt ved System 1. System 1 (Y-aksen) og systemet 2 (X-aksen). Hver linje i plottet representerer klassen konsentrasjon (klasse 0: 0,35, klasse 1: 0,35-0,7, klasse 2: 0,7-3.5, klasse 3: 3,5-17,5, klasse 4: 17,5-50, klasse 5:50-100, og klasse 6: > 100 IU/mL). Skyggelagte bokser er overensstemmende områder i konsentrasjon klassen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Karakteristisk No.(%)
Kjønn, n(%)
Kvinne 123(41.98%)
mann 170(58.02%)
Alder, år, n(%)
Median (25%, 75%) 23(8,36)
≤10 97(33.11%)
11-20 37(12.63%)
21-40 101(34.47%)
> 41 58(19.80%)
Diagnose, n(%)
Allergisk rhinitt 92(31.40%)
Allergisk astma 117(39.93%)
Allergisk rhinitt med astma 36(12.29%)
Andre 48(16.38%)

Tabell 1: pasienten demografiske kjennetegn. I alt fant 293 fag som oppfylt inklusjonskriterier, med en median alder av 23 (interquartile varierer fra 8 til 36 år gammel). Blant dem, 170 (58.02%) mann og 123 (41.98%) var kvinner. Også 92 (31.40%) av dem hadde allergisk rhinitt, 117 (39.93%) hadde allergisk astma, 36 (12.29%) hadde komorbiditet rhinitt og astma og 48 (16.38%) hadde andre allergiske sykdommer, for eksempel en næringen allergi eller hud allergier.

Utvalgsstørrelsen CAP + CAP- Total enighet SE SP PPV NNV AUC (95% CI)
BioIC + BioIC- BioIC + BioIC-
D1 250 196 20 0 34 92.00% 90.74% 100,00% 100,00% 62.96% 0.975 (0.947 til 0.991)
D2 112 93 6 0 13 94.64% 93.94% 100,00% 100,00% 68.42% 0.984 (0.941 til 0.999)
E1 150 34 5 2 109 95.33% 87.18% 98.20% 94.44% 95.61% 0.968 (0.925 til 0.990)
F2 134 16 27 10 81 72,39% 37.21% 89.01% 61.54% 75,00% 0.744 (0.661 til 0.815)
f13 64 18 15 6 25 67.19% 54.55% 80.65% 75,00% 62.50% 0.731 (0.606 til 0.834)
F24 216 36 127 1 52 40.74% 22.09% 98.11% 97.30% 29.05% 0.613 (0.545 til 0.678)
D1-Der. p1, d2-Der. f1, e1-Cat dander, f2-melk, f13-Peanut, f24-reker. CAP-ImmunoCAP, +-positive,--negative, SE følsomhet, SP-spesifisitet, PPV-positive forutsett verdi, NPV-negative logiske verdien, AUC-området under ROC kurven. HiA verdier vises 95% intervallverdien (95% CI) også i tabellen.

Tabell 2: klinisk ytelse mellom de to systemene. D1 - D. pteronyssinus, d2 - D. farina, e1 - katten dander, f2 - melk, f13 - peanut, og f24 - reker. CAP - ImmunoCAP, + -positiv,- - negativ, SE - følsomhet, SP - spesifisitet, PPV - positiv prediktiv verdi, NPV - negativ forutsett verdi, AUC - området under ROC kurven. HiA verdier vises 95% intervallverdien (95% CI) også i tabellen.

Kappa(95%,CI) Spearman'rho(95%,CI)
D1 0.727 (0.617 til 0.838) 0.896 (0.869 til 0.918)
D2 0.783 (0.617 til 0.948) 0.731 (0.631 til 0.807)
E1 0.876 (0.786 til 0.965) 0.927 (0.900 til 0.947)
F2 0.293 (0.122 til 0.463) 0.681 (0.579 til 0.763)
f13 0.349 (0.129 til 0.569) 0.969 (0.949 til 0.981)
F24 0.112 (0.062 til 0.162) 0.833 (0.788 til 0.870)

Tabell 3: korrelasjon og avtale mellom de to systemene. D1 - D. pteronyssinus, d2 - D. farina, e1 - katten dander, f2 - melk, f13 - peanut, og f24 - reker. Kappa og Spearman's Rho verdier vises 95% intervallverdien (95% CI) også i tabellen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Lik resultatene fra mange andre studier15,16,17, resultatene fra microfluidic systemet basert på sera fra 293 allergisk pasienter viste at huset støv mites (inkludert D. pteronyssinus, D. farinae, og B. tropicalis) er de viktigste innånding allergener fører til allergiske sykdommer i Sør-Kina, mens for mat, melk, peanut, reker, og krabbe er de mest vanlige allergener som forårsaker allergiske symptomer. Med hensyn til reproduserbarhet studie gjort på tre allergener, alle av dem viste gode resultater, med et samlet gjentakelseshastigheten på 88.89%, som betyr det møtte den maksimalt tillatte feilen.

Denne studien bruker System 1 som referanse, og evalueres kliniske diagnosen effekten av System 2. Med et serum sIgE 0,35 IU/mL cutoff2innebærer et utvalg med sIgE > 0,35 IU / mL at pasienten er følsom for allergenet, og jo høyere titer, bedre sammenheng med pasientens symptomer18. Resultatene viser at konkordans frekvensen av tre innånding allergener var alle mer enn 90%. I tillegg til resultatene for matallergener, som hadde en overensstemmelse med ~40.74%-72.39%, var den totale konkordans 81.75% (757/926). Kappa verdien av D. pteronyssinus, D. farinaog katten dander var 0.778, 0.663 og 0.860 (p < 0,001), henholdsvis. Kappa verdiene for matallergener var alle under 0.4. For de tre store inhalant og matallergener, ble en betydelig korrelasjon av kvantitative resultater sett mellom de to systemene (rSpearman ≈ 0.681-0.969, p < 0,01).

Det ble lagt merke til at mens rS koeffisient for peanut var 0.969, kappa verdien av konsistens evaluering indeksen var bare 0.349 (95% CI, 0.129-0.569). Slike avvik kan skyldes den lave utbredelsen av peanut regionen og derfor de fleste av de rekruttert sera var negativ for den bestemte IgE. Mange studier har indikert at en betydelig avvik kunne sees mellom sIgE titer og kliniske symptomer for matallergener. Bruk av forskjellige analysen systemer for mat-spesifikke IgE vilje kan også lage store variasjoner19. Dette kan være fordi det ikke er rå inntatt mat som utløser de allergiske symptomene, men endret komponentene genereres under koking eller fordøyelsen. Bruk av ulike råstoff av forskjellige produsenter å lage allergener kan også bidra til resultatet avvik20.

Microfluidic kassetten består av fem store deler: fem lagertanker, fem reagens levering kanaler, fem enveis pumper, en enkelt reaksjon sone i hvilke allergen ekstrakter kan bli immobilisert og en avfall tank å samle alle reaksjon biprodukter. Basert på analysen behovet, opptil 40 allergen ekstrakter kan bli strødd på sonen reaksjon. Kontrollert av PC, fem enveis pumpene lede og koordinere flyten av serum utvalg, vaske bufferen, blokkerer reagens, conjugates, og trekker, for å fullføre en totrinns enzym knyttet immunosorbent analysen. Etter reaksjonen er fullført, chemiluminescence reaksjon bildene er tatt av et lavoppløselig avkjølt CCD kamera og signalene behandler PC å etablere kalibreringskurven og beregne kvantitative og semiquantitative sIgE resultater.

Denne studien viser at de to systemene demonstrere god konsistens. Men sammenlignet med System-1, System 2 er enklere å bruke og har en lavere etterspørsel etter operatør opplæring. Siden hver microfluidic kassett har sin egen kvalitetskontroll kurve, er påliteligheten av systemet betydelig forbedret. Andre fordeler av systemet inkluderer en lys og tar liten plass, en utvidbar modulære oppsett og enkel som den er koblet til en PC for drift kontroll. Alle disse fordelene reduserer oppsett og kjører kostnad, og på samme tid, de svekker ikke presisjon og hastighet kravene i daglige klinisk praksis, noe som gjør systemet spesielt egnet for allergi screening primærhelsetjenesten sykehus i Kina. Likevel, en stor ulempe av microfluidic er at det er ikke en helautomatisk system, og hyppige tilsyn under operasjonen. Det kan ikke fortsatt erstatte systemene som skal behandle et stort antall eksempler daglig.

På grunn av mangel på nok positiv sera for visse allergener dekket denne studien ikke alle 19 allergener i microfluidic kassetten, men bare seks vanlige tilgjengelig i Sør-Kina. Flere studier er nødvendig for å utdype om evalueringen gjelder også for andre allergener.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Forfatterne takker Professor Mei Jiang for henne hjelp i den statistiske analysen og Mr. Hammer Tsui i utarbeidelsen av manuskriptet. Denne studien ble støttet av Guangzhou vitenskap og teknologi Foundation (201804020043) og National Natural Science Foundation av Kina (NSFC 81572063 og NSFC 81802076). Finansiering grupper enige studien design, dataanalyse, manuskriptet forberedelse og beslutningen om å publisere. Ingen annen finansiering ble mottatt for denne studien.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agnitio BioIC Analyzer Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) BA-G2000
BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DR17A12
BioIC Cartrideg Placement plate Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) T20SET
BioIC Reagent Dispenser Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DS-1
Image two-dimensional barcode machine Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) NLS-HR200
Software Package, LabIT Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) Version 2.4.12
VORTEX-5 Vortex Mixer Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd. VORTEX-5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kamble, S., Bharmal, M. Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States. Journal of Asthma Research. 46, (1), 73-80 (2009).
  2. Paganelli, R., et al. Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics. Allergy. 53, (8), 763-768 (1998).
  3. Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121, (5), 1219-1224 (2008).
  4. Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China. PLoS ONE. 9, (5), e94776 (2014).
  5. Zeng, G., et al. Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort. Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25, (5), 343-351 (2015).
  6. Luo, W., et al. grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma. Molecular Immunology. 78, (2016), 105-112 (2016).
  7. Zeng, G., et al. Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children. Molecular Immunology. 74, (2016), 1-9 (2016).
  8. Lee, J. H., et al. Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients. Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).
  9. Eckels, J., et al. Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform. Bmc Bioinformatics. 14, (1), 145 (2013).
  10. Bland, J. M., Altman, D. G. Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement. Lancet. 327, (8476), 307-310 (1986).
  11. Carletta, J. Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic. Computational Linguistics. 22, (2), 249-254 (1996).
  12. Shyur, S. D., et al. Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings. Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).
  13. Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods. Intensive Care Medicine. 37, (6), 1038-1040 (2011).
  14. Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy. Annals of Laboratory Medicine. 38, (1), 23-31 (2018).
  15. Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up. Allergy. 66, (8), 1123-1125 (2011).
  16. Fischer, J., et al. Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters. Allergy. 72, (10), 1540-1547 (2017).
  17. Li, J., et al. A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China. Allergy. 64, (7), 1083-1092 (2009).
  18. Ahlstedt, S. Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy. Clinical & Experimental Allergy. 32, (1), 11-16 (2002).
  19. Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. Accuracy of IgE antibody laboratory results. Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100, (2), 288-289 (2008).
  20. Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards. International Archives of Allergy & Immunology. 108, (1), 82-88 (1995).
Program Biochip Microfluidic teknologi for å oppdage Serum Allergen-spesifikke immunglobulin E (sIgE)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).More

Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter