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Medicine

Aplicação da tecnologia de Microfluidic Biochip para detectar soro alérgeno-específicas E de imunoglobulina (sIgE)

doi: 10.3791/59100 Published: April 21, 2019
* These authors contributed equally

Summary

Este trabalho apresenta um protocolo para a detecção de imunoglobulina soro específico E com um sistema de cartucho-baseado da quimioluminescência microfluídicos e a avaliação de sua utilidade no diagnóstico de alergia.

Abstract

Doença alérgica é comum em adultos e crianças. Identificação dos alérgenos causadores é significativa na prevenção e gestão de doença. No entanto, um sistema de medição específico de imunoglobulina E (IgE) com uma relação preço-desempenho elevado está faltando na China continental, especialmente nos hospitais de cuidados primários. Este artigo descreve os procedimentos de princípio e operação de usando um sistema de cartucho-baseado da quimioluminescência microfluidic para detectar IgE alérgeno-específicos no soro. Os resultados foram comparados com os do ImmunoCAP (sistema 1), o padrão industrial, e a reprodutibilidade do sistema para detectar pacientes sensibilizados a alérgenos comuns é avaliada. Os resultados mostraram que, em comparação com o ImmunoCAP (sistema 1), o sistema BioIC (sistema 2) tem boa precisão e sensibilidade na detecção de IgE específicos do soro contra vários alérgenos inalantes e alimentos, mas com um custo significativamente menor. Ele pode servir como uma boa alternativa para sistema 1 em hospitais de cuidados primários na China continental, que têm menor disponibilidade financeira.

Introduction

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A prevalência de alergias aumentou de forma constante nas últimas décadas e está afetando 20% - 30% da população global1. Identificação dos alérgenos causadores tem um significado importante na gestão das doenças. Na China, uma vez que testes cutâneos de pele in vivo registrado não estão disponíveis no país, determinação in vitro de IgE do soro específico é o mais importante e ferramenta comumente usada para tipo I alergia diagnostica2. Isso é semelhante às práticas no mundo ocidental, mas embora ImmunoCAP sistema (sistema 1), um sistema de base de enzima-lig da imunoabsorção fluorescência, é percebido como o padrão ouro para o diagnóstico de alergia in-vitro3, seu uso na China é muito limitado devido de seu alto preço do equipamento e do reagente. Portanto, é extremamente necessário um novo sistema de diagnóstico de alergia alternativo com uma relação preço-desempenho elevado.

O sistema BioIC (sistema 2) é um sistema baseado em cartucho microfluidic, baseado no princípio da quimioluminescência para multiplexado ensaios de IgE específicos do soro. Com um tamanho de 7 cm x 4 cm, o cartucho microfluídicos é composto de três camadas de plástico moldado por injeção. A parte superior é de 3 mm de espessura em policarbonato transparente que carrega boa estabilidade durante os processos de montagem térmica. Juntamente com a camada de 3 mm de espessura inferior construída a partir de um copolímero de acrilonitrila, butadieno e estireno (ABS), la sanduíches a 0,5 mm de espessura camada média feita de borracha de silicone. Sendo na cor preta, a camada média oferece mais baixo fundo durante a detecção de quimioluminescência. Em cima do gel de silicone, uma fina camada de membrana de nitrocelulose (NC membrana) é pulverizada na posição correspondente à zona de reação, que permite que a mancha de diferentes proteínas alergênicas. O objetivo deste estudo é avaliar o desempenho clínico do sistema microfluidic para determinação de IgE alérgeno-específicos no soro multiplexado.

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Protocol

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Este estudo e o uso de amostras de soro humano foram aprovados pelo Comitê de ética da Universidade o primeiro afiliado Hospital de Guangzhou Medical (GYYY-2016-73). Todos os participantes têm dado o seu consentimento escrito independentemente ou através de seus pais (no caso das crianças).

1. base informações do grupo de estudo

Nota: O repositório de informações de alergia do estado chave laboratório de doença respiratória (ar-SKLRD) é um banco de grande soro estabelecido dentro do Hospital Instituto de Guangzhou respiratória (GIRH). Iniciada na última década, o ar-SKLRD já começou a coletar e armazenar amostras de soro de pacientes com doenças alérgicas, juntamente com suas informações clínicas (tabela 1)4,5. O atual estudo foi realizado com soros do ar-SKLRD.

  1. Banco de dados do ar-SKLRD para soros colhidos de janeiro de 2015 para junho de 2018 e seleccione os pacientes com doença alérgica, que foram encontrados para ser sensível para os alérgenos comuns na região.
  2. Certifique-se de que todos os pacientes selecionados têm doenças alérgicas-relacionados, tais como rinite alérgica e asma, dermatite alérgica, ou urticária, e que o soro destes pacientes contém vários imunoglobulina de alérgeno específico de soro E (sIgE) sensibilizações de alérgenos comuns nesta região, detectados pelo sistema 1.
  3. Excluir pacientes com prontuários incompletos, aqueles perdeu para acompanhamento, aqueles que se recusam a fornecer o consentimento informado sobre a utilização de suas amostras de soro para fins científicos, aqueles com uma imunodeficiência identificada, aqueles atualmente na imunoterapia ou agentes imunomoduladores, ou aqueles encontrados para ter infecções parasitárias.
  4. Certifique-se de que nenhuma prescrição de tratamento ou medicamento foi dado antes da colheita de soro a fim de minimizar a interferência com os achados de laboratório. Todas as amostras de soro que não cumprem os critérios foram rejeitadas.

2. estudar o fluxo e as medidas de interesse

Nota: O sistema microfluidic precisa de 100 µ l de soro para a determinação de 19 alérgenos. O sangue venoso (5 mL) foi coletado de cada paciente, utilizando uma embarcação de sangue vácuo contendo gel de separação. Depois da centrifugação por 10min a 1.000 x g, a camada superior foi coletada para o teste. Não utilizado soro foi armazenado a-80 ° C. Antes do teste, o soro foi mantido em temperatura ambiente por 30 min e foi abalado com um misturador do vortex. Ciclos de congelamento e descongelamento repetidos foram evitados.

  1. Principalmente, testar as amostras de soro para o evento inteiro alérgenos de Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), pelo de gato (e1), pelos de cão (e5), grama de Bermuda (g2), Timóteo (de grama G6), baratas (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), tasna (w1), clara de ovo (f1), leite (f2), trigo (f4), amendoim (f13), soja (f14), amêndoa (f20), caranguejo (f23) e camarão (f24). Siga as instruções dadas na secção 3.
    Nota: determinação do sIgE foi feita com o IgE alérgeno específico ensaio kit (veja a Tabela de materiais) e medido por um analisador de quimioluminescência.
  2. Selecione aleatoriamente amostras de três dentre as amostras com suficiente (pelo menos 900 µ l) de soro para um estudo de reprodutibilidade. Mantendo todas as condições inalteradas, medir os três soros para evento de alérgeno diariamente por 9 dias consecutivos (ou seja, um total de 100 x 9 = 900 µ l de soro).

3. procedimento de teste semiautomação do sistema microfluídicos

Nota: O sistema 2 é a integração de tecnologia automática microfluidic proteína microarray, luz fria análise, análise paralela de IgE e tecnologia de processamento de imagem. Protocolo do teste é dividido em quatro partes: a preparação do equipamento, carregamento de amostra, incubação e medição.

  1. Preparação do equipamento
    1. Ligue o PC e o poder do analisador.
      Nota: O interruptor de alimentação está à esquerda da base.
    2. Inicie o programa LabIT no PC. Se a janela de aviso de Quadro escuro aparece, clique em Okey para executar o teste de vazamento. Depois, clique no logo do centro para entrar na interface de operação.
      Nota: O sistema lembrará o usuário executar o teste de vazamento , se é ocioso por mais de 24 h.
    3. Verifique a temperatura de reação e CCD (charge - coupled device) Temp no canto inferior direito da tela. A temperatura de reação deve elevar-se a 37 ° C ± 1 ° C em cerca de 10 min, e o CCD Temp deve cair para-15 ° C ± 1 ° C.
    4. Executar o teste de vazamento após o CCD Temp baixou para-15 ° C ± 1 ° C. Antes de executar o teste de vazamento, certificar-se de que não existem outros itens dentro do instrumento e feche a porta. Clique em ferramentas | Teste de sistema | Teste de vazamento. Não abra a porta durante o teste. Quando o teste for concluído, a janela de relatório irá aparecer.
  2. Carregamento de amostra
    1. Adicione 620 µ l de tampão de lavagem, 120 µ l de tampão de bloqueio, 60 µ l de conjugados A e B, 60 µ l de substrato A e B e 100 µ l de amostras de soro para o tanque de reagente correspondente no cartucho microfluidic.
  3. Incubação
    1. Clique no ID do cartucho, use o scanner de código de barras para verificar o número serial do cartucho, digite a ID de amostra, colocar o cartucho para o analisador e fecha a porta e clique em Analyzer e executar para iniciar a análise.
  4. Medição
    1. Exporte os resultados para o software estatístico (por exemplo, Excel) após a medição.
      Nota: Após 30 min de incubação, o analisador automaticamente executa a medição e relata o resultado.
  5. Fora o analisador de comutação
    1. Para manutenção de rotina, depois de terminar o teste, remova o cartucho e limpe do analisador aquecimento interno ferro e eletroímã levemente com 75% de álcool.
      Nota: Não pressione com força ou agitar o eletroímã.
    2. Feche a janela LabIT. A janela de monitoramento de temperatura irá aparecer. Fechará automaticamente quando o CCD aquece para o modo de proteção de 5 ° C. Nessa altura, será seguro desligar a energia do analisador e PC.
      Nota: Não feche manualmente a janela de monitoramento antes que o CCD Temp aumentou para 5 ° C de temperatura e não desligue o poder do analisador nem o PC durante o warm-up CCD.

4. definição de reatividade sIgE

Nota: Para uma amostra de soro não diluído, o intervalo de detecção do sistema o 2 é 0,21 – 100 IU/mL.

  1. Com base no valor limiar de 0,35 UI/mL, considere um sIgE nível superior a 0,35 UI/mL para ser positivo6,7. Avaliar a reatividade dos testes sIgE como8: classe 1 (≥0.35 e < 0,70 UI/mL), classe 2 (≥0.70 e < 3,50 UI/mL), classe 3 (≥3.50 e < 17,50 UI/mL), classe 4 (≥17.50 e < 50,00 UI/mL), classe 5 (≥50.00 e < 100,00 UI/mL) e classe 6 (≥100.00 UI/mL).

5. análise estatística

  1. Use um histograma para mostrar a taxa positiva dos 19 alérgenos (Figura 1) e use a curva de Levey-Jennings para demonstrar a repetibilidade da deteção sistema (Figura 2)9.
  2. Selecione os três mais comuns alérgenos inalantes e alérgenos alimentares (no total, seis alérgenos) e comparar os resultados com o I 1 sistema para avaliar seu desempenho diagnóstico clínico10,11. Incluem a taxa de concordância, sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos e a área sob o receptor operando curva característica (ROC) (AUC) como os critérios de avaliação.
  3. Aplicação de análise de correlação Spearman12 para descrever as correlações entre os dois sistemas e usar o valor de kappa para a consistência. Categorizar o valor de kappa como quase perfeito (0.8-1.0), substancial (0,6-0,8), moderada (0,4-0,6), razoável (0,2 – 0,4) ou pobres (< 0.2)13. Usar a análise estatística SPSS 23,0 e MedCalc 11.0 e definir P < 0,05 como significância estatística.

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Representative Results

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Taxas positivas para 19 alérgenos comuns
Os resultados em 293 soro são mostrados na Figura 3. Entre todos os alérgenos inalantes, d. farinae tiveram a maior taxa positiva (80,89%, 273/293), seguido por D. pteronyssinus (% 78.84, 231/293). Entre os alérgenos alimentares, caranguejo tem a maior taxa positiva (20.48%, 60/293), seguido por 13.65% (40/293) para camarão. A taxa total de positiva para alérgenos inalantes foi maior do que para alérgenos alimentares.

Repetibilidade do sistema microfluídicos
Repetibilidade de resultados para pelo de gato, pelos de cão e barata, com base em nove rodadas de testes, foram 32.98 ± 8,94, 1,61 ± 0,48 e 0,76 ± 0,18, respectivamente, e os níveis de consistência foram 100% (9/9), 100% (9/9) e 67% (6/9). Distribuição dos resultados é mostrada com a curva de Levey-Jennings na Figura 2. Todos os dados estão dentro da faixa de X ± 2 x SD, que é consistente com o erro clínico permissível máximo14.

Comparação de dois sistemas
Resultados qualitativos mostraram aquele pelo de gato tinha a maior concordância para sistema 1 (95 e 33 centavos %, 243/150). A menor concordância foi vista no camarão (40.75%, 88/216). A total concordância entre os alérgenos inalantes variou de 92.00% % 95 e 33 centavos. Alérgenos alimentares, a escala de concordância foi 40.74% – 72,39%. A maior sensibilidade para os inalantes foi vista em Dermatophagoides farinae (93.94%), com uma especificidade de 100%. Entre alérgenos alimentares, a sensibilidade mais alta foi vista em amendoim (54.55%), com uma especificidade de 80.65%. A tabela 2 mostra também que todos os resultados da avaliação para alérgenos inalantes eram superiores aos alérgenos alimentares. Desde que os valores AUC mostraram uma faixa de 0.613 a 0,984 e a AUC para os alergénios inalantes três foi maior que 0.950, pode-se concluir que o sistema 2 tem uma alta precisão com referência a sistema 1.

Análise de consistência para os dois sistemas mostrou que os valores de kappa para os três inalantes foram entre 0.727 – 0.876, com o mais alto valor visto no pelo de gato como 0.876 (95% CI, 0.786 – 0.965). Eles eram tudo melhores do que os valores de kappa para alérgenos alimentares que, em geral, caiu < 0,400. O menor valor de kappa foi 0.112 no camarão (95% CI, 0,062-0.162) (tabela 3). Análise de correlação de Spearman mostrou que a melhor correlação foi vista em pelos de amendoim e gato, com coeficientes de correlação como r = 0.942 (95% CI, 0.907 – 0.965; p < 0,0001) e r = 0,927 (95% CI, 0.900 – 0,947; p < 0,0001), respectivamente.

Na Figura 3, um gráfico de dispersão é construído com os resultados do sistema 2 ao longo do x-axis e do 1 sistema ao longo do y-axis para mostrar resultados de concentração dos dois sistemas de distribuição do sIgE D. pteronyssinus, D. Farina, amendoim, leite, camarão e raiva do gato. Para uma análise de concordância e discordância, os alérgenos que mostrou a diferença de classe de ± 1 foram d. pteronyssinus (91.60%, 229 vs 250), d. farinae (81.25%, 91 vs. 112), pelo de gato (98.00%, 147 vs 150), leite (83.58%, 112 vs. 134), camarão (59.72%, 129. vs. 216) e de amendoim (76.56%, 49 vs. 64). A taxa de concordância total combinada foi 81.75% (757 vs. 926).

Figure 1
Figura 1: as taxas de positividade da detecção de 19 alérgenos comuns por ensaio microfluidic. D1 - Dermatophagoides pteronyssinus, d2 - Dermatophagoides farinae, d201 - Blomia tropicalis, e1 - pelo de gato, e5 - pelo de cão, g2 - grama de Bermuda, g6 - Timóteo grama, i6 - baratas, m5 m3 - Aspergillus fumigatus, - Candida albicans, w1 - ambrósia, f1 - clara de ovo, f2 - leite, f4 - trigo, f13 - amendoim, f14 - soja, f20 - amêndoa, f23 - caranguejo e f24 - camarão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2: gráficos de Levey-Jennings dos três alérgenos repetidamente detectados pelo sistema microfluidic. (A) pelo de gato, pelo de cão (B) e (C) barata foram selecionados para avaliação de repetibilidade. O preto, verdes, amarelas e vermelhas linhas representam a média (X), a média ± o desvio-padrão (X ± SD), a média + vezes do desvio padrão (x ± 2SD) e a média + vezes o desvio padrão três (X ± 3SD) de várias medições, respectivamente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 3
Figura 3: espalhar a parcela de seis concentrações de sIgE alérgeno medidas pelo Sistema 1. Sistema 1 (Y-eixo) e o sistema 2 (X-eixo). Cada linha da parcela representa cortes de classe (classe 0: 0.35, classe 1: 0,35 – 0.7, classe 2: 0,7 – 3.5, classe 3: 3,5 – 17,5, classe 4: 17.5 – 50, classe 05:50 – 100 e classe 6: > 100 UI/mL). Caixas sombreadas são áreas correlatas na classe de concentração. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Característica No.(%)
Gênero, n(%)
Fêmea 123(41.98%)
macho 170(58.02%)
Idade, ano, n(%)
Mediana (25%, 75%) 23(8,36)
≤ 10 97(33.11%)
11-20 37(12.63%)
21-40 101(34.47%)
> 41 58(19.80%)
Diagnóstico, n(%)
Rinite alérgica 92(31.40%)
Asma alérgica 117(39.93%)
Rinite alérgica com asma 36(12.29%)
Outros 48(16.38%)

Tabela 1: características demográficas pacientes. No total, 293 indivíduos foram encontrados quem cumpriu os critérios de inclusão, com mediana de idade de 23 (intervalo interquartil de 8 a 36 anos de idade). Entre eles, 170 (58.02%) eram do sexo masculino e 123 (41.98%) eram do sexo feminino. Além disso, 92 (31.40%) deles tinha rinite alérgica, 117 (39,93%) tinha asma alérgica, 36 (12,29%) tinha a comorbidade de rinite e asma e 48 (16.38%) tinha outras doenças alérgicas, como alergias de pele ou alergia alimentar.

Tamanho da amostra CAP + CAP- Totalmente de acordo SE SP PPV NPV AUC (95% CI)
BioIC + BioIC- BioIC + BioIC-
D1 250 196 20 0 34 92,00% 90.74% 100,00% 100,00% 62.96% 0,975 (0,947 para 0.991)
D2 112 93 6 0 13 94.64% 93.94% 100,00% 100,00% 68.42% 0,984 (0.941 para 0.999)
E1 150 34 5 2 109 % de 95 e 33 centavos 87.18% 98.20% 94.44% 95.61% 0.968 (0.925 para 0.990)
F2 134 16 27 10 81 72,39% 37.21% 89.01% 61,54% 75,00% 0.744 (0.661 de 0.815)
F13 64 18 15 6 25 67.19% 54.55% 80.65% 75,00% 62,50% 0.731 (0,606 para 0.834)
F24 216 36 127 1 52 40.74% 22.09% 98.11% 97.30% 29.05% 0.613 (0.545 para 0.678)
D1-der p1, f1 d2-der, pelo de gato-e1, f2-leite, f13-amendoim, f24-camarão. CAP-ImmunoCAP, +-positivo,--negativo, SE-sensibilidade, SP-especificidade, valor preditivo positivo de PPV, valor preditivo negativo VPL, AUC-área sob a curva ROC. Para valores AUC, o valor do intervalo de 95% (95% CI) também é mostrado na tabela.

Tabela 2: desempenho clínico entre os dois sistemas. D1 - d. pteronyssinus, d2 - d. farina, e1 - pelo de gato, f2 - leite, f13 - amendoim e f24 - camarão. CAP - ImmunoCAP, + - positivo,- - negativo, SE - sensibilidade, SP - especificidade, PPV - valor preditivo positivo, VPL - negativo valor preditivo, AUC - área sob a curva ROC. Para os valores AUC, o valor do intervalo de 95% (95% CI) também é mostrado na tabela.

Kappa(95%,CI) Spearman'rho(95%,CI)
D1 0.727 (0.617 de 0.838) 0.896 (0.869 para 0.918)
D2 0.783 (0.617 de 0,948) 0.731 (0.631 de 0.807)
E1 0.876 (0.786 para 0.965) 0,927 (0.900 para 0,947)
F2 0,293 (0.122 para 0.463) 0,681 (0.579 de 0.763)
F13 0.349 (0.129 para 0.569) 0.969 (0,949 para 0.981)
F24 0.112 (0,062 a 0.162) 0.833 (0.788 para 0.870)

Tabela 3: correlação e acordo entre os dois sistemas. D1 - d. pteronyssinus, d2 - d. farina, e1 - pelo de gato, f2 - leite, f13 - amendoim e f24 - camarão. Para valores de Rho de Spearman e kappa, o valor do intervalo de 95% (95% CI) também é mostrado na tabela.

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Discussion

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Semelhante aos resultados de muitos outros estudos15,16,17, os resultados do sistema microfluidic baseado em soros de 293 pacientes alérgicos mostrou aquela casa ácaros (incluindo d. pteronyssinus, D. farinaee b. tropicalis) são os principais alérgenos inalantes, levando a doenças alérgicas no sul da China, Considerando que para o alimento, leite, amendoim, camarão e caranguejo são os alérgenos mais comuns que causam sintomas alérgicos. No que se refere o estudo de reprodutibilidade feito em três alérgenos, todos eles mostraram bons resultados, com uma taxa global de repetição de 88.89%, o que significa que encontrou o erro máximo admissível.

Usando o sistema 1 como referência, o estudo atual avaliada a eficácia do diagnóstico clínico do sistema 2. Com um nível de sIgE soro de 0,35 UI/mL como limite2, uma amostra com sIgE > 0,35 UI / mL implica que o paciente é sensível ao alérgeno e quanto maior o título, a melhor correlação de sintomas do paciente18. Os resultados mostram que a taxa de concordância dos três alérgenos inalantes eram mais do que 90%. Além dos resultados para alérgenos alimentares, que tinha uma concordância de ~40.74%-72.39%, a concordância total foi de 81.75% (757/926). O valor de kappa de d. pteronyssinus, d. farinae pelo de gato foram 0.778, 0.663 e 0.860 (p < 0,001), respectivamente. Os valores de kappa para alérgenos alimentares foram todos abaixo de 0,4. Para os três principal inalante e alérgenos alimentares, uma correlação significativa de resultados quantitativos foi vista entre os dois sistemas (rSpearman ≈ 0,681-0.969, p < 0,01).

Percebeu-se que enquanto o coeficiente rS para amendoim foi 0.969, o valor de kappa do índice de avaliação de consistência só foi 0.349 (95% CI, 0.129-0.569). Tal discrepância pode ser devido a baixa prevalência de sensibilidade de amendoim na região e, daí, a maioria dos soros de recrutados foram negativa para o IgE específico. Muitos estudos têm indicado que poderia ser vista uma discrepância significativa entre título de sIgE e sintomas clínicos de alérgenos alimentares. O uso de sistemas diferentes de ensaio para determinação de IgE alimentos específicos também poderia criar grandes variações19. Isto pode ser devido ao fato que não é o alimento ingerido cru que desencadeia os sintomas alérgicos, mas os componentes modificados gerados durante o cozimento ou digestão. A utilização de diferentes matérias-primas por fabricantes diferentes para fazer os alérgenos pode também contribuir para a discrepância de resultado20.

O cartucho microfluídicos é composto de cinco partes principais: cinco tanques de armazenamento, cinco canais de entrega de reagente, cinco bombas unidirecionais, uma zona de reação única na qual alérgeno extratos podem ser imobilizados e um depósito de dejectos para coletar todos os subprodutos da reação. Baseado na necessidade do ensaio, até 40 alérgeno extratos podem ser pontilhados na zona de reação. Controlado pelo PC, as cinco bombas unidirecionais guiar e coordenam o fluxo da amostra de soro, tampão de lavagem, reagente bloqueio conjugados e subtrai, para terminar um ensaio de imunoadsorção enzimática em duas fases. Depois que a reação é concluída, as imagens de reação de quimioluminescência são capturadas por uma câmera de CCD resfriada baixa resolução e os sinais são processados pelo computador para estabelecer a curva de calibração e para calcular os resultados quantitativos e semiquantitativa sIgE.

O estudo atual mostra que os dois sistemas demonstram boa consistência. No entanto, em comparação com o sistema 1, 2 o sistema é fácil de usar e tem uma menor demanda para treinamento do operador. Desde que cada cartucho microfluidic tem sua própria curva de controle de qualidade, a confiabilidade do sistema é bastante reforçada. Outras vantagens do sistema incluem uma luz e espaço físico pequeno, uma instalação modular expansível e a facilidade com a qual está ligado a um PC para controle de operação. Todas estas vantagens reduzem muito a instalação e o custo de funcionamento, e ao mesmo tempo, eles não ponham em risco os requisitos de precisão e velocidade na prática clínica diária, o que torna o sistema particularmente adequado para o rastreio de alergia em hospitais de cuidados de saúde primários na China. No entanto, uma grande desvantagem do sistema microfluídicos é que não é um sistema totalmente automático, e é necessária intervenção frequente durante a operação. Ele ainda não pode substituir os sistemas que precisam processar um grande número de amostras diariamente.

Devido à falta de suficiente soros positivos para certos alérgenos, este estudo não abrangeu todos os 19 alérgenos disponíveis em cartucho microfluídicos, mas apenas seis mais comuns disponíveis no sul da China. Estudo mais é necessário para elaborar sobre se a avaliação é também aplicável a outros alérgenos.

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Disclosures

Os autores não têm nada para divulgar.

Acknowledgments

Os autores Obrigado Professor Mei Jiang pela ajuda na análise estatística e Sr. Hammer Tsui na preparação do manuscrito. Este estudo foi suportado por tecnologia Fundação (201804020043) e a ciência de Guangzhou e Nacional Natural Science Foundation da China (NSFC 81572063 e 81802076 NSFC). Grupos de financiamento de acordo com o projeto de estudo, análise de dados, preparação de manuscrito e decisão de publicar. Nenhum outro financiamento foi recebido para este estudo.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agnitio BioIC Analyzer Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) BA-G2000
BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DR17A12
BioIC Cartrideg Placement plate Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) T20SET
BioIC Reagent Dispenser Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DS-1
Image two-dimensional barcode machine Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) NLS-HR200
Software Package, LabIT Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) Version 2.4.12
VORTEX-5 Vortex Mixer Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd. VORTEX-5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Aplicação da tecnologia de Microfluidic Biochip para detectar soro alérgeno-específicas E de imunoglobulina (sIgE)
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Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).More

Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).

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