Summary
يستخدم هذا النموذج الصراع لقياس الأضرار بمراقبة المثبطة بعد التعرض للادمان على المخدرات، أو غيرها من العوامل التي قد تؤثر على التحكم المثبطة. حافز جنسي وعقبة البرود وترد في نفس الوقت، وبالتالي الفئران الذكور للتغلب على العقبة التي تعترض نهج مكافأة الجنسي.
Abstract
ويصف هذا البروتوكول مهمة رواية صراع كنموذج لمراقبة المثبطة في الفئران. في هذا النموذج، حافز مجزية طبيعية (التحفيز الجنسي) الذي يمثل مكافأة عالية القيمة، والمحفزات البرود (pins)، ترد في نفس الوقت. وقد الفئران الذكور التسلق أو القفز فوق عقبة كاملة من دبابيس نهج والتحقيق على الشريك الجنسي. في حالة استمرار الحيوان في سلوكهم يقترب بغض النظر عن المحفزات البرود، تعتبر محفوفة بالمخاطر أو مهايئ تسعى إلى مكافأة سلوك. مهمة الصراع يسمح تقييم العجز في مراقبة المثبطة الناجمة عن التعرض للمخدر، مثل المورفين، أو حدث مجهدة.
والميزة الرئيسية لهذا النموذج أنه يوفر طريقة بسيطة وسريعة لاكتشاف العجز في مراقبة المثبطة بعد التعرض للعقاقير الأفيونية أو غيرها من الأحداث المجهدة. وبالإضافة إلى المواد الأفيونية، سيكون هذا النموذج السلوكي أيضا مفيدة لاكتشاف العجز التحكم المثبطة الناجمة عن إدمان المخدرات الأخرى بسرعة. ومع ذلك، الحد أن أداء الفئران الذكور قد يخضع في ممارسة آثار مع التجارب المتكررة تحت هذه المهمة الصراع. في المستقبل، واحدة يمكن الأمل في أن الأفراد ذوي النمط الظاهري القهري لالتماس مكافأة السلوك بعد التعرض للمواد الأفيونية وسيتم تحديد استناداً إلى تعديل هذا الطراز الصراع.
Introduction
الإدمان على المخدرات مرض المخ مزمنة التي تتسم بالتسرع والقهري المخدرات تسعى وأخذ1. هذه الميزات الرئيسية لإدمان قد سواء تم الافتراض نتيجة لضعف قدرة التحكم المثبطة2،3، أي الفشل في عرقلة السعي إلى تحقيق فوري مكافأة المحفزات وهكذا وضع مهايئ أنماط من السلوك4.
مهمة الانتقال/عدم الانتقال وإيقاف--إشارة مهمة هي تنميط المهام المستخدمة لقياس قدرة استجابة تثبيط2،5. هذه النماذج التجريبية هما تقييم قدرة المرء على قمع الأعمال غير ملائمة، بمقارنة الردود المثبطة نادرة ضد ضمنية تذهب الأساس6،7. لقد ثبت تثبيط استجابة المعروضة في هذه المهام النيل في الكوكايين المستخدمين8،9و10من مدمني المواد الأفيونية، والنيكوتين المستخدمين11. آخر اثنين من المهام – عكس التعلم واختيار وقت رد الفعل المسلسل مهام متعددة – كما توفر قياسات لتثبيط الاستجابة المثبطة التحكم12،13. بيد معظم هذه النماذج في القوارض تتطلب ليس فقط التدريب طويل الأجل حيث أن مواضيع يمكن التمييز بين متطلبات استجابة ممثلة بإشارات مختلفة، ولكن أيضا قد الفروق الفردية في سرعة التعلم والتعلم الآثار تتداخل مع نتائج الاختبار المثبطة اللاحقة11.
في هذه الورقة، نقدم مهمة رواية صراع التي يمكن استخدامها لقياس الأضرار بمراقبة المثبطة بعد التعرض للادمان المخدرات. في هذه المهمة، حافز مجزية طبيعية (التحفيز الجنسي) الذي يمثل مكافأة عالية القيمة14، والمحفزات البرود (pins) أن الفئران الذكور لقهر، ترد في نفس الوقت. وقد الفئران الذكور التسلق أو القفز فوق عقبة كاملة من دبابيس نهج والتحقيق على الشريك الجنسي. في حالة استمرار الحيوان في سلوكه يقترب بغض النظر عن المحفزات البرود، تعتبر محفوفة بالمخاطر أو مهايئ تسعى إلى مكافأة سلوك. أحد الأسس المنطقية لإنشاء هذه المهمة هو أن المفهوم بسيط ولا تضع أعباء ثقيلة على العمليات التنفيذية بالقيام بمهام أخرى. بالمقارنة مع غيرها من المهام التي تقيس تثبيط استجابة، هذه المهمة الصراع استناداً إلى السلوك الطبيعي، والفئران مع الوظيفة الجنسية طبيعية ويمكن اختبار تجربة جنسية مباشرة دون عملية تعلم. مبرر آخر هو أن صراع المقدمة في هذه المهمة بين الاقتراب من المكافأة وتجنب المحفزات البرود (أو خطر يجري وخز) قد يكون صحة أفضل، كما أنه يحاكي ما يحدث في المدمنين الذين غالباً ما يعرضون أنفسهم لمشابهة الصراع ولكن ثابر على متابعة مكافأة المخدرات بغض النظر عن التعرض لعواقب سلبية في الحياة الحقيقية15.
ولذلك، تطبيق هذا النموذج الصراع هي طريقة سريعة وحساسة لاكتشاف العجز في مراقبة المثبطة بعد التعرض للادمان على المخدرات، أو غير ذلك من العوامل التي قد تؤثر على قدرة التحكم المثبطة، مثل الإجهاد. كما أنه يوفر استراتيجية سلوكية رواية لتحقيق آليات العصبية الكامنة وراء العجز في مراقبة المثبطة. وعلاوة على ذلك، يمكن إضافة تعديلات بديلة على هذه المهمة. على سبيل المثال، تغيير نسبة التكلفة/المنفعة بالاستعاضة عن الحافز الجنسي مع الحافز الاجتماعي الذي يمكن أن تكشف عن دلالات سلوكية أكثر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
الموافقة على هذه الدراسة قبل الدولي استعراض المجلس (مجلس الهجرة واللاجئين) معهد علم النفس، الأكاديمية الصينية للعلوم، وجميع التجارب التي تجري وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة (الأمريكية) لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ( 2011).
1-المواد والإعداد لنموذج الصراع
- منزل أربعة الجرذان في قفص (50 سم طويلة × 22.5 سم x 30 واسعة سم ارتفاع) في غرف مستعمرة بحرارة مضبوطة (22-25 درجة مئوية) ودائرة ضوء/الظلام عكس ح 12/12 ح (الأنوار في الساعة 21:00) لمدة 10 أيام على الأقل.
ملاحظة: وقد استخدمت الذكور والإناث من الفئران سبراغ داولي وزنها 330-400 و 230 – 250 غ في بداية التجارب، على التوالي. - إجراء كافة الاختبارات تحت الإضاءة الخافتة أثناء مرحلة مظلمة.
- استخدام صناديق غير شفافة (37 سم طويلة × 26 سم x 18 واسعة سم ارتفاع) مع الصنوبر الجرذان الفراش حلق الخشب النقل من أقفاص منزلية لاختبار غرف.
- التعامل مع الفئران 3 دقيقة يوميا لمدة 5 أيام قبل بدء التجارب.
- إعداد 120 مل مورفين للتجربة كلها. حل هيدروكلوريد المورفين في 0.9% كلوريد الصوديوم (المحلول الملحي الفيزيولوجي) بتركيز 20 ملغ/مل نهائي. تخزين في درجة حرارة الغرفة (RT).
- إعداد 10 مل من الصوديوم بينتوباربيتال الحل لعملية جراحية. يحل الصوديوم بينتوباربيتال في 0.9% كلوريد الصوديوم بتركيز 1 غ/مل. مخزن في 4 درجات مئوية.
- إعداد 10 مل من استراديول بنزوات (EB) و 10 مل من البروجسترون لتحريض السفاد مصطنعة. حل بنزوات استراديول والبروجستيرون في زيت السمسم بتركيز 0.125 مغ/مل و 5 ملغ/مل، على التوالي.
ملاحظة: احتضان تعليق النفط EB أو البروجسترون في حمام مائي (55 – 60 درجة مئوية) على الأقل 1 ح ودقة ثم التخلص منه. ضمان أن يتم حل المجلس التنفيذي أو البروجسترون تماما. مخزن في الرايت - لمخاطرة تسعى إلى مكافأة السلوك اختبار واستخدام الدوائر المفتوحة-ميدان مكافأة-قرب زجاج اﻷكريليك الأسود. في نهاية واحدة من الساحة المفتوحة-حقل (85 سم طويلة × سم 35 سم x 50 واسعة عالية) جبل قفص تحفيز سلك شاشة (15 سم طويلة × سم 25 سم x 25 واسعة عالية). تثبيت المجلس مع دبابيس على الأرض حوالي 20 سم أمام التحفيز-القفص.
ملاحظة: دبابيس ثابتة على سم 34.5 طويلة × 13 سم مجالس واسعة (الشكل 1). وتستخدم هذه المجالس مع ثلاثة أنواع من المسامير بدوره أثناء الاختبار (الجدول 2).
2-السفاد التعريفي في الإناث والتزاوج الفحص عند الذكور
-
أوفاريكتومي الثنائية في إناث الفئران
ملاحظة: الأدوات الجراحية وغيرها من المواد المستخدمة في عملية جراحية عقيمة. ويتم إجراء عملية جراحية باستخدام تقنية معقمة.- إعداد الأدوات الجراحية والمواد مثل المشارط والشفرات الجراحية وملقط مرقئ، ملاقط، مقص العيون، شاش، مسحات القطن، إبر خياطة وخيوط الحرير في وقت مبكر، فضلا عن 75 ٪ من الكحول، اليود، الصوديوم بينتوباربيتال، 0.9% كلوريد الصوديوم، بنسلين الصوديوم.
- حقن إينترابيريتونيلي صوديوم بينتوباربيتال (55 مغ/كغ)، في انتظار التخدير الكامل لإناث الفئران. الفئران تتنفس بسلاسة ولن نرد على ذيل قرصه.
ملاحظة: أوفاريكتومي يتم فقط عندما يصل وزن الفئران الإناث إلى مالا يقل عن 240 ز. - مكان الفئران الإناث في موقف المعرضة ويحلق خارج الفراء على ظهره، وتطهير الجلد المكشوفة مع إيودوفور. ثم استخدم مشرط جعل شق رأسي الأوسط (حوالي 2 سم) على ظهره (1 سم تحت حافة القفص الصدري).
- سحب الجلد إلى الجانب الأيسر، وتشريح بلانت النسيج تحت الجلد مع ملقط مرقئ لفضح العضلات القطنية. قص طبقة العضلات (شق 1 سم) في تجويف البطن، حتى يتم التوصل إلى الأنسجة الدهنية.
- سحب الأنسجة الدهنية مع ملاقط عازمة، وتحديد موقع المبيض الذي نسيج اللحم الوردي (عن 0.5 سم × 0.4 × 0.3 سم) محاطة بالانسجة الدهنية مع أنبوب فالوب تأخ على السطح.
- المشبك قناة فالوب مع الملقط وسد عليه، ثم قطع المبيض جنبا إلى جنب مع الأنسجة الدهنية المحيطة.
- وضع قناة فالوب المتبقية والأنسجة الدهنية مرة أخرى في تجويف البطن بعد التأكد من لا نزيف، وخياطة طبقة العضلات.
- إزالة المبيض على الجانب الآخر بنفس الإجراء، وثم خياطة شق الجلد.
- وضع الفئران في بطانية ساخنة حتى الصحوة وثم وضعها في قفص المنزل مرة أخرى.
- بعد أسبوعين على الأقل من الانتعاش، استخدام الفئران الإناث كأداة للتزاوج فحص واختبار سلوكية.
ملاحظة: إيلاء الاهتمام لحالة الفئران الإناث بعد عملية جراحية، وإمدادات كافية من المياه والغذاء. الحفاظ على الفئران ovariectomized واحد يضم لمدة أسبوع واحد والبيت ثم أربعة في قفص.
-
تحريض السفاد في إناث الفئران ovariectomized
- التعامل مع إناث الفئران ovariectomized كل ثلاث مرات (3 دقيقة في اليوم) قبل استخدامها للتزاوج الفرز.
- بلطف تلتقط الفئران من مربع النقل مع اليد اليسرى والاحتفاظ بها في الأسلحة لبضع ثوان. ثم وضع الفئران إلى المربع وتكرار هذه العمليات لمدة 3 دقائق.
- حقن تحت الجلد بنزوات استراديول (25 ميكروغرام/فأر) حوالي 48 – 52 ح قبل التزاوج الفحص أو الاختبار الصراع.
- تحت الجلد حقن البروجسترون (1 ملغ/فأر) حوالي 4 – 6 ح قبل التزاوج الفحص أو الاختبار الصراع.
ملاحظة: يتم حقن هرمونات إستروجين تحت الجلد في الجزء الخلفي الرقبة. منذ دورة السفاد تستمر لأيام ~4\u20125، وإناث الفئران تستخدم مرة واحدة في أسبوع.
- التعامل مع إناث الفئران ovariectomized كل ثلاث مرات (3 دقيقة في اليوم) قبل استخدامها للتزاوج الفرز.
-
فحص الفئران الذكور للتزاوج الأداء
ملاحظة: ويجري الفحص تحت ضوء خافت أثناء مرحلة مظلمة من دائرة الضوء/الظلام في غرفة السكن.- ضع الفئران ذكور على حدة في الكرتون (60 سم طويلة × سم 50 سم x 40 واسعة عالية) مع الصنوبر خشب الفراش الحلاقة، وترك الأمر روض لمدة 5 دقائق.
- يدخل الفئران الإناث استروس كرتون ومراقبة السلوكيات copulatory الذكور (من المراقبين ذوي الخبرة).
- وضع الفئران مرة أخرى إلى أقفاص المنزل بعد الفئران الذكور كاملة القذف الأول داخل 30 دقيقة أو لا تعرض الولوج في غضون 15 دقيقة أو القذف خلال 30 دقيقة.
- تعيين الفئران الذكور أن يمر بفحص (القذف ناجحة لمدة ثلاثة أيام متتالية) عشوائياً إلى مجموعات مختلفة (مثل مجموعات معاملة المياه المالحة والمورفين).
3-المعالجة المسبقة في الفئران الذكور قبل الاختبار الصراع
-
العلاج بنهم مثل المورفين
ملاحظة: يتم حقن الفئران الذكور إينترابيريتونيلي مع المالحة أو تسليم المورفين في نظام مثل نهم14 (الجدول 1).- تزن ذكور الفئران وحساب حجم الحقن لكل فأر استناداً إلى وزن الجسم (انظر الجدول 1).
- إعداد المحاقن مع حلول المورفين أو المالحة.
- حقن الفئران واحدة في وقت إينترابيريتونيلي والفور وضعه بلطف في قفص المنزل (4 الفئران في قفص).
- بعد على الأقل 6 ح، إعطاء الفئران الذكور الحقنة الثانية بنفس الطريقة.
-
التوتر الحاد
ملاحظة: يتم تسليم الصدمات سيرا على الأقدام قبل كل اختبار الصراع في أربع دوائر متطابقة تجميعها مع أربعة مولدات الصدمة ويسيطر عليها البرامج المهنية المثبتة على جهاز كمبيوتر.- في يوم الاختبار الصراع، أن الفئران الذكور إلى غرفة أخرى مختلفة من الصراع اختبار الغرفة.
- وضع الفئران الذكور في الدوائر (30.5 سم طويلة × 25.4 سم × ارتفاع 30.5 سم) روض لمدة 1 دقيقة.
- قم بإعداد البرنامج مقدما. ويتضمن البرنامج للصدمات القدم متقطعة تسليمها في غضون 10 دقيقة (0.5 mA × 0.5 s x 10 دقيقة؛ ويعني صدمة بين فترة 40 ثانية، وتتراوح s 10 – 70).
- أدخل الحيوان معرفات واختر ما إذا كنت تريد تشغيل المولدات الصدمة حسب المجموعات (مجموعة صدمة والسيطرة على المجموعة). ثم اضغط على زر ابدأ .
- عند الانتهاء من الإجراء الإجهاد تجلب الفئران فورا إلى غرفة الاختبار الصراع في صناديق النقل؛ فأر واحد كل مربع.
4-اختبار الصراع
ملاحظة: ويجري الاختبار تحت ضوء خافت أثناء مرحلة مظلمة من دائرة الضوء/الظلام في غرفة اختبار الصراع.
- في اليوم قبل إجراء الاختبار، جلب جميع الفئران إلى غرفة الاختبار الصراع والسماح لهم بروض إلى الدائرة المفتوحة-ميدان مكافأة-قرب (بدون أي عائق، الشكل 1) لمدة 15 دقيقة.
- في يوم الاختبار، ضع الفئران الذكور في قاعة مما يتيح استكشاف مجاناً لمدة 10 دقيقة (تحت نفس الحالة كما اليوم قبل إجراء الاختبار).
- وضع الفئران الإناث استروس في التحفيز-القفص كحافز والسماح للذكور تخضع لنهج بحرية والتحقيق في الفئران الحوافز لمدة 5 دقائق.
ملاحظة: الفئران الذكور يتعرض عشوائياً لأنثى استروس، وذكر هذا ليس فأر مألوفة. - بعد 5 النهج دقيقة مجانية، نقل هذا الموضوع الذكور من التحفيز-القفص على الجانب الآخر من الساحة، وضع عقبة (14 سم-على صعيد مجلس سميكة مع دبابيس) ثم قم بتشغيل أول محاكمة للاختبار.
ملاحظة: مستوى صعوبة العقبات التي تختلف بين المحاكمات استناداً إلى أنواع دبابيس والارتفاع للمجلس. ويرد في الجدول 2نظام الدرجات. - نقل الفئران الذكور بعيداً عن التحفيز-القفص 15 – 20 ثانية بعد كل مرة أنها تعلو العقبة.
- نهاية محاكمة إذا كان الموضوع الذكور يصعد أو يقفز فوق العقبة 3 مرات خلال 4 دقيقة وفورا بدء المحاكمة القادمة مع تزايد صعوبة العقبة.
- إذا كان موضوع ذكور تعلو العقبة أقل من ثلاث مرات خلال 4 دقيقة، إنهاء الاختبار وتسجيل الأوقات أنها تعلو العقبة.
- جلب الفئران الذكور إلى القفص المنزل وفرك الدائرة المفتوحة-الحقل مع حمض الخليك الجليدية 0.05%.
- نقاط كل التغلب (أو الاقتراب) وفقا الجدول 2. استخدام مجموع النقاط للجميع سورمونتينجس كمجموع نقاط لموضوع ذكور في هذا الاختبار الصراع.
5-إحصائية تحليل
- تمثل البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة أو نقطة بيانات مفردة. في حالة طعن هذا التجانس للفرق أو التوزيع العادي لمجموعات البيانات، سجل تحويل مجموعات البيانات.
- تحليل تأثيرات المعالجة المورفين في سلوك التماس المكافأة المعروضة في يوم 7 ويوم 17 من الانسحاب (Wd7 و Wd17) باستخدام اختبارات t مع "المعالجة" كعامل بين مواضيع (المورفين مقابل المالحة، الشكل 2).
- تحليل تأثيرات المعالجة المورفين في السعي إلى مكافأة السلوك بعد تكرار الاختبار باستخدام تحليل التباين لتكرار القياس (ANOVA) مع "وقت انسحاب" (Wd7 مقابل Wd14) كعامل ضمن المواضيع و "المعالجة" (المورفين مقابل المالحة) كعامل بين مواضيع.
- وبالإضافة إلى ذلك، استخدم ارتباط بيرسون لتحليل العلاقة بين العشرات المواضيع الذكور أن حصل في أيام 7 و 14 من الامتناع عن ممارسة الجنس (Wd7 و Wd14، الشكل 3).
ملاحظة: بعد التحويل اللوغاريتمي للبيانات الأصلية، يتم إجراء التحليلات الإحصائية. - تحليل أثر الإجهاد الحاد على السعي إلى مكافأة السلوك في المخدرات-السذاجة الفئران باستخدام الاختبار t مع الإجهاد كعامل بين مواضيع (صدمة مقابل السيطرة، الرقم 4)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
لاستكشاف ما إذا كان هذا نموذج الصراع يمكن أن تكشف عن السلوك تسعى إلى مكافأة مهايئ/المحفوف بالمخاطر الناجمة عن المواد الأفيونية، قورنت في سلوك التماس المكافأة المعروضة بواسطة مجموعات pretreated المالحة والمورفين باختبارات t بعد قصيرة الأجل (Wd7) و الطويلة الأجل (Wd17) الانسحاب من المورفين على التوالي (الشكل 2). وتظهر النتائج أنه في يوم 7 ويوم 17 من الانسحاب، أظهرت الفئران المورفين pretreated السلوكيات يقترب أكثر بكثير من الفئران المالحة pretreated (الشكل 2a: t =-3.958؛ ومكسيكو = 24؛ ف < 0.01. الشكل 2b: t =-2.350؛ العاصم = 17؛ ف < 0.05)، مما يوحي بأن الفئران المورفين سحب عرض المزيد من السلوكيات بيرسيفيراتيفي مواجهة عقبة البرود وهذا السلوك مهايئ استمرت لفترة طويلة بعد الانسحاب.
عند الفئران تم اختباره مرارا وتكرارا ضمن المهمة الصراع (الشكل 3)، ANOVA التدبير المتكررة أظهرت تأثير رئيسية هامة للمعالجة المسبقة (F (1,24) = 12.910؛ ف < 0.01). لا تأثير كبير من وقت انسحاب (مقارنة Wd7 و Wd14، [و (1,24) = 0.807؛ p > 0.05)] ولا تفاعل هام (انسحاب x التفاعل المعالجة المسبقة: F (1,24) = 1.093, p > 0.05) تم العثور على (انظر الشكل 3 ألف). لمواصلة التحقيق استقرار سلوك التماس مكافأة محفوفة بالمخاطر، وقد تم تحليل الترابط بين النقاط بين فترات انسحاب مختلفة (بين Wd7 و Wd14). وأظهرت النتائج أن السلوكيات يقترب أثناء فترات انسحاب القصيرة الأجل والطويلة الأجل كانت مترابطة إلى حد كبير (ارتباط بيرسون: r = 0.445؛ ف < 0.05، انظر الشكل 3)، تشير إلى أن السلوكيات تسعى إلى مكافأة محفوفة بالمخاطر للفئران كانت ثابتة تقريبا على مدى تكرار الاختبارات.
للتحقيق في تأثير الأحداث المجهدة في قدرة التحكم المثبطة في الحيوانات، تعرضت الفئران المخدرات-ساذجة لإجهاد صدمة قدم متقطعة قبل الاختبار الصراع. على الرغم من أن هناك لا يوجد فرق كبير بين جماعات الضغط والتحكم (الشكل 4a: t =-1.207؛ ومكسيكو = 17؛ p > 0.05)، سلوك التماس مكافأة عرض توزيع ثنائي مشروط داخل المجموعة الإجهاد، مما يوحي بآثار الإجهاد الحاد فرق ملحوظ في السلوكيات تسعى إلى مكافأة محفوفة بالمخاطر فيما بين الأفراد (انظر الشكل 4 باء).
رقم 1: أجهزة test. الصراع الدائرة المفتوحة-حقل (85 سم طويلة × سم 35 سم x 50 واسعة عالية) مع قفص تحفيز عقد الفئران الإناث استروس كان المستخدمة لاختبار السلوكيات مكافأة تسعى تحت النزاع. كان المواضيع الذكور التغلب على عقبة خطرة، أي تسلق مجلس باستمرار تصاعد (34.5 سم طويلة × 13 سم) سميكة مع دبابيس، الاقتراب من قفص التحفيز. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: سلوك التماس مكافأة محفوفة بالمخاطر في الاختبارات النزاع المعروضة بواسطة ذكور الفئران. () عشرات لتقترب من السلوكيات عرض المورفين-(أسود) والمياه المالحة (أبيض) التعامل مع مجموعات في اليوم 7 من الانسحاب. (ب) عرض عشرات لتقترب من السلوكيات المورفين-(أسود) والمياه المالحة (أبيض) معاملة مجموعات في اليوم 17 من الانسحاب. تمثل الأشرطة يعني ± sem. * يشير إلى 0.05 < p ؛ * * تشير إلى ف < 0.01؛ سأل = سالين، مور = Morphine.This تم تعديل الشكل من17 مع الإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: اختبار سلوك محفوف بالمخاطر تسعى إلى مكافأة التتالي في يوم 7 و 14 من الانسحاب من المورفين. () عشرات لتقترب من السلوكيات عرض المورفين-(أسود) والمياه المالحة (أبيض) التعامل مع مجموعات في اليوم 7 و 14 من الانسحاب (Wd7 و Wd14). تمثل الأشرطة يعني ± sem. (ب) الترابط بين العشرات للسلوكيات تسعى إلى مكافأة محفوفة بالمخاطر بين اختبارين في يوم 7 و 14 انسحاب. * يشير إلى 0.05 < p ؛ * * تشير إلى ف < 0.01. سأل = سالين، مور = المورفين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: أثر الإجهاد صدمة الأقدام على السلوكيات مكافأة تسعى في test. الصراع () عشرات لتقترب من السلوكيات المعروضة بواسطة عنصر التحكم (رمادي) وصدمة (أسود) مجموعات تخضع للمعالجة المسبقة المالحة. تمثل الأشرطة يعني ± sem. * يشير إلى 0.05 < p ؛ * * تشير إلى ف < 0.01. (ب) تظهر عشرات لتقترب من السلوكيات عرض الفئات التحكم وصدمة في نقطة واحدة. تم تعديل هذه الأرقام من مرجع17 مع الإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| 1 يوم | 2 يوم | 3 يوم | 4 يوم | يوم 5 | |
| 1شارع حقن | 10 مغ/كغ | 20 مغ/كغ | 40 مغ/كغ | 40 مغ/كغ | 40 مغ/كغ |
| 2nd حقن (ح 6 في وقت لاحق) | 20 مغ/كغ | 40 مغ/كغ | 40 مغ/كغ | 40 مغ/كغ | 40 مغ/كغ |
الجدول 1: نظام المعالجة بنهم مثل المورفين. ذكور الفئران هي pretreated مرتين يوميا لمدة 5 أيام مع داخل حقن المحلول الملحي أو المورفين تسليمها في نظام مثل نهم17: 10، 20، 20، 40، 40، 40، 40، 40، 40 و 40 مغ/كغ. جرعتين من المورفين التي تديرها في كل يوم على الأقل 6 ح عن بعضها البعض.
| المحاكمة | العقبة | وسجل كل النهج |
| 1 | + 0 سم | 0.5 |
| 2 | + 2 سم | 1.0 |
| 3 | + 4 سم | 1.5 |
| 4 | ب + 4 سم | 3.0 |
| 5 | ب + 7 سم | 3.5 |
| 6 | ب + 10 سم | 4.0 |
| 7 | ب + 13 سم | 4.5 |
| 8 | ب + 17 سم | 5.0 |
| 9 | ج + 17 سم | 6.0 |
| 10 | ج + 21 سم | 6.5 |
| 11 | ج + 25 سم | 7.0 |
| 12 | ج + 29 سم | 7.5 |
جدول 2: تصنيف مقدار صعوبة الموضوع غزا كل نهج. وفقا لطول دبابيس ومتوسط المسافة بين دبابيس، استخدمت ثلاثة أنواع من المجلس كثيفا مع دبابيس: مع دبوس-طول 0.5 سم، متوسط المسافة من 1 سم؛ ب بطول رقم التعريف الشخصي من 0.8 سم، متوسط المسافة من 0.5 سم؛ و ج مع دبوس-الطول 2 سم، متوسط المسافة من 1 سم. مرارا وتكرارا قد زاد المجلس على النحو التالي: 0 و 2، 4، 7، 10، 13، 17، 21، 25 و 29 سم. وهكذا، هناك 12 مستويات من الصعوبة للتغلب العقبة، أي 12 محاكمة، أثناء الاختبار. مقدار صعوبة الموضوع غزا كل الوقت لنهج القفص الحافز هو سجل وقد لخص ما يصل إلى النتيجة الإجمالية لكل موضوع17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
مراقبة المثبطة العجز الناجم عن تعاطي المخدرات18 دوراً رئيسيا في الترويج للمخدرات القهري تسعى إلى أخذ السلوكيات والانتكاس19،20. ويوفر نموذج الصراع المعروضة هنا نهجاً جديداً لاستكشاف التغيرات التي حدثت في مراقبة المثبطة للأفراد المعرضين للادمان على المخدرات.
وهناك العديد من الخطوات الهامة في البروتوكول. أولاً وقبل كل شيء، يجب أن يحصل على المواضيع (ذكور الفئران) تجربة جنسية قبل دخول مهمة متابعة الصراع. على سبيل المثال، الفئران الذكور بحاجة لتمرير الفحص للجماع (كوبولاتينج ثلاث مرات على الأقل) قبل العلاج من تعاطي المخدرات، ويتم تعيينها إلى مجموعات مختلفة عشوائياً. من أجل القيام بالجماع الفحص بشكل سلس، نقطتين ينبغي إيلاء الانتباه إلى. واحد هو وزن الجسم من إناث الفئران عند أوفاريكتومي. أوفاريكتومي يتم فقط عندما يصل وزن إناث الفئران إلى مالا يقل عن 240 ز. أوفاريكتومي المبكر منذ نضوج الجسم من إناث الفئران يحدث في وقت لاحق من نضج جوندال21، يمكن أن يعرقل الفئران الذكور من كوبولاتينج بنجاح مع إناث الفئران حتى ولو كانت الإناث هرمونات إستروجين تدار. النقطة الأخرى أن الفئران الذكور ينبغي روض إلى مربعات الفحص قبل الجماع مع إناث الفئران، تفاديا لتأثير نيوفوبيا إلى سياق رواية على الجماع التالية.
ينبغي أن تكون عوامل الإجهاد رقابة مشددة من خلال التجربة. يتم التعامل مع الفئران الذكور والإناث على حد سواء واعتادوا على النقل قبل بدء المهمة الصراع. وعلاوة على ذلك، أثناء عملية تعود إلى الدائرة قرب مكافأة قبل يوم الاختبار، الفئران الذكور مرارا وتكرارا اغتنامها وانتقلت من الجزء الأمامي القفص حافزا للطرف الآخر من الدائرة عدة مرات.
كما لا تزال مهمة الصراع، العقبة (المجلس مع دبابيس) تزداد مرارا وتكرارا، وبالتالي لا يمكن انظر ذكور الفئران وراء العقبة أو مباشرة تشعر الفئران الإناث في قفص التحفيز أي أكثر. من أجل الحفاظ على الفئران الذكور تجذبهم بشكل مستمر على الشريك الجنسي، توضع بعض المواد الأسرة المتسخة قبل استروس إناث الفئران في قفص التحفيز، السماح لرائحة الإناث منتشر في الهواء. ملحقات الفرش جمعها قبل المهمة الصراع والمخزنة في-20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
بعد وقف العلاج المورفين، الفئران الذكور يمكن أن تعاني أعراض الانسحاب الجسدية التي تختفي 3 أيام بعد14. على الرغم من أن هناك احتمالاً أن الكفوف وخز بدبابيس، تم الكشف عن أي إصابة خطيرة أو الاكتفاء وأنشطة الذكور لا تتأثر.
في هذه المهمة الصراع، واحدة أيضا التحقيق في أثر قيمة المكافأة على السعي إلى مكافأة السلوكيات، على سبيل المثال، تغيير قيمة المكافأة بالاستعاضة عن الفئران الإناث (مكافأة الجنسي) مع14،الفئران ذكور (مكافأة اجتماعية)16. إذا كان يتم استخدام المكافآت الجنسية والاجتماعية على حد سواء في تجربة واحدة، سيكون من الأفضل لتشغيل هذه التجربة في مكافأة قرب دائرتين، واحدة لمكافأة الجنسي والآخر للمكافأة الاجتماعية. إذا كان للتجربة تنفذ في دائرة واحدة، الدائرة والقفص التحفيز يجب بعناية تنظيفها مع حمض الخليك الجليدية 0.1% بين المواضيع، فضلا عن الاختبارات، تفاديا التلوث عبر حاسة الشم بين الذكور والإناث من المحفزات . وينبغي تجديد السنون الموجودة على متنها بانتظام لضمان انتهاء التهديد المستمر للفئران الذكور.
قد يكون أداء الفئران الذكور رهنا بممارسة تأثير التجارب المتكررة تحت هذه المهمة الصراع. فقد لاحظنا أن بعض الحيوانات (لا سيما الفئران المالحة pretreated) يمكن أن تجنب دبابيس أفضل من خلال ممارسة على القفز فوق العقبة أثناء الاختبار الثاني (الشكل 3a). على الرغم من أن هناك علاقة كبيرة بين السلوكيات تسعى إلى مكافأة محفوفة بالمخاطر خلال الاختبارين المتكررة، فقد تعذر التحقق من حالة هذه المهمة يمكن أن تستخدم لتحديد تعمل عالية ومنخفضة المخاطر لالتماس مكافأة السلوك. ومن ثم، حتى الآن هذه المهمة الصراع مناسبة للتحقيق بسرعة أية تغييرات في مراقبة المثبطة بعد العلاج الدوائي أو السلوكي.
بالمقارنة مع مهمة الانتقال/عدم الانتقال ووقف إشارة مهمة ومتعددة الخيارات المهمة وقت رد الفعل المسلسل وعكس التعلم، التي تعكس القدرة في هذا الموضوع لتثبيط عن الاستجابات غير مناسبة بعد تعلم النظام المهام2،5 ، في هذه المهمة الصراع، المواضيع التي لا تحتاج إلى تحول دون أي ردود المستفادة ولكن تمنع حنين/دوافعها العفوية بسبب العواقب السلبية المحتملة. ومن ثم يحاكي هذه المهمة الصراع أفضل المدمنين التي كثيرا ما تواجه حالة من حالات الصراع، ويساعد على فحص قدرة التحكم المثبطة خلال العملية النفسي للموازنة بين التكلفة والمنفعة. وعلاوة على ذلك، على النقيض من مهام صنع القرار الأخرى، مثل قرار محفوفة بالمخاطر مما يجعل22،23 أو القمار المهمة24،25، هذه المهمة الصراع أبسط وأسهل للقيام، بحيث أنه يتكون فقط من واحد مكافأة وخطر واحد.
يمكن استخدام نموذج الصراع أنشأنا للكشف عن حالات العجز في مراقبة المثبطة بعد التعرض للعقاقير الأفيونية – المورفين. ونحن نعتقد أن هذا النموذج السلوكي سيكون أيضا مفيداً لاكتشاف الأضرار بمراقبة المثبطة الناجمة عن إدمان المخدرات الأخرى بسرعة. وعلاوة على ذلك، سيتم تحديد موثوقية المستحثة بالمواد الأفيونية القهري تسعى إلى مكافأة السلوكية النمط الظاهري استناداً إلى نموذج الصراع هذه. وفي الوقت الحاضر، نحن نعمل على استبدال العقبة (المجلس مليئة بالمسامير) مع شبكة الكهرباء بحيث القدم الصدمات يمكن تسليمها لذكور الفئران، وأيضا بتعديل الإجراءات السلوكية لقياس السلوكيات تسعى إلى مكافأة للحيوان في وجهة مرارا وتكرارا للنتيجة السلبية (الصدمات سيرا على الأقدام). وكما هو معروف، لا يوجد متاح السلوكية نموذج المستحثة بالمواد الأفيونية القهري تسعى إلى مكافأة السلوك حتى الآن، الذي على الأرجح بسبب تأثير مسكن الأفيونية26،27.
سريرياً، الإجهاد واحد من العوامل الهامة التي تؤدي إلى الانتكاس بعد انسحاب المخدرات28. وبالإضافة إلى ذلك، أن الإجهاد أيضا عاملاً هاما في التأثير على سلوكية تثبيط/الاندفاع/كومبولسيفيتي29. الأخذ بهذا النموذج الصراع كما يسمح لنا بمراقبة تأثيرات مختلف الأحداث المجهدة على قدرة التحكم المثبطة في المواضيع بسرعة بعد التعرض للمخدرات الذين تساء معاملتهم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
هذه الورقة كان يدعمها مختبر مفتاح سجل المستخلصات الكيميائية للصحة العقلية ومعهد علم النفس (KLMH2016K01) والتقييم والبحوث التكنولوجية التدخل "سكان مرضى إجهاد ما بعد الصدمة" (JCYJ20170413170301569)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | Beijing Tongguangjingxi Chemical company | CN No.81601 | CH3COOH |
| Benzypenicillin sodium for Injection | Huabei Pharmaceutical | F7072109 | C16H17N2NaO4S |
| Cotton swabs | Wan Xin, Shandong, China | 8 cm | |
| β-estradiol benzoate | SIGMA-ALDRICH | E8515-200MG | estradiol benzoate |
| Gauze | Wan Xin, Shandong, China | 21s × 21s 110×100 | |
| Hemostatic forceps | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Morphine hydrochloride | Qinghai Pharmaceutical Co. Ltd | 20100105 | Morphine hydrochloride |
| Ophthalmic scissors | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Pentobarbital Sodium | Sigma | C11H17O3N2Na | |
| Precision animal shocker | Coulbourn | ||
| Progesterone | SIGMA-ALDRICH | V900699-5G | progesterone |
| Sesama oil | Fengyi trading company ltd. | Sesama oil | |
| Sodium chloride injection | HuaLu Pharmaceutical | H17092107 | NaCl |
| Scalpels | Gillette | 96797241 | |
| Surgical blades | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Suture needles | Han Qin, Shanghai, China | Δ1/2 6×14 | |
| Silk sutures | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Sprague-Dawley rats | Vital River Animal Center, Beijing, China | Sprague-Dawley | animal strain |
| Syringe | WeiGao Group Medical Polymer Co.Ltd | 1 mL, 2 mL | |
| Tweezers | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. |
References
- Everitt, B. J., Robbins, T. W. Drug Addiction: Updating Actions to Habits to Compulsions Ten Years On. Annual Review of Psychology. 67, 23-50 (2016).
- Bari, A., Robbins, T. W. Inhibition and impulsivity: Behavioral and neural basis of response control. Progress in Neurobiology. 108, 44-79 (2013).
- Dalley, J. W., Everitt, B. J., Robbins, T. W. Impulsivity, compulsivity, and top-down cognitive control. Neuron. 69 (4), 680-694 (2011).
- Peter, W., Kalivas, N. D. V. The Neural Basis of Addiction: A Pathology of Motivation and Choice. American Journal of Psychiatry. 162, 1403-1413 (2005).
- Morein-Zamir, S., Robbins, T. W. Fronto-striatal circuits in response-inhibition: Relevance to addiction. Brain Research. 1628, 117-129 (2015).
- Garavan, H. Dissociable Executive Functions in the Dynamic Control of Behavior: Inhibition, Error Detection, and Correction. Neuroimage. 17 (4), 1820-1829 (2002).
- Garavan, H., Ross, T. J., Kaufman, J., Stein, E. A. A midline dissociation between error-processing and response-conflict monitoring. Neuroimage. 20 (2), 1132-1139 (2003).
- Connolly, C. G., Foxe, J. J., Nierenberg, J., Shpaner, M., Garavan, H. The neurobiology of cognitive control in successful cocaine abstinence. Drug and Alcohol Dependence. (1-2), 45-53 (2012).
- Kaufman, J. N., Ross, T. J., Stein, E. A., Garavan, H. Cingulate hypoactivity in cocaine users during a GO-NOGO task as revealed by event-related functional magnetic resonance imaging. The Journal of Neuroscience. 23 (21), 7839-7843 (2003).
- Forman, S. D., et al. Brain activity of opiate addicts predicts subsequent treatment retention. Annual Meeting of the American-College-of-Neuropsychopharmacology. , DEC 12-16 (2004).
- Kolokotroni, K. Z., Rodgers, R. J., Harrison, A. A. Acute nicotine increases both impulsive choice and behavioural disinhibition in rats. Psychopharmacology. 217, 455-473 (2011).
- Belin-Rauscent, A., et al. From impulses to maladaptive actions: the insula is a neurobiological gate for the development of compulsive behavior. Molecular Psychiatry. 21 (4), 491-499 (2016).
- Groman, S. M., et al. Dysregulation of D(2)-mediated dopamine transmission in monkeys after chronic escalating methamphetamine exposure. Journal of Neuroscience. 32 (17), 5843-5852 (2012).
- Bai, Y., Li, Y., Lv, Y., Liu, Z., Zheng, X. Complex motivated behaviors for natural rewards following a binge-like regimen of morphine administration: mixed phenotypes of anhedonia and craving after short-term withdrawal. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 23 (2014).
- Vandaele, Y., Janak, P. H. Defining the place of habit in substance use disorders. Progress in Neuropsychopharmacology & Biological Psychiatry. 87 (Pt A), 22-32 (2018).
- Li, Y., et al. The consummatory and motivational behaviors for natural rewards following long-term withdrawal from morphine: no anhedonia but persistent maladaptive behaviors for high-value rewards. Psychopharmacology (Berl). 234 (8), 1277-1292 (2017).
- Bai, Y., Belin, D., Zheng, X., Liu, Z., Zhang, Y. Acute stress worsens the deficits in appetitive behaviors for social and sexual stimuli displayed by rats after long-term withdrawal from morphine. Psychopharmacology. 234, 1693-1702 (2017).
- Schoenbaum, G., Saddoris, M. P., Ramus, S. J., Shaham, Y., Setlow, B. Cocaine- experienced rats exhibit learning deficits in a task sensitive to orbitofrontal cortex lesions. European Journal of Neuroscience. 19 (7), 1997-2002 (2004).
- Belin, D., Belin-Rauscent, A., Murray, J. E., Everitt, B. J. Addiction: failure of control over maladaptive incentive habits. Current Opinion in Neurobiology. 23 (4), 564-572 (2013).
- Everitt, B. J. Neural and psychological mechanisms underlying compulsive drug seeking habits and drug memories--indications for novel treatments of addiction. European Journal of Neuroscience. 40 (1), 2163-2182 (2014).
- Dai, F., et al. Dynamic Development of Organs and Serum Sex Hormone Levels in Normal Pre-pubertal Female Sprague-Dawley Rats. Chinese Journal of Comparative Medicine. 19 (07), 33-37 (2009).
- Orsini, C. A., Trotta, R. T., Bizon, J. L., Setlow, B. Dissociable roles for the basolateral amygdala and orbitofrontal cortex in decision-making under risk of punishment. Journal of Neuroscience. 35 (4), 1368-1379 (2015).
- Shimp, K. G., Mitchell, M. R., Beas, B. S., Bizon, J. L., Setlow, B. Affective and cognitive mechanisms of risky decision making. Neurobiology of Learning and Memory. , 60-70 (2015).
- Di Ciano, P., Le Foll, B. Evaluating the Impact of Naltrexone on the Rat Gambling Task to Test Its Predictive Validity for Gambling Disorder. PLoS One. 11 (5), e0155604 (2016).
- Ravel, N., et al. Elucidating Poor Decision-Making in a Rat Gambling Task. PLoS One. 8 (12), e82052 (2013).
- Charles, A., Pradhan, A. A. Delta-opioid receptors as targets for migraine therapy. Current Opinion in Neurology. 29 (3), 314-319 (2016).
- Lu, Z., et al. Truncated mu-Opioid Receptors with 6 Transmembrane Domains Are Essential for Opioid Analgesia. Anesthesia & Analgesia. 126 (3), 1050-1057 (2018).
- Sinha, R., Shaham, Y., Heilig, M. Translational and reverse translational research on the role of stress in drug craving and relapse. Psychopharmacology (Berl). 218 (1), 69-82 (2011).
- Wilson, C. A., Schade, R., Terry, A. V. Variable prenatal stress results in impairments of sustained attention and inhibitory response control in a 5-choice serial reaction time task in rats. Neuroscience. 218, 126-137 (2012).
