Summary
Bu çatışma model inhibitör kontrol bozukluğu bağımlılık uyuşturucu veya inhibitör denetim etkileyebilecek diğer faktörlere maruz kaldıktan sonra ölçmek için kullanılır. Bir cinsel uyarıcı ve caydırıcı bir engel aynı anda sunulan, böylece erkek rats cinsel ödül yaklaşım engel fethetmek zorunda.
Abstract
Sıçanlarda inhibitör denetiminin bir model olarak bir roman çatışma görev mevcut protokolünü açıklar. Bu modelde, bir yüksek değerli ödül temsil eden bir doğal tatmin edici uyarıcı (cinsel uyarıcı) ve itici uyarıcılara (PIN), aynı anda sunulmaktadır. Erkek rats tırmanmak veya iğne yaklaşım ve cinsel ortağı araştırmak için tam engel atlamak zorunda. Eğer hayvan itici uyarıcılara ne olursa olsun onların yaklaşan davranış devam ederse, bu bir uyumsuz veya riskli ödül davranışı kabul edilir. Çatışma görevi kötüye ilaç, morfin veya stresli bir olay gibi maruz kaynaklanan inhibitör denetimindeki açığı değerlendirilmesi izin verir.
Bu modelin temel yararı, uyuşturucu ilaçlar veya diğer stresli olaylara maruz kaldıktan sonra inhibitör kontrol eksikliği keşfetmek için basit ve hızlı bir yol sağlamasıdır. Afyon ek olarak, bu davranış modeli de hızlı bir şekilde diğer bağımlılık uyuşturucu indüklenen inhibitör kontrol açıkları keşfetmek için yararlı olacaktır. Ancak, erkek rats performans etkileri tekrarlanan bu çatışma görevi altında test ile egzersiz tabi olabilir sınırlama olduğunu. Gelecekte, bir kompulsif fenotip göre afyon maruz tanımlanan sonra ödül arayışında olan kişiler bu çatışma model değiştirme tarihinde dayalı umut ediyoruz.
Introduction
Uyuşturucu bağımlılığı arayan ve1alarak dürtüsel ve kompulsif ilaç tarafından karakterize kronik beyin hastalığıdır. Bu anahtar şekil-in bağımlılığı her ikisi de inhibitör denetim2,3, Engelli yeteneğinden Yani, neden uyaranlara ödüllendirici ve böylece uyumsuz geliştirme anında takip inhibe başarısız olan desen davranış4.
Başla/başlama-görev ve stop-sinyal görev yanıt inhibisyon2,5becerisini ölçmek için kullanılan prototip görevleri vardır. Bu iki deneysel paradigmalar uygunsuz eylemleri bastırmak, seyrek inhibitör yanıt karşı bir örtülü zıt tarafından gitmek temel6,7kişinin becerilerinizi değerlendirir. Bu görevleri'nde görüntülenen yanıt inhibisyon kokain kullanıcıları8,9, uyuşturucu bağımlıları10ve nikotin kullanıcıların11Engelli olduğu gösterilmiştir. Başka bir iki görev — ters öğrenme ve birden çok seçim seri reaksiyon zamanı görevleri — yanıt inhibisyon/inhibitör ölçümleri kontrol12,13de sağlar. Ancak, çoğu, kemirgen gerçekleştirilen bu paradigmalar sadece uzun vadeli eğitim böylece konular farklı sinyalleri tarafından temsil edilen yanıt gereksinimleri ayırt edebilirsiniz, ama aynı zamanda öğrenme hızı ve etkileri öğrenme bireysel farklılıklar olabilir gerektirir Sonraki inhibitör test11sonuçları ile müdahale.
Bu yazıda, biz inhibitör kontrol bozukluğu bağımlılık uyuşturucu maruz kaldıktan sonra ölçmek için kullanılan bir roman çatışma görevi mevcut. Bu görev, bir yüksek değerli ödül14temsil eden bir doğal tatmin edici uyarıcı (cinsel uyarıcı) ve erkek rats fethetmek zorunda, itici uyarıcılara (PIN) aynı anda sunulmaktadır. Erkek rats tırmanmak veya iğne yaklaşım ve cinsel ortağı araştırmak için tam engel atlamak zorunda. Eğer hayvan itici uyarıcılara ne olursa olsun onun yaklaşan davranış devam ederse, bu bir uyumsuz veya riskli ödül davranışı kabul edilir. Bu görevi oluşturmak için gerekçeler bu kavramsal olarak basit ve diğer görevler gibi ağır talepleri yönetim süreçleri yerleştirmez biridir. Yanıt inhibisyon ölçülmesi diğer görevlere göre bu çatışma görevi doğal davranış ve normal cinsel fonksiyon ile rats temel alır ve cinsel deneyim doğrudan bir öğrenme süreci test edilebilir. Başka bir gerekçe ne bağımlıları sık sık kendilerini benzer içinde yer oluşur taklit eder gibi daha iyi bir geçerliliği, ödül yaklaşıyor ve itici uyarıcılara (veya pricked riskini) arasında bu görevde sunulan bir çakışma olabilir mi çatışma ama ısrarla takip uyuşturucu ödül gerçek hayat15olumsuz sonuçları riski ne olursa olsun.
Bu nedenle, bu çatışma model uygulamadır inhibitör kontrol eksikliği bağımlılık uyuşturucu ya da stres gibi inhibitör denetim yeteneğini etkileyebilir diğer faktörlere maruz kaldıktan sonra keşfetmek için hızlı ve hassas bir yol. Sinirsel mekanizmalar açıkları inhibitör kontrol altında yatan incelenmesi için bir roman davranış stratejisi de sağlar. Ayrıca, alternatif değişiklikler bu görevi eklenir. Örneğin, sosyal uyarıcı ile cinsel uyarıcı değiştirerek maliyet/fayda oranı değiştirme daha fazla davranışsal anlamlar ortaya çıkarabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu çalışmada uluslararası inceleme Kurulu (IRB tarafından) Psikoloji Enstitüsü, Çin Bilimler Akademisi onaylanmıştır ve tüm deneyler için bakım ve kullanım laboratuvar hayvanlarının (Ulusal kurumları, Sağlık (ABD) Kılavuzu doğrultusunda yapılmaktadır 2011).
1. malzeme ve çatışma Model için kurulum
- Evin dört fareler kafesi (50 cm uzun x 22.5 cm geniş x 30 cm yüksekliğinde) koloni Oda ısı kontrollü (22-25 ° C) ile ve en az 10 gün için tersine çevrilmiş 12 h/12 h açık/koyu döngüsü (ışıkları burada 22:00).
Not: Deneyler, başında 330 – 400 ve 230-250 g ağırlığında erkek ve dişi Sprague-Dawley Rat sırasıyla kullanılmıştır. - Karanlık aşamasında loş ışık altında tüm sınamaları gerçekleştirin.
- Opak kartonları kullanın (37 cm uzun x 26 cm geniş x 18 cm yüksekliğinde) çam ile taşımak için ahşap tıraş yatak odaları test için ev mağaraları tarafından fareler.
- Sıçan deneyleri başlamadan önce 5 gün boyunca günde 3 dk her başa.
- 120 mL morfin bütün deneyin için hazırlayın. Morfin hidroklorür % 0,9 içinde erimesi NaCl (fizyolojik serum) 20 mg/mL nihai bir konsantrasyon. (RT) oda sıcaklığında saklayın.
- 10 mL Fentobarbital sodyum çözeltisi ameliyat için hazırlayın. % 0,9 sodyum Fentobarbital erimesi NaCl, 1 g/mL bir konsantrasyon. 4 ° C'de mağaza
- 10 mL estradiol benzoat (EB) ve progesteron 10 mL estrus yapay indüksiyon için hazırlayın. Estradiol benzoat ve progesteron susam yağı 0,125 mg/mL ve 5 mg/mL, konsantrasyon, sırasıyla geçiyoruz.
Not: EB veya progesteron için en az 1 saat su banyosunda (55-60 ° C) petrol süspansiyon kuluçkaya ve sonra iyice çalkalanır. EB veya progesteron tamamen çözülmüş emin olun. Mağazada RT. - Riskli ödül arayan davranış testleri için siyah akrilik camdan açık alanlı ödül-yakınlık Chambers'ı kullanın. Vasıl bir son-in açık alanlı arena (85 cm uzun x 35 cm geniş x 50 cm yüksekliğinde) bir tel-ekran uyarıcı kafes monte (15 cm uzun x 25 cm geniş x 25 cm yüksekliğinde). Yaklaşık 20 cm uyarıcı kafesin önünde yerde pimleri ile yönetim kurulu yükleyin.
Not: İğne 34,5 cm sabit uzun x 13 cm genişliğinde panoları (şekil 1). Kurulları üç tür iğne ile sırayla (Tablo 2) test sırasında kullanılır.
2. estrus indüksiyon kadın ve erkeklerde eleme çiftleşme
-
İkili ovariectomy dişi rats
Not: Cerrahi aletler ve kullanılan diğer öğeler steril olur. Ve cerrahi aseptik teknik kullanılarak gerçekleştirilir.- Cerrahi aletler ve malzemeler neşter, cerrahi bıçaklar, Kan durdurucu sargı forseps, cımbız, oftalmik makas, gazlı bez, pamuk temizleme bezi, dikiş iğneleri ve ipek dikiş peşin, gibi hazırlamak yanı sıra % 75 alkol, iyot, sodyum Fentobarbital, % 0,9 NaCl, penisilin sodyum.
- İntraperitoneally Fentobarbital sodyum (55 mg/kg), dişi rats tam anestezi için bekleyen enjekte et. Fareler sorunsuz respire ve kuyruk tutam tepki veriyorlar.
Not: Dişi sıçan ağırlığı en az 240 g ulaştığında ovariectomy gerçekleştirilir. - Dişi sıçan yüzükoyun sígara yerleştirin, kürk arkasında kapalı tıraş ve maruz kalan deri iodophor ile dezenfekte. Ardından bir neşter arkadaki (göğüs kafesi kenarından 1 cm) bir orta dikey kesi (yaklaşık 2 cm uzunluğunda) yapmak için kullanın.
- Cilt sol tarafına çekin ve blunt incelemek subkutan doku Kan durdurucu sargı Forseps ile bel kasları ortaya çıkarmak için. Yağ dokusu ulaşana kadar kas Katmanı (1 cm kesi) karın boşluğuna kesti.
- Yağ dokusu bükülmüş cımbızla çekin ve bir et-pembe dokudur yumurtalık bulun (hakkında 0.5 cm 0.4 cm x 0,3 cm x) yağ dokusu twining fallop tüpü yüzeyi ile çevrili.
- Forseps ile fallop tüpü kelepçe ve bu ligate sonra yumurtalık çevreleyen yağ dokusu ile birlikte kesti.
- Artık fallop tüpü ve yağ dokusu karın boşluğuna kanama yok olduktan sonra koy ve kas katmanı dikiş.
- Diğer tarafta yumurtalık aynı yordam tarafından kaldırmak ve cilt kesi dikiş at.
- Isıtmalı battaniye uyanış kadar fare yerleştirin ve ev kafesin içine geri koy.
- Kurtarma en az iki hafta sonra dişi rats tarama ve davranışsal test çiftleşme için bir araç olarak kullanın.
Not: Ameliyattan sonra dişi sıçan durumunu dikkat ve yeterli su ve yiyecek verin. Ovariectomized fareler tek bir haftalığına yer tutmak ve sonra dört kafes başına evde.
-
Dişi rats Ovariektomili içinde estrus indüksiyon
- Tüm ovariectomized dişi rats üç tarama çiftleşme için kullanmadan önce (3 dakika/gün) işlemek.
- Yavaşça sol el ile taşıma kutusundan bir sıçan almak ve bir kaç saniyeliğine kollarında tutun. Daha sonra fareyi geri kutuya koymak ve 3 min için bu işlemleri tekrarlayın.
- Subkutan estradiol benzoat (25 μg/fare) enjekte 48-52 tarama veya çakışma test çiftleşme önce h.
- Subkutan progesteron (1 mg/fare) enjekte yaklaşık 4-6 tarama veya çakışma test çiftleşme önce h.
Not: Östrojenik hormonlar subkutan boyun arkasında enjekte edilir. Bu yana estrus çevriminin ~4\u20125 gün sürer, dişi rats haftada bir kez kullanılır.
- Tüm ovariectomized dişi rats üç tarama çiftleşme için kullanmadan önce (3 dakika/gün) işlemek.
-
Erkek rats performans çiftleşme için eleme
Not: Tarama karanlık ışık/karanlık döngüsü aşamasında konut odaya loş ışık altında yapılır.- Bir erkek fare tek tek karton yerleştirin (60 cm uzun x 50 cm genişliğinde x 40 cm yüksekliğinde) ile çam ahşap tıraş yatak ve 5 min için alıştırmak için bırakın.
- Karton ve monitör erkek çiftleşme davranışları (tarafından deneyimli gözlemciler) içine estrous bir dişi sıçan tanıtmak.
- Erkek rats 30 dk içinde ilk boşalma tamamlamak veya sıra 15 dk içinde veya boşalma 30 dk içinde görüntüleme sonra fareler geri ev kafesleri için koymak.
- Tarama (üç gün üst üste için başarılı boşalma) geçmek erkek rats rastgele (serum fizyolojik ve morfin tedavi grupları gibi) farklı gruplara atayın.
3. ön içinde çatışma Test öncesinde erkek Rats
-
Alem benzeri morfin tedavisi
Not: Erkek rats intraperitoneally serum enjekte veya morfin teslim bir alem benzeri rejimi14 (Tablo 1).- Erkek rats tartmak ve vücut ağırlığı üzerinde dayalı her fare için enjeksiyon hacmi hesaplamak (bkz. Tablo 1).
- Şırınga morfin veya serum çözümleri ile hazırlayın.
- Bir fare intraperitoneally bir kerede enjekte ve hemen eve kafes (4 fareler/kafes) yavaşça yerleştirin.
- En az 6 saat sonra erkek rats aynı şekilde ikinci enjeksiyonu yap.
-
Akut stres
Not: Ayak şokları ile dört şok jeneratörler monte ve bir bilgisayarda yüklü profesyonel yazılım tarafından kontrol dört özdeş odalarında her çatışma test önce teslim edilir.- Çakışma test günü, başka bir Oda Oda test çatışma--dan farklı erkek rats almak.
- Erkek rats odaları koymak (30,5 cm uzun x 25,4 cm x 30,5 cm yüksek geniş) için 1 dk alıştırmak için.
- Yazılım programını önceden ayarlayın. Program 10 dk içinde teslim aralıklı ayak şoklara içerir (0,5 mA x 0.5 s x 10 min; arası darbe aralığı 40 s, 10-70 s aralığı ortalama).
- Hayvan kimlik girin ve şok jeneratörler göre gruplandırma (şok grubu ve kontrol grubu) etkinleştirmek seçin. Sonra Başlat düğmesine basın.
- Stres yordamı tamamlandığında, fareler hemen taşıma kutuları çatışma test odaya getirmek; kutu başına bir sıçan.
4. çatışma testi
Not: Testi açık/koyu döngüsü karanlık evre sırasında çakışma test odaya loş ışık altında yapılır.
- Test önce gün, tüm rats çatışma test odasına getir ve onları (olmadan herhangi bir engel, şekil 1) açık-alan ödül-yakınlık odasına 15dk için alıştırmak için izin.
- Test gününde 10 dakika (altında aynı koşul olarak bir gün önce test) için ücretsiz keşif izin odası erkek fare yerleştirin.
- Bir teşvik olarak uyarıcı kafeste estrous bir dişi fare yerleştirin ve özgürce bir yaklaşım tabi erkek izin ve 5 min için teşvik sıçan araştırmak.
Not: Erkek fare rasgele estrous bir kadın olarak sunulur ve bu dişi bildik bir sıçan değil. - 5 dk ücretsiz yaklaşım sonra erkek konu uyarıcı-kafes arena, diğer ucunu taşımak bir engel (14 cm çapındaki sedye ile iğne kalın) yerleştirin ve ilk deneme testi başlatın.
Not: Engelleri zorluk derecesine pimleri türleri ve yönetim kurulu yüksekliğini dayalı denemeler arasında değişmekteydi. Derecelendirme sistemi Tablo 2' de gösterilmiştir. - Erkek fareyi uyarıcı-kafes uzak hareket her zaman sonra 15-20 s engel surmounts.
- Son bir deneme erkek konu tırmanıyor veya engel atlar 3 kez 4 dk içinde ve hemen sonraki deneme engel zorluk artan ile başlayın.
- Erkek bir konu engel üç defadan daha az 4 dk içinde surmounts varsa test bitirmek ve engel surmounts kez kaydedebilirsiniz.
- Erkek fareyi ev kafese geri getirmek ve açık alan odası % 0.05 buzul Asetik asit ile fırçalayın.
- Puan her Tablo 2başına yokedici (veya yaklaşan). Puanları toplamı tüm surmountings için bu çatışma testinde erkek bir konu için bir toplam puan olarak kullanın.
5. istatistiksel analiz
- ± SEM veya tek veri noktası anlamına veri mevcut. -Dibi takdirde o homojenliği sapma veya normal dağılım veri kümeleri meydan, günlük-veri kümeleri dönüşümü.
- 7. gün ve gün 17 çekildiği (Wd7 ve Wd17) görüntülenen ödül davranışı üzerinde morfin Önarıtma etkilerini çözümlemek konular arasında faktör (morfin karşı serum, Şekil 2) olarak t-"ön" testlerle kullanma.
- Morfin Önarıtma tekrarlanan-ölçü birimi 's Varyans analizi (ANOVA) kullanarak test "para çekme zamanla" tekrarlanan sonra ödül-arama davranışı üzerinde etkilerini çözümlemek (Wd7 Wd14 karşı) konular içinde faktörü ve "ön" (morfin karşı olarak serum fizyolojik) konular arasında faktör olarak.
- Buna ek olarak, Pearson korelasyon puanları arasındaki korelasyon günlerde oruç (Wd7 ve Wd14, şekil 3) 7 ve 14 elde o erkek konular çözümlemek için kullanın.
Not: Özgün verilerin Logaritmik dönüşüm sonra İstatistiksel analizler yapılmaktadır. - Ödül-arama davranışı konular arasında faktör (şok karşı kontrol, şekil 4) olarak stres ile t-testi kullanarak uyuşturucu-saf Sıçanlarda akut stres etkisi analiz
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu çatışma model afyon tarafından indüklenen uyumsuz/riskli ödül-arama davranışı ortaya çıkarabilir olup olmadığını araştırmak için serum ve morfin ön işleme gruplar tarafından görüntülenen ödül arayan davranışları t-testleri tarafından kısa vadeli (Wd7) sonra karşılaştırıldı ve morfin uzun vadeli (Wd17) çekilme sırasıyla (Şekil 2). 7. gün ve gün 17 çekildiği, morfin ön işleme fareler salin ön işleme fareler daha önemli ölçüde daha fazla yaklaşan davranışları gösterdi sonuçlar gösterir (şekil 2a: t =-3.958; d.f. = 24; p < 0,01. Şekil 2b: t =-2.350; d.f. = 17; p < 0,05), morfin içine kapanık fareler caydırıcı engel karşısında daha fazla perseverative davranışları ve bu uyumsuz davranış görüntülenen öne çekilmesinden sonra uzun bir süre devam ederse.
Fareler sürekli çatışma görev (şekil 3) altında test edildi, tekrarlanan-ölçü ANOVA Önarıtma önemli bir temel etkisi gösterdi (F (1,24) = 12.910; p < 0,01). Ben de önemli etkisi para çekme zaman (Wd7 ve Wd14, karşılaştırma [F (1,24) 0.807; = p > 0.05]) ne de önemli bir etkileşimde (çekilme tedavi öncesi etkileşim x: F (1,24) 1.093, p > 0,05 =) bulundu (bkz. şekil 3a). Riskli ödül-arama davranışı kararlılığını daha ayrıntılı araştırmaya, puanları (Wd7 ve Wd14 arasında) farklı para çekme dönemleri arasında korelasyon analiz edildi. Kısa ve uzun vadeli çekilme dönemlerde yaklaşan davranışlar önemli ölçüde correlated sonuçlar gösterdi (Pearson korelasyon: r 0.445; = p < 0,05, bakınız şekil 3b), rats riskli davranışları ödül arayan kabaca üzerinden kararlı olduğunu gösteren testler tekrarladı.
Stresli olayları hayvanlarda inhibitör kontrol yeteneği üzerinde etkisi araştırmak için uyuşturucu-saf fareler çatışma test önce bir aralıklı ayak-şok strese maruz bırakıldı. Stres ve kontrol grupları arasında anlamlı bir fark olsa (şekil 4a: t =-1.207; d.f. = 17; p > 0.05), ödül arayan davranışları BI kalıcı dağıtım ödül Aradığınız riskli davranışlar (bkz. şekil 4b) bireyler arasında belirgin fark akut stres etkileri öne stres grubu içinde görüntülenir.
Şekil 1: için çakışma test aleti Açık alan Odası (85 cm uzun x 35 cm geniş x 50 cm yüksekliğinde) ile bir uyarıcı kafes estrous bir dişi sıçan holding ödül arayan davranışları çatışma altında test etmek için kullanılmıştır. Sürekli artan bir tahta üzerinde tırmanma erkek denekler Yani, tehlikeli bir engel aşmak zorunda kaldı (34,5 cm uzun x 13 cm genişliğinde) ile uyarıcı kafes yaklaşım için pin, kalın. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: ödül Aradığınız riskli davranışlar erkek rats tarafından görüntülenen çatışma testlerinde. (bir) davranışları yaklaşan puanları morfin-(siyah) ve serum fizyolojik tedavi-(beyaz) grupları tarafından çekilmesi gün 7 görüntülenir. (b) davranışları yaklaşan puanları çekilme gün 17 morfin-(siyah) ve serum fizyolojik tedavi-(beyaz) grupları tarafından görüntülenen. Çubuklar gösterir ortalama ± SEM * p < 0,05; gösterir ** p < 0,01 gösterir; Sal Saline, Mor = = Morphine.This şekil17 izni ile modifiye edilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: arka arkaya ödül Aradığınız riskli davranışlar test günde 7 ve morfin çekilme 14. (bir) davranışları yaklaşan puanları morfin-(siyah) ve serum fizyolojik tedavi-(beyaz) grupları tarafından günde 7 ve 14 çekildiği (Wd7 ve Wd14) görüntülenir. Çubuklar ortalama ± SEM (b) riskli davranışları ödül arayan puanları iki test çekildiği 14 gün ve 7 arasında korelasyon gösterir. * p < 0,05 gösterir; ** p < 0,01 gösterir. Sal Saline, Mor = morfin =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: çatışma testini de ödül arayan davranışları üzerinde ayak-şok stres etkisi (bir) davranışları yaklaşan puanları (gri) denetim tarafından görüntülenen ve (siyah) grup için serum fizyolojik Önarıtma tabi şok. Çubuklar gösterir ortalama ± SEM * p < 0,05; gösterir ** p < 0,01 gösterir. (b) denetim ve şok gruplar tarafından görüntülenen davranışları yaklaşan puanları tek hata noktaları içinde gösterilir. Bu rakamlar başvuru17 izni ile değiştirildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
| Gün 1 | 2. gün | 3. gün | 4. gün | Gün 5 | |
| 1st enjeksiyon | 10 mg/kg | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
| 2nd enjeksiyon (daha sonra 6 h) | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
Tablo 1: alem benzeri morfin tedavi rejimi. Erkek rats ön işleme iki kez her gün serum ya da aşırı benzeri rejimi17' teslim morfin mayi enjeksiyonu ile 5 gün: 10, 20, 20, 40, 40, 40, 40, 40, 40 ve 40 mg/kg. En az 6 saat arayla iki doz morfin her gün idare vardır.
| Deneme | Engel | Yaklaşım puanlama |
| 1 | bir + 0 cm | 0,5 |
| 2 | bir + 2 cm | 1.0 |
| 3 | bir + 4 cm | 1.5 |
| 4 | b + 4 cm | 3.0 |
| 5 | b + 7 cm | 3.5 |
| 6 | b + 10 cm | 4.0 |
| 7 | b + 13 cm | 4.5 |
| 8 | b + 17 cm | 5.0 |
| 9 | c + 17 cm | 6.0 |
| 10 | c + 21 cm | 6.5 |
| 11 | c + 25 cm | 7.0 |
| 12 | c + 29 cm | 7.5 |
Tablo 2: zorluk miktarı için konu sınıflandırma yaklaşım fethetti. Pins ve iğneler arasındaki ortalama uzaklığı uzunluğuna göre yönetim kurulu ile iğne kalın üç tür kullanılmıştır: bir PIN-0.5 cm, 1 cm; ortalama mesafe uzunluğu ile b PIN-0,8 cm, 0,5 cm ortalama mesafe uzunluğu ile; ve c PIN-2 cm, 1 cm ortalama mesafe uzunluğu ile. Yönetim Kurulu tekrar tekrar aşağıdaki gibi artan: 0, 2, 4, 7, 10, 13, 17, 21, 25 ve 29 cm. Böylece, test sırasında 12 seviyeleri Yani, 12 denemeler, engel, yokedici zorluk vardır. Zorluk konu miktarı fethetti uyarıcı kafese attı ve özetlenebilir yaklaşım her zaman her konu17Toplam skor kadar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Uyuşturucu istismarı18 tarafından neden inhibitör kontrol açıkları kompulsif davranışlar arayan/alarak ilaç teşvik önemli bir rol oynar ve19,20Relaps. Burada sunulan çatışma modeli için bağımlılık uyuşturucu maruz kalan bireylerin inhibitör denetim değişiklikleri keşfetmek için yeni bir yaklaşım sağlar.
Protokolünde çeşitli kritik adımlar vardır. İlk olarak, konular (erkek rats) izleme çakışma görev girmeden önce cinsel deneyim almanız gerekir. Örneğin, erkek rats (en az üç kez uyuşturucu tedavi öncesi copulating) birleşme için tarama geçmesi gerekir ve farklı gruplar halinde rasgele atanır. Sorunsuz eleme birleşme taşımak için iki nokta dikkat edilmesi. Vücut ağırlığı ile ovariectomy üzerine dişi rats biridir. Dişi rats ağırlığı en az 240 g ulaştığında ovariectomy gerçekleştirilir. Dişi rats vücut olgunlaşma Gonad olgunlaşma21' den sonra oluşur beri erken ovariectomy dişiler yönetilen östrojenik hormonlar olmalarına rağmen başarıyla dişi rats ile copulating gelen erkek rats engel olabilir. Diğer erkek rats tarama kutularına çiftleşme dişi rats ile daha önce neophobia bir roman içeriğinde etkisi aşağıdaki birleşme önlemek için alıştırmak ki zaten.
Stres faktörlerine deney boyunca sıkı bir şekilde kontrol edilmesi gerekmektedir. Hem erkek hem de dişi fareler işlendiği ve çatışma Görev başlatılmadan önce ulaşım habituated. Ayrıca, test gününden önce sırasında habituation ödül-yakınlık odasına erkek rats art arda kavradı ve uyarıcı kafes önden odanın öbür ucuna kadar birkaç kez taşındı.
Çatışma görevi devam ettikçe, engel (yönetim kurulu pin ile) art arda artan, böylece engel arkasında erkek rats göremiyorum veya doğrudan uyarıcı kafeste dişi fare daha fazla hissediyorum. Sürekli cinsel ortağı tarafından çekici erkek rats tutmak için estrous dişi rats tarafından kirli bazı yatak malzemesi yerleştirilir uyarıcı kafeste kadın kokusu havada diffüz izin. Eleketrik Yatak takımlar çatışma görev öncesinde toplanan ve kadar kullanmak-20 ° C'de depolanan.
Morfin tedavisi bırakma sonra 3 gün ortadan fiziksel yoksunluk belirtileri erkek rats acı daha sonra14. Onların paws pins tarafından pricked bir olasılık olsa da, hiçbir ciddi veya idame ettiren yaralanma algılandı ve erkekler faaliyetleri değil etkiledi.
Bu çakışma görevde, bir de ödül değeri ile bir erkek fare (sosyal ödül)14,16dişi fare (cinsel ödül) değiştirerek ödül değeri değiştirme ödül arayan davranışları, örneğin, etkisini araştırabilirsiniz. Cinsel ve sosyal senin bir deneyde kullanılan, iki ödül-yakınlık Odaları, bir cinsel ödül için ve sosyal ödül için başka bir deneme çalıştırmak en iyi olur. Deneme bir odasında uygulanacak varsa, odası ve uyarıcı kafes dikkatle % 0,1 buzul Asetik asit testleri, yanı sıra konular arasında koku Çapraz bulaşma arasında erkek ve dişi uyaranlara önlemek için ilaç artıklarından . Gemide pim erkek rats için onların sürekli tehdit emin olmak için düzenli olarak yenilenmesi gerekir.
Erkek rats performans etkisi ile tekrarlanan bu çatışma görevi altında test egzersiz tabi olabilir. Bazı hayvanlar (özellikle serum ön işleme Rat) iğneleri ikinci test sırasında (şekil 3a) üzerinde engel atlama egzersiz yoluyla daha iyi önlemek olabilir fark ettik. İki tekrarlanan testler sırasında ödül Aradığınız riskli davranışlar arasında önemli bir ilişki rağmen olmamıştır Bu görevi yüksek ve düşük riskli fenotipleri göre ödül arayışında tanımlamak için kullanılabilir eğer doğrulanmadı. Bu nedenle, defa bu çatışma görevi hızlı bir şekilde herhangi bir değişiklik inhibitör denetimindeki farmakolojik veya davranışsal tedaviler sonra soruşturma için uygundur.
Başla/başlama-görev, stop sinyal görev, birden çok seçenek seri reaksiyon zamanı görev ve öğrenme ters ile karşılaştırıldığında, hangi görevleri2,5 kurallarını öğrendikten sonra inhibisyon uygunsuz tepkiler üzerine konunun yeteneklerini yansıtmak , bu çatışma görevi konuları öğrendim herhangi bir yanıt inhibe ama kendiliğinden özlem/motivasyonlarını olası negatif sonucu nedeniyle inhibe gerek yoktur. Dolayısıyla bu çatışma görevi daha iyi taklit çakışma durumu hangi bağımlıları sık sık yüz ve maliyet ve fayda kadar ağırlığında psikolojik işlemi sırasında inhibitör kontrol yeteneği incelemek için yardımcı olur. Ayrıca,22,23 yapma veya görev24,25, kumar riskli karar gibi karar verme diğer görevleri aksine bu çatışma görevi gerçekleştirmek, sadece tek oluştuğu daha kolay ve basit ödül ve tek risk.
Biz kurulan çatışma model uyuşturucu ilaç maruz kaldıktan sonra inhibitör kontrol açıkları ortaya çıkarmak için kullanılabilir — morfin. Bu davranış modeli aynı zamanda hızlı bir şekilde inhibitör denetim tarafından diğer bağımlılık uyuşturucu indüklenen bozulma keşfetmek için yararlı olacağına inanıyorum. Ayrıca, güvenilir uyuşturucu kaynaklı kompulsif ödül arayan davranış fenotip bu çatışma modeline bağlı olarak tespit edilecektir. Şu anda, biz böylece ayak şoklar için erkek rats teslim edilebilir ve ayrıca art arda hayvanın davranışları karşısında ödül arayan ölçüm davranış yordamı değiştirme engel (pins-in tam pansiyon) elektrikli bir kılavuz ile değiştirmek için çalışıyoruz negatif sonucu (ayak şoklara). Bilindiği gibi afyon26,27analjezik etkisi nedeniyle muhtemelen olan uyuşturucu kaynaklı kompulsif ödül davranışı şimdiye kadar hiçbir kullanılabilir davranış modeli vardır.
Klinik olarak, stres uyuşturucu para çekme28sonra relapse için önde gelen önemli faktörlerden biridir. Buna ek olarak, stres de davranışsal inhibisyon/dürtüsellik/compulsivity29etkileyen önemli bir faktör var. Bu çakışma modeli ayrıca çeşitli stresli olayları etkileri hızla kötüye uyuşturucu maruz aşağıdaki konularda inhibitör kontrol yeteneği üzerinde gözlemlemek için bize izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu kağıt Post-traumatic stres hastalar nüfus (JCYJ20170413170301569) için CA anahtar laboratuvar ruh sağlığı, Psikoloji Enstitüsü (KLMH2016K01) ve değerlendirme ve müdahale teknoloji araştırma tarafından desteklenmiştir
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | Beijing Tongguangjingxi Chemical company | CN No.81601 | CH3COOH |
| Benzypenicillin sodium for Injection | Huabei Pharmaceutical | F7072109 | C16H17N2NaO4S |
| Cotton swabs | Wan Xin, Shandong, China | 8 cm | |
| β-estradiol benzoate | SIGMA-ALDRICH | E8515-200MG | estradiol benzoate |
| Gauze | Wan Xin, Shandong, China | 21s × 21s 110×100 | |
| Hemostatic forceps | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Morphine hydrochloride | Qinghai Pharmaceutical Co. Ltd | 20100105 | Morphine hydrochloride |
| Ophthalmic scissors | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Pentobarbital Sodium | Sigma | C11H17O3N2Na | |
| Precision animal shocker | Coulbourn | ||
| Progesterone | SIGMA-ALDRICH | V900699-5G | progesterone |
| Sesama oil | Fengyi trading company ltd. | Sesama oil | |
| Sodium chloride injection | HuaLu Pharmaceutical | H17092107 | NaCl |
| Scalpels | Gillette | 96797241 | |
| Surgical blades | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Suture needles | Han Qin, Shanghai, China | Δ1/2 6×14 | |
| Silk sutures | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Sprague-Dawley rats | Vital River Animal Center, Beijing, China | Sprague-Dawley | animal strain |
| Syringe | WeiGao Group Medical Polymer Co.Ltd | 1 mL, 2 mL | |
| Tweezers | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. |
References
- Everitt, B. J., Robbins, T. W. Drug Addiction: Updating Actions to Habits to Compulsions Ten Years On. Annual Review of Psychology. 67, 23-50 (2016).
- Bari, A., Robbins, T. W. Inhibition and impulsivity: Behavioral and neural basis of response control. Progress in Neurobiology. 108, 44-79 (2013).
- Dalley, J. W., Everitt, B. J., Robbins, T. W. Impulsivity, compulsivity, and top-down cognitive control. Neuron. 69 (4), 680-694 (2011).
- Peter, W., Kalivas, N. D. V. The Neural Basis of Addiction: A Pathology of Motivation and Choice. American Journal of Psychiatry. 162, 1403-1413 (2005).
- Morein-Zamir, S., Robbins, T. W. Fronto-striatal circuits in response-inhibition: Relevance to addiction. Brain Research. 1628, 117-129 (2015).
- Garavan, H. Dissociable Executive Functions in the Dynamic Control of Behavior: Inhibition, Error Detection, and Correction. Neuroimage. 17 (4), 1820-1829 (2002).
- Garavan, H., Ross, T. J., Kaufman, J., Stein, E. A. A midline dissociation between error-processing and response-conflict monitoring. Neuroimage. 20 (2), 1132-1139 (2003).
- Connolly, C. G., Foxe, J. J., Nierenberg, J., Shpaner, M., Garavan, H. The neurobiology of cognitive control in successful cocaine abstinence. Drug and Alcohol Dependence. (1-2), 45-53 (2012).
- Kaufman, J. N., Ross, T. J., Stein, E. A., Garavan, H. Cingulate hypoactivity in cocaine users during a GO-NOGO task as revealed by event-related functional magnetic resonance imaging. The Journal of Neuroscience. 23 (21), 7839-7843 (2003).
- Forman, S. D., et al. Brain activity of opiate addicts predicts subsequent treatment retention. Annual Meeting of the American-College-of-Neuropsychopharmacology. , DEC 12-16 (2004).
- Kolokotroni, K. Z., Rodgers, R. J., Harrison, A. A. Acute nicotine increases both impulsive choice and behavioural disinhibition in rats. Psychopharmacology. 217, 455-473 (2011).
- Belin-Rauscent, A., et al. From impulses to maladaptive actions: the insula is a neurobiological gate for the development of compulsive behavior. Molecular Psychiatry. 21 (4), 491-499 (2016).
- Groman, S. M., et al. Dysregulation of D(2)-mediated dopamine transmission in monkeys after chronic escalating methamphetamine exposure. Journal of Neuroscience. 32 (17), 5843-5852 (2012).
- Bai, Y., Li, Y., Lv, Y., Liu, Z., Zheng, X. Complex motivated behaviors for natural rewards following a binge-like regimen of morphine administration: mixed phenotypes of anhedonia and craving after short-term withdrawal. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 23 (2014).
- Vandaele, Y., Janak, P. H. Defining the place of habit in substance use disorders. Progress in Neuropsychopharmacology & Biological Psychiatry. 87 (Pt A), 22-32 (2018).
- Li, Y., et al. The consummatory and motivational behaviors for natural rewards following long-term withdrawal from morphine: no anhedonia but persistent maladaptive behaviors for high-value rewards. Psychopharmacology (Berl). 234 (8), 1277-1292 (2017).
- Bai, Y., Belin, D., Zheng, X., Liu, Z., Zhang, Y. Acute stress worsens the deficits in appetitive behaviors for social and sexual stimuli displayed by rats after long-term withdrawal from morphine. Psychopharmacology. 234, 1693-1702 (2017).
- Schoenbaum, G., Saddoris, M. P., Ramus, S. J., Shaham, Y., Setlow, B. Cocaine- experienced rats exhibit learning deficits in a task sensitive to orbitofrontal cortex lesions. European Journal of Neuroscience. 19 (7), 1997-2002 (2004).
- Belin, D., Belin-Rauscent, A., Murray, J. E., Everitt, B. J. Addiction: failure of control over maladaptive incentive habits. Current Opinion in Neurobiology. 23 (4), 564-572 (2013).
- Everitt, B. J. Neural and psychological mechanisms underlying compulsive drug seeking habits and drug memories--indications for novel treatments of addiction. European Journal of Neuroscience. 40 (1), 2163-2182 (2014).
- Dai, F., et al. Dynamic Development of Organs and Serum Sex Hormone Levels in Normal Pre-pubertal Female Sprague-Dawley Rats. Chinese Journal of Comparative Medicine. 19 (07), 33-37 (2009).
- Orsini, C. A., Trotta, R. T., Bizon, J. L., Setlow, B. Dissociable roles for the basolateral amygdala and orbitofrontal cortex in decision-making under risk of punishment. Journal of Neuroscience. 35 (4), 1368-1379 (2015).
- Shimp, K. G., Mitchell, M. R., Beas, B. S., Bizon, J. L., Setlow, B. Affective and cognitive mechanisms of risky decision making. Neurobiology of Learning and Memory. , 60-70 (2015).
- Di Ciano, P., Le Foll, B. Evaluating the Impact of Naltrexone on the Rat Gambling Task to Test Its Predictive Validity for Gambling Disorder. PLoS One. 11 (5), e0155604 (2016).
- Ravel, N., et al. Elucidating Poor Decision-Making in a Rat Gambling Task. PLoS One. 8 (12), e82052 (2013).
- Charles, A., Pradhan, A. A. Delta-opioid receptors as targets for migraine therapy. Current Opinion in Neurology. 29 (3), 314-319 (2016).
- Lu, Z., et al. Truncated mu-Opioid Receptors with 6 Transmembrane Domains Are Essential for Opioid Analgesia. Anesthesia & Analgesia. 126 (3), 1050-1057 (2018).
- Sinha, R., Shaham, Y., Heilig, M. Translational and reverse translational research on the role of stress in drug craving and relapse. Psychopharmacology (Berl). 218 (1), 69-82 (2011).
- Wilson, C. A., Schade, R., Terry, A. V. Variable prenatal stress results in impairments of sustained attention and inhibitory response control in a 5-choice serial reaction time task in rats. Neuroscience. 218, 126-137 (2012).
