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Medicine

दूरस्थ प्रयोगशाला प्रबंधन: श्वसन वायरस निदान

Published: April 6, 2019 doi: 10.3791/59188
Automatic Translation
1,2, 3, 1, 3, 3, 1,2
1Baylor Global Health, Baylor College of Medicine, 2Department of Medicine, Baylor College of Medicine, 3Department of Molecular Virology and Microbiology, Baylor College of Medicine

Summary

एक तेजी से-deployable, ऑफ-ग्रिड प्रयोगशाला बनाया गया है और दूरदराज के लिए बनाया गया है, संसाधन-विवश वैश्विक सेटिंग्स. सुविधाओं और logistically बढ़ाया, विस्तार योग्य, multifunctional प्रयोगशाला मॉड्यूल के महत्वपूर्ण पहलुओं का पता लगाया है । एक बुनियादी प्रयोगशाला कार्यप्रवाह और एक श्वसन वायरल नैदानिक परीक्षण के लिए एक प्रोटोकॉल के लिए एक चेकलिस्ट विकसित और प्रस्तुत कर रहे हैं ।

Abstract

हाल की महामारी में एक इजाफा (इबोला, जिका, MERS, इंफ्लूएंजा, आदि) एक ' अधिक फुर्तेशी ' की जरूरत को रेखांकित करता है, समन्वित प्रतिक्रिया है कि परिवहन, उपयोग, सुविधाओं, उपकरणों से लेकर मुद्दों की एक भीड़ को संबोधित, और प्रदाता के लिए संचार प्रशिक्षण. इस जरूरत को पूरा करने के लिए हमने एक अभिनव, स्केलेबल, लॉजिस्टिक्स-एंहांस्ड, मोबाइल, आपात स्थिति के लिए प्रयोगशाला सुविधा और संसाधन-विवश वैश्विक सेटिंग में महामारी का विकास किया है । एक अकादमिक चिकित्सा केंद्र के रूप में नैदानिक कार्यों में एक पृष्ठभूमि का उपयोग, हम महामारी के दौरान दूरदराज के क्षेत्रों में दवाओं और आपूर्ति की ट्रैकिंग और प्रबंधन के लिए उपयोगकर्ता के अनुकूल सॉफ्टवेयर के साथ एक तेजी से-deployable, मॉड्यूलर बीएसएल-2 और बीएसएल-3 सुविधा का डिजाइन किया है और प्रकोपों. यहां हम अपने इंटरमोडल, मोबाइल, विस्तारणीय शिपिंग-कंटेनर प्रयोगशाला इकाइयों को प्रस्तुत करते हैं । प्रयोगशाला के डिजाइन से बिजली की खपत को कम करके और वैकल्पिक जल स्रोतों की अनुमति देकर ऑफ-ग्रिड उपयोग की सुविधा मिलती है । यूनिट के सूचना संचार प्रौद्योगिकी (आईसीटी) मंच प्रदान करता है (i) उपयोगकर्ता के अनुकूल गोली आधारित प्रलेखन, (ii) रोगियों और आपूर्तियों की ट्रैकिंग में वृद्धि, और (iii) अंतर्निहित टेलीहेल्थ क्षमताओं के साथ एकीकृत संचार स्थल । दूरदराज के वातावरण में गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए, हम एक बुनियादी प्रयोगशाला कार्यप्रवाह और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया (आरटी-पीसीआर) का उपयोग कर श्वसन वायरल निदान के लिए एक प्रोटोकॉल के लिए एक चेकलिस्ट विकसित की है । के रूप में वर्णित है, इस अभिनव और व्यापक दृष्टिकोण संसाधन में प्रयोगशाला क्षमता के प्रावधान के लिए अनुमति देता है सीमित वैश्विक वातावरण ।

Introduction

रैपिड डायग्नोस्टिक्स समय पर वायरल संक्रमण नियंत्रण में एक महत्वपूर्ण साधन है, खासकर अगर जल्दी लक्षण संक्रमण रोगों की एक किस्म के लिए अविवेच्य है । हाल ही में इबोला का प्रकोप (2014-2015) पश्चिम अफ्रीका में1,2, zika वायरस महामारी (2015-2016) एशिया और लैटिन अमेरिका में3,4, मध्य पूर्व श्वसन सिंड्रोम (MERS) का उद्भव कोरोनाविरस संक्रमण5,6, और असामांय रूप से घातक फ्लू (इंफ्लूएंजा) महामारी (2017-2018) अमेरिका में7,8 तेजी से-deployable, प्रयोगशाला सुविधाओं है कि एक भीड़ का पता के लिए की जरूरत को उजागर परिवहन, उपयोग, सुविधाओं, उपकरण, और संचार से मुद्दों ।

ऑफ-ग्रिड क्षमता (स्वायत्त बिजली और पानी की आपूर्ति, आदि) ग्रामीण, संसाधन-विवश वैश्विक सेटिंग्स9,10,11में महत्वपूर्ण है । नैदानिक संचालन और Baylor कॉलेज ऑफ मेडिसिन में वैश्विक कार्यक्रमों में हमारे अनुभव के लिए डिजाइन और आसान तैनाती, सेट अप और multifunctional उपयोग (बीएसएल-2 और बीएसएल-3) के लिए क्षमताओं के साथ एक कंटेनर आधारित मोबाइल प्रयोगशाला का निर्माण किया गया था । इस बहुमुखी, logistically संवर्धित प्रयोगशाला सुविधा की छवियां चित्रा 1में दिखाया गया है ।

यह तेजी से-deployable, प्रयोगशाला सुविधा एक विस्तार योग्य पहले वर्णित कंटेनर क्लिनिक के समान डिजाइन किया है (' आपातकालीन स्मार्ट Pod ')12,13,14, baylor चिकित्सा के कॉलेज द्वारा विकसित और यूएसएड द्वारा प्रायोजित । एक एकल पैक इकाई (परिवहन मोड में) 9 फीट 9 इंच x 8 फीट x 8 फीट (चित्र 1a, ख) के आयाम है, और १७० वर्ग फुट (१५.७५ मीटर2) (चित्रा 1 सी, डी) के एक क्षेत्र में फैलता है । इस यूनिट में दस मिनट से कम समय में दो से चार लोगों को तैनात किया जा सकता है ।

रिमोट लेबोरेटरी का निर्माण बीएसएल-2 प्रयोगशाला सुविधा (चित्रा 2A) के लिए एक अलग, मॉड्यूलर, कुर्की, बीएसएल-3 इकाई (चित्रा 2a) संक्रामक एजेंटों के साथ काम करने के लिए बनाया गया है कि साँस लेना के माध्यम से गंभीर या संभावित घातक रोग पैदा कर सकता है के लिए बनाया गया है 15. दो प्रयोगशाला मॉड्यूल की कनेक्टिविटी प्रयोग वर्कफ़्लोज़ के अनुकूलन, संसाधनों के बंटवारे, और लागत बचत (चित्र 2c ई) सक्षम बनाता है ।

मॉड्यूल हवा तंग और पानी के लिए एक आरामदायक, ऊर्जा कुशल मोबाइल आश्रय बनाने के तंग कर रहे हैं । हीटिंग, वेंटिलेशन, और एयर कंडीशनिंग (HVAC) प्रणाली केंद्रीकृत और तापमान नियंत्रित इकाइयों के लिए प्रयोग किया जाता है । सामान्य तौर पर, प्रयोगशाला इकाइयों के डिजाइन अपने स्वयं के वैकल्पिक बिजली स्रोतों जैसे सौर पैनलों और/या एक स्वतंत्र विद्युत जनरेटर के उपयोग द्वारा बिजली की खपत को कम करता है । प्रत्येक इकाई एक सिंक और बहाना स्टेशन, विद्युत शक्ति और पानी कनेक्टर्स (चित्रा 3a-C) भी शामिल है । आईसीटी प्लेटफॉर्म आपूर्ति ट्रैकिंग और प्रयोगशाला परिणाम प्रलेखन (चित्रा 3 डी) Baylor सूचना प्रौद्योगिकी (आईटी) के साथ साझेदारी में विकसित के लिए एक वैकल्पिक, गोली आधारित (एंड्रॉयड फोन/टैबलेट या iPhone/ अनुसंधान समूह है कि सीमित कनेक्टिविटी के साथ दूरदराज के वातावरण में काम करने में अच्छी तरह से अनुभवी है । सिस्टम सेलुलर या वायरलेस संकेतों का उपयोग कर कार्य कर सकते हैं, और कनेक्टिविटी पुन: स्थापित है जब एक सुरक्षित बादल आधारित सर्वर के लिए तत्काल बैकअप या संचरण के साथ, कनेक्टिविटी के बिना प्रलेखन की अनुमति देता है.

प्रयोगशाला में कई प्रमुख संक्रमण नियंत्रण विशेषताएं शामिल हैं: (a) नकारात्मक दबाव हवा का प्रवाह, (ख) एक दस्ताने बॉक्स या जैव सुरक्षा कैबिनेट, (ग) एक स्वास्थ्य जोखिम प्रबंधन प्रणाली: एक जर्मिनाशी पराबैंगनी (यूवी-सी) प्रकाश प्रणाली रक्षा सिद्ध के 4 पदानुक्रम का उपयोग स्वास्थ्य संबंधी संक्रमण पैदा करने वाले रोगजनकों के ९९.७% को समाप्त करने के लिए । यह सुविधा आसानी से हाइड्रोजन पेरोक्साइड या सोडियम हाइपोक्लोराइट (ब्लीच) प्रणालियों का उपयोग कुशल और प्रभावी decontamination के लिए कीटाणुरहित कर रही है । 16

गुणवत्ता प्रयोगशाला परिणामों का आश्वासन संपूर्णता नैदानिक परीक्षण प्रक्रिया के सभी पहलुओं का आकलन करने के लिए एक प्रतिबद्धता पर निर्भर करता है । यहां, हम बीएसएल-2 और बीएसएल-3 प्रयोगशाला कार्यप्रवाह, और तेजी से श्वसन वायरस नैदानिक परीक्षण के लिए एक प्रोटोकॉल के लिए एक चेकलिस्ट प्रस्तुत करते हैं । वायरल रोगों के प्रस्तावित निदान वास्तविक समय रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया (आरटी-पीसीआर) के माध्यम से नमूना (नाक धोने, रक्त, मल, और मूत्र, आदि) में वायरल आरएनए या डीएनए का पता लगाने पर निर्भर करता है । तेजी से एक नमूना में वायरल लोड का अनुमान करने की क्षमता पीसीआर वायरल रोग स्क्रीनिंग17,18के लिए एक कुशल उपकरण बनाता है । उपंयास के कार्यांवयन, आणविक नैदानिक assays की अनुमति देता है ebola जैसे वायरस के लिए नैदानिक क्षमताओं के विस्तार19,20,21, इंफ्लूएंजा8,22, और तपेदिक (टीबी )23.

इस काम का लक्ष्य एक उपंयास मॉड्यूलर और तेजी से deployable प्रयोगशाला सुविधा मांय है और प्रयोगशाला दूरदराज में काम कर रहे कर्मियों के लिए एक प्रशिक्षण गाइड प्रदान करते हैं, एक महामारी, प्राकृतिक आपदा या अंय आपात राहत के दौरान कम संसाधन वातावरण स्थिति. यहां, हम इस अभिनव, पोर्टेबल प्रयोगशाला में श्वसन इंफ्लूएंजा निदान के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं ।

Protocol

1. स्थापना

नोट: केवल 2-4 लोगों को "लेगो की तरह" प्रयोगशाला इकाई तैनात करने की आवश्यकता है । बिगड़ेगा, 4 व्यक्तियों को तैनात करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा, लेकिन यह केवल 2 के साथ संभव है ।

  1. कंटेनर को संभालने के लिए एक कांटा लिफ्ट ट्रक (चित्रा 1a,ख) या अन्य उपयुक्त उठाने डिवाइस का उपयोग. 24कंटेनरों के दो प्रकार के हैंडल करने के लिए क्षमता उठाने के ंयूनतम सात टन के साथ एक कांटा लिफ्ट ट्रक का प्रयोग करें ।
  2. एक प्रयोगशाला इकाई स्थापित करने के लिए, लगभग ९० x ६० वर्ग फुट के एक पैच का चयन करें (२७.४ x १८.३ एम2) एक सपाट परिदृश्य पर कोई अवरोधों को सुनिश्चित करने के लिए उचित लेआउट बाधा । सुनिश्चित करें कि साइट अच्छी तरह से सूखा मिट्टी के लिए साइट जल निकासी आश्वासन के रूप में इस बारिश गिरने के बाद पानी के अपव्यय के साथ संभावित समस्याओं का कारण हो सकता है । आधार है कि पहले से समतल किया गया है का उपयोग करें और है कि मुश्किल है 10 kn/dm2की एक ंयूनतम संपीडन शक्ति की मिट्टी संकुचित । आसपास के क्षेत्र को अपने वाहन उपकरण से इकाई को उतारने के लिए आवश्यक उपकरणों तक पहुंच की अनुमति देनी चाहिए और कार्य को पूरा करने के लिए सहायता उपकरणों को समायोजित करना चाहिए ।
  3. इकाई या इकाइयों को अपनी ' ट्रांसपोर्ट मोड ' में चयनित साइट के केंद्र में रखें और स्तर समायोजित करें । प्रत्येक इकाई चार leveling जैक के साथ सुसज्जित करने के लिए एक साइट है कि ६.५% की एक अधिकतम ग्रेड है पर तैनाती की अनुमति है (~ 4 डिग्री) । कंटेनरों के लिए ंयूनतम ऊंचाई ~ 6 इंच है सुनिश्चित करने के लिए कि फर्श नालियों और निर्वहन पाइप ठीक से काम करते हैं । जैक का विस्तार नहीं 12 इंच से अधिक है । जैक के हाथ में समर्थन कोष्ठक संलग्न करें । सुनिश्चित करें कि कंटेनर प्रत्येक नीचे रेल के केंद्र में एक बुलबुला leveler रखकर स्तर है । इकाई का विस्तार नहीं है जब तक यह ठीक से तैनात किया गया है!
  4. पूर्ण कार्यक्षमता के लिए पैनलों को खोलकर इकाई का विस्तार करें । पहले दो टुकड़ा समर्थन ध्रुव का पता लगाएं । समर्थन ध्रुव कनेक्ट करें ताकि इसकी ऊंचाई कंटेनर इकाई के रूप में लगभग उच्च हो । ध्रुव उपयोगकर्ता पैनल खोलने के लिए और छत के पैनल के वजन के रूप में पक्ष दरवाजे खोल रहे है समर्थन की अनुमति देता है । वहां एक सुरक्षा क्लिप है कि एक पिन के रूप में कार्य करता है पैनलों बंद रखने के लिए । पहले सुरक्षा क्लिप निकालें, फिर लिफ्ट और छेद से कैम लॉक पिन खींच. लीवर के पीछे पिन रखें और बाहर के कंटेनर के नीचे (विस्तार योग्य) पक्षों पर स्थित कैम लॉक लीवर के रास्ते से बाहर.
  5. छत पैनल 1 विचार है कि इस पैनल गैस struts है और एक बार पैनल दरवाजे खुला है उठाएं, struts जारी करेंगे । यह उपयोगकर्ता के लिए छत (पैनल 1) दो टुकड़ा समर्थन ध्रुव का उपयोग कर बढ़ाने के लिए अनुमति देगा । अस्थायी रूप से इसका समर्थन करने के लिए रूफ पैनल के अंतर्गत समर्थन ध्रुव की टिप ले जाएँ (चित्र 4a).
    1. जबकि समर्थन प्रहार के साथ छत पैनल पकड़, सुरक्षा श्रृंखला, कंटेनर के ऊपर बाईं ओर स्थित पाते हैं । 2-3 व्यक्तियों की सहायता के साथ, ध्यान से नीचे खींचें पैनल 2 जब तक सुरक्षा श्रृंखला सीधे है, 2 पैनल के वजन पकड़ और लगे हुए है ।
    2. यह गैस अकड के बाहरी चारों ओर लपेटकर हाथ से चरखी पट्टा बेल्ट पीछे पीछे फिरना माउंट करने के लिए कनेक्ट करें । नोट कोई चरखी उपकरण नहीं है, तो पिछले चरण मैन्युअल रूप से रखने और इसे कम करने के लिए पैनल के प्रत्येक पक्ष पर कम से कम दो लोगों के साथ पूरी की जा सकती है ।
      चेतावनी: पैनल का वजन २६० पौंड है!
  6. सुनिश्चित करें कि वहां कोई लोग या पैनल 2 के रास्ते में आइटम और चरखी और ड्रिल का उपयोग कर रहे हैं, पैनल को कम करने के लिए आगे बढ़ना (चित्रा 4B) । जब 2 पैनल पूरी तरह से कम है, चरखी पट्टा डिस्कनेक्ट और यह चरखी में वापस रील । चरखी निकालें और यह प्रयोग के लिए तैयार करने में कंटेनर के विपरीत दिशा में जगह है । इकाई के दोनों ओर समान है और इकाई के दूसरे पक्ष के लिए ऊपर के चरणों का पालन करें ।
  7. पहली तरफ की तैनाती को पूरा करने के लिए, पैनल के नीचे तक पहुंचने (जो वर्तमान में फर्श है) और प्रत्येक पक्ष पर कम से कम दो लोगों के साथ, मैंयुअल रूप से दरवाजे और पक्ष के सामने की दीवार के रूप में जगह में पैनल 3 ऊपर उठा (चित्रा 4C) । दोनों लोग पैनल 3 को होल्ड करते रहेंगे, जबकि तीसरा व्यक्ति सपोर्ट पोल को हटाता है ।
    चेतावनी: कोई भी इकाई के अंदर या छत के नीचे होना चाहिए जब तक पैनल 3 दीवार जगह में है!
  8. 3 पैनल के अंदर से, दो कुंडों का पता लगाने और उंहें सुरक्षा का पट्टा का उपयोग कर जगह में ताला । सुनिश्चित करें कि काली छत पैनल रबड़ गास्केट बाहर खींच लिया इकाइयों के अंदर का सामना कर रहे हैं । इस इकाई में बारिश और अन्य पानी के प्रवेश को रोकने के लिए किया जाना चाहिए ।
    1. कंटेनर के अंदर से, 4 पैनल अनलॉक । एक बार खुला, 4 पैनल बाहर धक्का (चित्रा 4D) इतना है कि यह एक दरवाजे की तरह खुला झूलों । अंदर की दीवार पर दो सेफ्टी कुंडों को लॉक करें । 5 पैनल अनलॉक और 4 पैनल के लिए एक ही कदम दोहराएं । एक ही आंतरिक सुरक्षा कुंडों के साथ इस पैनल सुरक्षित । एक बार पूरी यूनिट इंटीरियर बंद कर दिया गया है, फिर से फर्श और अंत दीवारों को सील कर रहे है जब तक turnबकसुआ कस ।
  9. एक बार कंटेनर के दोनों ओर सुरक्षित रूप से विस्तारित कर रहे हैं, जैक की जांच करें और स्थानांतरण से किसी भी आवश्यक समायोजन कि हो सकता है । आश्रय की जांच के लिए स्तर साप्ताहिक हो । चरम मौसम (बारिश या हवा) के बाद कंटेनरों पर जैक का निरीक्षण और तदनुसार समायोजित करें ।
  10. यदि कनेक्शनयोग्य प्रयोगशाला मॉड्यूल उपयोग के लिए नियोजित हैं, तो दूसरा कंटेनर का विस्तार करें (चित्र 5) ।
  11. इकाइयों को पावर सोर्स और वॉटर सप्लाई से कनेक्ट करें । एक ब्रेकर बॉक्स के माध्यम से इकाइयों से जुड़े डीजल जनरेटर की स्थापना पर एक विस्तृत अनुदेश अनुसार मैनुअल24में पाया जा सकता है ।
    नोट: दूरस्थ प्रयोगशाला इकाई अब तैनात किया गया है । इकाई के भीतरी गैर खुलने और बंधनेवाला मात्रा उपकरण और प्रयोगशाला विशेष नैदानिक परीक्षणों के लिए आवश्यक आपूर्ति के ंयूनतम स्टोर करने के लिए अनुमति देता है । बीएसएल-3 मॉड्यूल के लिए दबाव प्रणाली की स्थापना विवरण24 में वर्णित है और अतिरिक्त गुणवत्ता नियंत्रण की आवश्यकता है । 24

2. व्यक्तिगत सुरक्षा और बुनियादी प्रयोगशाला कार्यप्रवाह के लिए चेकलिस्ट

नोट: किसी भी सामांय सुरक्षा और प्रयोगशाला परीक्षण आवश्यकता चरणों में कोई त्रुटि संपूर्ण परीक्षण प्रक्रिया के परिणामों को अमांय कर सकता है ।

  1. स्थापित प्रयोगशाला इकाई में प्रवेश की तैयारी करने से पहले यह सुनिश्चित करें कि सभी बीएसएल-2 या बीएसएल-3 सुरक्षा आवश्यकताओं के लिए जिंमेदार हैं: उचित कार्मिक सुरक्षात्मक उपकरण (ppe) के साथ ड्रेसिंग, हाथ धोने, दस्ताने पहने हुए है, और किसी भी कार्यस्थान कि कर रहे है विसंदूषण उपयोग किया जाना है ।
  2. तालिका 1 में चेकलिस्ट का पालन करें जिसमें निजी सुरक्षा के लिए परीक्षण के दौरान सुरक्षा आवश्यकताएं हैं लैब बीएसएल-2 और बीएसएल-3 मॉड्यूल (इकट्ठे दस्ताने बॉक्स रूम-नेगेटिव प्रेशर और पीसीआर रूम-पॉजिटिव प्रेशर) ।
  3. सभी काम अंतरिक्ष और प्रयोगशाला में आपूर्ति को दूषित करना । यदि सोडियम हाइपोक्लोराइट समाधान (०.५%), भी तरल ब्लीच के रूप में जाना जाता है का उपयोग करने की योजना बना, कार्यक्षेत्र और आपूर्ति को दूषित करने के लिए, यह भी ७०% इथेनॉल का उपयोग करने के लिए सभी ब्लीच उजागर क्षेत्रों को साफ, के रूप में ब्लीच के कार्यक्षेत्र में अंय रसायनों के साथ मिश्रण कर सकते है विषाक्त धुएं पैदा करते हैं । सभी ब्लीच उत्पादों को अपने स्वयं के नामित अपशिष्ट बिन में निपटाएं ।
  4. प्रयोगशाला इकाई में काम शुरू करने से पहले, अपनी व्यवस्था और लेआउट से परिचित हो जाते हैं । सख्त नियम दस्ताने बॉक्स (GB) कमरे में प्रसंस्करण के नमूने के लिए लागू होते हैं । जीबी रूम नकारात्मक दबाव है! एक दस्ताने बॉक्स संचालित करने के लिए, निर्माता के निर्देश की जांच करें । एकाधिक स्रोतों दस्ताने बॉक्स ऑपरेशन25पर विस्तृत ट्यूटोरियल प्रदान करते हैं ।
    नोट: इस परख का उद्देश्य निकालने के लिए और रिबोन्यूक्लीइक एसिड (आरएनए) या डिऑक्सीराइबोन्यूक्लीइक एसिड (डीएनए), अगर वर्तमान, नमूनों से शुद्ध है । निकाले गए आरएनए/डीएनए का परीक्षण लक्षित वायरल रोगजनकों की उपस्थिति या अनुपस्थिति का पता लगाने के लिए एक रीयल-टाइम आरटी-पीसीआर द्वारा किया जाएगा ।

3. एक बीएसएल-2 प्रयोगशाला सुविधा में RT-PCR द्वारा रैपिड इंफ्लूएंजा वायरस निदान

  1. प्राप्त और रजिस्टर
    1. PPE के लिए चेकलिस्ट लागू करें (अनुभाग 2 देखें) । INF एक वर्ग 2 एजेंट बीएसएल-2 अभ्यास की आवश्यकता है । बीएसएल-2 अभ्यास के लिए उपयुक्त PPE आवश्यक है । इसके अतिरिक्त, सुरक्षा चश्मे और cuffed आस्तीन लैब कोट पहनने के लिए संभावित त्वचा जोखिम कम ।
    2. विश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) की सिफारिशें26के अनुसार, श्वसन तंत्र से नमूनाकरण के लिए प्लास्टिक शाफ्ट के साथ बाँझ डैक्रॉन या रेयान swabs का उपयोग करें ।
      नोट: कपास या कैल्शियम alginate swabs, या लकड़ी की छड़ें के साथ swabs यौगिकों कि कुछ वायरस और रोकना पीसीआर26,27सूचनाको शामिल हो सकते हैं ।
    3. के रूप में नमूना swabs रोगियों से लिया जाता है, उंहें क्षेत्र या क्लिनिक से प्रयोगशाला की सुविधा के लिए परिवहन । पास के माध्यम से खिड़की के माध्यम से स्थानांतरण नमूने; यह विंडो दोनों तरफ से नहीं खोली जा सकती ।
    4. पास-थ्रू विंडो में, 1 मिनट के लिए ब्लीच के साथ नमूनों वाली स्प्रे ट्यूबों ७०% एथेनोल के बाद और सूखी पोंछ ताकि वे प्रयोगशाला इकाई में प्रवेश करने से पहले पर्याप्त विसंदूषण प्रदान कर सकें । जलमग्न होने के बाद, इकाई के अंदर प्रयोगशाला तकनीशियन पास-थ्रू विंडो खोलेगा और ब्लीच कंटेनर से नमूनों को पंजीकृत करने के लिए एकत्र करेगा । आमतौर पर नमूना पास करने वाला व्यक्ति और नमूना निकालने वाला व्यक्ति ही नहीं होता.
    5. पास-थ्रू विंडो खोलें और नमूनों को पंजीकृत करने के लिए एकत्रित करें । नीचे किसी भी नमूने कि ब्लीच और इथेनॉल में कीटाणुरहित थे पोंछ । ७०% इथेनॉल समाधान के बाद ब्लीच के साथ पास के माध्यम से खिड़की के इंटीरियर पोंछ । सहभागी टेबलेट-आधारित सिस्टम या लैपटॉप के भीतर एक नमूना पंजीकृत करें । निंन जानकारी के साथ एक नमूना पहचानें:
      -संग्रह दिनांक
      -शुरुआत की तारीख
      -रोगी उम्र और सेक्स
      -नमूना प्रकार (जैसे, नाक झाड़ू)
      -अद्वितीय पहचानकर्ताओं
      -अन्य प्रासंगिक जानकारी
    6. ट्यूब लेबलिंग के लिए बारकोड का उपयोग करें । प्रत्येक नमूना ट्यूब और चार खाली ट्यूब aliquots करने के लिए नामित करने के लिए बारकोड जोड़ें । वेंट हुड के नमूने ले जाएं । प्रत्येक ट्यूब पर एक बारकोड स्कैन और सुनिश्चित करें कि उचित नमूना पहचान जानकारी गोली आधारित प्रणाली या लैपटॉप स्क्रीन पर प्रकट होता है । बारकोड उपलब्ध नहीं हैं, तो एक शराब प्रतिरोधी मार्कर का उपयोग करें । हमेशा शीशी ही निशान, इस के रूप में टोपी कभी हैंडलिंग के दौरान स्विच प्राप्त कर सकते हैं! पंजीकरण प्रक्रिया को पूरा करें ।
  2. नमूना aliquot
    1. एक बार परीक्षण ट्यूबों लेबल किया गया है, एक प्रमाणित कक्षा 2 जैव सुरक्षा कैबिनेट का उपयोग करने के लिए नमूनों को संभालने और नमूनों के aliquots बनाते हैं । एक aliquot तत्काल परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और दूसरों के संदर्भ उद्देश्य या पुनर्परीक्षण के लिए बनाए रखा ।
    2. के रूप में नमूने वायरल परिवहन मध्यम में नाक झाड़ू टिप के साथ पहुंचें, 30 एस के लिए मध्यम में झाड़ू टिप हलचल और यह शीशी के पक्ष के खिलाफ निचोड़ । तो यह माध्यम से हटाने और एक bioजोखिमपूर्ण अपशिष्ट प्रोटोकॉल के साथ निपटान (उचित रूप से त्याग, आटोक्लेव या 1:100 क्लोरीन समाधान में लटका) ।
      नोट: मध्यम की सबसे छोटी मात्रा है कि संग्रहीत किया जाना चाहिए ०.५ मिलीलीटर है । इस प्रकार, एक 3 मिलीलीटर नमूने छह aliquots (उप नमूनों) में विभाजित किया जा सकता है । जमे हुए माध्यम के लिए अतिरिक्त मात्रा प्रदान करने के लिए ०.५ मिलीलीटर के प्रत्येक नमूने के लिए 1 मिलीलीटर cryo-संग्रहण ट्यूब का प्रयोग करें ।
    3. जब aliquots लेने, प्रत्येक नमूने के लिए ताजा बाँझ या प्रयोज्य पिसेटों का उपयोग करें और उन्हें जैव खतरनाक अपशिष्ट कंटेनरों में त्यागने के क्रम में पार संदूषण से बचने के लिए. सुनिश्चित करें कि हर ट्यूब कसकर सील और बंद कर दिया है ।
    4. तत्काल निष्कर्षण के लिए नमूना प्रति एक aliquot का उपयोग और फ्रीजर में किसी भी अंय aliquot स्टोर (पर-८० डिग्री सेल्सियस के रूप में यह एक श्वसन नमूना है) भविष्य में उपयोग के लिए ।
    5. काम स्टेशन पर जाने से पहले, सभी कार्यक्षेत्र सतहों और ब्लीच के साथ उपकरण ७०% इथेनॉल समाधान के बाद साफ ।
  3. निष्कर्षण और शुद्धि
    1. परीक्षण की गुणवत्ता को आश्वस्त करने के लिए, नमूना हैंडलिंग क्षेत्र से बार्कोडेड पीसीआर नमूना aliquots कार्य स्टेशन (बीएसएल-2 सुरक्षा कैबिनेट) निष्कर्षण के लिए नामित करने के लिए ले जाएँ । इस सेफ्टी कैबिनेट में सैंपल की हैंडलिंग के लिए पिपेट का अलग सेट होता है ।
    2. आरएनए नमूनों की निकासी के लिए वायरल आरएनए मिनी किट का प्रयोग करें । स्पिन प्रोटोकॉल द्वारा वायरल आरएनए के शुद्धिकरण के लिए निर्माता के निर्देशों का पालन करें । निकाले जाने की जरूरत है कि नमूनों की संख्या के अनुसार मास्टर मिक्स तैयार करें । नमूना और lysis बफर मास्टर मिश्रण कमरे के तापमान पर रखें ।
    3. निकाले जाने वाले नमूनों की संख्या की तैयारी करें । बारकोड संख्या या अद्वितीय पहचानकर्ता के साथ १.५ मिलीलीटर माइक्रो-सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों लेबल ।
    4. ५६० μL के लिए पिपेट सेट एक साफ पिपेट टिप लागू करें । प्रत्येक लेबल ट्यूब के लिए lysis बफर के ५६० μL जोड़ें । टिप छोड़ें । एक साफ पिपेट टिप लागू करें । नमूने के १४० μL जोड़ें । पुराने छोड़ें और एक क्लीन पिपेट टिप लागू करें । दूसरे नमूने के साथ दोहराएं । एक साफ पिपेट टिप लागू करें । नकारात्मक नियंत्रण ट्यूब के लिए १४० μL बफर जोड़ें । प्रत्येक ट्यूब को सुरक्षित रूप से बंद करें ।
    5. पल्स-भंवर नमूना 15 s. दोहराएं के लिए lysis बफर के साथ नमूने aliquot 2 और नियंत्रण ट्यूब का नमूना । माइक्रो-सेंट्रीफ्यूज 5 एस के लिए प्रत्येक नमूने को कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए नमूने इनसेबेट ।
    6. ऊष्मायन के 10 मिनट के बाद, फिर से एक ट्यूब ढक्कन के अंदर से किसी भी बूंदें हटाने के लिए ट्यूबों सेंट्रीफ्यूज । नमूना के लिए इथेनॉल समाधान के ५६० μL जोड़ें । पिपेट टिप बदलें । किसी भी शेष या अतिरिक्त नमूनों के साथ दोहराएं । प्रत्येक नमूना ट्यूब को सुरक्षित रूप से बंद करें और पल्स-भंवर 15 एस के लिए प्रत्येक नमूने माइक्रो-सेंट्रीफ्यूज 5 एस के लिए नमूने ।
    7. इस मिश्रण को स्पिन कॉलम में लागू करें । स्वच्छ 2 मिलीलीटर संग्रह ट्यूबों प्राप्त करें । स्पिन स्तंभ जोड़ें, और नमूनों को मिलाने के लिए उंहें लेबल करें । मिलान कॉलम के लिए नमूना के ६३० μL हस्तांतरण, तदनुसार ।
    8. सुरक्षित कैप और सेंट्रीफ्यूज करने के लिए ले जाएँ. नमूनों को सेंट्रीफ्यूज में समान रूप से वितरित करना । ६,००० × g पर सेंट्रीफ्यूज 1 मिनट के लिए lysis बफर को दूर करने के लिए । कार्य स्टेशन पर वापस लौटें । संग्रह ट्यूबों बदलें । शेष lysis बफ़र जोड़ें और केंद्रापसारक चरण को दोहराएं । मूल aliquot नमूना ट्यूबों छोड़ें ।
    9. लेएएट को निपटाएं और दो बफ़र्स के साथ स्पिन कॉलम को धोएं । बफर AW1 का ५०० μL लागू करें । हर नमूने के साथ दोहराएं । 1 मिनट के लिए ६,००० × जी पर हर नमूना और सेंट्रीफ्यूज की सुरक्षित टोपी । दूसरा बफर AW2 और सेंट्रीफ्यूज के साथ २०,००० × g पर 3 मिनट के लिए दोहराएं ।
    10. अंत में रेफरेंस बफर जोड़कर आरएनए को एल्ते । एक साफ १.५ मिलीलीटर ट्यूब में कॉलम प्लेस, कॉलम खुला और बफर AVE के ६० μL जोड़ने के लिए कमरे के तापमान पर 1 मिनट और सेंट्रीफ्यूज के लिए ६,००० एक्स जी पर 1 मिनट के लिए । अब नमूने पीसीआर एनालिसिस के लिए तैयार हैं ।
  4. पीसीआर प्रवर्धन और पहचान
    1. पीसीआर के लिए नामित एक अलग क्षेत्र में पीसीआर प्रवर्धन निष्पादित करें । निर्माता के निर्देशों के अनुसार एक कदम प्रक्रिया के लिए पीसीआर प्रोटोकॉल का उपयोग कर वायरल लक्ष्य के पीसीआर प्रवर्धन को पूरा करें । नोट, एक मास्टर मिक्स वायरल विशिष्ट primers, जांच, 2x आरटी-पीसीआर बफर और आरटी-पीसीआर एंजाइम का उपयोग किया जाता है । प्लेटों या ट्यूबों के लिए मास्टर मिक्स जोड़ें और फिर जोड़ने और व्यक्तिगत नमूने मिश्रण (अनुभाग ४.४ देखें).
    2. प्लेट को पीसीआर मशीन में ट्रांसफर करें और वायरल टारगेट एंपलीकरण की शर्तों के अनुसार चलाएं । एक बार नमूने पीसीआर साधन पर लोड कर रहे हैं यह रन पूरा करने के लिए लगभग ९० मिनट लगते हैं ।
  5. रखरखाव उपकरण के उपयोग के बाद
    1. तालिका 2के अनुसार उपकरण के उपयोग के बाद नियमित और आवधिक रखरखाव करते हैं ।

4. एक बीएसएल-3 प्रयोगशाला सुविधा में RT-PCR द्वारा रैपिड इंफ्लूएंजा वायरस निदान

नोट: बीएसएल-3 की शर्तों के तहत प्रायोगिक प्रोटोकाल एक ही रहेगा, लेकिन सुरक्षा उपायों को तरजीह किसी और चीज से ऊपर ले जाएगी । बीएसएल-3 प्रयोगशाला में प्रवेश करने से पहले, पारदर्शी खिड़की के माध्यम से देखने के लिए सुनिश्चित करें कि नकारात्मक दबाव दस्ताने बॉक्स इकाई में स्थापित किया गया है । यह स्पष्ट हो जाएगा कि नकारात्मक दबाव स्थापित किया गया है जब एक दीवार में एक गुलाबी गेंद दिखाई है ।

  1. प्राप्त और रजिस्टर
    1. एक बार नकारात्मक दबाव स्थापित हो गया है, दरवाजा खोलो और इकाई में प्रवेश । तुरंत हाथ धोना और फिर PPE के साथ आगे बढ़ना । PPE और कार्यप्रवाह के लिए चेकलिस्ट लागू करें बीएसएल-3 (अनुभाग 2 देखें) ।
    2. निंनलिखित क्रम में PPE पर डालने के लिए आगे बढ़ें: दस्ताने, गाउन, जूता कवर, मुखौटा, चेहरा ढाल, दस्ताने की दूसरी जोड़ी के तहत । पूरे शरीर की रक्षा करता है कि एक पूर्ण गाउन पहने हुए की सिफारिश की है ।
    3. मशीन को चालू करें और दस्ताने बॉक्स में दबाव को स्थिर करने की अनुमति दें । एक ब्लीच स्प्रे समाधान का उपयोग करने के लिए सभी क्षेत्रों और आपूर्ति विसंदूषित कर देना के अंदर और बाहर दस्ताने बॉक्स इस्तेमाल किया जाएगा । ब्लीच अपशिष्ट उत्पादों के एक ब्लीच केवल कंटेनर में निपटान । ७०% इथेनॉल समाधान का उपयोग करें ब्लीच के लिए किसी भी क्षेत्र को साफ करने के लिए इस्तेमाल किया गया है ।
    4. पास-थ्रू विंडो के माध्यम से नमूना स्थानांतरित ।
      नोट: से पहले खिड़की के माध्यम से पारित पर गिरा दिया जा रहा है, कीटाणुरहित ट्यूबों 1-2 मिनट के लिए एक हाइपोक्लोराइट स्नान में submerging द्वारा नमूनों से युक्त । विशेष रूप से, एक ब्लीच समाधान के साथ स्प्रे के नमूने और उंहें प्राप्त करने से पहले के माध्यम से सबसे कम 1 मिनट और पास के माध्यम से अकेले छोड़ बीएसएल-3 इकाई के अंदर । बाहर से सैंपल लेकर गुजरने वाले व्यक्ति और उससे मिलने वाले व्यक्ति, बीएसएल-3 प्रयोगशाला के अंदर सैंपल को बाहर निकाल कर ही नहीं रखना चाहिए.
    5. बीएसएल-3 यूनिट के अंदर नमूने प्राप्त करें और पंजीकरण और लेबलिंग के कदम उठाने से पहले उन्हें साफ करें ।
    6. सहभागी टेबलेट-आधारित सिस्टम या लैपटॉप के साथ एक नमूना पंजीकृत करें । निंन जानकारी के साथ किसी नमूने की पहचान करें (अनुभाग 3.1.5 देखें) ।
    7. ट्यूब लेबलिंग के लिए बारकोड का उपयोग करें । बारकोड उपलब्ध नहीं हैं, तो एक शराब प्रतिरोधी मार्कर का उपयोग करें ।
      नोट: हमेशा शीशी ही निशान, यह हैंडलिंग के दौरान बंद हो सकता है के रूप में टोपी कभी नहीं!
  2. नमूना aliquot
    1. एक बार नमूने पंजीकृत हैं और ट्यूबों लेबल किया गया है, दस्ताने बॉक्स के अंदर से नमूनों को पुनः प्राप्त करने के लिए हवा बंद ट्रे के माध्यम से प्रमाणित दस्ताने बॉक्स में नमूनों जगह. दरवाज़ा बंद करो. तो फिर नमूने को पुनः प्राप्त करने के लिए दस्ताने बॉक्स के माध्यम से दूसरे दरवाजे खोलो । दोनों दरवाजे एक ही बार में न खोलें । सुरक्षा सावधानियों के लिए दो भिंन चरणों में प्रत्येक द्वार को खोलें और बंद करें । यूवी सी प्रकाश चालू करें ।
    2. एक बार नमूनों को सुरक्षित रूप से दस्ताने बॉक्स इंटीरियर में ले जाया गया है, पहले एक दस्ताने बॉक्स में नमूना aliquots बनाने के लिए वर्णित चरणों का पालन करें । नमूना का एक उपनाम तत्काल परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और दूसरों के संदर्भ उद्देश्य या पुनर्परीक्षण के लिए बनाए रखा । नमूने वायरल परिवहन माध्यम में नाक झाड़ू टिप के साथ पहुंचें । नमूने ले और प्रत्येक शीशी में एक डाल दिया । 30 एस के लिए मध्यम में झाड़ू टिप हलचल और यह माध्यम से हटाने से पहले शीशी के पक्ष के खिलाफ निचोड़ और यह एक bioजोखिमपूर्ण अपशिष्ट प्रोटोकॉल का उपयोग निपटान (उचित रूप से त्याग, आटोक्लेव या 1:100 क्लोरीन समाधान में लटका) ।
      नोट: मध्यम की सबसे छोटी मात्रा है कि संग्रहीत किया जाना चाहिए ०.५ मिलीलीटर है, इस उद्देश्य के लिए 1 मिलीलीटर की विल्स का उपयोग करें । इस प्रकार, एक 3 मिलीलीटर नमूने छह aliquots (उप नमूनों) में विभाजित किया जा सकता है ।
    3. प्रत्येक नमूने के लिए ताजा बाँझ या डिस्पोजेबल पिपेट का उपयोग करें और उन्हें जैव खतरनाक अपशिष्ट के रूप में त्यागने. एक बार नमूने aliquoted कर रहे हैं, वाटरप्रूफ कंटेनर में नमूने ले जाएं । संरक्षण और दस्ताने बॉक्स से हटाने के साथ बंद विल्स ।
    4. दस्ताने बॉक्स के भीतर, biohazard अपशिष्ट बैग बंद करो और एक नया अपशिष्ट बैग को पार संदूषण से बचने के लिए तैयार । Decontaminate दस्ताने बॉक्स कार्यक्षेत्र के लिए 5 मिनट और ७०% इथेनॉल समाधान के लिए ब्लीच आवेदन बाद में ।
    5. तत्काल विश्लेषण के लिए प्रति नमूना एक उपनाम का उपयोग और फ्रीजर में दूसरों की दुकान-८० डिग्री सेल्सियस के रूप में यह एक श्वसन नमूना है । विसंदूषण परीक्षण के लिए एक aliquot बनाए रखने के बाद, सभी नमूनों में भंडारण के लिए दस्ताने बॉक्स से बाहर ले जाएँ-८० डिग्री सेल्सियस फ्रीजर.
  3. निष्कर्षण और शुद्धि
    1. Decontamination के बाद, नमूना हैंडलिंग क्षेत्र से वापस दस्ताने बॉक्स में पीसीआर विश्लेषण के लिए आवश्यक बारकोड नमूने aliquots ले जाएँ.
    2. दस्ताने बॉक्स में, निष्कर्षण प्रक्रिया के लिए सभी lysis चरण निष्पादित करें । निर्माता के निर्देशों के अनुसार आरएनए नमूनों की निकासी के लिए वायरल आरएनए मिनी किट का प्रयोग करें । निर्माता के निर्देशों में स्पिन प्रोटोकॉल द्वारा वायरल आरएनए के शुद्धिकरण के लिए चरण-दर-चरण निर्देशों का पालन करें ।
    3. निकाले जाने वाले नमूनों की संख्या की तैयारी करें । बारकोड संख्या या अद्वितीय पहचानकर्ता के साथ १.५ मिलीलीटर माइक्रो सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों लेबल ।
    4. नमूने और पल्स भंवर के १४० μL करने के लिए lysis बफर की ५६० μL जोड़ें । कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए इनसेबेट ।
      नोट: inactivation प्रक्रिया बीएसएल-3 रोगज़नक़ कि निकाला जा रहा है और कुछ मामलों में आगे निष्क्रियता आवश्यक हो सकता है के प्रकार के आधार पर भिंन हो सकते हैं ।
    5. Lysis कदम के बाद, कसकर प्रत्येक नमूने पर टोपी मुहर और दाबित वायु मार्ग बंद में जगह (यदि सेंट्रीफ्यूज दस्ताने बॉक्स के बाहर रखा गया है) । प्रक्रिया के शेष के लिए जैव सुरक्षा कैबिनेट में लीजड ड नमूनों स्थानांतरण ।
      नोट: निष्कर्षण और आरएनए के शुद्धिकरण के लिए प्रक्रिया दस्ताने बॉक्स में या एक दस्ताने बॉक्स में पूरा किया जा सकता है जैव सुरक्षा मंत्रिमंडल के बाद बीएसएल-3 रोगज़नक़ और आवश्यक प्रोटोकॉल के आधार पर.
    6. बनाने के कार्यक्षेत्र और दस्ताने बॉक्स में आपूर्ति फिर ब्लीच का उपयोग कर, और ७०% इथेनॉल समाधान के लिए सभी क्षेत्रों को साफ करने के लिए पहले से उजागर ब्लीच सुनिश्चित करें ।
    7. RNA की धुलाई और शुद्धिकरण के लिए धारा 3.3.6-3.3.10 में दिए गए चरणों का पालन करें.
    8. निष्कर्षण के बाद, पीसीआर विश्लेषण के लिए पास-थ्रू विंडो में नमूनों को स्थानांतरित करें ।
    9. नमूने को हटा दिया गया है और स्थानांतरित करने के बाद, दस्ताने बॉक्स के बाहर प्रयोगशाला कार्यक्षेत्र विसंदूषित कर देना, धारा 2 के अनुसार.
    10. PPE को हटाने से पहले इकाई में हवा परिसंचरण सुरक्षित रूप से PPE को दूर करने के लिए शुरुआत से पहले फ़िल्टरिंग चक्र के उचित संख्या तक पहुंच गया है रुको । तुरंत हटाने और PPE अपशिष्ट कंटेनर में सभी PPE के निपटान के बाद, इकाई से बाहर निकलने से पहले साबुन और पानी के साथ प्रयोगशाला में हाथ धोने के लिए आगे बढ़ना, धारा 2 के अनुसार ।
  4. पीसीआर प्रवर्धन और पहचान
    नोट: पीसीआर प्रवर्धन पीसीआर के लिए नामित एक अलग क्षेत्र में किया जाता है और पास-थ्रू विंडो के माध्यम से दस्ताने बॉक्स क्षेत्र से जुड़ा होता है । कार्यक्षेत्र और आपूर्ति के लिए एक परीक्षण से पहले दूषित होना चाहिए ।
    1. पास-थ्रू विंडो से निकाले गए RNA नमूने निकालें ।
    2. एक कदम पीसीआर प्रोटोकॉल का उपयोग कर वायरल लक्ष्य के पीसीआर प्रवर्धन प्रदर्शन । वायरल विशिष्ट primers, जांच, 2x आरटी-पीसीआर बफर और आरटी-पीसीआर एंजाइम का उपयोग करके एक मास्टर मिक्स तैयार करें । पानी, प्राइमरों और जांच, 2x बफर और आरटी-पीसीआर एंजाइम: प्रत्येक लक्षित परख के लिए निंनलिखित घटक के साथ एक १.५ मिलीलीटर ट्यूब का प्रयोग करें । भंवर और मास्टर मिक्स स्पिन ।
    3. पट्टी ट्यूबों में से प्रत्येक में मास्टर मिक्स Aliquot । मास्टर मिक्स तैयार किया गया है एक बार अनुशंसित तापमान पर भंडारण करने के लिए पीसीआर किट लौटें ।
    4. प्रत्येक स्ट्रिप ट्यूब के बीच एक अलग टिप का उपयोग कर पट्टी ट्यूबों के प्रत्येक के लिए व्यक्तिगत नमूने जोड़ें । 1 मिनट के लिए १,५०० rpm पर नमूना प्लेट या ट्यूबों स्पिन । नमूनों को रीयल-टाइम पीसीआर यूनिट पर लोड करने के लिए तैयार किया गया है ।
    5. प्लेट को नमूनों के साथ पीसीआर इंस्ट्रूमेंट में ट्रांसफर करें और वायरल टारगेट एंप्रवर्धन कंडीशंस के अनुसार मशीन चलाएं । यह लगभग ९० मिनट लगते है एक रन पूरा करने के लिए ।
    6. परिणाम इकट्ठा करने और प्रयोगशाला छोड़ने से पहले, ppe निकालें और पर्याप्त रूप से प्रत्येक कार्य केंद्र और अगले नैदानिक परीक्षण के लिए तैयारी विसंदूषित कर देना, धारा 2 के अनुसार ।
  5. रखरखाव उपकरण के उपयोग के बाद
    1. तालिका 2के अनुसार उपकरण के उपयोग के बाद नियमित और आवधिक रखरखाव करते हैं ।
      नोट: समग्र नैदानिक बदलाव समय लगभग 4 घंटे है । निष्कर्षण समय और पीसीआर सेट अप समय नमूनों की संख्या के आधार पर भिंन हो सकते हैं, और नैदानिक परीक्षण 4-5 घंटे या उससे अधिक ले सकते हैं, तदनुसार ।

Representative Results

इस अध्ययन का लक्ष्य यह प्रदर्शित करना है कि प्रस्तावित बीएसएल-2 और बीएसएल-3 मोबाइल प्रयोगशाला सुविधाएं एक पर्याप्त वातावरण प्रदान करती है जिसमें श्वसन वायरस नैदानिक परीक्षणों को उच्च गुणवत्ता वाले परीक्षणों के समरूप प्रतिनिधि परिणामों के साथ अनुमत करता है । स्टेशनरी प्रयोगशालाएं । प्रयोगशाला सुविधाएं व्यावसायिक स्वास्थ्य और सुरक्षा (OHS) की सिफारिशों में दी गई परीक्षण आवश्यकताओं का अनुपालन करने के लिए डिज़ाइन की गई हैं । जैसे ही रिमोट लेबोरेटरी सुविधा लागू की जाती है (चित्रा 4) और सभी उपकरण और आपूर्ति स्थापित कर रहे है (चित्रा 5), प्रयोगशाला परीक्षणों को चलाया जा सकता है ।

प्रयोगशाला मानक ऑपरेटिंग प्रक्रियाओं के अनुसार, पीपे (लैब कोट, सुरक्षात्मक जूते, दस्ताने, उन्नत मुखौटा, सुरक्षात्मक eyewear, आदि) बीएसएल-2 अभ्यास के लिए उपयुक्त है की आवश्यकता है । बीएसएल-3 अभ्यास के लिए, नकारात्मक दबाव के पीसीआर प्रयोगशाला मॉड्यूल एक प्रमाणित दस्ताने बॉक्स से सुसज्जित है । प्रयोगशाला इकाइयों को बाहरी पास-थ्रू खिड़कियों द्वारा अपग्रेड किया जाता है ताकि सैंपल प्राप्त करने के चरण में कार्मिकों को बचाया जा सके । पंजीकरण प्रक्रिया पहले से विकसित गोली आधारित आवेदन (चित्रा 3 डी) के साथ सरलीकृत किया जा सकता है । अंय स्वीकार्य अनुप्रयोगों है कि एक लैपटॉप पर चलने के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया जा सकता है ।

इस विशेष श्वसन वायरस नैदानिक परीक्षण के उद्देश्य पर नैदानिक प्रक्रिया के कदम अलग करने के लिए जुड़े प्रयोगशाला मॉड्यूल में किया जा सकता है संदूषण या जैव रासायनिक अभिकर्मकों के बीच संभावित हस्तक्षेप से बचने के लिए, जो प्रभावित कर सकते हैं भन्ने परिणाम छ । निदान की गुणवत्ता को अधिकतम करने के लिए, रैपिड नैदानिक परीक्षण अभ्यास का इस्तेमाल (i) दोनों बुनियादी प्रयोगशाला बीएसएल-2 और ट्रैवर्स कनेक्टेड पीसीआर रूम (सेक्शन 3) या (ii) पास-थ्रू विंडो (सेक्शन 4) से जुड़े जीबी और पीसीआर रूम । प्रस्तावित प्रयोगशाला कार्यप्रवाह का आरेख चित्र 6 पर प्रस्तुत किया गया है और व्यक्तिगत सुरक्षा पर बल देता है । आरेख कार्मिक सुरक्षा के लिए प्रत्येक इंगित चरण के महत्व को पहचानता है, विशेष रूप से दूरस्थ क्षेत्रों में प्रयोगशाला स्टाफ ंयूनतम प्रशिक्षित है ।

इन्फ्लूएंजा के तीव्र नैदानिक परीक्षण को आरटी-पीसीआर तकनीक के माध्यम से पूरा किया जाता है । प्रक्रिया में चार मुख्य चरण हैं । नोट करें कि व्यक्तिगत कार्यस्थान प्रोटोकॉल के प्रत्येक चरण के लिए असाइन किए गए हैं ।

पहला कदम एक नमूना प्राप्त करने के लिए और उप-यह कई aliquots में विभाजित है । Aliquots तो बारकोड के साथ चिह्नित किया जा सकता है डेटा नियंत्रण की प्रभावशीलता में सुधार और आगे की जांच के लिए फ्रीजर में संग्रहीत । दूसरे चरण में अपकेंद्रक और हीटिंग द्वारा lysis बफ़र में एक नमूना सूचनाको करने के लिए है । पहला और दूसरा कदम जैव सुरक्षा मंत्रिमंडलों में किया जाना चाहिए । व्यक्तिगत पिपेट सेट और उपकरणों का उपयोग । यदि उपलब्ध हो तो पीसीआर कक्ष में पीसीआर परीक्षण किया जाना प्रस्तावित है । तीसरे चरण के परिणामों के प्रलेखन है । चार कदम उपकरण के उपयोग के बाद रखरखाव है, और प्रयोग के अंत में कार्मिक संरक्षण के अनुस्मारक ।

यदि नमूना को बीएसएल-3 + (उदा., इबोला, जिका, MERS, टीबी) के रूप में वर्गीकृत किए जाने की आशा है तो दस्ताने बॉक्स की सुविधा का उपयोग किया जाना चाहिए । दूरस्थ प्रयोगशाला में, GB कमरे में नमूना पंजीकरण के लिए नमूने और एक लैपटॉप या टेबलेट प्राप्त करने के लिए अपनी पास-थ्रू विंडो होती है । नमूना aliquot और वायरस inactivation सभी दस्ताने बॉक्स चैंबर में किया जाना चाहिए । यूवी सी प्रकाश प्रक्रिया के दौरान संदूषण से बचने के लिए सिफारिश की है । एक नमूना के निष्क्रियता के बाद, प्रोटोकॉल के लिए आगे के कदम बुनियादी प्रयोगशाला बीएसएल-2 और बीएसएल-3 परीक्षण के समान है और चेकलिस्ट भाग III (तालिका 1, चित्रा 6) ।

Figure 1
चित्रा 1. प्रयोगशाला सुविधा प्रोटोटाइप । (क, ख) ट्रांसपोर्ट मोड; (ग) तैनात मोड: बाहर; (डी) तैनात मोड: इंटीरियर । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2 . स्कीमेटिक्स। (क) क्या मूल प्रयोगशाला बीएसएल-2; (ख) बीएसएल-3 मॉड्यूल में दस्ताने बॉक्स और पीसीआर प्रयोगशालाएं शामिल हैं, जिनकी संरक्षित नमूना अंतरण के लिए एक सामान्य पास-थ्रू विंडो है; (ग) संबद्ध प्रयोगशाला सुविधाएं (क) और (ख) साझा उपयोगिताओं के साथ । (घ,ङ) विपरीत पक्षों से जुड़ी इकाइयों की तस्वीरें । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें । 

Figure 3
चित्रा 3. (क) बीएसएल-3 सुविधा के इंटीरियर में (1) एक पास-थ्रू विंडो, एक सिंक और (2) इनलेट पर एक बहाना स्टेशन है; (ख) विद्युत विद्युत कनेक्टर्स, (ग) जल कनेक्टर्स; (घ) आपूत ट्रैकिंग और प्रयोगशाला परिणाम प्रलेखन के लिए टेबलेट आधारित साफ्टवेयर । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4 . प्रयोगशाला सुविधा की तैनाती । पैनल के लिए अनुदेश (A-D) सचित्र के रूप में इकाई के एक तरफ का खुलासा । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें । 

Figure 5
चित्रा 5 . संयोजनीय प्रयोगशाला की स्कीमेटिक्स: (क) बीएसएल-2 माड्यूल 1; (ख) दस्ताने बॉक्स और पीसीआर मॉड्यूल 2 कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें । 

Figure 6
चित्रा 6 . सुदूर प्रयोगशाला सुविधा में श्वसन विषाणु नैदानिक आरटी-पीसीआर परीक्षण के लिए फ्लो चार्ट । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

दूरस्थ प्रयोगशाला बीएसएल-2 दूरस्थ प्रयोगशाला बीएसएल-3
मैं भाग मैं भाग
i. लैब टेक द्वार लेबल प्रवेश द्वार के माध्यम से प्रवेश और लैब कोट, जो प्रवेश द्वार के बगल में रैक पर लटक रहा है पर डाल दिया । खुले जूते निषिद्ध हैं, उंनत मुखौटा और सुरक्षात्मक eyewear प्रोत्साहित कर रहे हैं । i. लैब टेक नकारात्मक दबाव बीमा करने के लिए इकाई के बाहर से Glove बॉक्स विंडो में देखने के लिए सक्रिय है । (गुलाबी गेंद इकाई में दिखाई देने के लिए नकारात्मक दबाव काम कर रहा है दिखाना चाहिए) ।
ii. लैब टेक सिंक में हाथ धोने के लिए, प्रयोज्य दस्ताने पर डाल दिया और नमूने के सेवन के साथ शुरू करते हैं । ii. यदि नकारात्मक दबाव काम कर रहा है, लैब टेक केवल दरवाजे के माध्यम से प्रवेश करने के लिए और लैब कोट, जो प्रवेश द्वार के बगल में रैक पर लटक रहा है पर डाल दिया ।  खुले जूते निषिद्ध हैं, उंनत मुखौटा और सुरक्षात्मक eyewear वांछनीय हैं ।
iii. पास-थ्रू विंडो में गिराए जाने से पहले हाइपोक्लोराइट स्नान में डूबा हुआ नमूना प्रयोगशाला टेक के लिए पास में बैठा है । iii. लैब टेक सिंक में हाथ धोने के लिए, प्रयोज्य दस्ताने, PPE पर डाल दिया और नमूनों के सेवन के साथ शुरू करते हैं ।
iv. सैंपल रिसेप्शन में प्राप्त । iv. नमूने है कि पहले हाइपोक्लोराइट स्नान में डूबा था खिड़की के माध्यम से पास में गिरा दिया जा रहा से पहले लैब टेक के लिए के माध्यम से पास में बैठे हैं ।
भाग द्वितीय v. सैंपल रिसेप्शन में प्राप्त हुए ।
v. नैदानिक प्रक्रिया के आधार पर, नमूनों जैव सुरक्षा कैबिनेट और निष्क्रिय करने के लिए ले जाया गया । भाग द्वितीय
vi. माइक्रोस्कोपी, सेंट्रीफ्यूज, या रॉट के लिए prepped नमूने । vi. दस्ताने बॉक्स में निष्क्रिय नमूनों ।
vii. उचित नैदानिक परीक्षण चलाए । vii. न्यूक्लिक एसिड अलगाव के लिए निष्पादित नमूनों ।
viii. 4 ° c रेफ्रिजरेटर या उचित फ्रीजर में स्टोर नमूनों । viii. निष्कर्षण के बाद, नमूनों को पास-थ्रू विंडो में ले जाया गया.
भाग III ix. लैब टेक (सकारात्मक दबाव) इकाई के पीसीआर पक्ष में प्रवेश द्वार के माध्यम से प्रवेश करती है ।
ix. धुंधला & वस्तुओं की धुलाई के लिए उपयोग करें । एक्स लैब टेक करने के लिए प्रवेश द्वार के बगल में रैक से लैब कोट पर डाल, सिंक में हाथ धोने, दस्ताने पर डाल दिया ।
एक्स. का प्रयोग लैपटॉप & counterpace विश्लेषण और प्रलेखन करने के लिए । xi. पास-थ्रू विंडो में दस्ताने बॉक्स रूम से नमूने प्राप्त करें ।
xi. आटोक्लेव चलाकर उपकरणों को करना । xii. यदि आवश्यक नमूने लैमिनर प्रवाह कैबिनेट में prepped.
xii. जैव जोखिम अपशिष्ट कंटेनर में किसी भी जैव खतरनाक कचरे को निपटाना । xiii. उपयुक्त निदान परीक्षण चलाया ।
xiii. सिंक में हाथ धोना । xiv. 4 डिग्री सेल्सियस रेफ्रिजरेटर या उचित फ्रीजर में स्टोर नमूनों ।
xiv. रुको लैब कोट रैक पर वापस । भाग III
xv. उसी दरवाजे से बाहर निकलें । xv. वस्तुओं के धुंधला & धोने के लिए सिंक का उपयोग करें ।
xvi. विश्लेषण और प्रलेखन करने के लिए लैपटॉप & counterpace का उपयोग करें ।
xvii. ट्रांसफर शीशियों को पास-थ्रू विंडो में पीसीआर रूम तक और ऑटोक्लेव चलाकर उपकरणों को करना.
xviii. जैव जोखिम अपशिष्ट कंटेनर में किसी भी जैव खतरनाक कचरे का निपटान ।
xix. सिंक में हाथ धोना ।
xx. एक ही प्रवेश द्वार के माध्यम से बाहर निकलें ।

तालिका 1. पीसीआर निदान वर्कफ़्लो के लिए चेकलिस्ट ।

रखरखाव और कैलिब्रेशन
रीयल-टाइम पीसीआर सिस्टम मासिक हर महीने पृष्ठभूमि कैलिब्रेशन निष्पादित करें
18 महीने पृष्ठभूमि, स्थानिक और डाई कैलिब्रेशन हर 18वें महीने प्रदर्शन
अपकेंद्रित्र 1 वर्ष बाहरी या आंतरिक अंशांकन सेवाओं के माध्यम से प्रति मिनट और तापमान में क्रांतियों के लिए कैलिब्रेट करें
दस्ताने बॉक्स दैनिक नेत्रहीन तत्वों, विशेष रूप से HEPA फिल्टर, दस्ताने, o-छल्ले और hoses के उजागर सतहों को नुकसान के लिए निरीक्षण । सुनिश्चित करें कि वाहिनी clamps तंग और जगह में हैं । रिसाव दबाव परीक्षण करते हैं । दबाव अलार्म का परीक्षण ।
6 महीने हेपा फ़िल्टर बदलें
1 वर्ष सिस्टम जांचना
आटोक्लेव साप्ताहिक पानी की टंकी और रैक एक हल्के गैर अपघर्षक डिटर्जेंट का उपयोग कर साफ करें
3 महीने टाइमर और गेज कैलिब्रेट करें
1 वर्ष या हर ५० चक्र निरीक्षण, अच्छी तरह से साफ, परीक्षण और जांचना
रेफ्रिजरेटर और फ्रीजर 6 महीने जांच प्रशंसक मोटर, वाष्पक कुंडल, vacuuming संघनित्र coils और कंडेंसर फिल्टर और जरूरत के रूप में बैटरी की जगह
1 वर्ष आंतरिक या बाहरी अंशांकन सेवाओं के माध्यम से फ्रीजर जांचना

तालिका 2. रीयल टाइम पीसीआर उपकरण रखरखाव ।

अनिवार्य अनुशंसित
लैब कोट, सुरक्षात्मक जूते, दस्ताने लैब कोट, सुरक्षात्मक जूते, दस्ताने, मास्क, eyewear
फ्रिज 4 ° c, फ्रीजर-20 ° c फ्रिज 4 डिग्री सेल्सियस, फ्रीजर-20 डिग्री सेल्सियस, फ्रीजर-८० डिग्री सेल्सियस
स्वचालित पाइपसेटों का एक सेट स्वचालित पिपेट के तीन सेट
अपकेंद्री, शेकर, तापचक्रक रोबोट प्रणाली
आरटी-पीसीआर मशीन, बर्फ स्नान आरटी-पीसीआर तापमान नियंत्रण, बर्फ मुक्त कूलर के साथ
Biohazard अपशिष्ट बैग ऑटोक्लेव से जैव खतरा कचरे का निपटारा

तालिका 3. आरटी-पीसीआर श्वसन विषाणु नैदानिक परीक्षण बीएसएल-2 के लिए ंयूनतम आवश्यकताएं ।

Discussion

दूरस्थ प्रयोगशाला सुविधा के ऊपर वर्णित logistically उंमुख, विस्तार योग्य, तेजी से deployable, multifunctional है, और मानव केंद्रित डिजाइन अवधारणाओं कि प्रयोगशाला कर्मियों और कार्यक्षेत्र दक्षता की रक्षा के लिए तैयार किया गया है पर आधारित है । त्वरित प्रयोगशाला सेट अप और सुरक्षित श्वसन वायरस अलगाव और निदान के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल विकसित और प्रस्तुत किया गया था ।

इष्टतम उपकरण कार्य के लिए, निम्नलिखित शर्तों को प्रयोगशाला इकाइयों में बनाए रखा जाना चाहिए: 21 ± 2 ° c का परिवेशी तापमान, 5 से ४० डिग्री सेल्सियस का अनुमेय तापमान, 14 ± 5% आरएच की आर्द्रता, ८०% आरएच की अनुमेय अधिकतम सापेक्ष आर्द्रता (noncondensing), और समुद्र के स्तर से ऊपर 0 और २,००० मीटर के बीच एक ऊंचाई ।

ऊर्जा की खपत एक ऑफ-ग्रिड प्रयोगशाला के प्रबंधन के लिए सबसे महत्वपूर्ण मापदंडों में से एक है । कोर प्रयोगशाला उपकरणों के लिए, बिजली की क्षमता 15-40% अलग कर सकते हैं; हालांकि, एक उपयुक्त सेवा देने के लिए यहां औसत ऊर्जा खपत का अनुमान लगाया जाता है । उच्चतम विद्युत दर (1500-2000 W) एयर कंडीशनर, glovebox प्रणाली, पीसीआर मशीन, और ऑटोक्लेव स्टरलाइजर से संबंधित है । प्रोटोकॉल को पूरा करने के लिए 8 घंटे के गहन कार्य और प्रयोगशाला पर्यावरण नियंत्रण के 16 घंटे को ध्यान में रखते हुए, प्रयोगशाला इकाइयों की दैनिक ऊर्जा खपत बीएसएल-2 के लिए लगभग ३६ किलोवाट घंटा/दिन, बीएसएल-3 के लिए लगभग ४३ kWh/दिन, और कनेक्ट करने के लिए ७३ kWh/ बीएसएल-2/बीएसएल-3 + सुविधाएं । एक एकल इकाई के लिए, हम चलाने की क्षमता के साथ विद्युत शक्ति का एक स्रोत प्रदान करने की सिफारिश/निरंतर बिजली ≥ 8 किलोवाट, वृद्धि/ कनेक्टेड सुविधा के लिए, चल रहा है/निरंतर बिजली ≥ 12 किलोवाट, और वृद्धि/ ध्यान दें, बीएसएल-3 प्रयोगशाला सुविधा में, एक बैकअप ऊर्जा स्रोत दृढ़ता से आकस्मिक शक्ति आउटेज से बचने के लिए और एक नैदानिक परीक्षण के दौरान दस्ताने बॉक्स और नकारात्मक दबाव प्रणाली के स्थिर काम की गारंटी की सिफारिश की है ।

एक पेट्रोल चालित बिजली जनरेटर आपातकालीन ऊर्जा की आपूर्ति के लिए एक लागत प्रभावी समाधान है । मान लें कि एक पेट्रोल जनरेटर की ईंधन दक्षता लगभग १.५ गैलन प्रति घंटे १००% लोड पर है । फिर, यदि औसत दैनिक ऊर्जा खपत 8 घंटे ४०% लोड और 10% लोड के 16 घंटे है, प्रयोगशाला इकाई बीएसएल-2 या बीएसएल-3 प्रति दिन ईंधन की 7-9 गैलन की आवश्यकता है, तदनुसार, और कनेक्टेड सुविधा की जरूरत है ~ 15 लड़की/

दूरस्थ प्रयोगशाला इकाइयों को ऑफ-ग्रिड सोलर पैनल सिस्टम की क्षमताओं को फिट करने के लिए डिज़ाइन किया गया है । सौर पैनलों अतिरिक्त ईंधन की आवश्यकता नहीं है और उच्च सौर विकिरण के कारण अफ्रीका, एशिया और लैटिन अमेरिका के उष्णकटिबंधीय और उपोष्ण क्षेत्रों में उच्च उत्पादकता के साथ संचालित किया जा सकता है । वर्तमान में, एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सौर पैनल प्रणाली की एक इकाई की अनुमति देता है ४४ kWh/

वैकल्पिक विद्युत ऊर्जा स्रोत के चयनित प्रकार के बावजूद, गंदे बिजली फिल्टर दृढ़ता से सिफारिश की है और प्रयोगशाला सुविधाओं में प्रीइंस्टॉल्ड करने के लिए बिजली की गुणवत्ता में सुधार लाने और प्रयोगशाला उपकरणों की रक्षा कर रहे हैं । पीसीआर सिस्टम को मजबूत और unshielded विद्युतचुंबकीय विकिरण के स्रोतों से दूर रखें क्योंकि मजबूत विद्युत चुम्बकीय विकिरण डिवाइस के उचित संचालन के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं. यह भी महत्वपूर्ण है इस तरह के एक केंद्रापसारक या पंप के रूप में मजबूत कंपन स्रोतों के पास पीसीआर प्रणाली का उपयोग नहीं है क्योंकि अत्यधिक कंपन साधन प्रदर्शन को प्रभावित करेगा । प्रयोगशाला उपकरण केवल एक ऐसे वातावरण में स्थापित किया जा सकता है जिसमें गैर-प्रवाहकीय प्रदूषक होते हैं, जैसे धूल के कण या लकड़ी के चिप्स. सुनिश्चित करें कि कमरे में किसी भी सुराख है कि साधन घटकों पर कण सामग्री निष्कासित कर सकता से दूर है ।

प्रयोगशाला जल उपयोग दैनिक रूप से चलाए जा रहे नैदानिक परीक्षणों और इस सुविधा में कार्यरत प्रयोगशाला तकनीशियनों की संख्या पर निर्भर करता है । नाभिकों को निष्कर्षण और पीसीआर परीक्षण सहित नैदानिक प्रक्रिया के दौरान मिक्सर तैयार करने के लिए निशुल्क जल की आवश्यकता होती है और इसे अन्य आपूतयों और रसायनों के रूप में अग्रिम रूप से दिया जाना चाहिए । एक नैदानिक परीक्षण चलाने के लिए कम से कम ५० मिलीलीटर नाभिक मुक्त पानी की जरूरत है; न्यूनालेस मुक्त जल की अपेक्षित मात्रा कार्य भार (अर्थात् नमूनों की संख्या पर) पर निर्भर करती है । आटोक्लेव स्टरलाइजर को चलाने के लिए आसुत जल की जरूरत होती है । ऑटोक्लेव एक चक्र में पानी की खपत 160-180 मिलीलीटर है; ऑटोक्लेव दैनिक उपयोग के लिए सिफारिश की है । प्लास्टिक के अधिकांश (ट्यूबों, पिपेट टिप्स, आदि) डिस्पोजेबल हैं, लेकिन कुछ फिर से प्रयोग करने योग्य है और धोने की जरूरत है (बड़े कंटेनर, रैक, आदि) । नियमित रूप से चलने वाले पानी का उपयोग प्रक्रियाओं के बीच हाथ धोने के लिए किया जाता है और इसकी न्यूनतम मात्रा 15-20 L प्रतिदिन होने का अनुमान है । पानी के लिए दबाव के लिए पंप की जरूरत है; तलछट पूर्व फिल्टर प्रणाली तलछट के हानिकारक प्रभाव से पानी के उपकरणों की रक्षा और चल रहे पानी की गुणवत्ता में सुधार करने के लिए सिफारिश की है ।

कोल्ड स्टोरेज के लिए, प्रत्येक प्रयोगशाला इकाई में नमूनों/आरएनए का भंडारण करने के लिए कम से ५.१ क्यूबिक फीट रेफ्रिजरेटर (+ 4 डिग्री सेल्सियस) और एक ४.९ क्यूबिक फीट (-20 डिग्री सेल्सियस से-30 डिग्री सेल्सियस) फ्रीजर की आवश्यकता होती है ।

प्रयोगशाला विसंदूषण कई स्तरों में शामिल हैं: नसबंदी > रोगाणुशोधन > सफाई > । साधारण सफाई साबुन और पानी का उपयोग करते हुए एक दस्ताने हाथ या ब्रश के साथ स्क्रबिंग प्रदर्शन किया जा सकता है । एंटीसेप्सिस तरल रोगाणुरोधी रासायनिक के साथ धोने के क्रम में वृद्धि और कीटाणुओं की बहुलता को बाधित शामिल है । शराब समाधान (७०%) एक एंटीसेप्टिक तरल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । कीटाणुशोधन एक तरल रसायन का अनुप्रयोग है जो लगभग सभी रोगजनक सूक्ष्मजीवों (बैक्टीरियल बीजाणुओं को छोड़कर) को कार्य सतहों और उपकरणों पर समाप्त करता है । रासायनिक जोखिम समय, तापमान, और कीटाणुनाशक की एकाग्रता महत्वपूर्ण हैं । सोडियम हाइपोक्लोराइट समाधान (०.५%), या ब्लीच, सतही शुद्धिकरण और जल शोधन के लिए एक बड़े पैमाने पर एक प्रभावी कीटाणुनाशक है । पराबैंगनी जर्मिनाशी विकिरण कीटाणुशोधन की एक और विधि है । एक जर्मिनाशी लैंप यूवी-सी प्रकाश पैदा करता है और बैक्टीरिया और वायरस के निष्क्रियता की ओर जाता है । नसबंदी सभी माइक्रोबियल जीवन को नष्ट करने के लिए एक भौतिक या रासायनिक प्रक्रिया कार्यरत-अत्यधिक प्रतिरोधी बैक्टीरियल बीजाणु शामिल हैं । नसबंदी के लिए एक ऑटोक्लेव स्टरलाइजर के साथ किया जा सकता है ।

सभी प्रयोगशाला अपशिष्ट उत्पादन के बिंदु पर अलग किया जाना चाहिए । रिसाव प्रूफ अपशिष्ट बैगों में ठोस, गैर-तीक्ष्ण, संक्रामक अपशिष्ट को जैव-संकट के रूप में चिह्नित किया गया है । यदि उत्पंन अपशिष्ट तेज है, यह पंचर प्रतिरोधी कंटेनरों में रखा जाना चाहिए । तरल पदार्थ के लिए ठीक से लेबल biohazard कंटेनरों में संभावित संक्रामक तरल अपशिष्ट लीजिए । कंटेनर और बैग मात्रा 2/3 से अधिक नहीं भरा जाना चाहिए । सभी ब्लीच उत्पादों का निपटान अपने स्वयं के नामित अपशिष्ट बिन में हल किया जाना चाहिए । प्रयोगशाला अपशिष्ट को धीरे से नियंत्रित किया जाना चाहिए एयरोसौलों और बैग/कंटेनरों के टूटना पैदा करने से बचें । ०.५% सोडियम हाइपोक्लोराइट विलयन के साथ प्रयोग के बाद जैव जोखिम अपशिष्ट वाले संग्रह बैग/डिब्बे को सील किया जाना चाहिए और बाहरी सतहों को दूषित करना चाहिए । जलाए जाने से पहले 30 मिनट के लिए १२१ डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में सभी प्रयोगशाला कचरे जीवाणुरहित । ऑटोक्लेव के उचित उपयोग के लिए कार्य मैनुअल देखें । यदि संभव हो, तो उचित नसबंदी सुनिश्चित करने के लिए ऑटोक्लेव में एक रासायनिक या जैविक संकेतक जोड़ें । सभी autoclaved ठोस और तरल अपशिष्ट की स्थापना, तिथि, समय, और ऑपरेटर के साथ निष्फल के रूप में स्पष्ट रूप से चिह्नित किया जाना चाहिए । लेबल अपशिष्ट तो एक सुरक्षित, अलग क्षेत्र में जलाए जाने से पहले रखा जाना चाहिए ।

यथा अपेक्षित, नैदानिक परीक्षण का कार्य-प्रवाह रोग और प्रतिदर्श पर निर्भर करता है । यदि यह वायरस पहचान के लिए सिफारिश की है रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए (उदाहरण के लिए, Ebola19), नमूना aliquots-के बजाय 20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है-८० डिग्री सेल्सियस (श्वसन वायरस के लिए आवश्यक) । बाद में प्रतिभाग करने वाले नमूनों की तुलना में रोगी से नमूने लेने पर एक से अधिक नमूने लेना हमेशा बेहतर होता है । यदि संभव हो, तो नमूने के प्रत्येक प्रकार के लिए कम से दो नमूनों अलग नमूना ट्यूबों में लिया जाना चाहिए । यदि अतिरिक्त नमूनाकरण संभव नहीं है तो नमूनों को उप-विभाजित किया जाना चाहिए.

यदि वैकल्पिक नमूनों को उचित तापमान पर संग्रहीत नहीं किया जा सकता (उदा., कोई फ्रीज़र उपलब्ध नहीं हैं), swabs शुद्ध में संग्रहीत किया जाना चाहिए (१००%) इथेनॉल या ९९% मेथिलयुक्त स्पिरिट आत्मा (मेथनॉल additives केवल) । इस मामले में, झाड़ू टिप इथेनॉल के 1-2 मिलीलीटर के साथ एक शीशी में डाल दिया जाना चाहिए । ध्यान दें कि ऐसे नमूने केवल पीसीआर के लिए ही उपयुक्त होते हैं । इसके अलावा, ध्यान दें कि एक अच्छी तरह से स्थापित परख प्रत्येक विशेष वायरस निदान के लिए आवश्यक है8,23, और अज्ञात वायरस के नमूने आगे की जांच के लिए सौंपा प्रयोगशालाओं के लिए भेजा जाना चाहिए19,20, 21.

श्वसन वायरस नैदानिक पीसीआर परीक्षणों के लिए प्रयोगशाला उपकरणों की सूची के लिए अनिवार्य और अनुशंसित आवश्यकताओं को पहचाना जाना चाहिए । तालिका 3 आरटी-पीसीआर नैदानिक परीक्षण के लिए मूल और ंयूनतम उंनत (अनुशंसित) उपकरण और आवश्यकताएं रेखांकित करता है । बीएसएल-3 अभ्यास के लिए, अतिरिक्त नकारात्मक दबाव संरक्षण (उदा., कार्मिक के दस्ताने बॉक्स) महत्वपूर्ण और आवश्यक है ।

प्रयोगशाला परीक्षण में शामिल कार्मिकों की संख् या में वृद्धि करने और एकल परीक्षण के लिए आवश् यक समय को गति देने के लिए कनेक् टेड प्रयोगशाला मॉड्यूल बेहतर हैं । समय लेने वाली मैनुअल आरएनए निष्कर्षण की जगह स्वचालित qPCR (जैसे, QiaCube) के साथ संभव है । जबकि यह यंत्र बोझिल (चौड़ाई ६५ सेमी, लम्बाई ६२ सेमी, ऊंचाई ८६ सेमी) है, यह बीएसएल-2 या बीएसएल-3 इकाइयों में फर्नीचर की पुनर्व्यवस्था के बाद मोबाइल प्रयोगशाला कार्यक्षेत्र में फिट हो सकता है ।

भविष्य के काम संवर्धित वास्तविकता (एआर) और आभासी वास्तविकता (वीआर) प्रशिक्षण के विकास पर ध्यान केंद्रित किया जाएगा । AR/VR चश्मे का उपयोग एक अच्छी तरह प्रशिक्षित प्रयोगशाला कार्यकर्ता बनने के लिए आवश्यक कौशल सिखाने के लिए एक इंटरैक्टिव मंच प्रदान करने के लिए किया जाएगा । उपयोगी युक्तियाँ प्रयोगशाला नैदानिक परीक्षणों में कठिन, बहुचरणी प्रक्रियाओं में से कुछ करने के लिए सॉफ्टवेयर गाइड में शामिल किया जाएगा. कार्मिक प्रशिक्षण के लिए यह दृष्टिकोण दूरस्थ प्रयोगशाला सुविधाओं, विशेष रूप से दूरदराज और संसाधन विवश क्षेत्रों में नैदानिक परीक्षण प्रदर्शन और प्रबंधन की गुणवत्ता में सुधार करना चाहिए ।

Disclosures

Baylor चिकित्सा कॉलेज के मोबाइल क्लीनिक के लिए एक अमेरिकी अनंतिम पेटेंट आवेदन (अमेरिकी पेटेंट आवेदन No .15/523126, # ६२००७८९२४) रखती है । लेखकों की घोषणा है कि वे कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित है ।

Acknowledgments

इस लेख की सामग्री जरूरी विचारों या अमेरिकी स्वास्थ्य और मानव सेवाओं के विभाग या लेखकों के साथ संबद्ध संस्थानों की नीतियों को प्रतिबिंबित नहीं करता है । इस शोध पॉल जी एलन परिवार फाउंडेशन "बढ़ाया शूंय प्रभाव, आपातकालीन स्मार्ट Pod" द्वारा समर्थित किया गया था । हम गहराई से सभी उपयोगी चर्चाओं और Baylor कॉलेज ऑफ मेडिसिन, जीएसएस स्वास्थ्य, नासा के जॉनसन स्पेस सेंटर के सहयोगियों के साथ सहयोग की सराहना करते हैं । हम दूरस्थ प्रयोगशाला सुविधा में श्वसन विषाणु नैदानिक परीक्षण करने के लिए आरटी-पीसीआर मशीन, सेंट्रीफ्यूज, और स्वचालित पिपेट के ऋण के लिए थर्मो फिशर साइनटीफिकों और इसके प्रतिनिधियों के प्रति ईमानदारी से आभारी हैं । लेखक मार्ता Storl के आभारी है-डेसमंड और Sidney स्टीफन Sorrell पांडुलिपि तैयार करने और वीडियोग्राफी में उनकी सहायता के लिए ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Autoclave Sterilizer 'BioClave' Benchmark Scientific, Edison, NJ, USA B4000-16 16 liter, Benchtop, Dims: 22x17.5x15.7 in, Fully automatic, Extremely Compact
Barcode Scanner Zebra Technologies ZIH Corp., Lincolnshire, IL, USA Symbol LS2208 Handheld, lightweight
Breaker Box Panelboard Enclosure Square D (Schneider Electric), France  MH62WP  NEMA 3R/5/12, Dims: 20 W x 62 H x 6-1/2 in. D, Electrical distribution board
Centrifuge - Microcentrifuge 17,000 x g Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 75002440 Holds 24 x1.5 or 2 ml tubes, Dims: 8.9x9.6x13.8 in
Class II Biological Safety Cabinet NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA NU-602-400 4 Ft. Class II Type A2 Cage Changing Biological Safety Cabinet, 12" Access Opening, HEPEX Pressure Duct 
Class III Biological Safety Cabinet (Glove box) Germfree Laboratories, Ormond Beach, FL, USA Model #PGB-36, Serial #C-2937 Glove box, Portable, 36", Class III BSC. Dims: 36x20x23.75 in, Includes 2 interior outlets
Cryo Coolers VWR, Radnor, PA, USA 414004-286 0.5 or 1.5 ml tube benchtop coolers
Freezer (30°C freezer) Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA Model ULT430A To occupy 4.9 Cubic feet
Laminar Flow Cabinet NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA NU-126-300 3 Ft. Vertical Laminar Airflow Cabinet, 8" Access Opening, HEPA filter supply, 99.99%
Mini Centrifuge Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 75004061 Dims: 4.1x5.0x6.0 in
Pipettes automated VWR, Radnor, PA, USA 05-403-151 Pipet 4-pack (2.5,10, 100 and 1,000μL volume)
Pipettes automated 'Finnpipette' Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 4700880 Pipet 4-pack (2, 20, 200 and 1,000μL volume), Advanced Volume Gearing(AVG), Ultra durable
Power Generator Cummins Power Generation, Minneapolis, MN, USA C60 D6 60 kW, 60 Hz, 1 Phase, 120/240V, Diesel
Refrigerator BioMedical Solutions, Inc., Stafford, TX, USA BSI-HC-UCFS-0504W Standard Undercounter Refrigerators & Freezers
Refrigerator Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 05LRAETSA  To occupy  5.1 Cubic feet
RT-PCR machine 'Step-one plus' Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 4376598 Holds 96 samples, Dims: 9.7x16.8x20.2 in 
Vortex Mix Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 88880017TS Dims: 6.1x8.3x3.3 in
Chemicals
AgPath-ID One-Step RT-PCR Reagents Applied Biosystems, Foster City, CA, USA 4387391
Ethanol Koptec Pure 200 Proof Decon Labs, Inc., King of Prussia, PA, USA V1001
Nuclease-free Water Ambion, Inc., Carlsbad, CA, USA AM9906
QIAamp Viral RNA Mini Kit Qiagen, Hilden, Germany 52906
SuperScript III Platinum One-Step qRT- PCR Kit Invitrogen, Carlsbad, CA, USA 11732-088
Disposable
1 mL cryogenic tubes Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 03-337-7X 
1.5 mL tubes VWR, Radnor, PA, USA 10025-726
10 µL Filter Tips Neptune, VWR, Radnor, PA, USA Neptune, BT10XLS3
20 µL Filter Tips Multimax, BioExpress, VWR, Radnor, PA, USA MultiMax, P-3243-30X
200 µL Filter Tips ART, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA ART, 2770
1000 µL Filter Tips Phenix Research Products, Candler, NC, USA TS-059BR
AB custom probes Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA N/A Custom probes
Combitips Eppendorf, Hauppauge, NY, USA 89232-972
Integrated DNA Technology (IDT) custom probes and primer IDT N/A Custom probes
MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 490003-978 CS
MicroAmp Fast Reaction Tubes (8 tubes/strip) Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 4358293
MicroAmp Optical 8-Cap Strip Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 4323032
MicroAmp Optical Adhesive Film Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA 4311971
Supplies
Biohazard waste bags VWR, Radnor, PA, USA 14220-046 20.3 x 30.5 cm Biohazard bags
Gloves Denville Scientific, Holliston, MA, USA G4162-250 Small, meduim or large Nitrile or latex gloves
Lab coat N/A N/A Customizable
Masks VWR, Radnor, PA, USA 414004-663 Advanced protection mask
Protective shoes N/A N/A Customizable

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References

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दवा मुद्दा १४६ Deployable विस्तार योग्य दूरस्थ प्रयोगशाला संसाधन विवश क्षेत्र सुरक्षा आवश्यकताओं नैदानिक परीक्षण श्वसन वायरस इंफ्लूएंजा
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Petrova, E. V., Avadhanula, V.,… More

Petrova, E. V., Avadhanula, V., Michel, S., Gincoo, K. E., Piedra, P. A., Anandasabapathy, S. Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics. J. Vis. Exp. (146), e59188, doi:10.3791/59188 (2019).

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