Summary
Denne protokollen beskriver en enkel metode for oppkjøpet av pusten prøver fra barn. Kort, prøver av blandede luften er pre konsentrert i absorberende rør før gass kromatografi-massespektrometri analyse. Pusten biomarkers av smittsomme og ikke-smittsomme sykdommer kan identifiseres med denne pusten samling metoden.
Abstract
Pusten innsamling og analyse kan brukes til å oppdage flyktige biomarkers i en rekke smittsomme og ikke-smittsomme sykdommer, som malaria, tuberkulose, lungekreft og leversykdom. Denne protokollen beskriver en reproduserbar metode for prøvetaking ånde hos barn og deretter stabilisere pusten prøver for videre analyse med gass kromatografi-massespektrometri (GC-MS). Målet med denne metoden er å etablere en standardisert protokoll for oppkjøpet av pusten prøver kjemiske analyser, fra barn i alderen 4-15 år. Først samples pusten ved hjelp av papp munnstykke knyttet til en 2-veis ventil, som er koblet til en 3 L bag. Pust analytter deretter overført til en termisk desorpsjon rør og lagret på 4-5 ° C før analysen. Denne teknikken har tidligere blitt brukt til å fange pusten av barn med malaria for vellykket pusten biomarkør identifikasjon. Deretter har vi har brukt denne teknikken å ekstra pediatric kohorter. Fordelen med denne metoden er at den krever minimal samarbeid på del av pasienten (av spesiell verdi pediatric bestander), har en kort samling perioden, krever ikke kvalifiserte ansatte, og kan utføres med bærbart utstyr i ressurs-begrenset Feltinnstillinger.
Introduction
Biomarkers kan gi verdifull informasjon om normal og patologisk biologiske prosesser som kan bidra til klinisk identifiserbar sykdom. Nylig har det vært økende interesse for evalueringen av pusten flyktige som biomarkers for en rekke sykdom stater, inkludert infeksjon, metabolske forstyrrelser og kreft 1. Skjermbilde for utåndet pusten inneholder kvantifiserbare nivåer av flyktige organiske forbindelser (VOCs), semi flyktige organiske forbindelser og microbially avledet materiale (f.eks nukleinsyrer mot bakterier og virus). Det sentrale målet for utåndet pusten analyse er å få innblikk i statusen for en medisinsk tilstand og/eller miljømessige eksponeringer ikke-invasively. Det finnes ulike metoder for å samle og analysere utåndet pust, avhengig av bestanddelene av interesse. Aktuelle finnes det ingen standardisert utåndet pusten samling metode, kompliserer komparativ analyse av resultater på tvers av studier. Standardisere pusten samlingen prosedyrer er viktig, som selve inngrepet prøvetaking har en betydelig effekt på nedstrømsresultatet på pusten analyser.
I mange studier er sent åndedretts pusten prøvetaking næringsdrivende2,3. Tallgrunnlaget innebærer forkaster den første delen av utåndet ("dead space"), for å fange fortrinnsvis luften på slutten av syklusen pusten. Fordelen med denne strategien er at det reduserer nivået av eksogene VOC (f.eks miljømessige VOCs), mens berikende for endogene, pasient-spesifikke VOCs. Denne metoden ekskluderer de første sekundene av utpust fra en individuell før samle det pust eksemplet. Andre etterforskere har ansatt en trykksensor til å aktivere prøvetaking i en forhåndsdefinert fasen av utløpsdato4,5. Trykk sensorer krever kompleks engineering, krever denne alternative metoden en dedikert og relativt dyrt prøvetakingsutstyr.
Pediatric pusten prøvetaking kan være spesielt utfordrende. En viktig bekymring er at små barn ikke kan samarbeide med protokoller for frivillig utpust av "dead space" luft. Derfor er det enklere å få blandet åndedretts pusten fra barn. En stor påminnelse med blandet åndedretts pusten prøver er imidlertid risikoen for miljø og materielle forurensning. Muligheten for pediatric samling er derfor en kjøring bekymring i feltet.
I tillegg til samling metoder, kan lagring av pusten prøver også påvirke utvalg kvalitet. Høy fuktighet i pusten exhalate og de svært lave konsentrasjonene (deler per billioner) av flyktige organiske pusten forbindelser gjøre pusten prøver spesielt utsatt for problemer knyttet til lagring6,7. Til tross for det store potensialet av sanntids teknikker som proton overføring reaksjon-massespektrometri (PTR-MS) forblir GC-MS gullstandarden for analyse av pusten prøver. Siden GC-MS analyse av pusten prøver er en teknikk som er frakoblet, den er kombinert med pre konsentrasjon metoder som termisk desorpsjon (TD) rør, solid fase mikro-utvinning og nål felle enheter. Før pre konsentrasjon må pusten prøver lagres midlertidig i polymer poser8. Polymer posene er populære på grunn av deres moderat pris, relativt god holdbarhet og reusability. Mens poser kan gjenbrukes, er tid og krefter nødvendig for å sikre effektiv rengjøring7,8. Hver bestemt bag type krever også empirisk bestemt og standardisert prosedyrer for kvalitetskontroll, gjenbruk og gjenvinning.
TD rør er mye brukt for pusten pre konsentrasjon fordi de fange et stort antall flyktige og kan tilpasses. Absorberende materialer for pakking TD rør kan tilpasses bestemte programmer og spesielle mål flyktige av interesse. TD rør vesentlig forbedre bekvemmeligheten av pusten biomarkør studier, spesielt ved eksterne feltet områder, fordi TD rør trygt lagre pusten flyktige i minst to uker og er enkle å transport3.
I et forsøk på å standardisere pediatric pusten samling for biomarkør oppdagelse, beskriver her vi en enkel metode for å samle pusten fra yngre barn. For å illustrere representant resultatene av implementert protokoller, presenteres de identifiserte data fra en pågående kohort av barn (alder 8-17) under evaluering for alkoholfrie fettsyrer leveren sykdom (NAFLD). Full resultatene og analyse av denne studien vil bli rapportert i senere publikasjoner. I dette arbeidet rapportere vi av data å demonstrere programmet av våre protokollen. I korthet, er barn pålagt å puster normalt via munnstykket til en polymer bag, som om "blåse en boble." Prosessen gjentas 2 - 4 ganger til 1 L pusten samles. Prøven er deretter overført til en TD rør og lagret på 5 ° C før GC-MS analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Studien har blitt godkjent av de institusjonelle gjennomgang styret av Washington University School of Medicine (#201709030). Informert samtykke ble innhentet fra foreldre eller verge før inkludering i studien. Fotografier i figur 2 gjengis med skriftlig informert foreldresamtykke.
1. pusten sampler montering
- Bruke engangshansker, knytte en papp munnstykket til pusten sampler, som vist i supplerende figur 1. Knytte en kort lengde på stor diameter rør til den andre ytterligheten av pusten sampler, som vist i supplerende figur 1. Bruk nye rør for hver pasient.
- Feste pusten koblingen til bag ventilen via slangen. Se figur 1 for bilde av pusten sampler og bag koblet.
- Slå riflete tommelskruen på siden av innløp passende mot klokken for å låse ventilen og presse stammen i posen ventilen ned, åpne innløp passer for prøvetaking.
- Lås valve åpne, ved å slå riflete tommelskruen på siden av innløp passer med klokken.
- Bekrefte at blå ventilen på den pust sampler er åpen (parallelt med kontakten).
- Skrive pasient ID, dato og klokkeslett på etiketten av polymer posen.
- Tilstand TD absorberende rør før pusten samling anbefalt prosedyrer (tilgjengelig fra enkelte produsenter). Cap og lagre termisk desorpsjon rør på 4-5 ° C før pusten samling å minimere gjenstander.
2. pust samling
- Utføre en demonstrasjon av pusten utpust barnet ved å bruke en pust sampler (uten en bag). Forklare barnet at de bør puster ut som de ville gjøre når "blåse opp en ballong" og fortsette puste som de kan komfortabelt. Sett papp munnstykket mellom leppene og pust ut så langt som mulig.
- Gi barnet en ny pust sampler knyttet til en pose og be dem å puster i demonstrasjonen, som vist i figur 2.
- Lukk blå ventilen på pusten sampler enheten når barnet er ferdig puster. Åpne ventilen etter behov før ytterligere eksos.
- Gjenta trinn 2.2 og 2.3 til minst 1 L pusten har vært samlet. For et sunt barn dette kan ta 2 eksos, og for en syk eller yngre barn 2-4 eksos. 1 L pusten er minimumskravet analytisk. Oppmerksom på vesken etiketten hvor mange åndedrag ble Hentet fra pasienten. Se supplerende figur 2 for et bilde av posen som inneholder forskjellige mengder pusten.
- Før du fjerner posen fra den pust sampler, sørg for å løsne riflete tommelskruen på siden av innløp ved å vri det mot urviseren og skyv stammen av ventilen opp nær innløp montering. Se supplerende figur 3 for bilde av posen ventilen i åpen og lukket posisjon.
- Låse bag ventilen stengt ved å slå riflete tommelskruen på siden av innløp passer med klokken.
- Koble posen fra den pust sampler.
- Kast munnstykket og sette til side den pust sampler for rengjøring før bruk med en annen pasient.
3. pusten overføring til termisk desorpsjon rør
- Fjern TD røret fra kjøleskapet. Fjerne dekslene til langsiktig lagring av absorberende rør, ved hjelp av verktøyet for levert av produsenten tube capping/uncapping.
- Fest den rillede enden av TD absorberende røret til prøvetaking posen med rør. Merk at rør orientering er viktig, som TD rør utformet for å få luft strømme i én retning, fra den rillede enden. Merk at overføring av pusten fra bag til TD bør gjøres innen 1 time pusten samling.
- Sett den andre enden av TD rør inn slangen, som er koblet til en pumpe.
- Slå på pumpen og satt til å kjøre på 100 mL/min for 10 min.
- Åpne ventilen på posen ved å vri mot urviseren riflete tommelskruen på siden av vik montering og trykk stammen av ventilen ned åpne innløp montering. Dette illustreres i supplerende figur 4, som viser pusten overføring til en TD absorberende rør med en pumpe.
- Starte pumpen, hvilke ville opphøre etter 10 min samling.
- Fjerne TD absorberende røret og stram caps på begge ender ved hjelp av verktøyet for rør capping/uncapping. Langsiktig lagring caps må være fast strammet for å sikre en lekkasje-tett forsegling.
- Plassere et klistremerke på slutten av én landskamp å angi røret har blitt brukt. Klistremerket, angi pasienten studien identifikasjon (ID) nummer og dato.
- Sett røret i en liten lukkbar plastpose. Lagre absorberende rør på 4-5 ° C. Presse resten av pusten ut av sekken og kast posen. Registrere pasienten studie ID, TD rør serienummer, samling dagen, pusten anvist, pusten overføring, og matinntaket (tiden av matinntaket før pusten samling og måltider fortært).
4. luft samling
- Samle luften prøvene i pasientens miljø umiddelbart etter pusten samling.
- Feste posen til pumpen stikkontakt porten ved hjelp av rør, som illustrert i supplerende figur 5.
- Skyv stammen i posen ventilen ned åpne innløp montering for prøvetaking.
- Lås valve åpne ved å dreie riflete tommelskruen på siden av vik montering.
- Slå på pumpen og satt til å kjøre på 100 mL/min i 12 minutter. Pumpen vil samle 1200 mL i omgivelsene.
- Etter at det angitte volumet har blitt samlet, løsne riflete tommelskruen på siden av innløp ved å vri det mot urviseren og skyv stammen av ventilen opp nær innløp montering.
- Låse bag ventilen stengt ved å slå klokken riflete tommelskruen på siden av vik montering.
- Koble posen fra pumpen.
- Følg de samme trinnene som i avsnitt 3. Den eneste forskjellen er at luften VOCs overføres, ikke de pust.
5. eksempelkode og dataanalyse
Merk: For analyse pusten og luft har vært beskrevet tidligere9.
- Analysere innsamlede data og oppdage forbindelser i chromatograms. Bruke typiske programmer for å finne og identifisere alle forbindelser oppdaget av apparatet (figur 3A). For eksempel bruke en deconvolution funksjon for å identifisere forbindelser. Filtrere data med oppbevaring vindu størrelse faktor på 80, masse høyder filtre ≥100 teller, og sammensatte absolutt området filteret ≥500 teller.
- Bruke kjemiske standarder til identitet forbindelser i pusten og luft. Ekstra base ion peak området forbindelser steder som isopren og β-pinene (Figur 4), og sammenligne nivåer av flyktige i pusten og luft.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I vår studie pusten innhentet prøver fra 10 barn (8-17 år) under evaluering ved St. Louis Children's Hospital. Pusten prøver og Luftprøver (n = 10) ble samlet som beskrevet ovenfor. Prøvene ble analysert med gass kromatografi quadrupole tid-av-flight massespektrometri (GC-QToF-MS) og termisk desorpsjon, som beskrevet tidligere9. Etter fjerning av bakgrunn forurensninger gitt de implementert protokollene gjennomsnittlig 311 flyktige organiske forbindelser (VOCs) i hver av blandet utåndet pusten prøvene. Gjennomsnittlig betydelig mer VOCs ble funnet i pusten prøver i forhold til ambient/miljøkontroller (311 ± 11.5 versus 190 ± 12.6, p < 0,0001) (figur 3A). Økt antall VOCs i åndedrag, sammenlignet med luften, kjennetegnes synlig ved å sammenligne representant totale ion chromatograms (TICs) (figur 3B).
Som en kvalitetskontroll av vellykket pusten samling ble nivåer av to vanlige pusten VOCs (isopren og β-pinene) sammenlignet med rommet luften kontroller (Figur 4). Isopren, en av de rikeste VOCs i åndedrag, finnes vanligvis i deler per milliarder (ppb) nivåer (131 ppb) mens β-pinene finnes i sub-ppb nivåer (0.59 ppb)6. Begge forbindelser er godt etablert å være anriket på pust av friske voksne, i forhold til de lave nivåene i romluften som angir normale fysiologiske prosesser som en primær kilde til disse analytter i pusten6. Isopren (m/z 67) ble funnet på oppbevaring tid 2.12 min og β-pinene (m/z 93) ble funnet ved oppbevaring tid 14.4 min. Vi finner at overflod av isopren var 10-fold høyere i pediatric pusten prøver enn i rommet luften kontroller (Figur 4; betyr overflod ± SEM er 4.2x105 ± 1.0x105 og 3.9x104 ± 0.9x104 for pust og air henholdsvis p = 0.0003) og β-Pinene utstilt 3 ganger høyere overflod i pusten enn luft (betyr overflod ± SEM er 3.0x104 ± 1.3x104 og 9.1x103 ± 1.6x103 for pust og air henholdsvis p = 0.007), bekrefter vellykket pusten samling. Full beskrivende analyse av biomarkør oppdagelsen funn fra denne studien vil bli rapportert i fremtidige publikasjoner.
Figur 1: samlet pusten sampler og bag for utåndet pusten samling. Pusten sampler (med blå ventilen åpen, dvs. parallelt med koblingen som angitt av den tosidige røde pilen) og bag forbundet med rør, klar for pusten samling. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: barn exhaling pust inn i en pust prøvetaking bag. (A) barn holder pusten sampler, puster ut, og (B) gir pust eksemplar i posen. Fotografere med tillatelse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: utåndet BreathVolatiles. (A) antall distinkte flyktige forbindelser i hvert åndedrag prøver fra pediatric fag (n = 10) og luften kontroller (n = 10). Vises er midler og standard feil av gjsnitt (SEM). (B) Total ion chromatograph (TIC) av representant pediatric pusten prøver mot luft kontroll, for visualisering. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: overflod av to utåndet pusten flyktige. Overflod av isopren og β-pinene i pusten prøver pediatric fag (n = 10) og rommet luften kontroller (n = 10). Overflod kvantifisert ved base ion peak området. Mener og SEM vises. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Ekstra figur 1: pust sampler. Venstre: A) samlet pusten sampler: 1) mannlige kort + 2) toveis kuleventil kontakt + 3) Teflon mannlige adapter. B) Pappmunnstykket. C) liten og stor diameter rør. Høyre: pusten sampler med munnstykke og rør festet. Klikk her for å laste ned denne filen.
Ekstra figur 2: forskjellige pusten volumer. Ovenfor er bilder av en prøvetaking pose fylt med forskjellige mengder (1 L, 2 L og 2.5 L), som en visuell representasjon av omtrentlig pusten volumer skal samles inn. Klikk her for å laste ned denne filen.
Ekstra figur 3: ventil på bag. Venstre: ventilen stammen er nede (bag ventilen er åpen). Låse bag ventilen stengt ved å slå klokken riflete tommelskruen på siden av vik montering. Posen er klar for pusten samling. Høyre: stammen av ventilen er opp (bag ventilen er stengt). Klikk her for å laste ned denne filen.
Ekstra figur 4: pust overføring. Venstre: absorberende rør (1) festet til den ene enden av vesken med små og store diameter rør, og på den andre enden, på pumpen. Høyre: Merk rillede enden på absorberende røret; rillede enden skal peke mot prøvetaking posen. Klikk her for å laste ned denne filen.
Ekstra figur 5: luft samling. Venstre: pumpe med to porter: innløp og utløp. Stikkontakt porten er knyttet til prøvetaking bag. Vik porten vil trekke luft og overføre den til vesken. Høyre: luften samling system montert. Klikk her for å laste ned denne filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Til tross for betydelig fremgang i pusten forskning det siste tiåret fortsatt standardisert praksis for prøvetaking og analyse av pusten gass flyktige udefinert10. En hovedårsak for denne mangelen på standardisering er mangfoldet av pusten samling metoder, som har direkte innvirkning på resulterende kjemiske mangfoldet i noen gitt utåndet pust eksemplar. Pust exhalate inneholder et omfattende utvalg av flyktige organiske forbindelser ved svært variert konsentrasjoner6. Derfor endrer endre samling metoder ikke bare overflod, men også mangfoldet av stoffer som kan finnes i et gitt utvalg.
Pusten gass prøvetaking er overraskende komplisert. Mens fag trenger bare å puster i munnstykket til en pust samler eller en gass-tette beholder før analyse, pusten prøvetaking må kontoen og for en rekke potensielle variabler. I dette arbeidet detalj vi en bestemt, godkjente protokoll for pusten gass prøvetaking i barn. Vi har tidligere implementert denne protokollen med febril barn så unge som fire år gammel, i feltet scenario i ressurs-begrensede omgivelser (Malawi), viser muligheten for våre pusten innsamling og analyse rørledninger for biomarkør Discovery9. Senere, har vi også gjennomført og evaluert våre protokoller for innsamling av pusten prøver fra barn under evaluering i en moderne pediatric subspecialty klinikk i USA. Våre resultater tyder på at for oppdagelsen av pediatric pusten biomarkers, innsamling av blandede luften er kritisk, som det gir en ekte "breathprint" av en bestemt person. I tillegg er blandet ekspiratorisk pusten også den enkleste typen pusten som kan oppnås, fordi alle faser av utåndet luft (munn og nese) er ervervet3.
I feltet, og spesielt når fag er akutt syke, det kan være vanskelig å kontrollere for vanlige forstyrrende faktorer som kosthold, kroppstemperatur eller bruk av parfyme eller kremer ved et gitt emne. Disse faktorene kan ha en betydelig innflytelse på pusten nivåer og kvalitet. Derfor anbefaler vi etterforskere ikke bare ta pusten samling og overføring til absorberende rør, men også oppmerksom pasient-spesifikke faktorer som diet (f.eks, 24-timers kosttilskudd tilbakekalling), bruk av munnvann og medisinering bruk, for å vurdere spesielt for effekten av disse mulige forstyrrende faktorer biomarkør oppdagelsen og nedstrøms analyser.
Forbindelser innånding fra luften kan også påvirke sammensetningen av utåndet pust, som kan være en utfordring å pusten biomarkør oppdagelsen innsats. Derfor er analyse og samling av luften en kritisk kontroll, gir viktig innsikt om opprinnelsen til utåndet pusten flyktige. For eksempel har luften flyktige profiler blitt brukt til å fastslå om en gitt pust flyktige er på høyere eller lavere overflod i pusten sammenlignet med omkringliggende luften11. En bestemt pusten sammensatte er derfor ansett å være avledet fra inne i kroppen (f.eks endogen opprinnelse) hvis konsentrasjonen er høyere i pusten enn i luften, mens redusert konsentrasjon på pusten indikerer at forbindelsen ble avledet fra miljøet (f.eks eksogene opprinnelse). Sammenligne flyktige overflod i pusten versus luften fungerer også som en viktig positiv kontroll for om pusten samling er tilstrekkelig. Som vist i vår representant data (Figur 4), den flyktige sammensatte isopren av endogen opprinnelse og skal vises i pusten prøver i konsentrasjoner > 10 ganger av ambient luft6.
For biomarkør oppdagelse, må flyktige profiler fra personer med forholdene rundt sammenlignes med en samsvarende sunn kontroll enkeltpersoner, slik at mønstre kan identifiseres ved hjelp av statistiske teknikker som maskinlæring og multivariabel analyser12. Pusten samling metoden beskrevet her kan brukes til en rekke patologiske tilstander. Det eneste kravet er at barnet kan samarbeide med pusten prøvetaking frivillig. Fordi pusten testing er ikke-invasiv, lett gjentas, og nesten samme arteriell konsentrasjonen av biologiske stoffer, har det store løftet for implementering i point-of-care testing for klinisk bruk.
Videre arbeidet vil fokusere på utvikling av nye metoder for pusten samling i unge spedbarn og barn (< 4 år), som er developmentally ikke puster på kommando.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Vi uttrykke vår takknemlighet til barn og familiene til St Louis Children's Hospital som deltok i denne undersøkelsen. Vi erkjenner unike innsatsen til Ms. Stacy Postma og Ms. Janet Sokolich under pusten samlingen. Dette arbeidet er støttet av St. Louis barnas sykehus fundament.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breath bag | SKC | 237-03 | These are 3 L bags |
| Cardboard mouthpiece | A-M systems | 161902 | 0.86" OD, 2.00" L |
| Large diameter tubing | Cole Parmer | 95802-11 | Silicone Tubing, 1/4"ID x 5/16"OD, |
| Long-term storage caps | Markes International | C-CF010 | Brass storage cap ¼" & PTFE ferrule, pk 10 |
| Male adapter | Charlotte Pipe | 2109 | Part 1/3 of breath connector (1/2" Universal part No. 436-005) |
| Male adapter (made from Teflon) | In-house built | Part 3/3 of breath connector (1/4" ID x 1/2" MIP). This part was specially machined from rods made from virgin Teflon | |
| Pump | SKC | 220-1000TC-C | Pocket PumpTouch with Charger |
| Small diameter tubing | Supelco | 20533 | Teflon tubing L × O.D. × I.D. 25 ft × 1/4 in. (6.35 mm) × 0.228 in. (5.8 mm) |
| Thermal desorption tubes | Markes International | C2-CAXX-5314 | Tube, inert, TnxTA/Sulficarb, cond/cap, pk 10 |
| Tube capping/uncapping tool | Markes International | C-CPLOK | |
| Two-way ball valve connector | Homewerks Worldwide | VBV-P40-E3B | Part 2/3 of breath connector (1/2") |
References
- Ahmed, W. M., Lawal, O., Nilsen, T. M., Goodacre, R., Fowler, S. J. Exhaled volatile organic compounds of infection: a systematic review. ACS Infectious Diseases. 3 (10), 695-710 (2017).
- Berna, A. Z., et al. Analysis of breath specimens for biomarkers of Plasmodium falciparum infection. Journal of Infectious Diseases. 212 (7), 1120-1128 (2015).
- Lawal, O., Ahmed, W. M., Nijsen, T. M. E., Goodacre, R., Fowler, S. J. Exhaled breath analysis: a review of 'breath-taking' methods for off-line analysis. Metabolomics. 13 (10), (2017).
- Kang, S., Thomas, C. L. P. How long may a breath sample be stored for at-80 degrees C? A study of the stability of volatile organic compounds trapped onto a mixed Tenax:Carbograph trap adsorbent bed from exhaled breath. Journal of Breath Research. 10 (2), (2016).
- Basanta, M., et al. Non-invasive metabolomic analysis of breath using differential mobility spectrometry in patients with chronic obstructive pulmonary disease and healthy smokers. Analyst. 135 (2), 315-320 (2010).
- Mochalski, P., et al. Blood and breath levels of selected volatile organic compounds in healthy volunteers. Analyst. 138 (7), 2134-2145 (2013).
- Mochalski, P., Wzorek, B., Sliwka, I., Amann, A. Suitability of different polymer bags for storage of volatile sulphur compounds relevant to breath analysis. Journal of Chromatography B-Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 877 (3), 189-196 (2009).
- Mochalski, P., King, J., Unterkofler, K., Amann, A. Stability of selected volatile breath constituents in Tedlar, Kynar and Flexfilm sampling bags. Analyst. 138 (5), 1405-1418 (2013).
- Schaber, C., et al. Breathprinting reveals malaria-associated biomarkers and mosquito attractants. Journal of Infectious Diseases. 217 (10), 1553-1560 (2018).
- Herbig, J., Beauchamp, J. Towards standardization in the analysis of breath gas volatiles. Journal of Breath Research. 8 (3), (2014).
- Phillips, M., et al. Variation in volatile organic compounds in the breath of normal humans. Journal of Chromatography B. 729 (1-2), 75-88 (1999).
- Eckel, S. P., Baumbach, J., Hauschild, A. C. On the importance of statistics in breath analysis-hope or curse? Journal of Breath Research. 8 (1), (2014).
