Burada, bir test makalesinin maternal damar içine uygulanmasını sağlamak ve ksenobiyotik partiküllerin veya farmakolojik ajanların plasental aktarımını değerlendirmek için ex vivo maternal-fetal vasküler perfüzyon Protokolü sunulmuştur. Plasental Fizyoloji.
Plasenta fetal ksenobiyotik pozlama için bir engel olarak hizmet veren ve atık için besin değişimi aracılık hamilelik sırasında anahtar bir organdır. Bir tahlil burada izole sıçan plasenta perfkullanmak ve Ksenobiyotiklerin ex vivo maternal-to-fetal translokasyon değerlendirmek için açıklanmıştır. Buna ek olarak, fetus ve plasental metabolizması için sıvı akışı gibi fizyolojik süreçlerin değerlendirilmesi Bu metodoloji ile yapılabilir. Bu teknik, ilaç adaylarının veya çevresel kirleticilerin maternal-fetal kinetiği değerlendirmek için uygundur. Bu metodoloji, mevcut alternatif yaklaşımların aksine, sistemik nöral veya bağışıklık tutulumu ile izole maternal-fetal damar sisteminin değerlendirilmesine izin verir ve fizyolojik işlevde gözlenen değişikliklerin izole doku içinde yerel etkenlere attenable.
Morfolojik yapısı ve fizyolojik tepkisini koruyarak, organ perfüzyon metabolik fonksiyon analizi için kabul edilen bir sistem veya doku tabanlı bir yaklaşım olmuştur. Bu perfüzyon teknikleri, çeşitli farmakolojik ve mekanik uyaranlara ait bozulmamış doku yanıtlarının ex vivo incelemesine izin verir. İnsan plasenta perfüzyon başlangıçta açıklanan 1958 sitrik asit döngüsünün metabolik aktivite üzerinde hormonal etkileri tanımlamak için; daha önce doku homojenlerde tanımlanmıştı, Troen ve Gordon yeni bir fizyolojik yaklaşım kullanarak endokrin etkinliğini açıklığa kavuşturmak için ihtiyaç kabul1. Aynı dönemde, şeker, tuzlar ve antipyrin ilaçların plasental aktarımını anlamak için büyük2,3 ve küçük4 hayvan modellerinde tek perfüzyon (maternal-to-fetal veya fetal-maternal) stratejileri tanımlanmıştır. In vivo ve ex vivo Dual-perfüzyon (koordineli maternal ve fetal perfüzyon) teknikleri, In vivo5 ve ex vivo6,7,8 metodolojileri kullanarak plasental transferini daha fazla karakterize etmek için tanımlanmıştır. Şanzıman ve Tarama elektron Mikroskopisinde teknolojik gelişmeler, araştırmacılar perfüzyon9‘ dan sonra insan plasental dokularının yapısal ve fonksiyonel bütünlüğünü doğrulamasına izin verdi.
İnsan plasental dokuları ve bireysel kotiledon perfüzyon en alakalı olmakla beraber, farmakolojik ajanlar ve çevresel kirleticilerin hızlı gelişimi ksenobiyotik erken tarama için bir hayvan perfüzyon modelinin kullanımını gerektirir Plasental bariyer üzerinden transfer. Bu plasental perfüzyon yöntemi, daha kolay ulaşılabilir ve fizyolojik olarak ilgili sıçan plasenta kullanarak plasental bariyer boyunca transferin değerlendirilmesi için izin verir. Buna ek olarak, bir pozlama sonra bir süre içinde plasental bariyer boyunca sıvı akışı göbek arter gelen perfüzat hacmi ölçerek değerlendirilebilir. Hem maternal hem de fetal sirkülasyonlardan plasental perfüzyon sağlayarak, bu çift akışlı tüm organ yaklaşımı, mevcut in vitro ve in vivo yaklaşımlara kıyasla avantajlı olabilir. Bu yöntem, maternal yönü ile bir ksenobiyotik yönetimi, plasenta boyunca göbek ven üzerinden ortaya çıkan perfuzatta ölçülmesi veya tersi sağlar. Burada sunulan protokol, maternal uterin arter fetal bölmesine 20 Nm Polistiren (Gıda ve tıbbi ürünlerde kullanılan ortak bir nanoplastik) ve plasenta boyunca sıvı akışında ilişkili bir azalma göstermek için aktarımını açıklayacaktır Bu yöntemin, maternal ve/veya fetal akışı etkileyen plasental aktarımı, metabolizmayı ve fizyolojik değişimleri değerlendirmek için birden fazla fizyolojik, farmakolojik ve toksikoloji ayarlarında kullanımı.
Bu perfüzyon yöntemi, rahim damarının ve trofoblast tabakasının plasental bariyer ve fizyolojik fonksiyonunun hızlı değerlendirilmesi için izin verir. Maternal uterus arter distal uçları proksimal kanülasyon ve perfüzyon gelişmekte olan fetüse kan göndermekten sorumlu bu büyük gemi ile maternal kan akışının fizyolojisi simüle eder. Bu metodoloji, izole maternal, plasental ve göbek damarının fizyolojik değerlendirilmesini sağlar ve bu nedenle fizyolojideki değişiklikler vasküler patoloji olarak tanımlanabilir; bağışıklık ve nöral innervations ex-vivo işlemde kaldırılır. Uygun değerlendirme sağlamak için, bu nedenle bu gemiler dikkatle damar duvarlarında herhangi bir gözyaşı veya delik oluşturmak ve hava kabarcıkları kaldırmak için cannulate için önemlidir. Gaz emboli, damarların endotel tabakasına zarar verebilir veya kan damarlarını engelleyebilir. Diseksiyon sırasında uterusun, plasenta ve fetüs arasındaki vasküler bağlantıları koruyarak, fetüse sıvı ve transkonumun değerlendirilmesi gözlenebilir. Bir xenobiotic yönetimi ile, bu durumda 20 Nm polistiren, uterus arter distal ucuna ve plasenta aracılığıyla fetal bölmesine kinetik 180 dakika boyunca bir zaman ders üzerinde atıkları analizi ile değerlendirilebilir.
Bu yazıda bir çift perfüzyon modeli tanımlanırken, maternal ‘den fetal bölmesine kadar partiküllerin ve sıvının aktarımı izlenirken, bu makalede, fetal, maternal bölmeye karşı değerlendirilmesi de yapılabilir. Burada açıklanan yöntemin bir sınırlama distal uterus ven kanüle veya örneklenmez olmasıdır. Gelecekteki çalışmalarda, özellikle fetal-maternal transfer odaklı, bu cannulate ve distal uterus damar numune önemli olacaktır. Bu sahte deneyden alınan atıkları ksenobiyotik transfer değerlendirmek için kullanıldı; Ancak endokrin ve moleküler plasental fonksiyonları veya fetal beslenme ile ilgili geniş bir değerlendirme yelpazesi gerçekleştirilebilir.
Bu protokolün güçlü yönleri, küçük sınırlamalarına çok daha fazla basar. Hazırlık, deneysel koşulları değerlendirmek için tüm organın fizyolojik yapısını ve bütünlüğünü korur. Ex vivo plasental perfüzyon, üreme riski değerlendirmesini düzgün bir şekilde belirlemek için hücresel tabanlı in vitro tüm hayvan maruz kalma bilimsel bir ilerlemektir. Bu plasental farmakolojik ilaç eğilimi, farmakokinetik, toksikoloji, fizyoloji ve maternal-fetal tıbbı değerlendirmede çalışmalar için değerli bir teknik olarak kabul edilebilir.
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Ulusal çevre sağlığı Bilimleri Enstitüsü (R00-ES024783), Rutgers çevre pozlama ve hastalık Merkezi (P30-ES005022) ve toksikoloji (T32-ES007148) Rutgers ortak lisansüstü programı tarafından destekleniyordu. Biz de bizim perfüzyon şematik tasarımı onun yardımı için DRS. Michael Goedken, Marianne Polunas, ve Pedro Louro teknik uzmanlık ve Dr adam Goodwill için teşekkür etmek istiyorum (Şekil 5).
Black braided silk non-absorbable surgical suture non-sterile | Surgical Specialties Look | AACO805 | |
Fine forceps | FST by Dumont Switzerland | 11252-20 | |
Fine scissors | FST by Dumont Switzerland | 14060-10 | |
Glass cannula pack | Living Systems Instrumentation (LSI) | GCP-75-100 | |
Microcentrifuge Tubes 2.0mL polypropylene graduated tube with locking lid MIXED | Fisherbrand | 02-681-299 | |
Non-serrated fine curved micro serrefine clamps | InterFocus | 18052-03 | |
Perfusate pump | ISMATEC | ISM795C | |
Pressure monitor | Living Systems Instrumentation (LSI) | Mode PM-4 | |
Self-heating single vessel chamber | Living Systems Instrumentation (LSI) | CH-1 | |
Servo Pump | Living Systems Instrumentation (LSI) | ModelPS-200-P | |
Stainless steel blunt needle 23 gauge | Component Supply Co. | 04651-01 | |
Stainless steel blunt needle 25 gauge | Component Supply Co. | 07116-01 | |
STERILE Nylon Suture | AROSurgical Instruments Corporation | T04A00N07-13 | |
Stopcock | Sedation Resource | 6-205-04 | |
Temperature Controller | Living Systems Instrumentation (LSI) | Model TC-09S |