Summary
इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य रेबीज परीक्षण के लिए संतोषजनक ऊतक नमूने प्राप्त करने के लिए छोटे और बड़े जानवरों में सुरक्षित नेक्रोप्सी तकनीक ों का प्रदर्शन करना है।
Abstract
न्यूयॉर्क राज्य स्वास्थ्य विभाग (NYSDOH) रेबीज प्रयोगशाला 6,000 से 9,000 नमूनों के बीच सालाना प्राप्त करता है और पूरे राज्य के लिए रेबीज परीक्षण करता है, न्यूयॉर्क शहर के अपवाद के साथ. रेबीज प्रयोगशाला में चमगादड़ों से लेकर बोविड तक आकार में विभिन्न प्रकार के जानवर शामिल होते हैं। इन नमूनों में से अधिकांश मस्तिष्क संबंधी संकेतों का प्रदर्शन जानवरों रहे हैं, तथापि, कम से कम 10% वास्तव में रेबीज के लिए सकारात्मक परीक्षण; इन लक्षणों के कारण के रूप में आघात, घावों या अन्य संक्रामक एजेंटों का अर्थ है। अनिदान संक्रामक एजेंटों को एयरोसोलाइज करने के जोखिम के कारण, रेबीज प्रयोगशाला बिजली के उपकरणों या आरी का उपयोग नहीं करती है। जानवरों के लिए तीन नेक्रोप्सी तकनीक प्रस्तुत की जाएंगी जिनकी खोपड़ी कैंची से अभेद्य है। प्रयोगशाला संक्रामक एजेंटों के लिए संभावित जोखिम को कम करने, नमूना के अनावश्यक हेरफेर को खत्म करने और प्रसंस्करण समय को कम करने के लिए इन तकनीकों को लागू किया गया है। एक पसंदीदा तकनीक के लाभ दूसरे के लिए विरोध प्रशिक्षित व्यक्ति नमूना प्रसंस्करण के अधीन है.
Introduction
रेबीज प्रयोगशाला के शव-परीक्षण तल पर कार्य करना स्वाभाविक रूप से खतरनाक है। कभी-कभी, नमूने एम्बेडेड साही क्विल, तीर/बुलेट्स/पेलेट्स या उजागर हड्डी shards सहित विदेशी वस्तुओं के साथ आते हैं जो सुरक्षात्मक शिपिंग रैप में प्रवेश कर सकते हैं। अनुचित पैकेजिंग रिसाव में परिणाम कर सकते हैं, व्यक्तियों को खतरे में डाल जो नमूने खोल. शारीरिक चोट के अलावा, नेक्रोप्सी तकनीशियन सीएनएस और नमूनों के शरीर के तरल पदार्थ से अज्ञात zonotic संक्रामक एजेंटों के लिए जोखिम जोखिम. इसके अतिरिक्त, नमूने द्वारा किए गए बहिर्परजीवी अन्य चिड़ियाघरीय रोगों को संचारित कर सकते हैं, क्योंकि पिस्सु और टिक आमतौर पर प्रस्तुत जानवरों पर देखा जाता है। भौगोलिक स्थान और प्रजातियों को शामिल बीमारियों के आधार पर उजागर भिन्न. Arboviruses जैसे पूर्वी विषुव एन्सेफलाइटिस वायरस (EEEV) या पश्चिम नील नदी वायरस (WNV), Lyme रोग या tularemia सहित टिक जनित रोगों, क्यू बुखार या तपेदिक के कारण बैक्टीरिया, और संक्रामक prions संभावित खतरों की एक छोटी संख्या का नाम1 , २ , 3.
इन पद्धतियों का उद्देश्य ऐसे यंत्रों का उपयोग करके सुरक्षित और कुशल नेक्रोप्सी तकनीकों का प्रदर्शन करना है जो विद्युत उपकरणों या आरी4,5के विपरीत एयरोसोलाइजेशन की क्षमता को कम करते हैं . आम तौर पर, रेबीज प्रयोगशाला में छोटे जानवरों की शव-परीक्षा के लिए कपाल की मांसपेशियों को काटने और कांवरिया के शव-कक्ष 6 के पुच्छ पृष्ठीय भाग को खोलने के लिए हथौड़ा और छेनी का उपयोग करना आवश्यक होता है। कैल्वरियम के इस क्षेत्र को हटाने से पिछले मस्तिष्क को उजागर होता है, जिसमें पूरे सेरिबैलम और कपाल मस्तिष्क स्टेम शामिल हैं। संशोधित नेक्रोप्सी तकनीक खोपड़ी के अधर भाग पर किया जा सकता है, बड़े कपाल की मांसपेशियों और खोपड़ी के मोटे क्षेत्रों से बचने. हालांकि, इन संशोधित नेक्रोप्सी तकनीक केवल तभी संभव है जब नमूना गर्भाशय ग्रीवा कशेरुकी के बिना है।
इसी प्रकार, बड़े जानवरों में मस्तिष्क के ऊतकों को कपाल की मांसपेशियों को अलग करके और खोपड़ी7के कारण पृष्ठीय भाग को खोलकर हटाया जा सकता है। बड़े जानवरों की खोपड़ी आम तौर पर मोटा कर रहे हैं के रूप में सेरिबैलम और मस्तिष्क स्टेम बेनकाब करने के लिए काफी प्रयास की आवश्यकता है। खोपड़ी में प्रवेश करने से बचने के लिए, एक बड़े जानवर का सिर तैनात है ताकि खोपड़ी के वेंट्रो-कॉडल भाग तकनीशियन का सामना कर रहा है। संशोधित उपकरणों का उपयोग करना, सेरिबैलम और मस्तिष्क स्टेम रंधिका मैग्नम के माध्यम से हटा रहे हैं. यह ट्रांसमिसिबल स्पंजीफॉर्म एन्सेफेलोपैथी (टीएसई) जांच8के लिए TSE यूरोपीय संघ संदर्भ प्रयोगशाला द्वारा अनुशंसित नमूना अधिग्रहण विधि के समान है। रंधिका कशेरुकी को रंधक मैग्नम तक पहुंच प्रदान करने के लिए पहले से हटा या जाना चाहिए।
इन तकनीकों का प्रयोग रेबीज प्रयोगशालाओं में उपयुक्त रूप से प्रशिक्षित तकनीशियनों के लिए लाभदायक है। के रूप में रेबीज प्रयोगशाला विभिन्न आकारों के नमूने प्राप्त करता है, किशोर चमगादड़ से वयस्क मसौदा घोड़ों9के लिए, तकनीशियन कई तरीकों से व्यक्तिगत परिस्थितियों के आधार पर से चुनने के लिए है. एक बड़े जानवर के लिए प्रदर्शन विधि पशु चिकित्सकों जो क्षेत्र में नेक्रोप्सी प्रदर्शन के लिए भी उपयुक्त है, के बाद से रेबीज परीक्षण के लिए एक पूरे बड़े पशु सिर शिपिंग बोझिल और महंगा है. इन तकनीकों में से किसी को लागू करने एयरोसोल उत्पादन की क्षमता को कम करके सुरक्षा में सुधार होगा, नमूना की हैंडलिंग को कम करने और प्रसंस्करण समय की बचत होगी. हालांकि, के रूप में क्षेत्र एक प्रयोगशाला रेबीज परीक्षण के लिए विशिष्ट सेट के रूप में एक ही लाभ नहीं है, यह आवश्यक है कि किसी भी इन प्रक्रियाओं के लिए किए गए संशोधनों सुरक्षा पर ध्यान केंद्रित, विशेष रूप से व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (PPE) का उपयोग करें.
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Protocol
वर्णित सभी तरीकों Wadsworth केंद्र संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया.
1. तैयारी
- डॉन PPE, कम से कम आंख संरक्षण (चश्मे या चेहरा ढाल), शल्य चिकित्सा या N-95 मुखौटा, और गैर-लेटेक्स दस्ताने.
- कार्य क्षेत्र तैयार करें, आदर्श रूप से एक जैव सुरक्षा कैबिनेट (बीएससी), एक डिस्पोजेबल काम सतह को कवर केसाथ (उदाहरण के लिए, क्राफ्ट कागज या शोषक पैड) और साफ नेक्रोप्सी उपकरणों (चित्र 1)।
- काम की सतह पर नमूना रखें और अपघटन के सबूत सहित नमूने की स्थिति का आकलन करने के लिए इसे हेरफेर करने के लिए उपकरणों का उपयोग करें, खोपड़ी को नुकसान, संभावित खतरों (उदा., साही कलम, स्केलपेल ब्लेड), और decapitation की गुणवत्ता.
2. वेंट्रल विधि
नोट: जब नमूना ठीक से जबड़े लाइन पर decapitated है, रंध्र मैग्नम और पश्चकपाल condyle उजागर किया जाएगा. अधर विधि सेरिबैलम और मस्तिष्क स्टेम पुन: प्राप्त करने के लिए कम जटिल है.
- नमूना को अधर पक्ष और नाक के साथ स्थिति बीएससी के पीछे की ओर distally निर्देशन.
- दाहिने हाथ में आर्थोपेडिक हथौड़ा /मलेट पकड़ो (यदि दाएं हाथ) और एक ही समय में बाएं हाथ में एक परिषदकेन छेनी पकड़ो।
- एक 45 डिग्री कोण पर छेनी शंख हड्डी के दाईं ओर और पश्चकपाल हड्डी के दाईं ओर एक "वी" खोलने बनाने के बीच निर्देशन छेनी के कोने बिंदु के साथ स्थिति.
- दो हड्डियों को अलग जब तक हथौड़ा के साथ छेनी के शीर्ष हड़ताल. आधार हड्डी के निकट की कटौती करें।
- शंख अस्थि के बाईं ओर दोहराएँ (चित्र 2क)।
- छेनी के साथ खोपड़ी के "वी" क्षेत्र को नीचे की ओर मोड़ें। मस्तिष्क के संपूर्ण समचतुर्भुज क्षेत्र (सेरिबैलम और मस्तिष्क तना) को उजागर करना (चित्र 2ख) ।
- कैंची और संदंश के साथ मस्तिष्क स्टेम और सेरिबैलम बाहर स्कूप. मस्तिष्क स्टेम और सेरिबैलम एक टुकड़ा में बाहर नहीं आया था, तो खोपड़ी से किसी भी शेष टुकड़े निकालें।
3. डोर्सल विधि
नोट: यदि नमूना एक गरीब decapitation है (फोरमेन मैग्नम दिखाई नहीं) और गर्दन को आसानी से नेक्रोप्सी के दौरान नहीं हटाया जा सकता है या अगर सेरिबैलम को नुकसान संदिग्ध है, पृष्ठीय विधि का उपयोग किया जाना चाहिए.
- बीएससी के पीछे की ओर अलग से निर्देशित नाक के साथ नमूना dorsally स्थिति.
- ट्यूमर tenacula का उपयोग करना, tenacula के दांत के साथ बाएं अस्थायी मांसपेशियों को समझ और संभाल निचोड़ द्वारा ताला.
- तेज नक्काशी चाकू के साथ हड्डी के लिए नीचे अस्थायी मांसपेशियों को काट.
- नमूना घुमाएँ 180 डिग्री tenacula और चाकू (हाथ नहीं) के साथ और विपरीत अस्थायी मांसपेशियों पर प्रक्रिया को दोहराने. खोपड़ी को उजागर करना.
- पैरीटल और इंट्रापैराइटल हड्डी के समय खोपड़ी के केंद्र पर छेनी के कोने बिंदु के साथ 45 डिग्री कोण पर एक छेनी को स्थिति दें।
- एक क्षैतिज खोलने पार्श्विक हड्डी पर खोपड़ी के शीर्ष आधे पर किया जाता है जब तक एक हथौड़ा के साथ छेनी के शीर्ष हड़ताल।
- नमूना 180 डिग्री घुमाएँ और विपरीत पक्ष पर प्रक्रिया को दोहराएँ.
- छेनी के बिंदु को कट 1 (चित्र 3क) के अंत में और क्षैतिज छिद्र के 90 डिग्री पर सम्मिलित करें। हथौड़ा के साथ हड़ताल जब तक उद्घाटन पश्चकपाल हड्डी तक पहुँचता है (लगभग 10 सेमी नमूना के आकार के आधार पर).
- नमूना रोल और कटौती 2 के अंत में विपरीत पक्ष पर दोहराएँ.
नोट: बीएससी के पीछे की ओर स्थित नमूना पृष्ठीय और नाक के साथ, खोपड़ी में उद्घाटन एक उल्टा-नीचे "यू" के समान होते हैं। - "यू" के नीचे खोपड़ी में टेनाकुला के दांत डालें और अपने आप की ओर pry। सेरिब्रम और सेरिबैलम के पुच्छीय सिरे को उजागर करना (चित्र 3ख)
- एक स्कूप के रूप में कैंची का प्रयोग करें और गुहा के भीतर से पूरे सेरिबैलम बाहर pry.
- रंकाओं से मस्तिष्क स्टेम बाहर तंग करने के लिए ऊतक forceps का प्रयोग करें.
4. बड़े पशु विधि
- नमूना स्थिति इतनी है कि खोपड़ी के पृष्ठीय भाग खोपड़ी के पुच्छ भाग के साथ नेक्रोप्सी सतह के साथ संपर्क में है और तकनीशियन का सामना करना पड़ रंधिका.
- जहां तक संभव हो रीढ़ की हड्डी और रीढ़ की हड्डी के बीच में रंधावा मैग्नम में संशोधित स्टिलेट्टो चाकू डालें।
- रीढ़ की हड्डी के आसपास स्कोर रीढ़ की हड्डी से अलग करने के लिए रीढ़ की हड्डी से मस्तिष्क स्टेम. चाकू रंधिका के माध्यम से डाला जाता है के बाद, धीरे के रूप में संभव के रूप में खोपड़ी के साथ पालन करने के लिए चाकू कोण।
- तंत्रिका ऊतक और रीढ़ की हड्डी meninges के बीच अंतरिक्ष में एक रसायन विज्ञान spatula या पतली, लंबे समय से संभाला चम्मच डालें.
- रीढ़ की हड्डी और सेरिबैलम के आसपास जांच करने के लिए रीढ़ की हड्डी के लिए कनेक्शन सुनिश्चित करने के लिए टूट गया है.
- संदंश के साथ मस्तिष्क स्टेम पकड़ो. दूसरे हाथ से, चम्मच रोस्टली अग्रिम तो dorsally सेरिबैलम स्कूप करने के लिए. इसके साथ ही forceps के साथ मस्तिष्क स्टेम पर वापस खींच और चम्मच का उपयोग कर सेरिबैलम बाहर स्कूप.
नोट: यह रेबीज परीक्षण के लिए पर्याप्त सेरिबैलम ठीक करने के लिए एक से अधिक प्रयास लग सकता है।
5. शवपरीक्षण के बाद
- सभी डिस्पोजेबल सामग्री (ग्लव्स, पैड, कार्य क्षेत्र कवर) और जैव खतरनाक कचरे में अप्रयुक्त ऊतकों का निपटान।
- उपलब्ध विधि के साथ सभी उपकरणों को साफ और कीटाणुरहित (उदा., औद्योगिक डिशवॉशर, ऑटोक्लेव, रासायनिक कीटाणुनाशक, उबलते)।
- स्वच्छ और कीटाणुरहित 20% ब्लीच और /
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Representative Results
31 जनवरी, 2019 और 28 फरवरी, 2019 के बीच खोपड़ी के साथ प्रस्तुत सभी स्थलीय नमूनों में गर्दन की उपस्थिति और एकत्र की गई शवपरीक्षा की विधि के बारे में जानकारी थी। उस समय के दौरान, 170 सिर 18 प्रजातियों का प्रतिनिधित्व के साथ नेक्रोप्सी किया गया. 52% (89/170) ठीक से नष्ट कर दिया गया. शेष में कम से कम एक कशेरुक था जिसमें तीन पूरे शरीर के नमूने शामिल थे। अधर विधि का उपयोग किया गया था 75% (128/170) समय की, उन में से, गर्दन 49 पर मौजूद थे. एक गर्दन के साथ प्रस्तुत specimens यह नेक्रोप्सी के दौरान हटा दिया जाएगा जब भी संभव हो अधर विधि के लिए अनुमति देते हैं. तीन बड़े जानवरों (गाय, हिरण, सुअर) प्रस्तुत किए गए और दो मामलों में बड़े पशु प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया गया था। बड़े पशु प्रोटोकॉल सुअर पर इस्तेमाल नहीं किया गया था क्योंकि अतिरिक्त मस्तिष्क ऊतक के नमूने अतिरिक्त परीक्षण के लिए आवश्यक थे. एक गिलहरी एक कुचल खोपड़ी के साथ प्रस्तुत किया गया था और बस दूर त्वचा उजागर मस्तिष्क के ऊतकों को काटने, इस प्रकार ऊपर तरीकों में से कोई भी इस्तेमाल किया गया (तालिका 1).
ताजा बरकरार प्रस्तुतियाँ पर, सभी तीन तरीकों विश्वसनीय रेबीज नैदानिक परीक्षण के परिणामों के लिए आवश्यक ऊतक के साथ परिणाम होगा. कभी-कभी, सेरिबैलम और मस्तिष्क स्टेम को बरकरार नहीं रखा जा सकता है, हालांकि हिंदमस्तिष्क से सभी ऊतकों को हटाने के बाद इन ऊतकों की पहचान की जा सकती है और तदनुसार संसाधित किया जा सकता है।
इन तीन मूल्यवान तरीकों प्रयोगशाला में रसीद से पहले कारण गरीब नमूना गुणवत्ता के लिए क्षतिपूर्ति नहीं कर सकते. ट्रामा, अपघटन और गरीब decapitation तरीकों के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं की परवाह किए बिना कैसे कुशलता से नमूने एकत्र कर रहे हैं.
चित्र 1: रेबीज शवोत्तर में प्रयुक्त उपकरण। घुमावदार तेज-ब्लंट मेयो कैंची, दांतों के बिना चिकनी-टिप ऊतक ड्रेसिंग संदियां, काउंसिलमैन आर्थोपेडिक हड्डी छेनी, आर्थोपेडिक मैलेट-हैमर, लॉकिंग ट्यूमर-टेनकुला, रेस्तरां गुणवत्ता नक्काशी चाकू, संशोधित स्टिलेट्टो चाकू, रसायन विज्ञान चम्मच, और तेज चम्मच. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 2: नेक्रोप्सी की वेंकल विधि। (ए) कटौती का स्थान: तीर के आधार पर एक छेनी का स्थान बिंदु, हरे तीर की दिशा में कटौती और रंधक मैग्नम के चारों ओर एक "वी" बनाने पीले तीर के बाद दोहराएँ। Pry "वी" मस्तिष्क स्टेम और सेरिबैलम का पर्दाफाश करने के लिए नीचे. (बी) मस्तिष्क स्टेम (हरा) और सेरिबैलम (नीला) जब नेक्रोप्सी की अधर विधि का उपयोग करउजागर किया जाता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3: नेक्रोप्सी की डोर्सल विधि। (ए) कटौती का स्थान: तीर के आधार पर एक छेनी का स्थान बिंदु और तीर की दिशा में कटौती क्रम में एक "यू" बनाने का उल्लेख किया। Pry "यू" नीचे यह नीचे मस्तिष्क स्टेम के साथ सेरिबैलम का पर्दाफाश करने के लिए. (बी) सेरिबैलम (वृत्त) जब पृष्ठीय विधि का उपयोग कर उजागर किया। मस्तिष्क स्टेम सीधे नीचे निहित है और जब तक सेरिबैलम हटा दिया जाता है दिखाई नहीं देता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| प्रजातियां | कशेरुकी संलग्न | विधि का इस्तेमाल किया V$ventral, डी-डॉर्सल, ला$बड़े जानवर | कुल | टिप्पणियाँ |
| भालू | नहीं | वी | २ | |
| बिल्ली | नहीं | वी | 32 | |
| बिल्ली | नहीं | डी | 3 | 2 कैंची के साथ खोपड़ी खोलने के लिए काफी छोटा है, 1 abcess कि खोपड़ी के शीर्ष उजागर जांच की जा रही थी |
| बिल्ली | हाँ | वी | 11 | |
| बिल्ली | हाँ | डी | 8 | |
| गाय | नहीं | ला | 1 | |
| कोयोट | नहीं | वी | 1 | |
| कोयोट | हाँ | वी | २ | |
| कोयोट | हाँ | डी | 3 | |
| हिरण | नहीं | ला | 1 | |
| कुत्ता | नहीं | वी | 19 | |
| कुत्ता | नहीं | डी | 3 | |
| कुत्ता | हाँ | वी | २ | 1 छोटा कुत्ता था |
| कुत्ता | हाँ | डी | 18 | |
| भगाना | नहीं | वी | 1 | |
| फिशर | नहीं | वी | 1 | |
| उड़न गिलहरी | हाँ | डी | 1 | संपूर्ण पिंड |
| धूसर लोमड़ी | नहीं | वी | २ | |
| धूसर लोमड़ी | हाँ | वी | 4 | |
| सुअर | हाँ | वी | 1 | |
| साही | नहीं | वी | 1 | |
| एक प्रकार का जानवर | नहीं | वी | 16 | |
| एक प्रकार का जानवर | नहीं | डी | 1 | जमे हुए |
| एक प्रकार का जानवर | हाँ | वी | 26 | |
| लाल लोमड़ी | नहीं | वी | २ | |
| बदमाश | नहीं | वी | 1 | |
| बदमाश | हाँ | वी | 3 | |
| गिलहरी | नहीं | वी | 1 | |
| गिलहरी | हाँ | डी | 1 | पूरा शरीर, कुचल खोपड़ी, उजागर मस्तिष्क गुहा को दूर त्वचा में कटौती करने के लिए कैंची का इस्तेमाल किया |
| थके हुए | नहीं | डी | 1 | |
| काष् ठचक | हाँ | डी | 1 | संपूर्ण पिंड |
| कुल | 170 | |||
| कुल का टूटना | ||||
| गर्दन के साथ | 81 | |||
| कोई गर्दन नहीं | 89 | |||
| अधर विधि | 128 | |||
| पृष् ठ विधि | 39 | |||
| बृहत् पशु विधि | २ | |||
| अन् य विधि | 1 | |||
| गर्दन के साथ अधर विधि | 49 |
तालिका 1: 31 जनवरी, 2019 से 28 फरवरी, 2019 तक न्यूयॉर्क राज्य स्वास्थ्य रेबीज प्रयोगशाला में प्रस्तुत खोपड़ी से ऊतक हटाने की आवश्यकता वाले नमूनों का विश्लेषण।
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Discussion
रेबीज नेक्रोप्सी के लिए प्रस्तुत specimens अक्सर नैदानिक लक्षण एक तंत्रिका विज्ञान की बीमारी के साथ संगत का एक इतिहास है. नैदानिक बीमारी की उपस्थिति चिड़ियाघरसंबंधी रोगों सहित विभिन्न विकारों के साथ जुड़ा हो सकता है, एक प्रयोगशाला प्राप्त संक्रमण के कर्मचारियों के लिए जोखिम बढ़ रही है। इन जोखिमों को कम करने के लिए, तकनीकों को लागू किया गया है जो नमूनों की हैंडलिंग और हेरफेर को कम करते हैं।
जिन तरीकों का प्रदर्शन किया गया है, वे केवल एक ही जानवर से वांछित ऊतकों को हटाने के लिए एक नेक्रोप्सी घटना का प्रतिनिधित्व करते हैं। अधिक सामान्यतः कई नमूनों एक पारी में संसाधित कर रहे हैं और देखभाल के लिए नमूनों के बीच कोई पार संदूषण सुनिश्चित करने की जरूरत है. एक साफ worksurface (डिस्पोजेबल क्राफ्ट कागज या पैड), स्वच्छ, कीटाणुरहित उपकरणों का एक नया सेट है, और दस्ताने परिवर्तन अनिवार्य हैं। एक बार ऊतकों प्राप्त कर रहे हैं, प्रसंस्करण के लिए अलग-अलग प्रयोगशाला प्रोटोकॉल का पालन किया जा सकता है, माइक्रोस्कोपी या आणविक तरीकों के लिए आरएनए निष्कर्षण के लिए स्लाइड बनाने सहित.
प्रयोगशाला या क्षेत्र में इन तकनीकों को सफलतापूर्वक कार्यान्वित करने के लिए कई आवश्यक आवश्यकताएँ हैं। पहले रेबीज टीकाकरण और PPE किसी को भी एक रेबीज संदिग्ध जानवर की परोत्तरजांच के लिए महत्वपूर्ण हैं. रेबीज प्रयोगशालाओं में कार्यरत व्यक्तियों को हर छह महीने में अपने सीरमका परीक्षण करना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि एंटी रेबीज एंटीबॉडी का पर्याप्त स्तर मौजूद है . यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि अन्य जीवाणू संबंधी रोग, जैसे ईईवी, डब्ल्यूएनवी और बोवाइन स्पंजीफॉर्म एन्सेफेलोपैथी (बीएसई) रेबीज के समान लक्षण प्रस्तुत करते हैं और रेबीज संदिग्ध पशुओं में भी हो सकते हैं 11,12.
सुरक्षित रूप से नेक्रोप्सी करने के लिए उपयुक्त अच्छी तरह से बनाए रखा उपकरणों आवश्यक हैं। एक बार एक नमूना अपने biohazard बैग से हटा दिया गया है, यह केवल उपकरणों के साथ हेरफेर किया जाना चाहिए, हाथ नहीं, दुर्घटनाओं के लिए क्षमता को कम करने के लिए. छोटे पशु नेक्रोप्सी से पहले, तकनीशियन को यह निर्धारित करने के लिए नमूने की स्थिति का मूल्यांकन करना चाहिए कि खोपड़ी के आधार के माध्यम से एक पसंदीदा अधर दृष्टिकोण संभव है या नहीं। बड़े जानवरों के साथ यह भी पूरी तरह से अतिरिक्त कशेरुकी के रूप में नमूना की स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए बोझिल हो सकता है के रूप में रंधिका मैग्नम के माध्यम से ऊतक पुन: प्राप्त करने से पहले हटाया जा करने की आवश्यकता हो सकती है.
सीमाएं नमूना हालत, ऊतक की गुणवत्ता और शेष गर्भाशय ग्रीवा कशेरुक की मात्रा सहित सभी नेक्रोप्सी तकनीकों में खुद को मौजूद करती हैं। ग्रीवा कशेरुकी रेबीज विश्लेषण के परिणामों को प्रभावित नहीं करेगा, लेकिन गंभीर रूप से विघटित ऊतक असंतोषजनक परिणाम हो सकता है। रेबीज निदान में अधिक संवेदनशील आणविक तरीकों से कुछ नमूनों में सफल परीक्षण की अनुमति दे सकता है जो प्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी परख (डीएफए) द्वारा परीक्षण करने में असमर्थ हैं, जिसमें गंभीर रूप से विघटित नमूने13शामिल हैं। हालांकि, संवेदनशीलता की कोई राशि उचित ऊतक नमूने के लिए की जरूरत को बदल सकते हैं.
रेबीज प्रयोगशाला में एक आम समस्या परीक्षण के लिए अनुचित या अपर्याप्त मस्तिष्क ऊतक प्राप्त कर रहा है जब बड़े पशु नेक्रोप्सी क्षेत्र में प्रदर्शन कर रहे हैं. आवश्यक ऊतक के बिना, और यदि अतिरिक्त ऊतकों resubmission के लिए उपलब्ध नहीं हैं, हमारे रेबीज प्रयोगशाला उपलब्ध ऊतक पर परीक्षण प्रदर्शन करेंगे, लेकिन नमूना नकारात्मक सत्यापित करने में असमर्थ है, बजाय यह परीक्षण के लिए असंतोषजनक है. क्षेत्र ऊतक संग्रहों के लिए अन्य प्रकाशित विधियां हैं जैसे भूसे की विधि या रेट्रो कक्षीय मार्ग14. दोनों तरीकों खोपड़ी खोलने की आवश्यकता के बिना मस्तिष्क के ऊतकों को इकट्ठा. एक पुआल या डिस्पोजेबल पिपेट या तो रंधिका या आंख सॉकेट में बनाया एक छेद के माध्यम से डाला जाता है और मस्तिष्क के माध्यम से धक्का दिया, अनिवार्य रूप से एक कोर नमूना लेने और जरूरी नहीं कि मस्तिष्क स्टेम के पूर्ण पार अनुभाग नमूना. चूंकि ये क्षेत्र विधियां हमारी प्रयोगशाला में परीक्षण के लिए संतोषजनक माने जाने के तरीके से नमूने एकत्र नहीं करती हैं, इसलिए इन प्रक्रियाओं का इस पेपर में प्रदर्शन या पता नहीं लगाया जाता है।
क्षेत्र में बड़े पशु नेक्रोप्सी व्यक्तियों, जो रेबीज परीक्षण के लिए सही ऊतक को दूर करने के लिए प्रशिक्षित नहीं कर रहे हैं के लिए चुनौतीपूर्ण हो सकता है. इसके बजाय जानवर के पूरे सिर, जो 20-45 किलो के बीच वजन कर सकते हैं, दोनों क्षेत्र पशुचिकित्सा और रेबीज प्रयोगशाला तकनीशियनों के लिए बोझिल परिवहन बनाने प्रस्तुत किया है. हमारी प्रयोगशाला में बड़े पशु शवोत्तर तकनीक पर प्रशिक्षण के लिए बार-बार अनुरोध किया गया है। इस पांडुलिपि का उद्देश्य व्यक्तियों और समूहों जिसका काम इन तकनीकों से लाभ उठा सकते हैं इस जानकारी को वितरित करने के लिए है.
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Disclosures
लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
हम इस परियोजना के समर्थन के लिए न्यूयॉर्क राज्य स्वास्थ्य विभाग के स्वास्थ्य Wadsworth केंद्र के आभारी हैं. हम भी एमी Willsey और स्वास्थ्य Wadsworth केंद्र विभाग के फ्रैंक Blaisdell से समर्थन स्वीकार करना चाहते हैं, और LL Ranch, Altamont, NY.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chemistry spoon | Any | ||
| Curved, sharp-blunt mayo scissors | Sklar | 14-2055 | Sklar Operating Scissors 5-1/2 Inch Premium OR Grade Stainless Steel Finger Ring Handle Curved Sharp/Blunt |
| Large sharp restaurant-quality carving knife | Dexter | P94848 | 8" Scalloped Utility Knife, white handle |
| Locking tumor-tenacula | Diamond Scientific and Surgicals | N/A | Czerny Tenaculum Forcep |
| Modified stiletto knife (6.5 inch long blade carving knife ground to 0.5 inch wide) | Dexter | P94848 | Modified 8" Scalloped Utility Knife, white handle |
| Orthopedic mallet-hammer | Mortech | N/A | Postmortem hammer with hook |
| Sharp councilman orthopedic bone chisel | Shandon | 60-5 | Councilman's Chisel Blade: 2 in x 2.25 in standard 7 in |
| Sharpened tablespoon or other long handled spoon | Any | ||
| Smooth-tipped tissue dressing forceps without teeth | Shandon | 63-03 | Shandon Broad Point Dressing Thumb Forceps |
| Powder-free non-latex gloves | Any | ||
| Safety glasses, goggles, or faceshield | Any | ||
| Surgery or N-95 mask | Any | ||
| Kraft paper, butcher paper, absorbent pad, etc | Any |
References
- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). West Nile virus activity - United States, 2009. MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).
- McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B. Jr, Gray, G. C. Humans and cattle: A review of bovine zoonoses. Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).
- Spickler, A. R. Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual. , Available from: https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases (2019).
- Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies. Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).
- Green, F. H. Y., Yoshida, K. Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents. Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).
- Barrat, J. Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis. Laboratory techniques in Rabies 4th Edition. Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. , World Health Organization. 425-427 (1996).
- Ness, S. L., Bain, F. T. How to perform an equine field necropsy. American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).
- Animal & Plant Health Agency. Sample requirements for TSE testing and confirmation – EURL guidance. , Available from: https://protect2.fireeye.com/url?k=09f00f8d-55d40ec4-09f2f6b8-0cc47aa8d394-3f805f032cc98df8&u=https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf (2019).
- New York State Department of Health, Wadsworth Center. Rabies reports. , Available from: https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports (2019).
- CDC. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , Available from: https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf (2019).
- Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle. Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).
- Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).
- Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).
- Chapter 7. Brain removal. Laboratory techniques in Rabies 5th Edition. Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. , World Health Organization. 67-72 (2018).
