Summary
Het doel van dit protocol is om te laten zien hoe de CFDA te laden in verschillende sites van de onderste delen van Arabidopsis. Vervolgens presenteren we de resulterende distributie patroon van CF in de scheuten.
Abstract
De symplastic Tracer 5 (6)-carboxyfluorescein DIACETAAT (CFDA) is op grote schaal toegepast in levende planten om de intercellulaire verbinding, bastweefsel transport en vasculaire patronen aan te tonen. Dit protocol toont onder-naar-top carboxyfluorescein (CF) beweging in de Arabidopsis met behulp van de root-Cutting en de hypocotyl-knijpen procedure respectievelijk. Deze twee verschillende procedures resulteren in verschillende efficiency van de beweging van het CF: ongeveer 91% verschijning van CF in de spruiten met de hypocotyl-knijpende procedure, terwijl slechts ongeveer 70% verschijning van CF met de wortel-snijdende procedure. De eenvoudige verandering van het laden van sites, wat resulteert in significante veranderingen in de mobiele efficiëntie van deze symplastic kleurstof, suggereert CF-beweging kan worden onderworpen aan de symplastic verordening, waarschijnlijk door de root-hypocotyl Junction.
Introduction
Vele fluorescente tracers met een waaier van spectrale eigenschappen, zoals 5 (6)-carboxyfluorescein (CF)1, 8-hydroxypyrene-1, 3, 6-trisulphonic zuur2, Lucifer geel CH (LYCH)3, Esculin en CTER4, zijn ontwikkeld en toegepast in planten om symplastic beweging en bastweefsel activiteit te controleren. Over het algemeen, wordt een symplastic kleurstof geladen in een besnoeiing in het doelweefsel en de opeenvolgende verspreiding van de verslaggever in andere delen van installatie zal de intercellulaire mededeling aantonen. Hoewel het mechanisme van de kleurstof absorptie is niet volledig begrepen, het principe onderliggende CF-beweging in levende cellen is alom erkend. De ester vorm van CF (CF DIACETAAT, CFDA) is niet-fluorescerend, maar membraan doorlaatbaar. Deze eigenschap maakt een snelle membraan diffusie van de kleurstof in cellen. Eenmaal binnen levende cellen, intracellulaire esterasen verwijderen van de acetaatgroepen op de 3 ' en 6 ' positie van CFDA, het vrijgeven van de TL-en membraan-ondoordringbare CF (Figuur 1, alternatief verwijzen Wright et al.2); CF kan dan door de plasmodesmata naar andere delen van planten bewegen.
Een gevestigde procedure met CFDA is dat het in bron bladeren kan worden geladen en gebruikt om het bastweefsel stromende en bastweefsel het leegmaken in de gootsteen weefsels van vele soorten te controleren, b.v., zoals het leegmaken van het CF in Arabidopsis wortel5, bastweefsel het leegmaken tijdens de aardappel tuberization6, bastweefsel lossen in de Nicotiana gootsteen bladeren7, en zo verder. Door gelijkaardige ladings benaderingen, hebben andere studies deze kleurstof goedgekeurd om de symplastic verbinding tussen gastheer en parasiet8,9te demonstreren, of de symbiotische verhoudingen10,11te openbaren.
Een andere manier om gebruik te maken van deze kleurstof is om het te laden in specifieke cellen of een cel door middel van Microinjection om zijn distributie patroon te bepalen. Dergelijke verfijnde technieken hebben sterk vergemakkelijkt ons dieper begrip van plasmodesmata-gemedieerde intercellulaire communicatie, met name in de ontwikkeling van het concept van symplastic domein12,13. Bijvoorbeeld, de Microinjection van CFDA in cotyledon cellen van Arabidopsis resulteerde in het kleurstof-koppelings patroon in de hypocotyl epidermis maar niet-koppeling in de onderliggende cellen of in de wortel epidermis, daarom vormt de hypocotyl epidermis een symplastic domein14. Vergelijkbare domeinen, zoals de stomatale Guard cellen15, zeef element-Companion cellen16, wortel haarcellen14 en root Cap17,18 zijn geïdentificeerd door de Microinjection techniek. Het meest verrassend, sommige domeinen kunnen Tracer moleculen te verplaatsen in een bepaalde richting. Neem de trichome domein bijvoorbeeld, Microinjection van een fluorescente sonde in de ondersteunende epidermale cel leidt tot de stroom van Tracer in het trichome domein, echter, de omgekeerde injectie houdt geen waar19. Een recent rapport heeft ook gelijkaardige situaties gevonden in de symplastic domeinen van het Sedum embryo20. Dus, alle bovenstaande gevallen impliceren dat het ruilen van laadplaatsen kan leiden tot nieuwe inzichten in symplastic communicatie. Ons vorige experiment gericht op het ontleden van de route van root-to-shoot mobiele silencing identificeerde een nieuwe symplastic domein, of de HEJ (Hypocotyl-epicotyl Junction) zone, die verder werd geverifieerd door de root-loading (niet-canonieke gootsteen-loading) CFDA experiment21. Hier, we verder uitwerken van de root-to-shoot CF-beweging met behulp van een eenvoudige methode en herstellen van een potentieel symplastic domein door het verschuiven van de laad-sites. Bovendien kan deze procedure worden aangepast aan de genetische achtergronden die zijn veranderd root-to-shoot lange afstand vervoer te differentiëren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Arabidopsis verticale groei in MS medium
- Het binnenland van laminaire stroom kabinet moet met 30 min UV licht en 15 min luchtstroom vóór gebruik worden behandeld. Zorg ervoor dat de glazen deur te sluiten wanneer UV-licht is ingeschakeld. Spray alle gereedschappen en platen met 70% ethanol alvorens ze in de kast.
- Bereid het Murashige en Skoog (MS) medium in een standaard 90 mm diameter Petri schaaltje onder een laminaire stromings kast.
Opmerking: de MS medium bevat de volgende componenten: 20,6 mM NH4No3, 18,8 mm kno3, 1,25 mm KH2po4, 1,5 mm MgSO4· 7H2o, 3 mm CaCl2· 2H2o, 0,1 mm MnSO4· H2o, 1,03 µ m na2Moo4· 2H2o, 0,1 mm H3Bo3, 30 µ m ZnSO4· 7H2o, 0,1 µ m CuSO4· 5H2o, 0,1 µ m CoCl2· 6 uur2o, 1,39 µ m ki, 97 µ M FeSO4 · 7H2O, 114,5 µ m ethylenediaminetetraacetic zuur (EDTA), 4,07 µ m nicotinezuur, 2,44 µ m pyridoxine hcl, 0,15 µ m thiamine hcl, 2,68 mm glycine, 555 µ m-inositol, 87,7 mm sacharose en 10 g/L agar. - Hydrateren de gesteriliseerde tips of tandenstokers door het aanraken van de tip of tandenstokers aan de MS medium, dan Dompel de gesteriliseerde zaden een voor een op de vaste positie van elke Petri schaal aangegeven door de seeding kaart.
- Seal de Petri schaal met paraffine folie en plakband en plaats het verticaal op een duidelijke stand in een Groeiruimte (22 °C, 70% vocht) met een dag cyclus van 16 uur licht en 8 h van de duisternis (verlichting van 6 uur tot 10 uur). De Arabidopsis plant is klaar voor CFDA laden op dag 9-13 na het zaaien.
Let op: de volgende procedure wordt uitgevoerd in de namiddag van 14.00 uur tot 17.00 uur.
2. CFDA laden met de wortel snijden procedure
- Bereid vers CFDA werkoplossing onmiddellijk voor gebruik. Verdun de 1 mM CFDA stockoplossing opgeslagen in-20 °C diepvries met steriele ultrapuur water tot een werkende concentratie van 5 µ M.
- Snijd de micro-poreuze paraffine folie (Zie de lijst van materialen) in kleine stukjes van 3 mm x 3 mm grootte.
- Ontdek de groeiende planten in de kamer op 22 ° c en duidelijk het overtollige vocht met een papieren handdoek. Plaats de kleine stukjes film onder elke wortel.
Nota: van dit aan stap 2,6, zou het gehele proces binnen 15 min moeten worden voltooid. - Til de planten op de Petri schaal deksel. Snijd de wortels in een positie van ongeveer 5-10 mm onder de wortel-hypocotyl kruising. Plaats de shoot deel terug op de film op het medium.
- Zorgvuldig van toepassing 0,25 µ L van CFDA op het snij einde van elke wortel onder een ontleden Microscoop. Vermijd spatten naar andere delen van de plant.
- Bedek de plaat en laat de planten onder het licht voor 2-3 h (22 ° c) in de Groeiruimte.
- Spoel de gebeitste planten drie keer achtereenvolgens in drie afzonderlijke bekers gevuld met gedistilleerd water, dan observeren de planten onder een stereo-fluorescentiemicroscoop met zoom van 1,4 x tot 3.3 x (Zie de tabel van materialen). Voor fluorescentie detectie, gebruik maken van een hoog rendement filter kubus (470/20 nm excitatie, 495 Nm Split en 525/50 nm emissie) gemonteerd op de fluorescentie signaal te zenden.
3. CFDA laden met hypocotyl-knijpen procedure
- Bereid vers CFDA werkoplossing onmiddellijk voor gebruik. Verdun de 1 mM CFDA stockoplossing opgeslagen in-20 °C diepvries met steriele ultrapuur water (Zie de tabel van materialen) tot een werkende concentratie van 5 µ m.
- Snijd de micro-poreuze paraffine folie (Zie de lijst van materialen) in kleine stukjes van 3 mm x 3 mm grootte.
- Ontdek de groeiende planten in de kamer op 22 ° c en duidelijk het overtollige vocht met een papieren handdoek.
Nota: van dit aan stap 3,7, zou het gehele proces binnen 15 min moeten worden voltooid. - Leg een klein stukje film onder de wortel-hypocotyl kruising van elke plant.
- Gebruik een tang om voorzichtig knijp de hypocotyl in de buurt van de wortel-hypocotyl kruising onder een ontleden Microscoop.
- Zorgvuldig van toepassing 0,1 µ L van CFDA op de wond site onder een ontleden Microscoop. Vermijd spatten naar andere delen van de plant.
- Bedek de plaat, en laat de planten onder het licht (22 ° c) voor 2-3 h.
- Spoel de gebeitste planten drie keer achtereenvolgens in drie afzonderlijke bekers gevuld met gedistilleerd water, dan observeren de planten onder een stereo-fluorescentiemicroscoop met zoom van 1,4 x tot 3.3 x (Zie de tabel van materialen). Voor fluorescentie detectie, Monteer een hoog rendement filter kubus (470/20 nm excitatie, 495 Nm Split en 525/50 nm emissie) om het fluorescentie signaal te zenden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Symplastic beweging is vaak onderhevig aan milieu fluctuaties. Verstoring van de plant groeiende staat, en zelfs het proces van weefsel bereiding zal invloed hebben op de grootte uitsluiting grens van plasmodesmata, waardoor de symplastic transport22. Ter verbetering van de kleuring efficiëntie, beperken we onze werking in de Groeiruimte, waar de temperatuur en vocht is strak gecontroleerd, en ook de hele procedure zo snel mogelijk (idealiter binnen 10-15 min na het opheffen van het deksel van Petri schaal). Deze voorzorgsmaatregelen tijdens een experiment kan effectief verminderen de tarieven van de mislukte schieten vlekken.
We beschreven twee iets verschillende procedures om te demonstreren CF shoot-Ward beweging. Normaal, beide procedures kan leiden tot CF-kleuring in de scheuten ongeveer 2 uur na het voeden (Figuur 2). Niettemin, de twee procedures produceren verschillende kleuring efficiëntie. De hypocotyl-knijpen procedure resulteert in 91% kleuring efficiëntie, terwijl de wortel-snijden procedure produceert 70% (Welch t-test, p < 0,001) (Figuur 3). We hebben ook geprobeerd het laden van de kleurstof door een wortel-knijpen methode en vond een nog lagere kleuring efficiëntie in vergelijking met root-Cutting methode, wat suggereert dat de aanpak van de kleurstof in de wortel belasting niet goed voor de kleuring verschil tussen de wortel en hypocotyl laadplaatsen (Figuur 3). Het CF-signaal is vooral te vinden in de vasculatuur, maar slechts weinig planten tonen de half-Leaf patroon (Figuur 2) zoals te zien in andere macromolecule bewegingspatronen21. Zodra het CF-signaal wordt uitgespreid naar de shoot, kan het worden gehandhaafd voor meer dan 72 h en het signaal niet kan lossen verder naar andere soorten cellen; Dit is in overeenstemming met eerder gepubliceerde resultaten17.
Figuur 1 : Een schematische illustratie voor CFDA opname en CF-beweging in de cellen van de plant. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 2 : CF-signaal in de scheuten van 9, 11 en 13 dagen na het zaaien (das) Arabidopsis planten. CF-signaal kan worden gedetecteerd in zowel zaadlobben en ware bladeren (a, B, C). In de meerderheid van de planten, het CF-signaal wordt waargenomen in de vasculatuur na 2-3 uur van het laden met ofwel de wortel-snijden of hypocotyl-knijpen methode. Slechts in een zeer zeldzame gevallen (minder dan 0,5%), kan de hypocotyl-knijp methode een gedeeltelijk het bevlekken patroon in cotyledon van 7 DAS Arabidopsis (D) produceren. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 3 : De kleuring efficiëntie met de root-loading methode (root-Cutting en root-knijpen) en hypocotyl-knijpen methode. De het bevlekken efficiency in 9 DAS installaties werd bepaald in drie onafhankelijke experimenten (n = 26 in het wortel-knijpen experiment; n = 335 in het wortel-snijden experiment; n = 522 in de hypocotyl-knijpen methode). Foutbalk geeft standaardfout aan. geeft aan p < 0,001. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Opkomende studies hebben aangetoond dat planten snel kunnen reageren op externe stimuli23, met inbegrip van manipulatie ingevoerd om de experimentele procedures22. In onze eerste experiment, ons toezicht op deze kennis leidt vaak tot vlekken falen. Met deze lessen stellen wij voor dat de volgende voorzorgsmaatregelen in gedachten worden gehouden bij het uitvoeren van dit experiment: (1) de zaden na de oogst moeten worden bewaard in een opbergkast ingesteld op een lage temperatuur en weinig vocht; (2) manipulatie van planten, met name de blootstelling aan de lucht in het kabinet, moet worden gehouden tot een minimumtijd; (3) de experimentele voorwaarden moeten constant worden gehouden, bijvoorbeeld alle procedures moeten worden uitgevoerd in een Groeiruimte.
Een ander aspect in dit experiment dat moet worden opgemerkt is dat het ladingsvolume van CFDA zo klein mogelijk zou moeten worden gehouden. De bovenmatige oplossing leidt vaak tot artefacten waarin de bovenmatige CFDA oplossing tot de spruit door capillaire actie kan verspreiden, daardoor het verven van de trichomen van jonge gootsteen bladeren. Hoewel een wassen stap voordat Imaging kan dit artefact te verminderen, de beste aanpak is om een minimum bedrag te laden om complicaties veroorzaakt door overtollige oplossing te voorkomen.
Met deze technische voorzorgsmaatregelen opgelost, de root-to-shoot beweging van CFDA kan stabiel worden waargenomen zoals weergegeven in Figuur 2. Wanneer planten ouder worden, zeggen meer dan 24 dagen, de Arabidopsis planten lijken te verliezen het vermogen om CF te zenden naar de shoot, waarvoor we nog niet gevonden een exacte verklaring. Een mogelijke aanwijzing komt van haar intracellulaire accumulatie. Volgens de rapporten van Wright et al.2, CF is aansprakelijk te worden beslag door vacuolen, daarom is de intracellulaire gratis CF over de loop van de translocatie vermindert geleidelijk aan de vastlegging in de grotere vacuolen van veroudering planten.
Een voor de hand liggende kenmerk van deze procedure is de distributie patroon van CF in de shoot. Dit vasculaire patroon doet denken aan die door het laden van de kleurstof in de bronblad1,24,25, dus leidt tot een illusie dat de kleurstof ook beweegt door het bastweefsel. In feite is de bottom-to-top translocatie van CF kan niet worden bereikt door het bastweefsel gezien het feit dat de wortel is een sterke gootsteen weefsel en de shootward beweging van CFDA gaat tegen bastweefsel streaming. Integendeel, dit proces kan worden vergemakkelijkt door Xylem transport zoals aangegeven door Botha et al.25. Kort, CFDA kan worden opgenomen door middel van Xylem schepen, verwerkt in parenchym cellen en verder verplaatst naar het zeef element van bastweefsel stroom25. Daarom kan het ladings experiment op deze wijze de activiteit van bastweefsel niet weerspiegelen, maar de symplastic beweging van CF moet voorkomen aangezien de sterke fluorescentie kan worden ontdekt. Met andere woorden, deze bottom-to-top CF-beweging kan het gevolg zijn van de gecombineerde Xylem transport en symplastic transport door parenchym cellen.
Symplastic transport is vaak onderworpen aan Symplastic domein vorming13, en in bepaalde omstandigheden toont het unidirectionele vervoer19,20. Een manier voor een snelle controle is om te verschuiven laden sites. Inderdaad, toen we dit proces met behulp van dezelfde methode uitgewerkt, vonden we de eenvoudige verandering van de laad-site, van de wortel kant naar de hypocotyl kant proximaal naar root-hypocotyl Junction, zou resulteren in een significante verandering van CFDA mobiele efficiëntie (Figuur 3). De CF mobiele differentiatie toe te schrijven aan de verschillende ladings plaatsen zou voorstellen dat de wortel-hypocotyl verbinding een ander symplastic domein is, waar de symplastic barrière voor de wortel-afgeleide shootward signalen wordt gevormd. Verder experimenteel ontwerp met andere moleculen is nodig om deze mogelijkheid te onderzoeken.
Tot nu toe, deze eenvoudige methode kan zorgen voor een stabiele shootward beweging van CFDA. Deze eigenschap kan verder worden onderzocht om installaties met gecompromitteerde of verbeterde wortel-aan-spruit beweging te onderscheiden die zelden is bestudeerd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd gefinancierd door National Natural Science Foundation of China (31671257) en Hubei Collaboratief innovatiecentrum voor graan industrie (LXT-16-18).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| KNO3 | Sinopharm Chemical Reagent | 10017218 | |
| KH2PO4 | Sinopharm Chemical Reagent | 10017608 | |
| MgSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10013018 | |
| CaCl2·2H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 20011160 | |
| MnSO4·H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10013418 | |
| Na2MoO4·2H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10019818 | |
| Boric Acid | Sinopharm Chemical Reagent | 10004818 | |
| ZnSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10024018 | |
| CuSO4·5H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10008218 | |
| CoCl2·6H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10007216 | |
| KI | Sinopharm Chemical Reagent | 10017160 | |
| FeSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10012118 | |
| EDTA | Sinopharm Chemical Reagent | 10009717 | |
| NaOH | Sinopharm Chemical Reagent | 10019718 | |
| KOH | Sinopharm Chemical Reagent | 10017018 | |
| Sucrose | Sinopharm Chemical Reagent | 10021418 | |
| Myo-inositol | MACKLIN | I811835 | |
| Nicotinic Acid | MACKLIN | N814565 | |
| Pyridoxine HCl | MACKLIN | V820447 | |
| Thiamine HCl | MACKLIN | T818865 | |
| Glycine | MACKLIN | G800880 | |
| Agar powder | Novon | ZZ14022 | |
| Fluorescence Microscope | Zeiss | Axio Zoom V16 | |
| Dissecting microscope | SDPTOP | SRE-1030 | |
| 200μl pipette | Dragon Laboratory Instruments | 713111110000-20-200ul | |
| 2.5μl pipette | Eppendorf | 3120000011 | |
| Fine forceps | TWEEZERS | ST-15 | |
| Parafilm | PARAFILM | PM-996 | |
| Stainless steel double-sided blade | Gillette | Platinum-Plus Double-Edge Blade |
References
- Grignon, N., Touraine, B., Durand, M. 6(5)Carboxyfluorescein as a tracer of phloem sap translocation. American Journal of Botany. 76, 871-877 (1989).
- Wright, K. M., Oparka, K. J. The fluorescent probe HPTS as a phloem-mobile, symplastic tracer: an evaluation using confocal laser scanning microscopy. Journal of Experimental Botany. 47 (3), 439-445 (1996).
- Oparka, K. J., Prior, D. A. Movement of Lucifer Yellow CH in potato tuber storage tissues: A comparison of symplastic and apoplastic transport. Planta. 176 (4), 533-540 (1988).
- Knoblauch, M., et al. Multispectral Phloem-Mobile Probes: Properties and Applications. Plant Physiology. 167 (4), 1211-1220 (2015).
- Oparka, K. J., Duckett, C. M., Prior, D. A. M., Fisher, D. B. Real-time imaging of phloem unloading in the root tip of Arabidopsis. The Plant Journal. 6 (5), 759-766 (1994).
- Viola, R., et al. Tuberization in Potato Involves a Switch from Apoplastic to Symplastic Phloem Unloading. The Plant Cell. 13 (2), 385-398 (2001).
- Roberts, A. G., et al. Phloem Unloading in Sink Leaves of Nicotiana benthamiana: Comparison of a Fluorescent Solute with a Fluorescent Virus. The Plant Cell. 9 (8), 1381-1396 (1997).
- Péron, T., et al. New Insights into Phloem Unloading and Expression of Sucrose Transporters in Vegetative Sinks of the Parasitic Plant Phelipanche ramosa L (Pomel). Frontiers in Plant Science. 7 (2048), (2017).
- Spallek, T., et al. Interspecies hormonal control of host root morphology by parasitic plants. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 114 (20), 5283-5288 (2017).
- Complainville, A., et al. Nodule initiation involves the creation of a new symplasmic field in specific root cells of medicago species. The Plant Cell. 15 (12), 2778-2791 (2003).
- Bederska, M., Borucki, W., Znojek, E. Movement of fluorescent dyes Lucifer Yellow (LYCH) and carboxyfluorescein (CF) in Medicago truncatula Gaertn. roots and root nodules. Symbiosis. 58 (1-3), 183-190 (2012).
- Robards, A. W., Lucas, W. J. Plasmodesmata. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 41 (1), 369-419 (1990).
- Roberts, A. G., Oparka, K. J. Plasmodesmata and the control of symplastic transport. Plant, Cell & Environment. 26 (1), 103-124 (2003).
- Duckett, C. M., Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Dolan, L., Roberts, K. Dye-coupling in the root epidermis of Arabidopsis is progressively reduced during development. Development. 120 (11), 3247-3255 (1994).
- Palevitz, B. A., Hepler, P. K. Changes in dye coupling of stomatal cells of Allium and Commelina demonstrated by microinjection of Lucifer yellow. Planta. 164 (4), 473-479 (1985).
- van Bel, A. J. E., Kempers, R. Symplastic isolation of the sieve element-companion cell complex in the phloem of Ricinus communis and Salix alba stems. Planta. 183 (1), 69-76 (1991).
- Erwee, M. G., Goodwin, P. B. Symplast domains in extrastelar tissues of Egeria densa Planch. Planta. 163 (1), 9-19 (1985).
- Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Wright, K. M. Symplastic communication between primary and developing lateral roots of Arabidopsis thaliana. Journal of Experimental Botany. 46 (2), 187-197 (1995).
- Christensen, N. M., Faulkner, C., Oparka, K. Evidence for Unidirectional Flow through Plasmodesmata. Plant Physiology. 150 (1), 96-104 (2009).
- Wróbel-Marek, J., Kurczyńska, E., Płachno, B. J., Kozieradzka-Kiszkurno, M. Identification of symplasmic domains in the embryo and seed of Sedum acre L. (Crassulaceae). Planta. 245 (3), 491-505 (2017).
- Liang, D., White, R. G., Waterhouse, P. M. Gene silencing in Arabidopsis spreads from the root to the shoot, through a gating barrier, by template-dependent, non-vascular, cell to cell movement. Plant Physiology. 159 (3), 984-1000 (2012).
- Radford, J. E., White, R. G. Effects of tissue-preparation-induced callose synthesis on estimates of plasmodesma size exclusion limits. Protoplasma. 216 (1-2), 47-55 (2001).
- Kollist, H., et al. Rapid Responses to Abiotic Stress: Priming the Landscape for the Signal Transduction Network. Trends in Plant Science. 24 (1), 25-37 (2019).
- Haupt, S., Duncan, G. H., Holzberg, S., Oparka, K. J. Evidence for Symplastic Phloem Unloading in Sink Leaves of Barley. Plant Physiology. 125 (1), 209-218 (2001).
- Botha, C. E. J., et al. A xylem sap retrieval pathway in rice leaf blades: evidence of a role for endocytosis? Journal of Experimental Botany. 59 (11), 2945-2954 (2008).
