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अरैबिडोप्सिस के नीचे सिंक ऊतकों में भरी हुई CFDA अनुरेखक के shootward आंदोलन

Published: May 11, 2019 doi: 10.3791/59606
Automatic Translation
*1, *1, 2, 1, 1
1Hubei Collaborative Innovation Center for Grain Industry, School of Agriculture, Yangtze University, 2CSIRO Agriculture
* These authors contributed equally

Summary

इस प्रोटोकॉल के लक्ष्य को दिखाने के लिए कैसे Arabidopsisके नीचे भागों के विभिंन स्थलों में cfda लोड करने के लिए है । हम तो शूटिंग में CF के परिणामस्वरूप वितरण पैटर्न प्रस्तुत करते हैं ।

Abstract

संघट्य अनुरेखक 5 (6)-कार्बोक्सिफ्लूरसेइन डाइऐसीटेट (सीएफडीए) को सजीव पादपों में अंतरकोशिक कनेक्शन, फ्लोएम परिवहन और संवहनी नमूनों को प्रदशत करने के लिए व्यापक रूप से लागू किया गया है । इस प्रोटोकोल में क्रमश: जड़-कर्तन और अधकोटिल-पिंचिंग प्रक्रिया का उपयोग करके अरबडिडोप्सिस में बॉटम-टू-टॉप कार्बोक्सिफ्लूएसेइन (सीएफ़) गति का पता चलता है । इन दो विभिंन प्रक्रियाओं CF आंदोलन की विभिंन क्षमता में परिणाम: के बारे में ९१% hypocotyl के साथ शूटिंग में CF की उपस्थिति-pinching प्रक्रिया, जबकि केवल के बारे में ७०% जड़ काटने की प्रक्रिया के साथ CF की उपस्थिति । लोड हो रहा है साइटों की सरल परिवर्तन, इस सिंप्लास्टिक डाई के मोबाइल दक्षता में महत्वपूर्ण परिवर्तन में जिसके परिणामस्वरूप, पता चलता है CF आंदोलन सिम्प्लास्टिक नियमन के अधीन हो सकता है, सबसे शायद रूट-hypocotyl जंक्शन से.

Introduction

वर्णक्रमीय गुणों की एक श्रृंखला के साथ कई फ्लोरोसेंट tracers, जैसे 5 (6)-carboxyfluorescein (CF)1, 8-हाइड्रोक्सीपाइरीन-1, 3, 6-triसल्फोनिक एसिड2, लूसिफ़ेर येलो CH (lych)3, एस्क्युरिन और cter4, विकसित किया गया है और संघट्य आंदोलन और फ्लोएम गतिविधि पर नजर रखने के लिए पौधों में आवेदन किया । आम तौर पर, एक सिंप्लास्टिक डाई लक्ष्य ऊतक में एक कट में भरी हुई है और संयंत्र के अन्य भागों में रिपोर्टर के अनुक्रमिक फैलाव अंतराकोशिक संचार प्रदर्शित करेगा । हालांकि डाई अवशोषण की व्यवस्था पूरी तरह से समझ में नहीं आता, जीना कोशिकाओं के अंदर CF आंदोलन अंतर्निहित सिद्धांत व्यापक रूप से स्वीकार किया गया है. सीएएफ के एस्टर फार्म (CF diacetate, CFDA) गैर फ्लोरोसेंट है, लेकिन झिल्ली पारगुनीय । इस संपत्ति कोशिकाओं में डाई की तेजी से झिल्ली प्रसार की अनुमति देता है । एक बार जीवित कोशिकाओं के अंदर, intracellular esterases 3 ' और ' 6 CFDA की स्थिति में एसीटेट समूहों को हटाने, फ्लोरोसेंट और झिल्ली-impermeable CF जारी (चित्रा 1, वैकल्पिक रूप से राइट एट अल.2); CF तो प्लास्मोडेमेटा के माध्यम से पौधों के अन्य भागों में स्थानांतरित कर सकते हैं ।

CFDA के साथ एक अच्छी तरह से स्थापित प्रक्रिया यह है कि यह स्रोत पत्तियों में लोड किया जा सकता है और कई प्रजातियों के सिंक ऊतकों में फ्लोएम स्ट्रीमिंग और फ्लोम उतराई पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जाता है, उदा., अरबीडोप्सिस रूट5, फ्लोएम उतराई में CF उतराई आलू टयूगुराइजेशन6के दौरान निकोटियाना सिंक में फ्लोएम अनलोडिंग7, और इसी तरह की पत्तियां । इसी तरह लदान दृष्टिकोण से, अंय अध्ययनों से इस डाई को स्वीकार किया है कि मेजबान और परजीवी8,9, या सहजीवी रिश्तों10,11प्रकट के बीच सिंप्लास्टिक कनेक्शन प्रदर्शित करने के लिए ।

एक और तरीका है इस डाई का उपयोग करने के लिए यह विशिष्ट कोशिकाओं या एक कोशिका में microinjection द्वारा अपने वितरण पैटर्न निर्धारित करने के लिए लोड है । इस तरह की अत्याधुनिक तकनीकों ने विशेष रूप से सिम्प्लास्टिक डोमेन12,13की अवधारणा के विकास में प्लास्मोडेमेटा-मध्यस्थता अंतरकोशिकीय संचार की हमारी गहरी समझ को सुगम बनाया है । उदाहरण के लिए, अरडिडोप्सिस की बीजपत्र कोशिकाओं में cfda के microinjection के परिणामस्वरूप hypocotyl एपिडर्मिस में डाई युग्मन पैटर्न लेकिन गैर-युग्मन अंतर्निहित कोशिकाओं में या जड़ एपिडर्मिस में, इसलिए hypocotyl एपिडर्मिस रूपों एक सिम्प्लास्टिक डोमेन14. इसी तरह के डोमेन, जैसे कि स्टोमटल गार्ड सेल्स15, सीव एलिमेंट-कंपेनियन सेल्स16, रूट हेयर सेल्स14 और रूट कैप17,18 की पहचान माइक्रोइंजेक्शन टेक्निक द्वारा की गई है । सबसे आश्चर्य की बात है, कुछ डोमेन अनुरेखक अणुओं एक निश्चित दिशा में स्थानांतरित करने के लिए अनुमति देते हैं । Trichome डोमेन उदाहरण के लिए ले लो, सहायक एपिडर्मल सेल में एक फ्लोरोसेंट जांच के microinjection trichome डोमेन में अनुरेखक के प्रवाह की ओर जाता है, तथापि, रिवर्स इंजेक्शन सच19पकड़ नहीं है । हाल ही में आई एक रिपोर्ट में सीडम भ्रूण20के सिम्प्लास्टिक डोमेनों में भी ऐसी ही स्थितियां पाई गई हैं । इस प्रकार, उपरोक्त सभी मामलों का मतलब है कि लोडिंग साइटों की अदला-बदली symplastic संचार में उपंयास अंतर्दृष्टि के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । हमारे पिछले प्रयोग रूट करने के लिए गोली मार मोबाइल मुंह बंद एक उपंयास सिंप्लास्टिक डोमेन, या hej (hypocotyl-epicotyl जंक्शन) क्षेत्र है, जो आगे रूट के माध्यम से सत्यापित किया गया था की पहचान करने के लिए लक्ष्य-लदान (गैर विहित सिंक-लोड हो रहा है) cfda प्रयोग21। यहां, हम आगे एक सरल विधि का उपयोग करके और लोडिंग साइटों को स्थानांतरित करके एक संभावित सिम्प्लास्टिक डोमेन पुनर्प्राप्त रूट-टू-शूट CF आंदोलन को विस्तृत करते हैं । इसके अलावा, इस प्रक्रिया को आनुवंशिक पृष्ठभूमि है कि जड़ बदल दिया है अंतर करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है लंबी दूरी की परिवहन गोली मार ।

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Protocol

1. एमएस मध्यम में Arabidopsis ऊर्ध्वाधर विकास

  1. स्तरीय फ्लो कैबिनेट के इंटीरियर के लिए 30 मिनट यूवी प्रकाश और उपयोग से पहले 15 मिनट airflow के साथ इलाज की जरूरत है । यूवी लाइट चालू होने पर शीशे के दरवाजे को बंद करना सुनिश्चित करें । कैबिनेट में रखने से पहले ७०% इथेनॉल के साथ सभी उपकरणों और प्लेटों स्प्रे ।
  2. एक स्तरीय प्रवाह कैबिनेट के तहत एक मानक ९० mm व्यास पेट्री डिश में murashige और skoog (एमएस) माध्यम तैयार करते हैं ।
    नोट: एमएस माध्यम निम्नलिखित घटक हैं: २०.६ मिमी एनएच4NO3, १८.८ मिमी kno3, १.२५ मिमी KH2पीओ4, १.५ मिमी Mgso4· 7h2ओ, 3 मिमी cacl2· 2h2ओ, ०.१ मिमी mnso4· एच2ओ, १.०३ Μm Na2मू4· 2H2ओ, ०.१ मिमी एच3बो3, 30 μm Znso4· 7h2ओ, ०.१ μm cuso4· 5H2 हे, ०.१ μm cocl2· 6h2 o, १.३९ μm KI, ९७ μ M FeSO4-7h2O, ११४.५ μm ethylenediaminetetraacetic एसिड (edta), ४.०७ μm निकोटिनिक एसिड, २.४४ μm pyridoxine एचसीएल, ०.१५ μm थियामिन एचसीएल, २.६८ mm glycine, ५५५ μm myo-inositol, ८७.७ मिमी सुक्रोज और 10 g/L आगर ।
  3. या एमएस माध्यम के लिए टिप या toothpicks छू द्वारा निष्फल सुझाव या टूथपिक्स moisturize, तो एक के बाद एक रोगाणुरहित बीज एक पेट्री डिश के द्वारा संकेत दिया सीडिंग कार्ड की निश्चित स्थिति पर डुबकी ।
  4. पैराफिन फिल्म और चिपचिपा टेप के साथ पेट्री डिश सील और यह एक वृद्धि के कमरे में एक स्पष्ट स्टैंड पर खड़ी जगह (22 डिग्री सेल्सियस, ७०% नमी) प्रकाश के 16 एच और अंधेरे के 8 घंटे के एक दिन के चक्र के साथ (सुबह 6 बजे से 10 बजे तक प्रकाश व्यवस्था) । अरबीडोप्सिस प्लांट बुवाई के बाद दिन 9-13 पर सीएफडीए लोडिंग के लिए तैयार है ।
    नोट: निम्न कार्यविधि दोपहर 2 बजे से शाम 5 बजे तक किया जाता है ।

2. CFDA रूट काटने की प्रक्रिया के साथ लोड हो रहा है

  1. तुरंत उपयोग करने से पहले ताजा CFDA काम समाधान तैयार करें । पतला 1 मिमी CFDA स्टॉक समाधान में संग्रहीत-20 ° c में बाँझ ultrapure पानी के साथ फ्रीजर 5 μM की एक काम एकाग्रता के लिए ।
  2. माइक्रो-सरंध्र पैराफिन झिल्ली फिल्म काटें ( सामग्रियों की तालिकादेखें) 3 मिमी x 3 मिमी आकार के छोटे टुकड़ों में ।
  3. कमरे में 22 डिग्री सेल्सियस पर बढ़ते पौधों को उजागर और एक कागज तौलिया के साथ अतिरिक्त नमी स्पष्ट । प्रत्येक रूट के नीचे छोटी फिल्म के टुकड़े रखें ।
    नोट: इस से २.६ चरण के लिए, पूरी प्रक्रिया 15 मिनट के भीतर पूरा किया जाना चाहिए ।
  4. पौधों को पेट्री डिश ढक्कन पर उठाएं । जड़-hypocotyl जंक्शन के नीचे 5-10 mm के बारे में एक स्थिति में जड़ों में कटौती । शूट के पार्ट को मीडियम पर फिल्म को वापस रिप्लेस कर दें ।
  5. ध्यान से एक विदारक माइक्रोस्कोप के तहत प्रत्येक जड़ के काटने अंत पर cfda के ०.२५ μl लागू होते हैं । संयंत्र के अंय भागों में छिड़काव से बचें ।
  6. प्लेट को ढक कर रखें और पौधों को विकास कक्ष में 2-3 ज (22 ° ब्) के लिए प्रकाश के अंतर्गत छोड़ दें ।
  7. तीन अलग आसव पानी से भरे beakers में दाग पौधों तीन बार क्रमिक रूप से कुल्ला, तो एक स्टीरियो के तहत पौधों का निरीक्षण, 1.4 x से ज़ूम के साथ प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप 3.3 x ( सामग्री की तालिकादेखें) । प्रतिदीप्ति का पता लगाने के लिए, एक उच्च दक्षता फिल्टर घन (470/20 एनएम excitation, ४९५ एनएम विभाजन और 525/50 एनएम उत्सर्जन) का उपयोग करने के लिए प्रतिदीप्ति संकेत संचारित करने के लिए मुहिम शुरू की ।

3. hypocotyl के साथ CFDA लोडिंग-प्रक्रिया बन्द रखो

  1. तुरंत उपयोग करने से पहले ताजा CFDA काम समाधान तैयार करें । पतला 1 मिमी CFDA स्टॉक समाधान में संग्रहीत-20 ultrapure पानी के साथ ° c फ्रीजर ( सामग्री की तालिकादेखें) 5 μm की एक काम एकाग्रता के लिए ।
  2. माइक्रो-सरंध्र पैराफिन झिल्ली फिल्म काटें ( सामग्रियों की तालिकादेखें) 3 मिमी x 3 मिमी आकार के छोटे टुकड़ों में ।
  3. कमरे में 22 डिग्री सेल्सियस पर बढ़ते पौधों को उजागर और एक कागज तौलिया के साथ अतिरिक्त नमी स्पष्ट ।
    नोट: इस से ३.७ चरण के लिए, पूरी प्रक्रिया 15 मिनट के भीतर पूरा किया जाना चाहिए ।
  4. प्रत्येक संयंत्र के मूल-hypocotyl जंक्शन के तहत फिल्म का एक छोटा सा टुकड़ा बिछाएं ।
  5. एक विच्छेदकारी माइक्रोस्कोप के नीचे मूल hypocotyl जंक्शन के पास hypocotyl धीरे चुटकी करने के लिए संदंश का उपयोग करें ।
  6. एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत घाव स्थल पर CFDA के ०.१ μL ध्यान से लागू करें । संयंत्र के अंय भागों में छिड़काव से बचें ।
  7. प्लेट को ढक कर रखें और पौधों को प्रकाश के नीचे (22 ° c) 2-3 ज के लिए छोड़ दें ।
  8. तीन अलग आसव पानी से भरे beakers में दाग पौधों तीन बार क्रमिक रूप से कुल्ला, तो एक स्टीरियो के तहत पौधों का निरीक्षण, 1.4 x से ज़ूम के साथ प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप 3.3 x ( सामग्री की तालिकादेखें) । प्रतिदीप्ति का पता लगाने के लिए, एक उच्च दक्षता फिल्टर घन माउंट (470/20 एनएम excitation, ४९५ एनएम विभाजन और 525/50 एनएम उत्सर्जन) प्रतिदीप्ति संकेत संचारित करने के लिए ।

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Representative Results

सिम्प्लास्टिक आंदोलन अक्सर पर्यावरणीय उतार-चढ़ाव के अधीन होता है । संयंत्र की बढ़ रही राज्य के क्षोभ, और यहां तक कि ऊतक तैयार करने की प्रक्रिया plasmodesmata के आकार बहिष्करण सीमा को प्रभावित करेगा, इस प्रकार सिंप्लास्टिक परिवहन22को प्रभावित. धुंधला दक्षता में सुधार करने के लिए, हम विकास के कमरे में हमारे आपरेशन सीमित है, जहां तापमान और नमी कसकर नियंत्रित है, और भी जल्दी के रूप में पूरी प्रक्रिया के रूप में संभव प्रदर्शन (आदर्श पेट्री डिश के ढक्कन उठाने के बाद 10-15 मिनट के भीतर) । एक प्रयोग के दौरान इन सावधानियों को प्रभावी ढंग से असफल गोली मार धुंधला की दरों को कम कर सकते हैं ।

हम दो थोड़ा अलग प्रक्रियाओं CF गोली मार-वार्ड आंदोलन को प्रदर्शित करने के लिए वर्णित है । आम तौर पर, दोनों प्रक्रियाओं को खिलाने के बाद 2 एच के बारे में गोली मारता में CF धुंधला करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं (चित्रा 2). फिर भी, दो प्रक्रियाओं अलग धुंधला क्षमता का उत्पादन । Hypocotyl-pinching प्रक्रिया में परिणाम ९१% धुंधला दक्षता, जबकि रूट काटने की प्रक्रिया ७०% (वेल्च टीपरीक्षण, पी < ०.००१) (चित्रा 3) का उत्पादन । हम यह भी एक जड़-pinching विधि द्वारा डाई लोड करने की कोशिश की और जड़ काटने विधि के साथ तुलना में एक भी कम धुंधला दक्षता पाया, कि जड़ में डाई लोड करने के लिए दृष्टिकोण जड़ और hypocotyl के बीच धुंधला अंतर के लिए खाता नहीं है कि सुझाव साइटें लोड हो रहा है (चित्रा 3). CF संकेत मुख्य रूप से वाहिकन्यास में पाया जाता है, लेकिन केवल कुछ पौधों आधा पत्ती पैटर्न (चित्रा 2) के रूप में अन्य macromolecule आंदोलन पैटर्न21में देखा दिखा. एक बार CF संकेत शूट करने के लिए फैला है, यह अधिक से अधिक ७२ h के लिए बनाए रखा जा सकता है और संकेत अंय सेल प्रकार के लिए आगे अनलोड नहीं कर सकते; यह पहले प्रकाशित परिणाम17के साथ संगत है ।

Figure 1
चित्रा 1 : Cfda तेज और CF आंदोलन के लिए संयंत्र की कोशिकाओं में एक योजनाबद्ध चित्रण । इस आंकड़े का बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2 : 9, 11 और 13 दिन की शूटिंग के बाद बुवाई (दास) में CF संकेत अरैडिडोप्सिस पौधों । CF संकेत दोनों cotyledons और सच पत्तियों (ए, बी, सी) में पाया जा सकता है । पौधों के बहुमत में, CF संकेत वाहिकचर में या तो जड़ काटने या hypocotyl-pinching विधि के साथ लोड करने के 2-3 घंटे के बाद मनाया जाता है । केवल एक बहुत ही दुर्लभ मामलों में (०.५% से कम), hypocotyl-pinching विधि 7 दास arabidopsis (डी) के बीजपत्र में एक आंशिक धुंधला पैटर्न उत्पंन कर सकते हैं । इस आंकड़े का बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3 रूट- लोडिंग विधि (रूट-कटिंग और रूट-पिचिंग) और hypocotyl-pinching विधि के साथ धुंधला क्षमता । 9 दास पादपों में अभिरंजक दक्षता का निर्धारण तीन स्वतंत्र प्रयोगों में किया गया (द = 26 जड़-पिचिंग प्रयोग में; द = ३३५ जड़-कर्तन प्रयोग में; द = ५२२ में हाइपोकोटिल-पिचिंग विधि) । त्रुटि पट्टी मानक त्रुटि इंगित करती है । p < ०.००१ इंगित करता है । इस आंकड़े का बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।

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Discussion

उभरते अध्ययनों से पता चला है कि पौधों को तेजी से प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं22से शुरू हेरफेर सहित बाहरी उत्तेजनाओं23, का जवाब कर सकते हैं । हमारे प्रारंभिक प्रयोग में, इस ज्ञान के हमारे निरीक्षण अक्सर धुंधला विफलता की ओर जाता है । इन पाठों के साथ, हमारा सुझाव है कि यह प्रयोग करते समय निम्नलिखित सावधानियों को ध्यान में रखा जाना चाहिए: (1) फसल के बाद बीज एक भंडारण कैबिनेट में रखा जाना चाहिए एक कम तापमान और कम नमी के लिए सेट; (2) पादपों में हेर-फेर, विशेषकर मंत्रिमंडल में वायु के संपर्क में, न्यूनतम समय रखा जाना चाहिए; (3) प्रायोगिक परिस्थितियों को स्थिर रखना चाहिए, जैसे-सभी प्रक्रियाएं विकास कक्ष में की जानी चाहिए ।

इस प्रयोग में एक अन्य पहलू यह बताया गया है कि सीएफडीए का लोडिंग वॉल्यूम यथासंभव छोटा रखा जाना चाहिए । अतिरिक्त समाधान अक्सर कलाकृतियों जिसमें अतिरिक्त CFDA समाधान केशिका कार्रवाई के माध्यम से गोली मार करने के लिए फैलाना कर सकते हैं की ओर जाता है, जिससे युवा सिंक के पत्तों की trichomes tinting । हालांकि इमेजिंग से पहले एक धोने कदम इस विरूपण साक्ष्य कम कर सकते हैं, सबसे अच्छा तरीका है एक ंयूनतम राशि लोड करने के लिए अतिरिक्त समाधान के कारण जटिलता से बचने के लिए है ।

इन तकनीकी सावधानियों को हल करने के साथ, सीएफडीए के रूट-टू-शूट मूवमेंट को stably देखा जा सकता है जैसा कि चित्र 2में दर्शाया गया है । जब पौधे बड़े हो जाते हैं, 24 दिनों से अधिक कहते हैं, Arabidopsis पौधों को गोली मार करने के लिए CF संचारित करने की क्षमता खोने लगते हैं, जिसके लिए हम अभी तक एक सटीक विवरण नहीं मिला है । एक संभावित सुराग अपने intracellular संचय से आता है । राइट एट अल2द्वारा रिपोर्ट के अनुसार, cf रिक्तिकाएं द्वारा sequestrated किया जा करने के लिए उत्तरदायी है, इसलिए, ट्रांसलोकेशन के पाठ्यक्रम पर intracellular मुक्त cf धीरे-से उंर बढ़ने पौधों की बड़ी रिक्तिकाएं में ज़ब्ती करने के लिए कम कर देता है ।

इस प्रक्रिया का एक स्पष्ट विशेषता शूट में CF के वितरण पैटर्न है । इस संवहनी पैटर्न के स्रोत पत्ती1,24,25में डाई लोड करने से उन लोगों की याद ताजा करती है, इस प्रकार एक भ्रम है कि डाई भी phloem के माध्यम से चलता है के लिए अग्रणी । वास्तव में, CF के नीचे-से-शीर्ष स्थानांतरण फ्लोएम के माध्यम से प्राप्त नहीं किया जा सकता है तथ्य यह है कि जड़ एक मजबूत सिंक ऊतक और cfda के shootward आंदोलन फ्लोएम स्ट्रीमिंग के खिलाफ चला जाता है दिया । इसके बजाय, यह प्रक्रिया जाइलम परिवहन द्वारा सुगम हो सकती है जैसाकि बोथा एट अल.25द्वारा दर्शाया गया है । संक्षेप में, सीएफडीए को जाइलम वाहिकाओं के माध्यम से लिया जा सकता है, जो पैरेंकाइमा कोशिकाओं में संसाधित किया जाता है और आगे फ्लोएम धारा25के चलनी तत्व में ट्रांसस्थित होता है । इसलिए, इस तरह से लोडिंग प्रयोग phloem की गतिविधि को प्रतिबिंबित नहीं हो सकता है, लेकिन मजबूत प्रतिदीप्ति का पता लगाया जा सकता है के रूप में CF के सिम्प्लास्टिक आंदोलन होने चाहिए । दूसरे शब्दों में, इस नीचे से शीर्ष CF आंदोलन संयुक्त जाइलम परिवहन और सिंप्लास्टिक परिवहन से पैरेंकाइमा कोशिकाओं के माध्यम से परिणाम हो सकता है.

सिम्प्लास्टिक परिवहन अक्सर सिंप्लास्टिक डोमेन गठन के अधीन है13, और कुछ परिस्थितियों में यह यूनिडायरेक्शनल परिवहन19,20प्रदर्शित करता है । एक त्वरित जांच के लिए एक ही रास्ता लोडिंग साइटों को शिफ्ट करने के लिए है । वास्तव में, जब हम एक ही विधि का उपयोग कर इस प्रक्रिया सविस्तार, हम लोड हो रहा है साइट की सरल परिवर्तन पाया, जड़ से समीपस्थ hypocotyl करने के लिए रूट-hypocotyl जंक्शन, CFDA मोबाइल दक्षता के महत्वपूर्ण परिवर्तन में परिणाम होगा (चित्रा 3). अलग लोडिंग साइटों के कारण CF मोबाइल भिंनता का सुझाव है कि रूट-hypocotyl जंक्शन एक और symplastic डोमेन है, जहां सिंप्लास्टिक बाधा जड़-shootward संकेतों से व्युत्पंन के लिए बनाई गई है । इसके अलावा अंय अणुओं के साथ प्रयोगात्मक डिजाइन के लिए इस संभावना का पता लगाने की जरूरत है ।

अब तक, इस सरल विधि CFDA के स्थिर shootward आंदोलन प्रदान कर सकते हैं । इस सुविधा के लिए और अधिक समझौता या बढ़ाया जड़ से गोली मार आंदोलन है जो शायद ही कभी अध्ययन किया गया है के साथ पौधों अंतर का पता लगाया जा सकता है ।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा वित्त पोषित किया गया था चीन (३१६७१२५७) और Hubei सहयोगात्मक नवाचार केंद्र अनाज उद्योग के लिए (LXT-16-18) ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
KNO3   Sinopharm Chemical Reagent 10017218
KH2PO4  Sinopharm Chemical Reagent 10017608
MgSO4·7H2O Sinopharm Chemical Reagent 10013018
CaCl2·2H2O Sinopharm Chemical Reagent 20011160
MnSO4·H2O  Sinopharm Chemical Reagent 10013418
Na2MoO4·2H2O Sinopharm Chemical Reagent 10019818
Boric Acid Sinopharm Chemical Reagent 10004818
ZnSO4·7H2O Sinopharm Chemical Reagent 10024018
CuSO4·5H2O Sinopharm Chemical Reagent 10008218
CoCl2·6H2O Sinopharm Chemical Reagent 10007216
KI Sinopharm Chemical Reagent 10017160
FeSO4·7H2O Sinopharm Chemical Reagent 10012118
EDTA  Sinopharm Chemical Reagent 10009717
NaOH Sinopharm Chemical Reagent 10019718
KOH Sinopharm Chemical Reagent 10017018
Sucrose Sinopharm Chemical Reagent 10021418
Myo-inositol   MACKLIN I811835
Nicotinic Acid  MACKLIN N814565
Pyridoxine HCl MACKLIN V820447
Thiamine HCl MACKLIN T818865
Glycine MACKLIN G800880
Agar powder Novon ZZ14022
Fluorescence Microscope Zeiss Axio Zoom V16
Dissecting microscope SDPTOP SRE-1030
200μl pipette Dragon Laboratory Instruments 713111110000-20-200ul
2.5μl pipette Eppendorf 3120000011
Fine forceps  TWEEZERS ST-15
Parafilm PARAFILM PM-996
Stainless steel double-sided blade Gillette Platinum-Plus Double-Edge Blade

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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पर्यावरण विज्ञान इश्यू १४७ CFDA रूट-टू-शूट ट्रेसर मूवमेंट प्लास्मोडेमेटा फ्लोएम रूट-हाइपोकोटिल जंक्शन
अरैबिडोप्सिस के नीचे सिंक ऊतकों में भरी हुई CFDA अनुरेखक के shootward आंदोलन <em></em>
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Jiang, M., Deng, Z., White, R. G.,… More

Jiang, M., Deng, Z., White, R. G., Jin, T., Liang, D. Shootward Movement of CFDA Tracer Loaded in the Bottom Sink Tissues of Arabidopsis. J. Vis. Exp. (147), e59606, doi:10.3791/59606 (2019).

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