Summary
Bu protokol amacı nasıl Arabidopsisalt kısımlarında farklı sitelere CFDA yüklemek için göstermek için. Daha sonra çekim içinde CF ortaya çıkan dağıtım deseni sunuyoruz.
Abstract
Symplastic Tracer 5 (6)-carboxyfluorcein diasetat (CFDA), hücresel bağlantı, floem taşımacılığı ve vasküler desenlerin ortaya koyduğu yaşam tesislerinde yaygın olarak uygulanmaktadır. Bu protokol, sırasıyla kök kesme ve ikiyüzlü pinching prosedürünü kullanarak Arabidopsis 'te Alta-to-top carboxyflorcein (CF) hareketini gösterir. Bu iki farklı prosedür, CF hareketinin farklı verimlilikleri ile sonuçlanır: yaklaşık% 91 ' i, iki yüzlü-pinching prosedürü ile çekimler içinde CF 'nin% 70 ' i, root-kesme prosedürü ile CF 'nin yaklaşık%% ' i. Bu simplastik boya mobil verimlilikte önemli değişiklikler sonuçlanan yükleme siteleri, basit değişiklik, CF hareketi en büyük olasılıkla kök-ikiyüzotil kavşak tarafından, symplastic yönetmeliğine tabi olabilir öneriyor.
Introduction
5 (6)-karboksflorcein (CF)1, 8-hidrokpliroidi-1, 3, 6-trisulphonik asit2, Lucifer sarı ch (lych)3, esculin ve cter4gibi spektral özellikleri bir dizi ile birçok floresan izleyiciler geliştirilmiştir ve symplastik hareketi ve floem aktivitesini izlemek için bitkiler uygulanır. Genellikle, bir symplastic boya hedef doku bir kesim içine yüklenir ve bitkinin diğer bölgelerine içine gazetecinin sıralı dağılım hücresel iletişim gösterecektir. Boya emilimi mekanizması tam olarak anlaşılmamış olsa da, canlı hücreler içinde temel CF hareketinin ilkesi yaygın olarak kabul edilmiştir. CF (CF diacetate, CFDA) ester formu floresan olmayan, ancak membran geçirgen. Bu özellik, boyanın hücrelere hızlı membran difüzyon sağlar. Canlı hücreler içinde bir kez, hücre içi esterleri 3 ' ve 6 ' CFDA pozisyonunda asetat grupları kaldırmak, floresan ve membran geçirmez CF serbest (Şekil 1, alternatif Wright ve al.2bakın); CF daha sonra plasmodesmata aracılığıyla bitkilerin diğer bölgelerine taşıyabilirsiniz.
CFDA ile iyi kurulan bir prosedür bu kaynak yaprakları içine yüklenebilir ve floem akışı ve birçok türün lavabo dokularında boşaltma floem izlemek için kullanılan olduğunu, örn, Arabidopsis root5CF boşaltma olarak, floem boşaltma patates tüberkülasyonu6sırasında, Nicotiana lavabo içinde floem boşaltma7yaprakları, ve benzeri. Benzer yükleme yaklaşımlarıyla, diğer çalışmalar bu boya ana bilgisayar ve parazit arasında symplastic bağlantı göstermek için benimsenen8,9, ya da simbiyotik ilişkiler ortaya çıkarmak için10,11.
Bu boyayı kullanımın başka bir yolu da, dağıtım düzenini belirlemek için belirli hücrelere veya tek hücreye mikroenjeksiyon yoluyla yüklenecektir. Bu tür sofistike teknikler, özellikle symplastic Domain12,13konseptinin geliştirilmesinde, plasmodesmata-aracılı hücresel iletişimin daha derin anlayışımızı büyük ölçüde kolaylaştırdı. Örneğin, Arabidopsis kotiledon hücrelerine CFDA Mikroenjeksiyonu, ikiyüzlülik epidermis ancak altta yatan hücrelerde veya kök epidermis içinde boya-bağlantı deseni sonuçlandı, bu nedenle iki yüzlü epidermis formları symplastic etki alanı14. Evcikli Guard hücreleri gibi benzer etki alanları15, elek element-Companion hücreleri16, kök saç hücreleri14 ve root Cap17,18 mikroenjeksiyon tekniği ile tespit edilmiştir. En şaşırtıcı şekilde, bazı etki alanları izleyici moleküllerinin belirli bir yönde hareket etmesine izin verir. Örneğin diken alan alın, destekleyici epidermal hücreye bir floresan prob mikroenjeksiyon diken etki içine izleyici akışına yol açar, ancak, ters enjeksiyon gerçek tutmaz19. Son raporda ayrıca Sedum embriyo20' nin symplastic alanlarında da benzer durumlar bulunmuştur. Bu nedenle, yukarıdaki tüm durumlarda yükleme sitelerinin takas symplastik iletişim içine yeni Öngörüler yol açabilir anlamına gelir. Önceki deney kök-to-Shoot mobil susturma rota incelemek amaçlayan bir roman symplastic etki alanı veya HEJ (ikiyüzsüz-epicotyl Junction) bölge, daha fazla kök yükleme (non-kurallı lavabo-yükleme) CFDA üzerinden doğrulanmıştır tespit Deneme21. Burada, biz daha basit bir yöntem kullanarak root-to-Shoot CF hareketi ayrıntılı ve yükleme sitelerini değiştirerek potansiyel bir symplastic etki alanı kurtarmak. Ayrıca bu prosedür, kökten ateş eden uzun mesafe taşımacılığını değiştiren genetik kökenleri ayırt etmek için uyarlanabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. MS orta Arabidopsis dikey büyüme
- Laminar akış kabininin iç kısmı, kullanımdan önce 30 dk UV ışık ve 15 dk hava akımı ile tedavi edilmelidir. UV ışığı açık olduğunda cam kapıyı kapattığınızdan emin olun. % 70 etanol ile tüm araçları ve plakaları dolap yerleştirmeden önce sprey.
- Murashige ve Skoog (MS) ortamını, bir laminar akış kabininin altında Standart 90 mm çap Petri tabağı ile hazırlayın.
Not: MS orta aşağıdaki bileşenleri içerir: 20,6 mM NH4No3, 18,8 mm kno3, 1,25 mM KH2Po4, 1,5 mm MgSO4· 7h2o, 3 mm CAcl2· 2H2o, 0,1 mm mnso4· H2o, 1,03 μm na2MoO4· 2H2o, 0,1 mm H3Bo,3, 30 ΜM Znso4· 7h2o, 0,1 μM Cuso4· 5h2o, 0,1 μm COCL2· 6h2o, 1,39 μm kı, 97 μ M FeSO4 · 7h2O, 114,5 μm etylenediaminetetraasetic asit (EDTA), 4,07 μm nikoinik asit, 2,44 μM piridoksin HCL, 0,15 μm tiamin HCL, 2,68 mm Glycine, 555 μm Myo-İnositol, 87,7 mm sakaroz ve 10 g/L agar. - Sterilizasyon ipuçları veya diş, MS medyası için uç veya kürdan dokunarak nemlendirici, daha sonra her Petri çanak bir sabit pozisyon üzerine tek bir sterilize tohumları daldırma tohumlama kartı ile gösterilir.
- Parafin film ve yapışkan bant ile Petri tabak mühür ve dikey bir büyüme odasında açık bir stand üzerine yerleştirin (22 °C, 70% nem) bir gün döngüsü ile 16 saat ışık ve 8 karanlık h (aydınlatma 6 to 10 PM). Arabidopsis tesisi, ekim sonrası 9-13 gün boyunca CFDA yükleme için hazırdır.
Not: Aşağıdaki prosedür öğleden sonra 2 PM 5 pm gerçekleştirilir.
2. root kesme prosedürü ile CFDA yükleme
- Hemen kullanmadan önce yeni CFDA çalışma çözümünü hazırlayın. 1 mm CFDA stok çözeltisi, 5 μM çalışma konsantrasyonuna steril Ultra Saf suyla-20 °c ' lik dondurucu içinde saklanır.
- Mikro-gözenekli parafin membran filmi (bkz. malzeme tablosu) 3 mm x 3 mm büyüklüğünde küçük parçalara keser.
- 22 °C ' de odada büyüyen bitkileri ortaya çıkarın ve kağıt havlusu ile aşırı nemi temizleyin. Küçük film parçalarını her kökün altına yerleştirin.
Not: Bu adım 2,6, tüm işlem 15 dakika içinde tamamlanması gerekir. - Bitkiler Petri çanak kapağı üzerine kaldırın. Root-ikiyüzotil kavşak altında 5-10 mm hakkında bir pozisyonda kökleri kes. Orta üzerinde filme geri çekim parçası yerleştirin.
- CFDA 0,25 μL 'leri, her bir kökün kesme ucunu Diseksiyon mikroskobu altında dikkatle uygulayın. Bitkinin diğer bölgelerine sıçramadan kaçının.
- Plaka kapağı ve büyüme odasında 2-3 h (22 °C) için ışık altında bitkiler bırakın.
- Lekeli bitkileri üç kez sıralı olarak damıtılmış su ile dolu üç ayrı bezelerde durulayın, ardından 1.4 x 'den 3.3 x 'e yakınlaştırma ile stereo-floresans mikroskop altında bitkiler gözlemlemek ( malzeme tablosunabakın). Floresan algılama için, floresan sinyalini iletmek üzere monte edilen yüksek verimlilik filtre küpü (470/20 Nm uyarma, 495 nm bölünmüş ve 525/50 nm emisyonu) kullanın.
3. cıkotil-pinching prosedürü ile CFDA yükleme
- Hemen kullanmadan önce yeni CFDA çalışma çözümünü hazırlayın. 1 mm CFDA stok solüsyonu-20 °c ' de steril Ultra Saf suyla ( malzeme tablosunabakın) 5 μM ' lik bir çalışma konsantrasyonuna saklanan seyreltilebilir.
- Mikro-gözenekli parafin membran filmi (bkz. malzeme tablosu) 3 mm x 3 mm büyüklüğünde küçük parçalara keser.
- 22 °C ' de odada büyüyen bitkileri ortaya çıkarın ve kağıt havlusu ile aşırı nemi temizleyin.
Not: Bu adım 3,7, tüm işlem 15 dakika içinde tamamlanması gerekir. - Her bitkinin kök-ikiyüzli kavşak altında film küçük bir parça Lay.
- Bir Diseksiyon mikroskobu altında kök-ikiyüzleril kavşak yakın ikiyüzüne hafifçe çimdik için forseps kullanın.
- CFDA 0,1 μL 'leri, Diseksiyon mikroskobu altında yara sitesine dikkatle uygulayın. Bitkinin diğer bölgelerine sıçramadan kaçının.
- Plaka kapağı ve 2-3 h için ışık (22 °C) altında bitkiler bırakın.
- Lekeli bitkileri üç kez sıralı olarak damıtılmış su ile dolu üç ayrı bezelerde durulayın, ardından 1.4 x 'den 3.3 x 'e yakınlaştırma ile stereo-floresans mikroskop altında bitkiler gözlemlemek ( malzeme tablosunabakın). Floresan algılama için, floresan sinyalini iletmek için yüksek verimli bir filtre küpü (470/20 Nm uyarma, 495 nm bölünmüş ve 525/50 nm emisyonu) monte edin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Symplastic hareketi genellikle çevresel dalgalanmalara tabidir. Bitki büyüyen devlet Perturbation, ve hatta doku hazırlama süreci plasmodesmata boyutu dışlama sınırını etkileyecektir, böylece symplastic taşıma etkileyen22. Boyama verimliliğini artırmak için, biz sıcaklık ve nem sıkıca kontrol edilir büyüme odasında, bizim operasyon Confine, ve aynı zamanda mümkün olduğunca hızlı bir şekilde tüm prosedürü gerçekleştirmek (ideal içinde 10-15 dakika Petri kapağı kaldırdıktan sonra). Bir deney sırasında bu önlemler etkili çekim boyama oranlarını azaltabilirsiniz.
Biz CF Shoot-Ward hareketi göstermek için iki biraz farklı prosedürler nitelendirdi. Normalde, her iki prosedür de, beslendikten sonra yaklaşık 2 saat sürgünler CF boyama için yol açabilir (Şekil 2). Yine de, iki prosedür farklı boyama verimliliği üretir. İki yüzlü,% 91 boyama verimliliği ile, kök kesme prosedürü% 70 (Welch 's t-test, p < 0,001) üretir (Şekil 3). Biz de bir kök-pinching yöntemi ile boya yükleme çalıştı ve kök kesme yöntemiyle karşılaştırıldığında daha düşük bir boyama verimliliği bulundu, kök ve ikiyüzsüz arasındaki boyama farkı için hesap değil kökünde boya yükleme yaklaşımı düşündürmektedir yükleme siteleri (Şekil 3). CF sinyali ağırlıklı olarak damar içinde bulunur, ancak sadece birkaç bitki diğer makromolekül hareket desenleri21görüldüğü gibi yarım yaprak deseni (Şekil 2) gösterir. CF sinyali ateş yayıldıktan sonra, daha fazla 72 h için muhafaza edilebilir ve sinyal diğer hücre türlerine daha fazla boşaltılamaz; Bu, önceden yayımlanan sonuçlar17ile uyumludur.
Şekil 1 : Fabrikanın hücrelerinde CFDA alımı ve CF hareketi Için bir şematik çizim. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Şekil 2 : 9, 11 ve 13 gün sonra Ekim (DAS) çekleri CF sinyali Arabidopsis bitkiler. CF sinyal hem kotiledon ve gerçek yaprakları (A, B, C) tespit edilebilir. Bitkilerin çoğunda CF sinyali, kök kesme veya ikiyüzli-pinching yöntemi ile 2-3 saat sonra damar içinde görülür. Sadece çok nadir durumlarda (% 0,5 ' den az), iki yüzlü otil-pinching yöntemi 7 das Arabidopsis (D) kotiledon bir kısmi boyama deseni üretebilir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Şekil 3 : Kök yükleme yöntemiyle (root-kesme ve root-pinching) ve ikiyüzlere sabitleme yöntemiyle boyama verimliliği. 9 DAS tesislerinde boyama verimliliği üç bağımsız deneyler (n = 26 root-pinching denemede belirlendi; n = 335 kök kesme denemede; n = 522 iki yüzlü-pinching yönteminde). Hata çubuğu standart hatayı gösterir. p < 0,001 gösterir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Gelişmekte olan çalışmalar bitkiler hızla dış uyaranlara yanıt verebilir göstermiştir23, manipülasyon da dahil olmak üzere deneysel prosedürler tanıtıldı22. İlk deneyimizde, bu bilginin gözetimi genellikle boyama başarısızlığa yol açar. Bu derslerle, bu deneyi yaparken aşağıdaki önlemlerin akılda tutulması gerektiğini öneriyoruz: (1) hasat sonrası tohumlar düşük sıcaklık ve düşük nemi ayarlamak için bir depolama kabininde tutulmalıdır; (2) bitkilerin manipülasyon, özellikle kabine hava maruz kalma, en az bir süre tutulmalıdır; (3) deneysel koşullar sabit tutulmalıdır, örneğin, tüm prosedürler bir büyüme odasında yapılmalıdır.
İşaret edilmesi gereken bu denemede başka bir yönü CFDA yükleme hacminin mümkün olduğunca küçük tutulması gerektiğini olduğunu. Aşırı çözüm genellikle hangi aşırı CFDA çözüm kılcal eylem yoluyla ateş kadar diffü olabilir eserler, böylece genç lavabo yaprakları trichomes tonlama yol açar. Görüntü bu artifakı azaltan önce bir yıkama adım olsa da, en iyi yaklaşım aşırı çözeltinin neden komplikasyon önlemek için minimum miktarda yüklemek için.
Bu teknik önlemlerle çözüldü, CFDA root-to-Shoot hareketi Şekil 2' de gösterildiği gibi stabil olarak görülebilir. Bitkiler büyüdükçe, 24 gün boyunca, Arabidopsis bitkiler biz henüz tam bir açıklama bulamadık hangi, ateş CF iletimi yeteneğini kaybetmek gibi görünüyor. Olası bir ipucu hücre içi birikiminden gelir. Wright ve al.2' nin raporlarına göre, CF vakoller tarafından arındırılacak, bu nedenle, translokasyon boyunca hücre içi ücretsiz CF yaşlanma bitkilerin büyük vakollerinde sekestrasyon kademeli olarak azaltır.
Bu prosedürün bir belirgin özelliği, ateş CF dağıtım desendir. Bu vasküler desen kaynak yaprak1,24,25, böylece boya da phloem aracılığıyla hareket bir yanılsama lider boya yükleyerek bu anımsatan. Aslında, CF alt-to-top translokasyon root güçlü bir lavabo dokusu ve CFDA shootward hareketi floem akışı karşı gider gerçeğini verilen floem aracılığıyla elde edilmeyebilir. Bunun yerine, bu süreç Botha ve al.25tarafından gösterildiği gibi xylem taşımacılığı tarafından kolaylaştırılabilir. Kısaca, CFDA xylem damarları aracılığıyla alınabilir, parankimat hücrelerinde işlenmiş ve floem akışı elek elemanı için daha fazla transloke25. Bu nedenle, bu şekilde yükleme deneyi phloem aktivitesini yansıtmayabilir, ancak güçlü floresans tespit edilebilmek için CF 'nin symplastik hareketi gerçekleşmelidir. Diğer bir deyişle, bu Bottom-to-top CF hareketi, parankimat hücreleriyle kombine xylem taşıma ve symplastik taşıma neden olabilir.
Symplastic taşıma genellikle symplastic etki alanı oluşumu13tabidir, ve belirli durumlarda tek yönlü taşıma görüntüler19,20. Hızlı bir kontrol için bir yol yükleme siteleri vardiya etmektir. Nitekim, biz aynı yöntemi kullanarak bu süreci özenle, biz yükleme sitesi basit bir değişiklik bulundu, root-ikiyüzotil kavşak için proksimal tarafı kökünden, CFDA mobil verimlilik önemli değişiklik neden olur (Şekil 3). Farklı yükleme siteleri nedeniyle CF mobil farklılaşma kök-ikiyüzotil kavşak başka bir symplastik etki, hangi symplastic bariyer kök türetilmiş shootward sinyalleri için oluşmuş olduğunu düşündürmektedir. Diğer moleküllerle daha deneysel tasarım bu olasılığı keşfetmek için gereklidir.
Şimdiye kadar, bu basit yöntem CFDA istikrarlı shootward hareketi sağlayabilir. Bu özellik daha da nadiren incelenmiştir tehlikeye veya gelişmiş kök-to-Shoot hareketi ile bitkiler ayırt etmek için keşfedilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Bu çalışma Çin 'in Ulusal Doğal Bilim Vakfı (31671257) ve Hubei ortak yenilik Merkezi tahıl endüstrisi (LXT-16-18) tarafından finanse edilmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| KNO3 | Sinopharm Chemical Reagent | 10017218 | |
| KH2PO4 | Sinopharm Chemical Reagent | 10017608 | |
| MgSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10013018 | |
| CaCl2·2H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 20011160 | |
| MnSO4·H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10013418 | |
| Na2MoO4·2H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10019818 | |
| Boric Acid | Sinopharm Chemical Reagent | 10004818 | |
| ZnSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10024018 | |
| CuSO4·5H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10008218 | |
| CoCl2·6H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10007216 | |
| KI | Sinopharm Chemical Reagent | 10017160 | |
| FeSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent | 10012118 | |
| EDTA | Sinopharm Chemical Reagent | 10009717 | |
| NaOH | Sinopharm Chemical Reagent | 10019718 | |
| KOH | Sinopharm Chemical Reagent | 10017018 | |
| Sucrose | Sinopharm Chemical Reagent | 10021418 | |
| Myo-inositol | MACKLIN | I811835 | |
| Nicotinic Acid | MACKLIN | N814565 | |
| Pyridoxine HCl | MACKLIN | V820447 | |
| Thiamine HCl | MACKLIN | T818865 | |
| Glycine | MACKLIN | G800880 | |
| Agar powder | Novon | ZZ14022 | |
| Fluorescence Microscope | Zeiss | Axio Zoom V16 | |
| Dissecting microscope | SDPTOP | SRE-1030 | |
| 200μl pipette | Dragon Laboratory Instruments | 713111110000-20-200ul | |
| 2.5μl pipette | Eppendorf | 3120000011 | |
| Fine forceps | TWEEZERS | ST-15 | |
| Parafilm | PARAFILM | PM-996 | |
| Stainless steel double-sided blade | Gillette | Platinum-Plus Double-Edge Blade |
References
- Grignon, N., Touraine, B., Durand, M. 6(5)Carboxyfluorescein as a tracer of phloem sap translocation. American Journal of Botany. 76, 871-877 (1989).
- Wright, K. M., Oparka, K. J. The fluorescent probe HPTS as a phloem-mobile, symplastic tracer: an evaluation using confocal laser scanning microscopy. Journal of Experimental Botany. 47 (3), 439-445 (1996).
- Oparka, K. J., Prior, D. A. Movement of Lucifer Yellow CH in potato tuber storage tissues: A comparison of symplastic and apoplastic transport. Planta. 176 (4), 533-540 (1988).
- Knoblauch, M., et al. Multispectral Phloem-Mobile Probes: Properties and Applications. Plant Physiology. 167 (4), 1211-1220 (2015).
- Oparka, K. J., Duckett, C. M., Prior, D. A. M., Fisher, D. B. Real-time imaging of phloem unloading in the root tip of Arabidopsis. The Plant Journal. 6 (5), 759-766 (1994).
- Viola, R., et al. Tuberization in Potato Involves a Switch from Apoplastic to Symplastic Phloem Unloading. The Plant Cell. 13 (2), 385-398 (2001).
- Roberts, A. G., et al. Phloem Unloading in Sink Leaves of Nicotiana benthamiana: Comparison of a Fluorescent Solute with a Fluorescent Virus. The Plant Cell. 9 (8), 1381-1396 (1997).
- Péron, T., et al. New Insights into Phloem Unloading and Expression of Sucrose Transporters in Vegetative Sinks of the Parasitic Plant Phelipanche ramosa L (Pomel). Frontiers in Plant Science. 7 (2048), (2017).
- Spallek, T., et al. Interspecies hormonal control of host root morphology by parasitic plants. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 114 (20), 5283-5288 (2017).
- Complainville, A., et al. Nodule initiation involves the creation of a new symplasmic field in specific root cells of medicago species. The Plant Cell. 15 (12), 2778-2791 (2003).
- Bederska, M., Borucki, W., Znojek, E. Movement of fluorescent dyes Lucifer Yellow (LYCH) and carboxyfluorescein (CF) in Medicago truncatula Gaertn. roots and root nodules. Symbiosis. 58 (1-3), 183-190 (2012).
- Robards, A. W., Lucas, W. J. Plasmodesmata. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 41 (1), 369-419 (1990).
- Roberts, A. G., Oparka, K. J. Plasmodesmata and the control of symplastic transport. Plant, Cell & Environment. 26 (1), 103-124 (2003).
- Duckett, C. M., Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Dolan, L., Roberts, K. Dye-coupling in the root epidermis of Arabidopsis is progressively reduced during development. Development. 120 (11), 3247-3255 (1994).
- Palevitz, B. A., Hepler, P. K. Changes in dye coupling of stomatal cells of Allium and Commelina demonstrated by microinjection of Lucifer yellow. Planta. 164 (4), 473-479 (1985).
- van Bel, A. J. E., Kempers, R. Symplastic isolation of the sieve element-companion cell complex in the phloem of Ricinus communis and Salix alba stems. Planta. 183 (1), 69-76 (1991).
- Erwee, M. G., Goodwin, P. B. Symplast domains in extrastelar tissues of Egeria densa Planch. Planta. 163 (1), 9-19 (1985).
- Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Wright, K. M. Symplastic communication between primary and developing lateral roots of Arabidopsis thaliana. Journal of Experimental Botany. 46 (2), 187-197 (1995).
- Christensen, N. M., Faulkner, C., Oparka, K. Evidence for Unidirectional Flow through Plasmodesmata. Plant Physiology. 150 (1), 96-104 (2009).
- Wróbel-Marek, J., Kurczyńska, E., Płachno, B. J., Kozieradzka-Kiszkurno, M. Identification of symplasmic domains in the embryo and seed of Sedum acre L. (Crassulaceae). Planta. 245 (3), 491-505 (2017).
- Liang, D., White, R. G., Waterhouse, P. M. Gene silencing in Arabidopsis spreads from the root to the shoot, through a gating barrier, by template-dependent, non-vascular, cell to cell movement. Plant Physiology. 159 (3), 984-1000 (2012).
- Radford, J. E., White, R. G. Effects of tissue-preparation-induced callose synthesis on estimates of plasmodesma size exclusion limits. Protoplasma. 216 (1-2), 47-55 (2001).
- Kollist, H., et al. Rapid Responses to Abiotic Stress: Priming the Landscape for the Signal Transduction Network. Trends in Plant Science. 24 (1), 25-37 (2019).
- Haupt, S., Duncan, G. H., Holzberg, S., Oparka, K. J. Evidence for Symplastic Phloem Unloading in Sink Leaves of Barley. Plant Physiology. 125 (1), 209-218 (2001).
- Botha, C. E. J., et al. A xylem sap retrieval pathway in rice leaf blades: evidence of a role for endocytosis? Journal of Experimental Botany. 59 (11), 2945-2954 (2008).
