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Immunology and Infection

ठीक सुई आकांक्षा द्वारा अतिरिक्त संवहनी Trypanosoma परजीवी की जांच

doi: 10.3791/59798 Published: August 7, 2019

Summary

ठीक सुई आकांक्षा एक तकनीक है, जिससे कोशिकाओं को एक पतली सुई का उपयोग कर एक घाव या अंग से प्राप्त कर रहे हैं. Aspirated सामग्री गंदा, दाग और निदान के लिए एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की है या आणविक जीव विज्ञान, साइटोमेट्री या इन विट्रो विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया। यह सस्ता है, सरल, जल्दी और कम से कम आघात का कारण बनता है.

Abstract

ठीक सुई आकांक्षा (FNA) एक नियमित नैदानिक प्रक्रिया दोनों चिकित्सा और पशु चिकित्सा प्रथाओं के लिए आवश्यक है. यह कोशिकाओं और / या स्पष्ट जनता, अंगों या बहाव (एक शरीर गुहा में द्रव संचय) से कोशिकाओं और / या सूक्ष्मजीवों के percutaneous आकांक्षा के होते हैं एक पतली सुई शिरापरक पंचर के लिए इस्तेमाल किया नियमित सुई के समान का उपयोग कर. FNA द्वारा एकत्र सामग्री सामान्य अत्यधिक सेलुलर में है, और पुनः प्राप्त aspirate तो गंदा है, हवा सूखे, गीला तय, दाग और एक माइक्रोस्कोप के तहत मनाया. नैदानिक संदर्भ में, FNA एक महत्वपूर्ण नैदानिक उपकरण है कि उचित चिकित्सीय प्रबंधन के लिए एक गाइड के रूप में कार्य करता है. क्योंकि यह सरल है, तेज, न्यूनतम इनवेसिव और प्रयोगशाला और मानव संसाधनों में सीमित निवेश की आवश्यकता है, यह बड़े पैमाने पर पशु चिकित्सकों द्वारा प्रयोग किया जाता है, ज्यादातर घरेलू में, लेकिन यह भी खेत जानवरों में. पशु मॉडल का उपयोग कर अध्ययन में, FNA लाभ है कि यह एक ही जानवर में बार बार प्रदर्शन किया जा सकता है, ट्यूमर और अंगों से कोशिकाओं के संग्रह के माध्यम से अनुदैर्घ्य अध्ययन को सक्षम करने / नियमित माइक्रोस्कोपी के अलावा, पुनः प्राप्त सामग्री भी इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, जैव रासायनिक विश्लेषण, प्रवाह साइटोमेट्री, आणविक जीव विज्ञान या इन विट्रो परख के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। FNA संक्रमित चूहों के gonads में प्रोटोज़ोअन परजीवी Trypanosoma brucei की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, पशुओं में भविष्य के निदान के लिए संभावना खोलने.

Introduction

ठीक सुई आकांक्षा (FNA) व्यापक रूप से कैंसर और गैर neoplastic रोगों के निदान में प्रयोग किया जाता है, दोनों मानव और घरेलू पशुओं में. इस तकनीक का मानकीकरण पिछले कुछ वर्षों में किया गया है और इसका वर्णन अनेक पाठ्यपुस्तकों1,2में किया गया है .

यह काफी हद तक एक खाली सिरिंज पर फिट एक पतली सुई के साथ स्पष्ट जनता, अंगों या बहाव के percutaneous आकांक्षा के होते हैं, बड़े पैमाने पर1,3से कोशिकाओं या तरल पदार्थ को वापस लेने के लिए नकारात्मक दबाव का उपयोग कर. सुई आम तौर पर कर रहे हैं 22 करने के लिए 25 जी (सूई आंतरिक व्यास के लिए इसी गेज), और एक बड़ा बोर सुई का उपयोग (बड़े व्यास, उदा., 21 जी) सेलुलरता को बढ़ाने के लिए उपयोगी है, हालांकि यह अत्यधिक रक्त संदूषण का उत्पादन कर सकते हैं. सुई लंबाई द्रव्यमान की गहराई पर निर्भर करेगा, लेकिन 1 या 11 डिग्री 2 इंच आमतौर पर सतही जनता के लिए प्रयोग किया जाता है. Syringes आम तौर पर कर रहे हैं 5 से 10 एमएल, बड़ा सिरिंज उच्च वैक्यूम प्राप्त करने के साथ, जो बारी में aspirate उपज बढ़ जाती है. गैर palpable गहरी बैठा जनता भी अब सुइयों के साथ और छवि मार्गदर्शन (अल्ट्रासोनोग्राफी) के तहत, aspirated किया जा सकता है। पुनः प्राप्त ऐस्पायर को स्मीयर किया जा सकता है, वायु शुष्क, गीला-फिक्स्ड, दाग और एक सूक्ष्मदर्शी के नीचे देखा जा सकता है ताकि निदान3 (चित्र1) प्राप्त किया जा सके।

यह एक सरल, सस्ती, दर्द रहित और न्यूनतम इनवेसिव तकनीक मुख्य रूप से स्पष्ट जनता पर और भी अंगों के लिए एक निदान प्राप्त करने के लिए preoperative सेटिंग में इस्तेमाल किया है, लिम्फ नोड्स की तरह, थायराइड, प्रोस्टेट या यहां तक कि बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं 1. नैदानिक उपकरण होने के अलावा, इस तकनीक का उपयोग कोशिकाओं के संग्रह के लिए अन्य प्रयोजनों के लिए भी किया जा सकता है, जैसे साइटोजेनेटिक्स, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (चित्र 1D), प्रवाह साइटोमेट्रिकलक्षण4,5 6,7, सेल संस्कृतियों की स्थापना8. नैदानिक अभ्यास में एक सामान्य उदाहरण इन विट्रो निषेचन 9 के लिए शुक्राणु पुनर्प्राप्तिहै.

आकांक्षा कई स्मीयर प्राप्त करने के लिए एक ही द्रव्यमान में कई बार दोहराया जा सकता है। विषम घाव, जैसे, एक ठोस क्षेत्र और सिस्टिक स्थान के मामले में, यह महत्वपूर्ण है कि कोशिकाओं को प्रत्येक क्षेत्र से प्रेरित किया जाता है। FNA द्वारा एकत्र सामग्री सामान्य अत्यधिक सेलुलर में है, जो ज्यादातर मामलों में एक ऊतक बायोप्सी के लिए आवश्यकता के बिना रोगों के निदान के लिए अनुमति देता है. विशेष दाग, इम्यूनोफ्लोरेसेंस। इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री (चित्र 1 डी) और आणविक तकनीक भी FNA के माध्यम से प्राप्त स्मीयर में प्रदर्शन किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, संक्रामक एजेंटों की पहचान के लिए जब केवल आकारिकी द्वारा पहचानने योग्य नहीं10. सामान्य अनुप्रयोगों और FNA के लिए आवश्यक उपकरणों और आपूर्ति का एक संक्षिप्त अवलोकन टेबल्स 1 और 2में क्रमशः संक्षेप कर रहे हैं.

नैदानिक प्रयोजनों के लिए सुई पंचर के उपयोग पर पहली रिपोर्ट अरब चिकित्सा के प्रारंभिक लेखन में वर्णित है, लेकिन यह जल्दी 20 वीं सदी में है कि आधुनिक सुई आकांक्षा तकनीक11लागू किया गया. विशेष रूप से, शायद पहली रिपोर्ट है कि संक्रामक रोगों के निदान के लिए FNA के उपयोग से पता चलता है 1904 में एक अध्ययन किया गया था, जहां ग्रिग और ग्रे नींद की बीमारी के साथ रोगियों से लिम्फ नोड्स की सुई आकांक्षाओं की सूचना दी गतिशील trypanosomes 12 पता चला . लेखकों दोनों जल्दी और उन्नत मामलों में trypanosomes की उपस्थिति की सूचना दी, और रक्त स्मीयर में देखा है कि, जहां इन अक्सर दुर्लभ घटनाओं12की तुलना में एक उच्च घनत्व पर.

पशुओं में ट्रिपैनोसोमासिस का वर्तमान निदान रक्त में परजीवी के प्रत्यक्ष अवलोकनपर निर्भर करता है , लसीका या प्रतिरक्षा निदान तकनीक 13,14,15. हम पहले से पता चला है कि माउस में प्रयोगात्मक Trypanosoma संक्रमण में, Trypanosoma brucei (टी brucei) वसा ऊतक के लिए एक उल्लेखनीय tropism है16 और भी बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं में से कुछ के लिए, अर्थात् एपिडिडिमिस17| परजीवी इन ऊतकों के स्ट्रोमा में बडी संख्या में16जमा होते हैं .

नीचे चित्रित प्रोटोकॉल लाइव चूहों में FNA के लिए एक विस्तृत कदम दर कदम तकनीकी प्रक्रिया का वर्णन करता है, बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं में मौजूद trypanosomes की आकांक्षा के उद्देश्य से (परीक्षण, epididymis, और epididymal वसा), उसके बाद विशिष्ट परजीवी प्रोटीन (वीएसजी)16,17के लिए पारंपरिक कोशिका विज्ञान और इम्यूनोस्टेनिंग . आकांक्षा संक्रमण और सुरक्षा प्रक्रियाओं है कि लागू करने के बाद 6 दिन प्रदर्शन किया गया था उन आमतौर पर प्रयोगात्मक जानवरों की नियमित हैंडलिंग के लिए स्थापित कर रहे हैं. अवसरवादी रोगजनकों के आकस्मिक जोखिम को कम करने के लिए अतिरिक्त उपायों की आवश्यकता है कि प्रतिरक्षा की कमी है (एक भाप बाँझ गाउन, मुखौटा, बाल बोनट, बाँझ दस्ताने, और हर समय aseptic तकनीक सुनिश्चित करने के पहने हुए).

Protocol

इस प्रोटोकॉल में सभी पशु प्रयोगों यूरोपीय संघ के नियमों के अनुसार प्रदर्शन किया गया और Instituto de Medicina आणविक (iMM) के पशु आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया, (AEC]2011[006]LF]TBrucei]IMM). iMM की पशु सुविधा प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के लिए पुर्तगाली कानून के अनुरूप है (Decree-कानून 113/2013) और यूरोपीय निर्देशक 2010/63/EU और FELASA (यूरोपीय प्रयोगशाला पशु विज्ञान संघों के संघ) दिशा निर्देशों का पालन करता है और प्रयोगशाला पशु कल्याण से संबंधित सिफारिशें।

1. माउस के बाहरी पुरुष प्रजनन अंगों से परजीवी की आकांक्षा

नोट: ठीक सुई आकांक्षा (FNA) जंगली प्रकार पुरुष C57BL/6J चूहों में प्रदर्शन किया गया था, 6 से 10 सप्ताह पुराने, टी brucei से संक्रमित 200 के साथ नमकीन के 200 डिग्री सेल्सियस के इंट्रापेरिटोनल इंजेक्शन के रूप में पहले वर्णित16.

  1. बाहरी पुरुष प्रजनन अंगों के FNA के लिए, माउस को लेमिनर फ्लो हुड में रखें, जानवर को 75 मिलीग्राम/किलोग्राम केटामाइन + 1 मिलीग्राम/किलोग्राम मेडेटोमीन के मिश्रण के 200 डिग्री सेल्सियस इंजेक्शन के साथ एनेस्थेटाइज करें।
    1. टो चुटकी विधि के साथ एनेस्थेटाइजेशन की पुष्टि करें। जब पैर के प्रत्याकर्षण का प्रतिवर्त अनुपस्थित हो जाता है, तो पृष्ठीय भारमेंत में माउस की स्थिति (चित्र 2क)।
    2. ध्यान से वृषण palpate, आकार और overlying त्वचा से दूरी का आकलन. सूचकांक और मध्यमा उंगली के बीच या तर्जनी और अंगूठे के बीच अंग को रोकें। लक्ष्य को और अधिक स्थिर करने के लिए बड़े पैमाने पर कसकर अत्यधिक त्वचा को फैलाएं। अल्कोहल वाइप्स से सतह को साफ करें (चित्र 2क)
    3. इकट्ठे 22 जी सुई और 5 एमएल सिरिंज पकड़ो और लक्ष्य में सुई टिप डालने, हमेशा बाकी राज्य में प्लंजर के साथ (चित्र 2B-C)।
    4. सीरिंज प्लंजर को 4 एमएल से 5 एमएल मार्क 2-3 बार वापस लेने से चूषण लागू करें। एक प्रतिनिधि नमूने की संभावना को बढ़ाने के लिए और एपिडिडिमिस जैसे छोटे संरचनाओं को लक्षित करने के लिए या तो एक सीधी रेखा में या कई अलग-अलग स्पर्शरेखाओं के साथ अंग के भीतर सुई को रीडायरेक्ट करें। सुनिश्चित करें कि इस प्रक्रिया कोमल है, ऊतक क्षति को कम करने के लिए (चित्र 2C-D).
    5. चूषण रिलीज और फिर सुई वापस ले लो. वापस लिए गए प्लंजर के साथ सुई को फिर से न खींचें क्योंकि इससे सिरिंज के बैरल में ऐस्पायर का चूषण हो जाएगा और इसकी वसूली में बाधा आएगी (चित्र 2ई) । सुई की वापसी के बाद, पंचर स्थल पर एक बाँझ धुंध स्पंज के साथ दबाव लागू करने से किसी भी रक्तस्राव को नियंत्रित करें।
    6. सुई से सिरिंज डिस्कनेक्ट करें, इसे हवा से भरें, सुई को फिर से कनेक्ट करें और सुई की सामग्री को स्लाइड पर धीरे से निकालें। splattering से बचने के लिए सुई की नोक बहुत करीब या स्लाइड पर भी रखें (चित्र2F-I)।
    7. प्रतिकृति नमूना सुनिश्चित करने के लिए अंग/पशु के अनुसार कम से कम एक अतिरिक्त आकांक्षा करें।
    8. नमकीन में 1 मिलीग्राम/किलोग्राम Atipamezole के एक subcutaneous इंजेक्शन के साथ संज्ञाहरण उलटो और वसूली के लिए अपने घर पिंजरे में जानवरों को वापस और पूरी वसूली तक निरीक्षण.

2. Aspirated सामग्री से स्मियर तैयारी

नोट: प्रक्रिया के दौरान दस्ताने का प्रयोग करें और सुइयों और सिरिंजों के सुरक्षित निपटान सुनिश्चित करें।

  1. दो कदम पुल विधि
    1. गैर-प्रमुख हाथ का उपयोग करके aspirate की बूंद है कि स्लाइड उठाओ, और अंगूठे और तर्जनी के बीच ठंढा अंत चुटकी (चित्र 3A) .
    2. एक दूसरी साफ स्लाइड उठाओ, स्प्रेडर स्लाइड, प्रमुख हाथ के साथ और यह aspirate की बूंद के साथ पहली स्लाइड भर में ले आओ. स्लाइड की चिकनी साफ किनारे को प्रतिदर्श स्लाइड पर लगभग 30 डिग्री (चित्र3ठ) के कोण पर केवल ड्रॉप के शीर्ष पर रखें ।
    3. एक पतली फिल्म प्राप्त करने के लिए एक प्रकाश, सतत और स्थिर गति के साथ स्लाइड को आगे की स्लाइड को ग्लाइड करें (चित्र 3ं) ।
    4. स्लाइड को आराम करें और सामग्री के पूर्ण और तेज हवा सुखाने की अनुमति दें (चित्र 3डी)। गर्मी ठीक मत करो. स्लाइड के ठंढे किनारे को पेंसिल से लेबल करें।
      नोट: प्रोटोकॉल इस कदम पर रोका जा सकता है और स्मीयर अनिश्चित काल के लिए संग्रहीत किया जा सकता है जब तक दाग के लिए तैयार है.

3. स्मियर्स का दाग

नोट: प्रक्रिया के दौरान दस्ताने का प्रयोग करें और सुनिश्चित करें कि कदम 3.1.4 और 3.2.9 एक धूआं हुड के अंदर प्रदर्शन कर रहे हैं.

  1. Giemsa धुंधला प्रोटोकॉल
    1. स्लाइड को कोपलिन जार में डुबोकर हवा में सुझाए गए स्मीयरों को ठीक करें जिसमें 5 मिनट के लिए 100% मेथनॉल होता है (चित्र3E)।
    2. एक कोपलिन जार में स्लाइड को स्थानांतरित करें जिसमें 20% गिमसा समाधान (आसुत जल में 1/5 तक पतला) 30 मिनट के लिए, या 10 मिनट के लिए 10% गिमसा (चित्र 3 एफ)।
    3. नल के पानी में कुल्ला और अच्छी तरह से पीने के ऊतक कागज का उपयोग कर डब करने के लिए.
    4. स्लाइड को क्षैतिज रूप से होल्ड करें और स्मीयर पर गैर-एक्क्यूस बढ़ते माध्यम की एक बूंद लागू करें। स्लाइड पर एक कवर ग्लास के किनारे रखें, इसे कम करें और किसी भी हवा के बुलबुले को हटाने के लिए धीरे से दबाएं।
  2. FNA स्मीयर में इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री
    1. 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 100% मेथनॉल में हवा सूखे स्मीयर को ठीक करें।
    2. 1x फॉस्फेट बफर (पीबीएस) के साथ एक Coplin जार में 5 मिनट के लिए स्लाइड धो, इस कदम को दोहरा 3 बार ताजा 1x पीबीएस हर बार का उपयोग कर.
    3. Coplin जार से स्लाइड निकालें, स्मीयर को छूने के बिना अतिरिक्त बफर पोंछऔर एक पानी repellent कलम के साथ स्मीयर के चारों ओर एक चक्र आकर्षित (सामग्री कीतालिका).
    4. स्लाइड को क्षैतिज रूप से होल्ड करें और प्रत्येक स्मीयर के लिए पतला प्राथमिक एंटीबॉडी समाधान के 150 डिग्री सेल्सियस लागू करें और कमरे के तापमान पर 1 एच के लिए इनक्यूबेट करें।
      नोट: प्राथमिक एंटीबॉडी यहाँ इस्तेमाल किया एक गैर शुद्ध खरगोश सीरम विरोधीटी brucei VSG13 प्रतिजन है (कई टी brucei VSGs के साथ पार प्रतिक्रियाशील, घर में उत्पादित), 1x PBS में पतला 1:50,000 पर. माध्यमिक एंटीबॉडी के गैर विशिष्ट बंधन के आकलन के लिए अनुमति देने के लिए preimmune सीरम (सामग्री कीतालिका) के साथ उपयुक्त प्राथमिक एंटीबॉडी की जगह नकारात्मक नियंत्रण प्रदर्शन.
    5. 1x PBS के साथ एक Coplin जार में 5 मिनट के लिए स्लाइड धो, ताजा 1x पीबीएस हर बार का उपयोग कर इस कदम को दोहरा.
    6. स्लाइड को क्षैतिज रूप से होल्ड करें और प्रत्येक स्मीयर के लिए वाणिज्यिक रूप से उपलब्ध हॉर्सराडिश peroxidase/DAB दृश्य प्रणाली के 150 $L लागू करें। कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट (सामग्री की मेज)।
    7. 1x पीबीएस में 5 मिनट के लिए 3x के लिए धो लें.
    8. हैरिस hematoxylin युक्त एक Coplin जार में स्लाइड immersing द्वारा काउंटर. नल के पानी में कुल्ला और अच्छी तरह से साफ करने के लिए डब करने के लिए कागज का उपयोग कर सूखी।
    9. स्लाइड को क्षैतिज रूप से होल्ड करें और स्मीयर पर गैर-एक्क्यूस बढ़ते माध्यम की एक बूंद लागू करें। स्लाइड पर एक कवर ग्लास के किनारे रखें, इसे कम करें और किसी भी हवा के बुलबुले को हटाने के लिए धीरे से दबाएं।

Representative Results

एफएनए टी ब्रूसी से संक्रमित चूहों के बाहरी पुरुष प्रजनन अंगों में एक 22 जी सुई का उपयोग करके किया गया था जो 5 एमएल सिरिंज के साथ मिलकर किया गया था, और स्मीयर तैयार करने के लिए कांच की स्लाइडें (चित्र 1ए-सी) । विधि सरल है, लेकिन इष्टतम परिणाम महत्वपूर्ण चरणों पर भरोसा करते हैं: सामान्य संज्ञाहरण के माध्यम से प्राप्त माउस का सही स्थिरीकरण, और पूरी प्रक्रिया में अंगों के स्थिरीकरण (चित्र 2A-B)। सक्शन 2-3 बार लागू किया गया था और सुई छोटे अंगों और ऊतकों के प्रतिनिधि नमूने के लिए अनुमति देने के लिए 1-2 बार पुनः निर्देशित: एपिडिडिमिस और एपिडिडयमल वसा। सुई को बाह्यबनाने से पहले ऋणात्मक दाब जारी किया गया था। सुई के लुमेन और हब में निहित ऐश्पिरेट (लगभग 20 डिग्री सेल्सियस) का उपयोग 2 स्मीयरों का उत्पादन करने के लिए किया गया था (चित्र 3क-ब्) मामलों में जहां सुई चूषण की रिहाई के बिना वापस ले लिया गया था, सामग्री सिरिंज में चूसा गया था और वसूली योग्य नहीं था. प्रक्रिया सफलतापूर्वक दो बार दोहराया गया था, प्रत्येक युग्मित अंग के लिए एक. सुखाने के बाद, स्मीयर गीला तय किया गया था और trypanosome सतह प्रोटीन के लिए इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री प्रदर्शन किया गया था।

एक अच्छी गुणवत्ता स्मीयर (चित्र 4A-C) अच्छा सेलुलर घनत्व के साथ कोशिकाओं के एक मोनोलेयर द्वारा विशेषता थी, जिसमें मेजबान कोशिकाओं संरक्षित रूपात्मक विशेषताओं को दिखाने के लिए, मूल और रिश्तेदार के अपने ऊतक की पहचान के लिए अनुमति देता है एक दूसरे के बीच का अनुपात। परजीवी कुशलतापूर्वक प्रतिरक्षा-सना हुआ, पहचानयोग्य और गणनीय थे (चित्र 4ख)। एक संक्रमित माउस में एक peritoneal बहाव के एक FNA का एक मामला, प्रत्यक्ष अवलोकन और निदान के लिए Giemsa के साथ दाग, भी दिखाया गया है (चित्र 3 डी-एफ और चित्रा 4C).

एक गरीब या नकारात्मक FNA परिणाम विभिन्न कारणों के कारण हो सकता है: (1) बहुत कम FNA सामग्री स्लाइड पर व्यक्त की है और नमूना के तहत प्रतिनिधित्व है; (2) बहुत ज्यादा FNA सामग्री एक स्लाइड पर व्यक्त की है, overly मोटी स्मीयर बनाने और साइटोलॉजिकल मूल्यांकन ख़राब; (3) बहुत अधिक बल लागू किया जाता है जब स्मीयर बनाने, और कोशिकाओं को बाधित कर रहे हैं, नग्न नाभिक और डीएनए धारियाँ का एक बहुत में जिसके परिणामस्वरूप (क्रश कलाकृति); या (4) स्मीयर और कोशिकाओं को अलग न करने पर पर्याप्त बल नहीं लगाया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप स्तरित परत होती है जो कोशिकाओं की आकृतिक विशेषताओं के मूल्यांकन में बाधा डालती है (चित्र 5)।

जब हम ऊतकरोगविज्ञान के साथ FNA साइटोपैथोलॉजी की तुलना करते हैं, अर्थात्, कोशिकाओं बनाम ऊतकों के विश्लेषण, मुट्ठी लाभ है कि सेलुलर आकृति विज्ञान बेहतर संरक्षित है और रिश्तेदार अनुपात और कोशिकाओं की गिनती बेहतर मूल्यांकन किया जा सकता है (चित्र 6) . इसके अलावा, इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री सरल, तेज और आसान इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री की तुलना में अनुकूलित करने के लिए है, जो आम तौर पर औपचारिक रूप से तय और पैराफिन-एम्बेडेड ऊतक में किया जाता है।

लक्ष्य अनुप्रयोगों लाभ सीमाओं
स्पर्शी द्रव्यमान नियमित माइक्रोस्कोपी, निदान सरल, जल्दी कोई ऊतक वास्तुकला
अंग इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री कम लागत अंध आकांक्षा (सुई लक्ष्य स्पर्शरेखीय रूप से याद कर सकती है; आकांक्षा नेक्रोटिक, सिस्टिक या हेमोरेजिक क्षेत्रों को लक्षित कर सकती है)
बहि:स्राव प्रवाह साइटोमेट्री कई साइटों से सैम्पलिंग
साइटोजेनेटिक्स अच्छी तरह से संरक्षित सेलुलर आकारिकी
इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी जटिलताओं से मुक्त
पीसीआर, अन्य आणविक तकनीक उच्च नैदानिक सटीकता
जैव रासायनिक विश्लेषण संज्ञाहरण (अचलीकरण के लिए)
इन विट्रो परख, सेल संस्कृति गैर-टर्मिनल प्रक्रिया

तालिका 1: लक्ष्य, सामान्य अनुप्रयोगों, लाभ और ठीक सुई आकांक्षा की सीमा.

FNA किट एक आकांक्षा सुई और सिरिंज का आर्केटाइप
आकांक्षा: सुई भागों:
1. डिस्पोजेबल प्लास्टिक सिरिंज (5 या 10 एमएल) (चित्र 1B) बेवल. सुई शाफ्ट की नोक एक बिंदु बनाने के लिए तिरछा है, तिरछा बेवल जा रहा है। केवल beveled सुइयों percutaneous आकांक्षाओं के लिए उपयुक्त हैं.
3. 22 से 25 गेज (व्यास) की सुई; 0.75, 1.0, 1.5 इंच लंबा, मानक beveled सुई टिप बढ़त के साथ (चित्र 1A) दस्ता. सुई का खोखले ट्यूबलर भाग जिसकी लंबाई द्रव्यमान की गहराई के अनुसार समायोजित की जा सकती है। सुई का गेज इसके बोर के व्यास से मेल खाती है, जो शाफ्ट के अंदर का व्यास है (छोटी सुइयों में उच्च गेज होता है)। बड़ा बोर सुइयों का उपयोग (कम से कम 22 जी) सेलुलरता को बढ़ाने के लिए उपयोगी है, हालांकि यह अत्यधिक iatrogenic रक्त संदूषण का उत्पादन कर सकते हैं.
1. संज्ञाहरण (यदि आवश्यक हो)। FNA के साथ जुड़े दर्द एक शिरापरक पंचर के समान है, तथापि, अच्छी आकांक्षा विषय का अच्छा स्थिरीकरण की आवश्यकता है, छोटे आकार के जानवरों में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है और / चूहे और चूहों FNA के अधीन उचित रूप से निष्क्रिय रोका जाना चाहिए, या, जब आवश्यक हो, बेहोश या प्रकाश सामान्य संज्ञाहरण के तहत किया जाना चाहिए. हब. सिरिंज से जुड़ी सुई का प्लास्टिक भाग; पारदर्शी होना चाहिए aspirated सामग्री के दृश्य के लिए अनुमति देते हैं. FNA के दौरान प्राप्त aspirate सामग्री सुई शाफ्ट में एकत्र किया जाना चाहिए और आकांक्षा बंद कर दिया जब सामग्री हब में प्रवेश देखा जाता है.
FNA स्मीयर बनाने और व्याख्या: सिरिंज भागों:
1. फ्रॉस्टेड एंड ग्लास माइक्रोस्कोप स्लाइड (चित्र 1C) बैरल/सिलेंडर। सिरिंज के खोखले हिस्से. जब तक सिस्टिक घावों या बहाव से निपटने के लिए, सामग्री है कि बैरल के लिए aspirated है आम तौर पर बरामद नहीं किया जा सकता है. FNA साइटोलॉजी के लिए aspirate के आदर्श मात्रा लगभग है 5 $L, aspirate की औसत मात्रा है कि शाफ्ट और सुई के हब में रह रहे हैं के लिए इसी.
2. रोमानोवेस्की प्रकार के दाग (उदा. डिफ़-क्विक, गिमसा) टिप. बैरल का अंत जिससे सुई हब जुड़ा हुआ है।
3. माइक्रोस्कोप (ब्राइट-फील्ड) प्लंजर. सिरिंज का चल भाग जिसमें एक तरफ एक सपाट डिस्क या होंठ होता है और दूसरे छोर पर रबर की मुहर होती है। बैरल में फिट बैठता है और कोशिकाओं, सुई में तरल पदार्थ आकर्षित करने के लिए दबाव प्रदान करता है। एक पूरी तरह से सील प्लंजर है कि अच्छा नकारात्मक दबाव बनाता है एक अच्छा aspirate उपज प्राप्त करने के लिए अनिवार्य है.

तालिका 2: ठीक सुई आकांक्षा के लिए आवश्यक उपकरण और आपूर्ति.

Figure 1
चित्र 1 : उपकरण और ठीक सुई आकांक्षा के लिए परिणाम. () एफएनए के लिए सुई का आदर्श व्यास 22 से 25 ग्राम (बी) एक अच्छा aspirate उपज प्राप्त करने के लिए आदर्श सिरिंज मात्रा 5 से 10 लाख की है। (ग) साफ, शुष्क, तेल कांच स्लाइड से मुक्त पेंसिल और पूर्व लेपित (यदि इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए) के साथ लिखने के लिए ठंढा अंकन क्षेत्र के साथ। (घ) मिम्सा अभिरंजन (काला तीरशीर्ष), वी.एस.जी. सतह प्रोटीन (सफेद तीर शीर्ष) के लिए और संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (ब्लॉक तीर) के साथ देखा गया ट्रिपानोसोम का उदाहरण। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2 : चूहों में बाहरी पुरुष प्रजनन अंगों (टेस्टिस, एपिडिडिमिस, और एपिडिडमधील वसा) की ठीक सुई आकांक्षा (एफएनए) दिखा रहेहैं। (एक) एक बार जानवर सुरक्षित है, पहले इकट्ठे आकांक्षा साधन उठाया जाता है. (बी-सी) लक्ष्य अंग में सुई टिप डालें. (डी) सीरिंज प्लंजर को 1 एमएल से 2 एमएल मार्क पर वापस लेकर चूषण को बार-बार 3-4 बार लागू करें। चूषण लागू करते समय सुई टिप भी लक्ष्य के भीतर आगे और पीछे ले जाया जा सकता है, पर्याप्त सामग्री इकट्ठा करने के लिए. () चूषण रिलीज और उसके बाद ही सुई वापस ले लो. () सिरिंज से सुई निकालें और (जी) प्लंजर को वापस खींच लें। (एच) सुई को फिर से जोड़ना। (मैं) सिरिंज के माध्यम से तेजी से प्लंजर धक्का द्वारा एक गिलास स्लाइड पर सामग्री निष्कासित. splattering से बचने के लिए, सुनिश्चित करें कि सुई की नोक बहुत करीब या यहां तक कि स्लाइड पर आराम करें। ऐस्पायर की बूंद को ठंढा अंकन क्षेत्र के किनारे से लगभग 1 सेमी रखा गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3 : स्मियर तैयारी और धुंधला(ए) अंगूठे और तर्जनी के बीच स्लाइड (फ्रॉस्टेड एरिया) के एक छोर को पकड़ो। (ख) सामग्री की बूंद के ठीक सामने नमूना स्लाइड पर दूसरी स्लाइड (स्प्रेडर) की चिकनी साफ किनारे रखें। () एक पतली फिल्म प्राप्त करने के लिए मध्यम गति से एक बार प्रसार को आगे स्लाइड करें। (घ) स्लाइड को सूखी हवा में जाने दें और स्लाइड के ठंढे किनारे को पेंसिल से लेबल करें। () 5 मिनट के लिए मेथनॉल के साथ पूरा सुखाने तय करने के बाद (एफ) 30 मिनट के लिए 20% Giemsa समाधान के साथ दाग (या 10 मिनट के लिए 10% Giemsa) . पानी के साथ हल्का कुल्ला, पूरी तरह से सूखी, xylene में डुबकी, और एक पानी में घुलनशील बढ़ते एजेंट के साथ घुड़सवार. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्र 4 : से संक्रमित चूहों में बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं के FNA से प्राप्त स्मीयर के माइक्रोफोटोग्राफ टी ब्रूसी. (ए) एक अच्छी गुणवत्ता प्रत्यक्ष धब्बा की सकल उपस्थिति: सामग्री स्लाइड पर व्यक्त किया गया था लगभग 1 सेमी दूर ठंढा किनारे (काला डॉट), स्मीयर और स्लाइड के किनारे से पहले 0.5 सेमी बंद कर दिया (समानांतर लाइनों). (बी) परजीवी (वीएसजी) की सतह प्रोटीन के लिए इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री संक्रमण के दिन 6 दिन बाहरी पुरुष प्रजनन अंगों के एफएनए से प्राप्त स्मीयर के लिए किया गया था। कई परजीवी (तीरसिर) माउस रोगाणु कोशिकाओं (तीर) के साथ admixed पाया गया. DAB हैरिस hematoxylin के साथ counterstained. मूल आवर्धन: 40x (स्केल बार $ 50 डिग्री मी)। (ग) संक्रमण के 21 दिन पर एक peritoneal बहाव के FNA के बाद प्राप्त स्मीयर के Giemsa-स्टेनिंग, कई परजीवी (एरोहेड) मेजबान (माउस) कोशिकाओं के साथ admixed दिखाया, इस मामले में भड़काऊ कोशिकाओं, मैक्रोफेज (तीर) और लिम्फोसाइटों. मूल आवर्धन: 40x (स्केल बार $ 50 डिग्री मी)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्र 5 : खराब गुणवत्ता FNA स्मीयर. (ए) खराब सेलुलर स्मीयर, द्रव्यमान या अंग का कम प्रतिनिधित्व। (बी) बहुत मोटी धब्बा. (ग) बाधित कोशिकाओं, नग्न नाभिकों और डीएनए धारियाँ के साथ कुचल कलाकृति। (घ) कोशिकाओं की परतों का सकल और स्तरित परतें। DAB हैरिस hematoxylin के साथ counterstained. मूल आवर्धन: 20x (स्केल बार $ 100 डिग्री मी)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्र 6 : से संक्रमित चूहों में एपिडिडमधील साइटोलॉजी और ऊतक विज्ञान की तुलना टी ब्रूसी. (ए) एक एफएनए स्मीयर और (बी) के संगत माइक्रोफोटोग्राफ, एक ही आवर्धन (20x मूल आवर्धन, स्केल बार ] 100 उ) पर, परजीवी (वीएसजी) की सतह प्रोटीन के लिए दोनों इम्यूनोस्स। स्मीयर में बड़ी संख्या में परजीवी (एरोहेड) को अच्छी तरह से संरक्षित सेलुलर आकारिकी के साथ दिखाया गया, जो रोगाणु कोशिकाओं की मध्यम संख्या और कुछ शुक्राणुजोआ (तीर) के साथ मिश्रित था। हिस्टोलॉजिकल अनुभाग ने एक अच्छी तरह से संरक्षित ऊतक वास्तुकला दिखाई, जो इंट्रा-लुमिनल शुक्राणुजोआ (तीर) के साथ एपिडिडमल नलिकाओं से बना है, और एपिडिडियल स्ट्रोमा (एरोहेड) का विस्तार करने वाले परजीवी की बड़ी संख्या की उपस्थिति। DAB हैरिस hematoxylin के साथ counterstained. मूल आवर्धन: 20x (स्केल बार $ 100 डिग्री मी)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Discussion

ठीक सुई आकांक्षा (FNA) एक विधि व्यापक रूप से मानव और घरेलू पशुओं में रोग का निदान करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इस तकनीक का मानकीकरण कई वर्षों में1,2किया गया है , जो एक स्पष्ट द्रव्यमान या अंग1,3से कोशिकाओं या तरल पदार्थ के लिए एक छोटी बोर सुई का उपयोग करता है . aspirate तो आम तौर पर एक गिलास स्लाइड पर smeared है और सूक्ष्म अवलोकन के लिए दाग एक निदान प्राप्त करने के लिए, लेकिन तकनीक भी अन्य प्रयोजनों के लिए कोशिकाओं को पुनः प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता4,5,6, 7 , 8 , 9.

प्रक्रिया त्वरित है (lt;5 मिनट प्रति माउस, एक अनुभवी शोधकर्ता के लिए) और जटिलताओं का खतरा कम है, जब सरल शिरापरक पंचर के दौर से गुजर जोखिम के समान. इस कारण से, स्पष्ट जनता के FNA के लिए, संज्ञाहरण केवल संवेदनशील परमाणु स्थानों के लिए आवश्यक है या जब जानवर का एक अच्छा immobilization और अंग या बड़े पैमाने पर aspirated किया जा करने के लिए स्थिरीकरण इष्टतम परिणामों के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है. यह छोटे प्रयोगशाला जानवरों के लिए अक्सर है, एक हाथ से एक छोटे कृंतक के सुरक्षित और प्रभावी संयम के रूप में, जबकि दूसरे हाथ से आकांक्षा के लिए क्षेत्र के लिए सबसे अच्छा उपयोग सुनिश्चित करने, संज्ञाहरण के बिना प्राप्त करने के लिए मुश्किल है. अल्पकालिक संज्ञाहरण ज्यादातर मामलों में पर्याप्त है, फिर भी आवश्यक, माउस में एक अच्छा FNA के लिए. एक अच्छा स्थिरीकरण घाव के सेलुलर घटकों का प्रतिनिधि है और नकारात्मक दबाव लागू किया जाता है, जबकि सुई की नोक externalizing की संभावना को कम करता है कि एक aspirate प्राप्त करने की संभावना को अधिकतम करता है।

हालांकि प्रक्रिया ही बहुत सरल है, समन्वित आवेदन और निर्वात की रिहाई सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं. सुई की प्रविष्टि के बाद, सिरिंज का प्लंजर एक नियंत्रित वैक्यूम (सक्शन) को प्राप्त करने के लिए वापस ले लिया जाता है, और सुई को केवल प्लंजर के जाने देकर नकारात्मक दबाव को छोड़ने के बाद द्रव्यमान से हटाया जा सकता है (चित्र 2; अन्यथा aspirate सिरिंज की बैरल में चूसा है और फिर ठीक करने के लिए बहुत मुश्किल है. एक और बहुत ही महत्वपूर्ण कदम उच्च गुणवत्ता वाले स्मीयर की तैयारी है। एक धब्बा बनाने के लिए विभिन्न तरीके हैं, लेकिन विधि की परवाह किए बिना, सामग्री को कांच पर रखा गया है के तुरंत बाद स्मीयर तैयार किया जाना चाहिए। कोशिका-क्रश कलाकृतियों से बचने के लिए जैविक सामग्री को धीरे से फैलाया जाना चाहिए। स्प्रेडर के रूप में एक कवरस्लिप का उपयोग इन कलाकृतियों को रोकने में मदद कर सकता है। हालांकि, स्मीयर बनाते समय बहुत अधिक बल का उपयोग कवरस्लिप को तोड़ देगा। एक अच्छी गुणवत्ता स्मीयर आम तौर पर सेल आबादी के सबसे मोनोलेयर के रूप में वितरित किया है ताकि वे आसानी से प्रकाश संचारित कर सकते हैं. सेलुलर सामग्री को रक्त के थक्के में जरूरत से ज्यादा नहीं फंसना चाहिए।

एक FNA का लक्ष्य एक बड़े पैमाने पर, ऊतक या अंग से कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए है. बड़ा बोर सुइयों का उपयोग सेलुलरता बढ़ाने के लिए उपयोगी है, लेकिन अत्यधिक रक्त संदूषण के साथ जुड़ा हो सकता है, जबकि छोटी सुइयों के साथ नमूना उच्च गुणवत्ता पैदावार, हालांकि कम प्रचुर मात्रा में सामग्री. हमारे मामले में, चूहों में बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं की percutaneous आकांक्षा टी bruceiसे संक्रमित प्रयोगात्मक, 22 गेज सुइयों के साथ एक 5 एमएल सिरिंज के साथ किया गया था. चूहे एनेस्थेटाइज किए गए थे, वृषण एक हाथ और पंचर और आकांक्षा निर्देशित और दूसरे हाथ से प्रदर्शन के साथ स्थिर हो गया था। हमने रोगाणु कोशिकाओं, शुक्राणुओं, उपकला कोशिकाओं और स्ट्रोमल कोशिकाओं के साथ एडिकेंड किए गए कई ट्रिपेनोसोम प्राप्त किए, जिन्हें परजीवी की सतह प्रोटीन (वीएसजी) (चित्र4) के लिए स्मीयर और प्रतिरक्षा युक्त किया गया था।

वहाँ हमेशा aspirates नकारात्मक परिणाम उपज में संभावित नमूना त्रुटि है क्योंकि हालांकि एक दिया घाव के कई क्षेत्रों में कई बार नमूना किया जा सकता है, यह एक अंधा आकांक्षा है जहां हम सुई टिप और लक्ष्य अंग या बड़े पैमाने पर कल्पना नहीं है. यह एक नैदानिक सेटिंग में अत्यंत प्रासंगिक है, जहां एक संदिग्ध घाव के एक नकारात्मक FNA आगे की जांच को दूर नहीं करता है, लेकिन यह रोग के पशु मॉडल में इतना प्रासंगिक नहीं है। इस प्रकार, सामान्य सीमाओं में मुख्य रूप से गलत नकारात्मक परिणाम शामिल हैं, और कम बार झूठी सकारात्मक परिणाम (जैसे, रक्त संदूषण से), लेकिन पशु प्रयोग की स्थापना में सबसे महत्वपूर्ण सीमा ऊतक पर जानकारी की कमी है वास्तुकला17,जैसे हम हिस्टोपैथोलॉजी के साथ है, जैसे परजीवी के वितरण पैटर्न, प्रतिरक्षा कोशिकाओं की, और सेल सेल बातचीत सुविधाओं. फिर भी, लाभ कर रहे हैं कि FNA एक गैर-टर्मिनल समय पर एक ही जानवर में दोहराया नमूने के लिए अनुमति देने की प्रक्रिया है और हमेशा बेहतर संरक्षित सेलुलर आकारिकी के लिए अनुमति देता है (चित्र 5). मेजबान कोशिकाओं की कटाई के लिए FNA के लिए विकल्प, एक माउस से प्रतिरक्षा कोशिकाओं या सूक्ष्मजीवों हमेशा बड़े पैमाने पर या ब्याज के अंगों को इकट्ठा करने के लिए माउस euthanizing पर भरोसा करते हैं.

हमारे ज्ञान के लिए, वहाँ केवल छोटे प्रयोगशाला जानवरों में FNA के उपयोग पर कुछ रिपोर्ट कर रहे हैं, 1949 से एक हेमेटोपोइसिस का अध्ययन करने के लिए 22 जी सुई के साथ अस्थि मज्जा की आकांक्षा के लिए इसी18, और प्रवाह साइटोमेट्री के साथ संयोजन में अन्य सभी के लिए या तो ट्यूमर से जुड़े भड़काऊ कोशिकाओं या endothelial कोशिकाओं7,19,20मात्रा में . हमारे काम से पता चलता है कि इस तकनीक के निदान और संक्रामक रोग मॉडल के अध्ययन के लिए बढ़ाया जा सकता है और इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी जैसी तकनीकों के साथ साइटोलॉजी गठबंधन कर सकते हैं. प्रयोगात्मक पशुओं में विधि के प्रमुख लाभों में से दो हैं: (1) यह प्रक्रिया टर्मिनल नहीं है, यानी, लाइव चूहों में किया जा सकता है; और (2) अपनी हल्के गंभीरता के कारण यह एक ही जानवर में धारावाहिक आकांक्षाओं के लिए अनुमति देता है. इसलिए कम चूहों प्रत्येक अध्ययन के लिए आवश्यक हैं, और नैदानिक रोग की प्रगति और सेलुलर और एक रोग के आणविक सुविधाओं के विकास के बीच संबंध और /

शायद एक संक्रामक रोगों के निदान के लिए FNA के उपयोग पर पहली रिपोर्ट Grieg और ग्रे द्वारा 1904 में एक अध्ययन है कि नींद की बीमारी के साथ रोगियों से लिम्फ नोड्स की सुई आकांक्षाओं की रिपोर्ट है, जो गतिशील trypanosomes12से पता चला . यदि प्रयोगशाला चूहों में हमारे निष्कर्ष पशुओं के लिए अनुवाद मिल जाए, यानी, कि अगर Trypanosoma आसानी से बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं से FNA द्वारा नमूना किया जा सकता है, एक उम्मीद कर सकते हैं कि इस तकनीक पशु के निदान के लिए पशु चिकित्सकों के लिए उपयोगी हो जाएगा ट्राइपैनोसोमासिस इन-फार्म, पशुधन में।

Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस परियोजना के Fundos के माध्यम से Funda$o पैरा एक Cicncia ई एक Tecnologia (FCT) / Ministerrio दा Ci$ncia, Tecnologia ई Ensino सुपीरियर (MCTES) Fundos के माध्यम से वित्त पोषित किया गया था Oramento de Estado (ref.: ID/BIM/50005/2019). LMF Funda$o पैरा के एक अन्वेषक है एक Ci$ncia ई Tecnologia (IF/01050/2014) और प्रयोगशाला ईआरसी द्वारा वित्त पोषित है (FatTryp, ref.771714). इस कार्य का प्रकाशन भी UID/BIM/50005/2019 परियोजना Funda$o पैरा एक Ci$ncia ई एक Tecnologia (FCT) / Minist-rio दा Ci$ncia, Tecnologia ई Ensino सुपीरियर (MCTES) के माध्यम से Fundos do Oramento de Estado द्वारा वित्त पोषित परियोजना वित्त पोषित किया गया था. हम संक्रमित चूहों से ऊतकों को साझा करने के लिए विशेषज्ञ इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सहायता के लिए आई एमएम की ऊतक विज्ञान और तुलनात्मक पैथोलॉजी प्रयोगशाला से आंद्रेई पिंटो को धन्यवाद देते हैं, और सैंड्रा ट्रिंडेड, तियागो रेमिलो और हेनरिक मैकाडो (आईएमएम)।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Atipamezole (ANTISEDAN 10 mL) Bio 2 7418046 Anesthesia reversal
Cover slips (24 x 60 No.1) VWR 631-0664 Smear making
DAB Dako K3468 Immunocytochemistry
Entellan (500 mL) VWR 1.07961.0500 Mounting media
Envision Flex antibody diluent Dako 8006 Immunocytochemistry
EnVision Flex conjugated w/ HRP (anti-rabbit) Dako K4010 Immunocytochemistry
Envision Flex Wash Buffer Dako K8007 Immunocytochemistry
Giemsa stain Atom Scientific Ltd RRSPSS-A Smear staining
Glass slides (Superfrost Plus) VWR 631-9483 Smear making
Harris Haematoxylin Bio-optica 05-06004E Immunocytochemistry
Hydrogen Peroxidase solution Sigma H1009-500ML Immunocytochemistry
Hypodermic needles Microlance 3 (23 G) Henry Schein 902-8001 Aspiration technique
Ketamin (IMALGENE 1,000-10 mL) Bio 2 7410928 Anesthesia
Medetomidine (DOMITOR 10 mL) Bio 2 7418335 Anesthesia
Methanol Merck 1.06009.2511 Smear fixative
Pap pen Merck Z377821-1EA Immunocytochemistry
Protein Block Serum free Dako X0909 Immunocytochemistry
Syringes (5 mL, 10 mL) Henry Schein 900-3311, 900-3304 Aspiration technique

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References

  1. Leopold, G., Koss, M. R. M. Koss’ Diagnostic cytology and it’s histologic bases. Lippincott Williams and Wilkins. (2006).
  2. Raskin, R. E., Meyer, D. J. Canine and Feline Cytology: a Color Atlas and Interpretation Guide. Canine and Feline Cytology. (2016).
  3. Hopper, K. D., Abendroth, C. S., Sturtz, K. W., Matthews, Y. L., Shirk, S. J. Fine-needle aspiration biopsy for cytopathologic analysis: Utility of syringe handles, automated guns, and the nonsuction method. Radiology. 185, (3), 819-824 (1992).
  4. Saliba, A. E., et al. Microfluidic sorting and multimodal typing of cancer cells in self-assembled magnetic arrays. Proceedings of the National Academy of Sciences, U.S.A. 107, (33), 14524-14529 (2010).
  5. Guzera, M., Cian, F., Leo, C., Winnicka, A., Archer, J. The use of flow cytometry for immunophenotyping lymphoproliferative disorders in cats: a retrospective study of 19 cases. Veterinary and Comparative Oncology. 14, 40-51 (2016).
  6. Young, N. A., Al-Saleem, T. I., Ehya, H., Smith, M. R. Utilization of fine-needle aspiration cytology and flow cytometry in the diagnosis and subclassification of primary and recurrent lymphoma. Cancer. 40, (4), 307-319 (1998).
  7. Carroll, C. S. E., Altin, J. G., Neeman, T., Fahrer, A. M. Repeated fine-needle aspiration of solid tumours in mice allows the identification of multiple infiltrating immune cell types. Journal of Immunological Methods. 425, 102-107 (2015).
  8. Araujo, R. W., Paiva, V., Gartner, F., Amendoeira, I., Martinez Oliveira, J., Schmitt, F. C. Fine needle aspiration as a tool to establish primary human breast cancer cultures in vitro. Acta Cytologica. 43, (6), 985-990 (1999).
  9. Craft, I., et al. Percutaneous epididymal sperm aspiration and intracytoplasmic sperm injection in the management of infertility due to obstructive azoospermia. Fertility and Sterility. 63, (5), 1038-1042 (1995).
  10. Powers, C. N. Diagnosis of infectious diseases: A cytopathologist’s perspective. Clinical Microbiology Reviews. 120, (3), 351-367 (1998).
  11. Diamantis, A., Magiorkinis, E., Koutselini, H. Fine-needle aspiration (FNA) biopsy: Historical aspects. Folia Histochemica et Cytobiologica. 47, (2), 191-197 (2009).
  12. Greig, E. D. W., Gray, A. C. H. Note on the lymphatic glands in sleeping sickness. British Medical Journal. 1, (2265), 1252 (1904).
  13. Robson, J., Ashkar, T. S. Trypanosomiasis in domestic livestock in the Lambwe Valley area and a field evaluation of various diagnostic techniques. Bulletin of the World Health Organization. 47, (6), 727-734 (1972).
  14. Disease, T. African Animal Trypanosomiasis. In Vitro. 1-15 (2009).
  15. Kennedy, P. G. E. Clinical features, diagnosis, and treatment of human African trypanosomiasis (sleeping sickness). Lancet Neurology. 12, (2), 186-194 (2012).
  16. Trindade, S., et al. Trypanosoma brucei parasites occupy and functionally adapt to the adipose tissue in mice. Cell Host and Microbe. 19, (6), 837-848 (2016).
  17. Carvalho, T., Trindade, S., Pimenta, S., Santos, A. B., Rijo-Ferreira, F., Figueiredo, L. M. Trypanosoma bruceitriggers a marked immune response in male reproductive organs. PLoS Neglected Tropical Diseases. 12, (8), 1-15 (2018).
  18. Sundberg, R. D., Hodgson, R. E. Aspiration of bone marrow in laboratory animals. Blood. 4, (5), 557-561 (2013).
  19. Sottnik, J. L., Guth, A. M., Mitchell, L. A., Dow, S. W. Minimally invasive assessment of tumor angiogenesis by fine needle aspiration and flow cytometry. Angiogenesis. 13, (3), 251-258 (2010).
  20. Betka, J., Hovorka, O., Boucek, J., Ulbrich, K., Etrych, T., Rihova, B. Fine needle aspiration biopsy proves increased T-lymphocyte proliferation in tumor and decreased metastatic infiltration after treatment with doxorubicin bound to PHPMA copolymer carrier. Journal of Drug Targeting. 21, (7), 648-661 (2013).
ठीक सुई आकांक्षा द्वारा अतिरिक्त संवहनी <em>Trypanosoma</em> परजीवी की जांच
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Carvalho, T., Santos, A. M., Figueiredo, L. M. Detection of Extravascular Trypanosoma Parasites by Fine Needle Aspiration. J. Vis. Exp. (150), e59798, doi:10.3791/59798 (2019).More

Carvalho, T., Santos, A. M., Figueiredo, L. M. Detection of Extravascular Trypanosoma Parasites by Fine Needle Aspiration. J. Vis. Exp. (150), e59798, doi:10.3791/59798 (2019).

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