Summary
Denne artikkelen representerer en nyttig in vitro-analysen for å evaluere evnen til betinget medium fra tumorceller å tiltrekke makrofager.
Abstract
Tumor forbundet makrofager (TAMs) står for en stor prosentandel av cellene i tumor massen for ulike typer kreft. Glioblastom (GBM), en ondartet hjernesvulst uten kur, har opptil halvparten av tumor massen TAMs. TAMs kan være Pro-tumoral eller anti-tumoral, avhengig av aktivering av spesifikke gener i cellene. Genetiske mutasjoner i tumorer, gjennom regulering cytokin uttrykk, kan påvirke rekruttering av TAMs til tumor mikromiljøet. Her beskriver vi en kvantitativ celle-basert analyse for å vurdere macrophage rekruttering av betinget medium fra tumorceller. Denne analysen bruker den menneskelige macrophage cellelinje MV-4-11 for å studere macrophage attraksjon ved betinget medium fra glioblastom, noe som åpner for høy reproduserbarhet og lav variasjon. Data generert med denne analysen kan bidra til en bedre forståelse av samspillet mellom tumor og tumor mikromiljøet. Lignende analysen kan brukes til å vurdere samspillet mellom tumorceller og andre immunceller, inkludert T-celler og naturlig Killer (NK) celler.
Introduction
Makrofager er immunceller med høy fenotypiske og funksjonell heterogenitet1. De spiller viktige roller i verts forsvaret systemer, reparasjon av vev, utvikling og tumorprogresjon1. TAMs er makrofager i mikromiljøet av solide svulster. Visse TAMs kan fremme tumor vekst gjennom hemme T Cell-mediert cytotoksisk aktivitet, modulerende svulsten mikromiljøet (TME), fremme angiogenese, invasjon og metastasering2,3,4, 5. TAMs er blant de mest tallrike celletyper i TME og høyere antall TAMs generelt samsvarer med verre pasient overlevelse i mange typer solide svulster6. De distinkte genetiske signaturene i tumorcellene påvirker deres evne til å rekruttere makrofager. I GBM, en aggressiv hjernesvulst uten kur, makrofager kan representere opptil halvparten av tumor massen7. Co-forsterkning av epidermal vekstfaktorreseptor (EGFR) og dens avkorting mutant EGFRvIII er ofte observert i GBM, som gir tumor vekst fordeler8. Celler co-uttrykker EGFR og EGFRvIII tiltrekke flere makrofager i forhold til celler som uttrykker EGFR eller EGFRvIII enkeltvis7.
Chemokiner er en familie av små cytokiner som spiller en betydelig rolle i å regulere immunforsvaret iTME. Menneskelige celler uttrykker mer enn 50 cytokiner10. Immun infiltrasjon i svulster er i stor grad realisert ved samspillet mellom cytokiner og cytokin reseptorer11. Hver type immunceller uttrykker distinkte chemokine reseptorer/chemokiner og kan bli rekruttert av celler sekresjon spesifikke chemokiner/chemokine reseptorer12. Kreftceller kan øke uttrykk for visse chemokiner å rekruttere immunceller som TAMs, regulatoriske T celler og myelogen Suppressor celler (MDSCs)6. Blokade av spesifikke chemokine skilles ut av svulster kan være en lovende måte i hemme infiltrasjon av immunceller i tumor massen.
Her beskriver vi en protokoll som tillater in vitro evaluering av tumor-macrophage interaksjon, ved hjelp av betinget Media fra tumorceller som inneholder chemokiner og macrophage cellelinjer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. middels forberedelse
-
Tilberedning av serum-fri stilk cellen medium
- Tin 50x B27-tillegget, den epidermal vekst faktoren (EGF, 20 μg/mL i 10 mM eddiksyre med 0,1% BSA), og Fibroblast vekstfaktor (FGF, 20 μg/mL i 10 mM eddiksyre med 0,1% BSA).
- Tilsett 500 μL av EGF (siste konsentrasjon 20 ng/mL), 500 μL av FGF (siste konsentrasjon 20 ng/mL), 10 mL 50x B27 til 500 mL av Dulbecco ' s modifiserte Eagle medium/næringsstoff blanding F-12 (DMEM/F12) og 5 mL av 100% penicillin/Streptomycin (pen/strep). Vend flasken 4-6 ganger for å blande, Filtrer sterilisere gjennom en 500 mL 0,1 μm filtrerings kopp. Merk flasken og oppbevar ved 4 ° c.
Merk: Mediet er godt å bruke i inntil en måned ved 4 ° c.
- Forbered MV-4-11 kultur medium: tilsett 50 mL av Foster storfe serum (FBS) til 500 mL av Iscove ' s modifisert Dulbecco ' s medium (IMDM). Vend flasken 4-6 ganger for å blande, Filtrer sterilisere gjennom en 500 mL 0,1 μm filtrerings kopp. Merk flasken og oppbevar ved 4 ° c.
Merk: Mediet er godt å bruke i inntil en måned ved 4 ° c. - Forbered tumor celle vedlikehold medium: tilsett 50 mL FBS til 500 mL av Dulbecco ' s modifiserte Eagle medium (DMEM). Vend flasken 4-6 ganger for å blande, Filtrer sterilisere gjennom en 500 mL 0,1 μm filtrerings kopp. Merk flasken og oppbevar ved 4 ° c.
Merk: Mediet er godt å bruke i inntil en måned ved 4 ° c.
2. celle forberedelse
Dag 1:
- Tine tumorceller
- Varm opp tumor celle vedlikehold medium (som beskrevet i trinn 1,3) ved et 37 ° c vannbad i 20 min.
- Ta den frosne U87, U87: EGFR, U87: EGFRvIII og U87: EGFR + EGFRvIII celler fra flytende nitrogen tanken. Tin cellene i vannbadet på 37 ° c i 2 minutter.
FORSIKTIG: Vær forsiktig når du tar cellene fra væske nitrogen tanken. Bruk hansker med termisk beskyttelse og vernebriller etter behov. - Spray vevet kulturen panseret overflaten med 70% etanol og tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær.
- Spray de kryogene hetteglassene inneholder celler og medium flaske med 70% etanol, tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær, og bringe dem inn i vevet kultur panseret.
- Pipette 5 mL av tumor celle vedlikehold medium i en 15 mL sterilt sentrifugerør. Inverter røret som inneholder tumorceller 4-6 ganger for å blande. Pipetter alle cellene til 15 mL sentrifuge røret. Vend sentrifuge røret 4-6 ganger for å blande.
- Sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Vask cellene med 10 mL fosfat bufret saltvann (PBS). Sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Resuspend cellene i 12 mL av tumor celle vedlikehold medium (som beskrevet i trinn 1,3). Pipetter opp og ned 3-5 ganger for å blande. Overfør cellene til en T75 cellekultur kolbe.
- Vokse cellene i en 37 ° c inkubator med 5% CO2. Sett tumor celle vedlikehold medium tilbake til 4 ° c kjøleskap.
Dag 2:
- Kontroller cellene under mikroskopet. Endre mediet om nødvendig. Celler skal vokse i en monolag i kultur.
Dag 3:
- Tine MV-4-11 celler
- Varme opp MV-4-11 kultur medium (som beskrevet i trinn 1,2) ved et vannbad på 37 ° c i 20 minutter.
Merk: MV-4-11 kan endres til primære makrofager eller andre macrophage cellelinjer, avhengig av behovet for den spesifikke studien. - Ta de frosne MV-4-11-cellene fra den flytende nitrogen tanken. Tin cellene i et vannbad på 37 ° c i 2 minutter.
Forsiktig: Vær forsiktig når du tar cellene fra væsken nitrogen tank. Bruk hansker med termisk beskyttelse og vernebriller etter behov. - Spray vevet kulturen panseret overflaten med 70% etanol og tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær.
- Spray de kryogene hetteglassene inneholder celler og medium flaske med 70% etanol, tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær, og bringe dem inn i vevet kultur panseret.
- Pipette 5 mL MV-4-11 kultur medium (som beskrevet i trinn 1,2) til en 15 mL steril sentrifuge slange. Inverter røret som inneholder tumorceller 4-6 ganger for å blande. Pipetter alle cellene til 15 mL sentrifuge røret. Vend sentrifuge røret 4-6 ganger for å blande.
- Sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Vask cellene i 10 mL PBS og sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Resuspend cellene i 12 mL MV-4-11 kultur medium (som beskrevet i trinn 1,2). Pipetter forsiktig opp og ned 3-5 ganger for å blande. Overfør cellene til en T75 cellekultur kolbe.
- Vokse cellene i en 37 ° c inkubator med 5% CO2.
- Varme opp MV-4-11 kultur medium (som beskrevet i trinn 1,2) ved et vannbad på 37 ° c i 20 minutter.
- Splitting tumorceller
- Varm opp serum-fri stilk cellen medium (som beskrevet i trinn 1,1) ved et 37 ° c vannbad i 20 min.
- Spray vevet kulturen panseret overflaten med 70% etanol og tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær. Ta celle avløsning løsningen fra kjøleskapet. Spray mediet og celle avløsning løsning flasker med 70% etanol, tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær og bringe dem inn i vevet kultur panseret.
Merk: Ikke pre-varme accutase celle avløsning løsning. - Overfør tumor celle kulturen fra inkubator inn i vevet kultur panseret. Aspirer mediet, tilsett 2 mL av celle avløsning løsning i flasken.
Merk: Skylling med PBS før du legger til accutase er valgfritt her. - Sett flasken i panseret. Sjekk om tumorceller runde opp hvert minutt. Når tumorceller runde opp, forsiktig Trykk på siden av flasken for å hjelpe cellene løsne fra flasken.
- Pipetter 8 mL serum-fri stilk cellen medium inn i flasken, pipette opp og ned 3 ganger for å blande, og overføre cellene til en 15 mL sterilt sentrifugerør. Sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Vask cellene i 10 mL PBS. Pipetter opp og ned 3-5 ganger for å blande. Sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
Merk: Dette trinnet er valgfritt. - Resuspend cellene i 10 mL serum fri stilk cellen medium (som beskrevet i trinn 1,1). Pipetter opp og ned 3-5 ganger for å blande. Ta 10 μL av cellene og bland med 10 μL av Trypan Blue-løsning. Pipetter 10 μL av blandingen i telle lysbildet, kvantifisere levende celle nummer ved hjelp av en automatisk celle teller.
- Juster celle tettheten til 2,5 x 105 -celler/ml med serum fritt stilk celle medium (som beskrevet i trinn 1,1), og frø 2 ml av cellene i hver brønn av en 6-brønn celle-kultur plate. For hver type celler, frø 3 brønner (tre eksemplarer Sample). På samme tid, forberede 6 brønner med 2 mL serum-fri stilk cellen medium bare (ingen celler).
Merk: Disse prøvene vil bli brukt: 1) som negative kontroller og 2) for å justere betinget medium volum basert på celle tall. - Sett 6-brønn platene i en 37 med 5 –2° c. Tillat cellene å vokse i 24 h.
3. in vitro macrophage Attraction analysen
- Utarbeidelse av conditioned Media
- Varm opp tumor celle vedlikehold medium (som beskrevet i trinn 1,3) ved et 37 ° c vannbad i 20 min.
- Spray vevet kulturen panseret overflaten med 70% etanol og tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær. Ta celle avløsning løsningen fra kjøleskapet. Spray flaskene av mediet og cellen avløsning løsning med 70% etanol, tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær og bringe dem inn i vevet kultur panseret.
- Ta 6-brønn platene ut fra inkubator. Du bør forsiktig Pipetter de med følgende mediene til 15 mL sterile sentrifugerør. Sett rørene på is. Pipetter mediene i "Media Only" godt inn i et separat 15 mL sterilt sentrifugerør.
Merk: Før dette trinnet, sørg for å sjekke under mikroskopet for å se om cellene fester. Hvis ikke kan man bruke belagte plater i trinn 2.4.8 for å tillate bedre vedlegg eller inkludere de flytende cellene i opptellings trinnet. - Tilsett 0,5 mL celle avløsning løsning i hver brønn av 6-brønn plate. Sjekk om tumorceller runde opp hvert minutt. Når tumorcellene runde opp, forsiktig Trykk på siden av platen for å hjelpe cellene løsne.
- Pipetter 2,5 mL av tumor celle vedlikeholds medium inn i brønnen, Pipetter opp og ned 3 ganger for å mikse og overføre cellene til et 15 mL sterilt sentrifugerør. Ta 10 μL av cellene og bland med 10 μL av Trypan Blue-løsning. Pipetter 10 μL av blandingen i telling lysbildet og kvantifisere antall levende celler ved hjelp av en automatisk celle teller.
- Juster volumet på medie mediet i henhold til celle nummer ved hjelp av serum celle mediet (37 ° c inkubasjons over natten). For eksempel, hvis Well A har 3x så mange levende celler som brønnen med minst antall celler, fortynne sin betinget Media 1:3. Dette trinnet brukes til å kontrollere forskjellen forårsaket av celle sprednings hastighet.
Merk: Grunnen til å bruke serum celle medium med 37 ° c inkubasjons over natten er å kontrollere den mulige endringen i mediene med forlenget 37 ° c eksponering. - Filtrer det conditioned Media gjennom 0,45 μm filtre. Sett conditioned Media på isen.
Merk: Dette trinnet fjerner celler og celle rusk i de conditioned Media.
- Utarbeidelse av MV-4-11 celler
- Varm opp IMDM-mediet (uten FBS) ved et vannbad på 37 ° c i 20 minutter.
- Spray vevet kulturen panseret overflaten med 70% etanol og tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær. Spray mediet flaske med 70% etanol, tørk av 70% etanol på overflaten med papirhåndklær og bringe dem inn i vevet kultur panseret.
- Ta flasken med MV-4-11 celler inn i vevet kultur panseret. Pipetter 10 mL celler til en 15 mL steril sentrifuge slange. Ta 10 μL av celler og bland med 10 μL av Trypan Blue-løsning. Pipetter 10 μL av blandingen i telling lysbildet og kvantifisere antall levende celler ved hjelp av en automatisk celle teller. Sentrifuger cellene ved 200 x g for hver kl 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Vask cellene med 10 mL PBS og sentrifuger cellene ved 200 x g i 5 min ved 4 ° c. Aspirer supernatanten.
- Resuspend cellene i IMDM medium (uten FBS) for en endelig celle tetthet på 1x106 celler/ml.
Merk: Celle nummeret til makrofager som brukes her, kan justeres.
- Transwell analysen
Merk: I dette trinnet bruker du et analysesett for celle migrering eller kjøper reagensene og setter dem inn separat. For MV-4-11-celler velger du Transwell innsatser med størrelse på 5 μm pore. Å oppdage macrophage migrasjon, direkte kvantifisere antall makrofager i nedre kammeret eller bruke fargemetrisk/fluorimetric metoder. Her viser vi analysen ved hjelp av fargemetrisk metoden.- Bring 24-brønn plate, innsatsen og reagensene til romtemperatur.
- Tilsett 250 μL av MV-4-11-celler som er klargjort ovenfor i hver innsats.
- Tilsett 400 μL av betinget medium/medium bare (med overnatting inkubasjons ved 37 ° c, disse prøvene tjene som negativ kontroll) til de nedre kamre av 24-brønn plate. For hver tumor linje eller kontroll, bruk tre eksemplarer prøver. Unngå bobler mellom innsatsen og mediet som er betinget. Bubbles vil hemme makrofager fra å migrere til bunnen brønner.
- Ruge platene i en 37 ° c inkubator med 5% CO2 for 4 h.
Merk: Inkubasjonstiden kan justeres. Celler som migrerer til de nedre kamrene kan ses under mikroskopet. - Trykk forsiktig på innsatsen på den indre veggen av den samme brønnen og kast innsatsen. Som MV-4-11 celler vokser i suspensjon, celle avløsning løsning eller Trypsin behandling er ikke nødvendig her.
- Pipette cellene forsiktig i brønnene opp og ned 3 ganger for å blande. Overfør 225 μL av celle oppheng til en 96-brønn med svart vegger som er egnet for fluorescerende målinger.
- Fortynne CyQuant fargestoff 1:75 med 4X lyseringsbuffer. Vortex kort og spinne ned løsningen. Tilsett 75 μL oppløsning på hver brønn av 96-brønn platen. Ruge 15 min ved romtemperatur.
- Les fluorescens med 480/520 NM filter sett med en fluorescens plate leser.
- Analysere data ved å trekke den tomme og normalisere til kontroll tumor cellelinjen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Resultatene er vanligvis viste via bar grafer (eksempel vist i figur 1). Prøver med høye 480/520 verdier tyder på at mediene har høy kapasitet til å rekruttere makrofager. Avhengig av eksperimentell behov, kan flere kontroller inkluderes. For eksempel kan man bruke nøytralisere antistoffer for å behandle de conditioned Media å avskaffe macrophage chemotaxis, og utføre samme analysen. Man kan også legge til ekstra chemokiner (dvs. CCL2) til conditioned Media, som fungerer som en positiv kontroll.
Figur 1: conditioned Media fra U87 celler co-uttrykker EGFR og EGFRvIII tiltrekke flere makrofager enn U87 celler uttrykker en kontroll vektor, eller EGFR/EGFRvIII enkeltvis. Dette tallet er endret fra an, et al.7. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne protokollen er det flere viktige trinn: 1) valg av Transwell innsats. For MV-4-11 cellelinje 5 μm Transwell setter fungerer godt. Men for andre cellelinjer som vanlig brukte monocytt cellelinje THP-1, kan en annen pore størrelse fungere bedre. 2) som forskjellige cellelinjer vokser i forskjellige hastigheter, er det viktig å justere volumet av de conditioned Media i henhold til celle tall. For dette formålet kan celle frie medier som er inkubert under de samme eksperimentelle forholdene, brukes til å fortynne Media. 3) FBS inneholder cytokiner. Det er viktig å bruke serum fritt medium til frø MV-4-11 celler i det øvre kammeret. Hvis FBS brukes her, kan noen ganger celle migrering ikke overholdes.
Forskere kan endre denne analysen for ulike programmer. For eksempel, andre tumorceller, enten primære pasient-avledet xenograft kultur, eller muse celler kan erstatte hjernetumor cellelinje som brukes i ovennevnte eksempel. Den macrophage cellelinjen kan erstattes av primære makrofager eller monocytter fra pasienter eller mus avhengig av det spesifikke behovet. Et viktig poeng er at forskerne må velge celler fra samme art for å sikre best resultat. Selv om den macrophage chemotaxis veien er svært bevart, kan variasjonen av protein sekvens av struktur mellom ulike arter legge til lag av komplikasjoner for å tolke eksperimentelle resultater.
TAMs tiltrekker stadig mer oppmerksomhet i kreft immunologi13,14. Hvordan ulike genetiske endringer i svulster påvirker rekruttering av TAMs og andre immunceller i tumor mikromiljøet fortsatt venter videre studier. Ved å endre pore størrelser av Transwell inserts, denne analysen kan brukes til å studere samspillet mellom tumor og andre immunceller som T-celler og NK celler. En fordel med å bruke Transwell analysen for å evaluere tumor-immune interaksjon er at det er lett å demonstrere hvordan spesifikke oncogenes/mutasjoner påvirker rekruttering av en bestemt type immunceller. Videre er denne analysen lett å skalere opp for Genova-brede skjermer. Denne analysen åpner opp flere muligheter for forskere å studere tumor-immune celle interaksjoner. I tillegg kan denne analysen brukes til å studere hvordan betinget Media fra tumorceller påvirke transkripsjon profilen til makrofager/andre immunceller.
Alle analysene har sine begrensninger. For denne analysen, er betinget medium fra tumorceller kultivert in vitro. De skilles ut chemokiner her kan være forskjellig fra de skilles ut av svulster vokst i vivo. I tillegg er macrophage cellelinje forskjellig fra tumor infiltrere makrofager, som er mer phenotypically og transcriptionally mangfoldig. Det er derfor nødvendig med ytterligere bekreftelse på in vitro-funnene ved bruk av andre in vitro-og in vivo-metoder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
William A. Weiss er en av grunnleggerne av StemSynergy legemiddel selskap. Zhenyi an har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Grant Support: Z. en mottatt støtte fra Alex ' s lemonade stand Foundation, American Brain tumor Association, NIH T32CA108462 og program for gjennombrudd Biomedical Research, som er delvis finansiert av Sandler Foundation. W. Weiss ble støttet av NIH tilskudd R01CA221969, R01NS091620, P50CA097257, U01CA217864, P30CA82103; Samuel G. Waxman Cancer Research Foundation; og Evelyn og Mattie Anderson Chair.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.1 μm filtration cup | Thermo fisher | 566-0010 | |
| 0.45 μm filter unit | Millipore | SLHA033SS | |
| 10 mL serological pipettes | Olympus plastics | 12-104 | |
| 15 mL sterile centrifuge tubes | Olympus plastics | 28-103 | |
| 1 mL pipette tip | ART molecular bioproducts | 2779-RI | |
| 2 mL aspirating pipet | Falcon | 357558 | |
| 24-well plate | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 4x lysis buffer | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 5 μm Transwell insert | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 75 cm2 flask | Corning | 430641U | |
| Accutase | Innovative cell technologies | AT-104 | |
| B27 | Gibco | 12587-010 | |
| CyQuant Dye | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| DMEM:F12 | Gibco | 10565-018 | |
| EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| FBS | Gibco | 26140 | |
| FGF | Peprotech | 100-18B | |
| IMDM | Gibco | 12440-053 | |
| PBS | Gibco | 14190-144 | |
| Pen Strep | Gibco | 15140-122 | |
| Trypan blue | Biorad | 1450021 |
References
- Liu, Y., Cao, X. The origin and function of tumor-associated macrophages. Cellular & Molecular Immunology. 12 (1), 1-4 (2015).
- Riabov, V., et al. Role of tumor associated macrophages in tumor angiogenesis and lymphangiogenesis. Frontiers in Physiology. 5, (2014).
- Coussens, L. M., Zitvogel, L., Palucka, A. K. Neutralizing tumor-promoting chronic inflammation: a magic bullet. Science. 339 (6117), 286-291 (2013).
- Tsukamoto, H., et al. Combined Blockade of IL6 and PD-1/PD-L1 Signaling Abrogates Mutual Regulation of Their Immunosuppressive Effects in the Tumor Microenvironment. Cancer Research. 78 (17), 5011-5022 (2018).
- Borgoni, S., et al. Depletion of tumor-associated macrophages switches the epigenetic profile of pancreatic cancer infiltrating T cells and restores their anti-tumor phenotype. Oncoimmunology. 7 (2), e1393596 (2018).
- Argyle, D., Kitamura, T. Targeting Macrophage-Recruiting Chemokines as a Novel Therapeutic Strategy to Prevent the Progression of Solid Tumors. Frontiers in Immunology. 9, 2629 (2018).
- An, Z., et al. EGFR cooperates with EGFRvIII to recruit macrophages in glioblastoma. Cancer Research. , (2018).
- Fan, Q. W., et al. EGFR phosphorylates tumor-derived EGFRvIII driving STAT3/5 and progression in glioblastoma. Cancer Cell. 24 (4), 438-449 (2013).
- Jacquelot, N., Duong, C. P. M., Belz, G. T., Zitvogel, L. Targeting Chemokines and Chemokine Receptors in Melanoma and Other Cancers. Frontiers in Immunology. 9, 2480 (2018).
- Arimont, M., et al. Structural Analysis of Chemokine Receptor-Ligand Interactions. Journal of Medicinal Chemistry. 60 (12), 4735-4779 (2017).
- Turner, M. D., Nedjai, B., Hurst, T., Pennington, D. J. Cytokines and chemokines: At the crossroads of cell signalling and inflammatory disease. Biochimica et Biophysica Acta. 1843 (11), 2563-2582 (2014).
- Sokol, C. L., Luster, A. D. The chemokine system in innate immunity. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (5), (2015).
- Pathria, P., Louis, T. L., Varner, J. A. Targeting Tumor-Associated Macrophages in Cancer. Trends in Immunology. 40 (4), 310-327 (2019).
- Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology. Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (7), 399-416 (2017).
