Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

В vitro Анализ для изучения опухоли макрофаг взаимодействия

Published: August 1, 2019 doi: 10.3791/59907
Automatic Translation
1, 1,2,3
1Department of Neurology, University of California, San Francisco, 2Helen Diller Family Comprehensive Cancer Center, University of California, San Francisco, 3Departments of Pediatrics and Neurological Surgery, University of California, San Francisco

Summary

Эта статья представляет собой полезный анализ in vitro для оценки способности условной среды из опухолевых клеток для привлечения макрофагов.

Abstract

Опухолевые макрофаги (TAMs) составляют большой процент клеток в опухолевой массе для различных видов рака. Глиобластома (ГБМ), злокачественная опухоль головного мозга без лечения, имеет до половины опухолевой массы TAMs. TAMs может быть проопухолевым или противоопухолевым, в зависимости от активации конкретных генов в клетках. Генетические мутации в опухолях, путем регулирования экспрессии цитокинов, могут повлиять на набор TAMs в микросреду опухоли. Здесь мы описываем количественный анализ на основе клеток для оценки набора макрофагов условным средством из опухолевых клеток. Этот анализ использует человеческую линию макрофагов MV-4-11 для изучения притяжения макрофагов условной средой от глиобластомы, что позволяет к высокой воспроизводимости и низкой изменчивости. Данные, генерируемые с помощью этого анализа, могут способствовать лучшему пониманию взаимодействия между опухолью и микроокружением опухоли. Подобный ассс может быть использован для оценки взаимодействия между опухолевыми клетками и другими иммунными клетками, включая Т-клетки и естественные клетки-убийцы (НК).

Introduction

Макрофаги являются иммунными клетками с высокой фенотипической и функциональной неоднородностью1. Они играют важную роль в системах защиты хозяина, ремонт тканей, развитие и прогрессирование опухоли1. TAMs являются макрофагами в микросреде твердых опухолей. Некоторые TAMs может способствовать росту опухоли путем ингибирования Т-клеточной цитотоксичной активности, модулируя микросреду опухоли (TME), способствуя ангиогенез, вторжение и метастазы2,3,4, 5. TAMs являются одними из наиболее распространенных типов клеток в TME и большее количество TAMs обычно коррелирует с хуже выживания пациента во многих типах твердых опухолей6. Различные генетические подписи опухолевых клеток влияют на их способность набирать макрофаги. В GBM, агрессивная опухоль мозга без лечения, макрофаги могут представлять до половины массы опухоли7. Совместное усиление рецептора эпидермального фактора роста(EGFR)и его усечения мутанта EGFRvIII часто наблюдается в ГБМ, что дает преимущества роста опухоли8. Клетки, совместно выражающие EGFR и EGFRvIII, привлекают больше макрофагов посравнению с клетками, выражающими EGFR или EGFRvIII singly 7.

Chemokines представляют собой семейство небольших цитокинов, которые играют значительную роль в регулировании иммунного состава в TME6,9. Клетки человека выражают более 50 цитокинов10. Иммунная инфильтрация в опухолях в значительной степени реализуется путем взаимодействия между цитокинов и цитокиновых рецепторов11. Каждый тип иммунных клеток выражает различные рецепторы хемокина /хемокины и могут быть завербованы клетками, выделяющими специфические хемокины/хемокиновых рецепторы12. Раковые клетки могут увеличить экспрессию некоторых хемокины для вербовки иммунных клеток, таких какTAMs, регулятивные Т-клетки и миелоидные супрессорные клетки (MDSCs) 6. Блокада специфического хемокина, выделяемого опухолями, может быть многообещающим способом ингибирования проникновения иммунных клеток в опухольную массу.

Здесь мы описываем протокол, который позволяет в пробирке оценки взаимодействия опухолево-макрофагов, используя условные средства из опухолевых клеток, содержащих хемокины и макрофаг клеточные линии.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Средняя подготовка

  1. Приготовление среды стволовых клеток, свободных от сыворотки,
    1. Оттепель 50x B27 дополнения, эпидермальный фактор роста (EGF, 20 мкг/мл в 10 мм уксусной кислоты с 0,1% BSA), и фактор роста фибробластов (FGF, 20 мкг/мл в 10 мм уксусной кислоты с 0,1% BSA).
    2. Добавьте 500 л EGF (окончательная концентрация 20 нг/мл), 500 л FGF (окончательная концентрация 20 нг/мл), 10 мл 50x B27 до 500 мл л. модифицированной орла Dulbecco Средний /Питательный Mixture F-12 (DMEM/F12) и 5 мл 100x пенициллина/стрептомицина (Pen/Strep). Перевернуть бутылку 4-6 раз, чтобы перемешать, фильтр стерилизовать через 500 мл 0,1 мкм фильтрации чашки. Отметьте бутылку и храните при 4 градусах Цельсия.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Среда хороша для использования в течение месяца при 4 градусах Цельсия.
  2. Подготовка MV-4-11 культуры среды: Добавить 50 мл сыворотки крупного рогатого скота плода (FBS) до 500 мл Исковва модифицированных Dulbecco в среднем (IMDM). Перевернуть бутылку 4-6 раз, чтобы перемешать, фильтр стерилизовать через 500 мл 0,1 мкм фильтрации чашки. Отметьте бутылку и храните при 4 градусах Цельсия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Среда хороша для использования в течение месяца при 4 градусах Цельсия.
  3. Подготовка среды обслуживания опухолевых клеток: Добавить 50 мл FBS до 500 мл модифицированного орла среднего Dulbecco (DMEM). Перевернуть бутылку 4-6 раз, чтобы перемешать, фильтр стерилизовать через 500 мл 0,1 мкм фильтрации чашки. Отметьте бутылку и храните при 4 градусах Цельсия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Среда хороша для использования в течение месяца при 4 градусах Цельсия.

2. Подготовка клеток

День 1:

  1. Таяние опухолевых клеток
  2. Разогрейте среду обслуживания опухолевых клеток (как описано в шаге 1.3) на водяной бане 37 градусов по Цельсию в течение 20 минут.
  3. Возьмем замороженные u87, U87:EGFR, U87:EGFRvIII и U87:EGFR-EGFRvIII из резервуара с жидким азотом. Оттепель клетки на 37 градусов воды в течение 2 минут.
    ВНИМАНИЕ: Будьте осторожны при взятии клеток из резервуара с жидким азотом. Носите перчатки с тепловой защитой и защитными очками по мере необходимости.
  4. Спрей ткани культуры капота поверхности с 70% этанола и стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами.
  5. Спрей криогенные флаконы, содержащие клетки и средняя бутылка с 70% этанола, стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами, и принести их в ткани культуры капот.
  6. Pipette 5 mL поддержания опухолевых клеток среднего в 15 мл стерильной центрифуги трубки. Перевернуть трубку, содержащую опухолевые клетки 4-6 раз, чтобы смешать. Пипетка все клетки в 15 мл центрифуги трубки. Перевернуть центрифугу трубки 4-6 раз, чтобы перемешать.
  7. Центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 мин при 4 кв. C. Аспирируй супернатанта.
  8. Вымойте клетки 10 мл фосфатного буферного солья (PBS). Центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 мин при 4 кв. C. Аспирируй супернатанта.
  9. Resuspend клетки в 12 мл среднего обслуживания опухолевых клеток (как описано в шаге 1.3). Пипетка вверх и вниз 3-5 раз, чтобы смешать. Перенесите клетки в колбу культуры Т75.
  10. Выращивайте клетки в инкубаторе 37 градусов с 5% CO2. Положите средний уровень обслуживания опухолевых клеток обратно в холодильник 4 градусов по Цельсию.

День 2:

  1. Проверьте клетки под микроскопом. При необходимости измените среду. Клетки должны расти в монослой в культуре.

День 3:

  1. Таяние MV-4-11 клеток
    1. Разогрейте культурную среду MV-4-11 (как описано в шаге 1.2) на водяной бане 37 градусов по Цельсию в течение 20 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: MV-4-11 может быть изменен на первичные макрофаги или другие линии клеток макрофагов, в зависимости от необходимости конкретного исследования.
    2. Возьмите замороженные MV-4-11 клетки из резервуара с жидким азотом. Оттепель клетки на водяной бане 37 градусов в течение 2 мин.
      ПРЕДЕКТО: Будьте осторожны при взятии клеток из резервуара с жидким азотом. Носите перчатки с тепловой защитой и защитными очками по мере необходимости.
    3. Спрей ткани культуры капота поверхности с 70% этанола и стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами.
    4. Спрей криогенные флаконы, содержащие клетки и средняя бутылка с 70% этанола, стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами, и принести их в ткани культуры капот.
    5. Пипетка 5 мл культуры MV-4-11 (как описано в шаге 1.2) в стерильной центрифуге 15 мл. Перевернуть трубку, содержащую опухолевые клетки 4-6 раз, чтобы смешать. Пипетка все клетки в 15 мл центрифуги трубки. Перевернуть центрифугу трубки 4-6 раз, чтобы перемешать.
    6. Центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 мин при 4 кв. C. Аспирируй супернатанта.
    7. Вымойте клетки в 10 мл PBS и центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 минут при 4 c. Аспирируй супернатанта.
    8. Повторное действие клеток в 12 мл культуры MV-4-11 среды (как описано в шаге 1.2). Аккуратно пипетка вверх и вниз 3-5 раз, чтобы смешать. Перенесите клетки в колбу культуры Т75.
    9. Выращивайте клетки в инкубаторе 37 градусов с 5% CO2.
  2. Разделение опухолевых клеток
    1. Разогрейте среду стволовых клеток, свободных от сыворотки (как описано в шаге 1.1) на водяной бане 37 градусов по Цельсию в течение 20 минут.
    2. Спрей ткани культуры капота поверхности с 70% этанола и стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами. Возьмите раствор отслоения клетки из холодильника. Спрей среднего и клеточного отслоения раствор бутылки с 70% этанола, стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами и принести их в ткани культуры капот.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не разогревайте раствор аккутазы.
    3. Перенос культуры опухолевых клеток из инкубатора в капюшон культуры тканей. Прибавьте среду, добавьте 2 мл раствора отслоения клеток в колбу.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Промыть pbS перед добавлением аккутазы является необязательным здесь.
    4. Установите колбу в капюшоне. Проверьте, каждую минуту опухолевые клетки округляются. Как только опухолевые клетки округляются, осторожно коснитесь стороны колбы, чтобы помочь клеткам отделиться от колбы.
    5. Пипетка 8 мл сыворотки свободной стволовых клеток среды в колбу, пипетка вверх и вниз 3 раза, чтобы смешать, и передать клетки в 15 мл стерильной центрифуги трубки. Центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 мин при 4 кв. C. Аспирируй супернатанта.
    6. Вымойте клетки в 10 мл PBS. Пипетка вверх и вниз 3-5 раз, чтобы смешать. Центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 мин при 4 кв. C. Аспирируй супернатанта.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг не является обязательным.
    7. Приостанавливайте действие клеток в 10 мл среды стволовых клеток, свободных от сыворотки (как описано в шаге 1.1). Пипетка вверх и вниз 3-5 раз, чтобы смешать. Возьмите 10 л клеток и смешайте с 10 злитровых раствора Trypan Blue. Пипетка 10 л смеси в счетслайд, количественно живой номер ячейки с помощью автоматического счетчика клеток.
    8. Отрегулируйте плотность клеток до 2,5 х 105 клеток/мл со средой стволовых клеток, свободных от сыворотки (как описано в шаге 1.1), и семенами 2 мл клеток в каждую скважину 6-хорошей пластины клеточной культуры. Для каждого типа клеток, семян 3 скважины (тройной образец). В то же время, подготовить 6 скважин с 2 мл сыворотки свободной стволовых клеток среды только (без клеток).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эти образцы будут использоваться: 1) в качестве отрицательного контроля и 2) для регулировки условного среднего объема на основе номеров клеток.
    9. Положите 6-колодец пластин в инкубатор 37 градусов с 5% CO2. Разрешить клетки расти в течение 24 ч.

3. В пробирке Макрофаг Привлечение Анализ

  1. Подготовка условных носителей
    1. Разогрейте среду обслуживания опухолевых клеток (как описано в шаге 1.3) на водяной бане 37 градусов по Цельсию в течение 20 минут.
    2. Спрей ткани культуры капота поверхности с 70% этанола и стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами. Возьмите раствор отслоения клетки из холодильника. Спрей бутылки среды и раствор отслоения клеток с 70% этанола, стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами и принести их в ткани культуры капот.
    3. Вынизвините из инкубатора 6-колодливые пластины. Тщательно пипетка кондиционированных носителей в 15 мл стерильных центрифуг труб. Поставьте трубки на лед. Pipette средств в «средствах только» наилучшим образом в отдельно пробку центрифуги 15 mL стерильной.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Перед этим шагом, убедитесь, что проверить под микроскопом, чтобы увидеть, если клетки прикрепляются. Если нет, можно использовать покрытые пластины на шаг 2.4.8, чтобы лучше вложения или включить плавающие ячейки в шаге подсчета.
    4. Добавьте 0,5 мл раствора отслоения клеток в каждую скважину 6-колодца. Проверьте, каждую минуту опухолевые клетки округляются. После того, как опухолевые клетки округлить вверх, осторожно нажмите сторону пластины, чтобы помочь клеткам отделиться.
    5. Пипетка 2,5 мл поддержания опухолевых клеток среднего в колодец, пипетка вверх и вниз 3 раза, чтобы смешать и передать клетки в 15 мл стерильной центрифуги трубки. Возьмите 10 л клеток и смешайте с 10 злитровых раствора Trypan Blue. Пипетка 10 л смеси в счетслайд и количественно количество живых клеток с помощью автоматического счетчика клеток.
    6. Отрегулируйте громкость условных носителей в соответствии с номером клетки с помощью среды стволовых клеток, свободной от сыворотки (37 градусов по Цельсию на ночь). Например, если Well A имеет в 3 раза больше живых клеток, а также скважину с наименьшим количеством клеток, разбавьте его условные носители 1:3. Этот шаг используется для контроля разницы, вызванной скоростью пролиферации клеток.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Причина использовать сыворотку свободной среде стволовых клеток с 37 КК инкубации в одночасье заключается в том, чтобы контролировать возможные изменения в средствах массовой информации с длительным 37 кС воздействия.
    7. Фильтр условных носителей через 0,45 мкм фильтры. Положите условные носители на льду.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг удаляет клетки и мусор клеток в условных носителях.
  2. Приготовление клеток MV-4-11
    1. Разогрейте среду IMDM (без FBS) на водяной бане 37 градусов по Цельсию в течение 20 минут.
    2. Спрей ткани культуры капота поверхности с 70% этанола и стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами. Спрей средней бутылки с 70% этанола, стереть 70% этанола на поверхности с бумажными полотенцами и принести их в ткани культуры капот.
    3. Возьмите колбу MV-4-11 клеток в капюшон культуры ткани. Пипетка 10 мл клеток в стерильной центрифуге 15 мл. Возьмите 10 л клеток и смешайте с 10 злитровым раствором Trypan Blue. Пипетка 10 л смеси в счетслайд и количественно количество живых клеток с помощью автоматического счетчика клеток. Центрифуги клетки на 200 х г в течение 5 мин при 4 c. Аспирируй супернатанта.
    4. Вымойте клетки с 10 мл PBS и центрифуга клетки на 200 х г в течение 5 минут при 4 c. Аспирируй супернатанта.
    5. Приостанавливайте действие клеток в среде IMDM (без FBS) для конечной плотности клеток 1x106 ячеек/мл.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Количество клеток макрофагов, используемых здесь, может быть скорректировано.
  3. Трансуэлл ассе
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для этого шага используйте набор асссов для проведения исследований миграции клеток или купите реагенты и вставьте отдельно. Для ячеек MV-4-11 выберите вставки Transwell с размером поры 5 мкм. Чтобы обнаружить миграцию макрофагов, непосредственно количественно количество макрофагов в нижней камере или использовать колористетриметрические /фторметрические методы. Здесь мы демонстрируем анализ с помощью колориметрического метода.
    1. Доведите 24-колоднюю пластину, вставку и реагенты до комнатной температуры.
    2. Добавьте 250 кЛ ячеек MV-4-11, подготовленных выше, в каждую вставку.
    3. Добавьте 400 кл кв.м. кондиционированной средней/средней только (с ночной инкубации при 37 градусах Цельсия, эти образцы служат отрицательным контролем) в нижние камеры 24-хорошей пластины. Для каждой линии опухоли или контроля, используйте тройные образцы. Избегайте пузырьков между вставкой и кондиционированной средой. Пузыри будут препятствовать макрофагам от миграции в нижние колодцы.
    4. Инкубировать пластины в инкубаторе 37 градусов с 5% CO2 на 4 ч.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Время инкубации можно скорректировать. Клетки, мигрирующие в нижние камеры, можно увидеть под микроскопом.
    5. Аккуратно коснитесь вставки на внутренней стене того же колодца и отбросьте вставку. Поскольку клетки MV-4-11 растут в суспензии, раствор отслоения клеток или лечение трипсина здесь не требуется.
    6. Аккуратно пипетка клетки в колодцах вверх и вниз 3 раза, чтобы смешать. Передача 225 л клеточной подвески на черностенную 96-хорошую пластину, подходящую для флуоресцентных измерений.
    7. Разбавить краситель Cyquant 1:75 с 4x лисис буфера. Vortex кратко и спина вниз решение. Добавьте 75 л раствора к каждой скважине из 96-хорошо пластины. Инкубировать 15 мин при комнатной температуре.
    8. Читайте флуоресценцию, используя фильтр 480/520 нм с флуоресценцией.
    9. Проанализируйте данные, вычитая пробел и нормализации в линии контрольной опухолевой клетки.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Результаты обычно показываются с помощью графиков баров (пример показано на рисунке 1). Образцы с высокими значениями 480/520 показывают, что условные носители обладает высокой емкостью для набора макрофагов. В зависимости от экспериментальной потребности могут быть включены дополнительные элементы управления. Например, можно использовать нейтрализующие антитела для лечения условных носителей, чтобы отменить макрофаг химиотаксис, и выполнить тот же анализ. Можно также добавить дополнительные хемокины (т.е. CCL2) в условные носители, которые служат положительным контролем.

Figure 1
Рисунок 1: Условные носители из u87 клеток, совместно выражающих EGFR и EGFRvIII, привлекают больше макрофагов, чем клетки U87, выражающие вектор контроля, или EGFR/EGFRvIII по-разному. Эта цифра была изменена с An, и др.7. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В этом протоколе есть несколько ключевых шагов: 1) выбор вставки Transwell. Для MV-4-11 клеточной линии, 5 мкм Transwell вставки хорошо работать. Однако, для других клеточных линий, таких как широко используемая линия моноцитов THP-1, другой размер поры может работать лучше. 2) По мере того как по-разному линии клетки растут на по-разному скоростях, важно отрегулировать том обусловленных средств согласно номерам клетки. Для этой цели, безклеточные средства массовой информации инкубируются в тех же экспериментальных условиях могут быть использованы для разбавления условных носителей. 3) FBS содержит цитокины. Важно использовать среду без сыворотки для семян MV-4-11 клеток в верхней камере. Если FBS используется здесь, иногда миграция ячейки не может наблюдаться.

Исследователи могут изменить этот асссдля для различных приложений. Например, другие опухолевые клетки, либо первичные культуры ксенотрансплантата, полученные из основного пациента, или мышиные клетки могут заменить линию опухолевых клеток мозга, используемую в вышеупомянутом примере. Линия макрофагов может быть заменена первичными макрофагами или моноцитами пациентов или мышей в зависимости от конкретной потребности. Одним из важных моментов является то, что исследователи должны выбрать клетки из одного и того же вида, чтобы обеспечить лучший результат. Хотя макрофаг химиотаксис путь очень сохраняется, изменение последовательности белка структуры между различными видами может добавить слои осложнений для интерпретации экспериментальных результатов.

TAMs привлекают все больше внимания в иммунологии рака13,14. Как различные генетические изменения в опухолях влияют на набор TAMs и других иммунных клеток в микроокружении опухоли все еще ожидает дальнейших исследований. Изменяя размеры пор вставок Transwell, этот ассс может быть использован для изучения взаимодействия между опухолью и другими иммунными клетками, такими как Т-клетки и НК-клетки. Одним из преимуществ использования исследования Transwell для оценки опухолево-иммунного взаимодействия является то, что легко продемонстрировать, как специфические онкогены/мутации влияют на набор определенного типа иммунных клеток. Кроме того, этот анализ легко масштабировать для экранов, всех и рисуемых по всему геному. Этот ассеи открывает дополнительные возможности для исследователей для изучения опухолево-иммунных клеточных взаимодействий. Дополнительно, это анализ можно использовать для того чтобы изучить как обусловленные средства от клеток тумора влияют на профиль транскрипции макрофагов/других иммунных клеток.

Все анализы имеют свои ограничения. Для этого анализа, обусловленная среда от опухолевых клеток культивируется в пробирке. Секретные хемокины здесь могут отличаться от тех, которые выделяются опухолями, выращенными в vivo. Кроме того, линия клеток макрофагов отличается от опухоли, проникающей в макрофаги, которые более фенотипически и транскрипционно разнообразны. Поэтому необходимо дальнейшее подтверждение выводов in vitro с использованием других методов in vitro и in vivo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Уильям А. Вайс является соучредителем StemSynergy Therapeutics. Чжэньи Ан не имеет ничего раскрывать.

Acknowledgments

Грантовая поддержка: З. Полученная поддержка от Фонда Лимонада Алекса, Американской ассоциации опухолей головного мозга, NIH T32CA108462 и Программы прорывных биомедицинских исследований, которая частично финансируется Фондом Сандлера. В. Вайс был поддержан грантами NIH R01CA221969, R01NS091620, P50CA097257, U01CA217864, P30CA82103; Сэмюэл Г. Ваксман онкологический фонд; и председатель Эвелин и Мэтти Андерсон.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.1 μm filtration cup Thermo fisher 566-0010
0.45 μm filter unit Millipore SLHA033SS
10 mL serological pipettes Olympus plastics 12-104
15 mL sterile centrifuge tubes Olympus plastics 28-103
1 mL pipette tip ART molecular bioproducts 2779-RI
2 mL aspirating pipet Falcon 357558
24-well plate Millipore ECM507 Part of ECM507, or can be purchased separately
4x lysis buffer Millipore ECM507 Part of ECM507, or can be purchased separately
5 μm Transwell insert Millipore ECM507 Part of ECM507, or can be purchased separately
75 cm2 flask Corning 430641U
Accutase Innovative cell technologies AT-104
B27 Gibco 12587-010
CyQuant Dye Millipore ECM507 Part of ECM507, or can be purchased separately
DMEM Gibco 11965-092
DMEM:F12 Gibco 10565-018
EGF Peprotech AF-100-15
FBS Gibco 26140
FGF Peprotech 100-18B
IMDM Gibco 12440-053
PBS Gibco 14190-144
Pen Strep Gibco 15140-122
Trypan blue Biorad 1450021

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Liu, Y., Cao, X. The origin and function of tumor-associated macrophages. Cellular & Molecular Immunology. 12 (1), 1-4 (2015).
  2. Riabov, V., et al. Role of tumor associated macrophages in tumor angiogenesis and lymphangiogenesis. Frontiers in Physiology. 5, (2014).
  3. Coussens, L. M., Zitvogel, L., Palucka, A. K. Neutralizing tumor-promoting chronic inflammation: a magic bullet. Science. 339 (6117), 286-291 (2013).
  4. Tsukamoto, H., et al. Combined Blockade of IL6 and PD-1/PD-L1 Signaling Abrogates Mutual Regulation of Their Immunosuppressive Effects in the Tumor Microenvironment. Cancer Research. 78 (17), 5011-5022 (2018).
  5. Borgoni, S., et al. Depletion of tumor-associated macrophages switches the epigenetic profile of pancreatic cancer infiltrating T cells and restores their anti-tumor phenotype. Oncoimmunology. 7 (2), e1393596 (2018).
  6. Argyle, D., Kitamura, T. Targeting Macrophage-Recruiting Chemokines as a Novel Therapeutic Strategy to Prevent the Progression of Solid Tumors. Frontiers in Immunology. 9, 2629 (2018).
  7. An, Z., et al. EGFR cooperates with EGFRvIII to recruit macrophages in glioblastoma. Cancer Research. , (2018).
  8. Fan, Q. W., et al. EGFR phosphorylates tumor-derived EGFRvIII driving STAT3/5 and progression in glioblastoma. Cancer Cell. 24 (4), 438-449 (2013).
  9. Jacquelot, N., Duong, C. P. M., Belz, G. T., Zitvogel, L. Targeting Chemokines and Chemokine Receptors in Melanoma and Other Cancers. Frontiers in Immunology. 9, 2480 (2018).
  10. Arimont, M., et al. Structural Analysis of Chemokine Receptor-Ligand Interactions. Journal of Medicinal Chemistry. 60 (12), 4735-4779 (2017).
  11. Turner, M. D., Nedjai, B., Hurst, T., Pennington, D. J. Cytokines and chemokines: At the crossroads of cell signalling and inflammatory disease. Biochimica et Biophysica Acta. 1843 (11), 2563-2582 (2014).
  12. Sokol, C. L., Luster, A. D. The chemokine system in innate immunity. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (5), (2015).
  13. Pathria, P., Louis, T. L., Varner, J. A. Targeting Tumor-Associated Macrophages in Cancer. Trends in Immunology. 40 (4), 310-327 (2019).
  14. Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology. Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (7), 399-416 (2017).

Tags

Исследования рака выпуск 150 макрофаг опухоль кондиционированная среда микросреда опухоли глиобластома рецептор эпидермального фактора роста
В vitro Анализ для изучения опухоли макрофаг взаимодействия
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

An, Z., Weiss, W. A. In Vitro Assay… More

An, Z., Weiss, W. A. In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction. J. Vis. Exp. (150), e59907, doi:10.3791/59907 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter