Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Biology

En enkel tilgang til at udføre TEER målinger ved hjælp af en selv lavet volt-amperemeter med programmerbar Udgangsfrekvens

doi: 10.3791/60087 Published: October 5, 2019

Summary

Her demonstrerer vi, hvordan man opsætter en billig volt-amperemeter med programmerbar udgangsfrekvens, der kan bruges med kommercielt tilgængelige Chopstick-elektroer til transepithelial/Endothelial elektriske modstands målinger.

Abstract

Transepithelial/Endothelial elektrisk modstand (TEER) har været anvendt siden 1980 ' erne til at bestemme konfluency og permeabilitet af in vitro-barriere modelsystemer. I de fleste tilfælde bruges Chopstick elektroder til at bestemme den elektriske impedans mellem det øvre og nedre rum i et cellekultur filter-indsætnings system, der indeholder cellulære monolayers. Filter membranen gør det muligt for cellerne at klæbe, polarisere og interagere ved at bygge stramme kryds. Denne teknik er blevet beskrevet med en række forskellige cellelinjer (f. eks. celler i blod-hjerne barrieren, blod-cerebrospinalvæske barriere, eller gastrointestinale og pulmonale tarmkanalen). TEER-måleanordninger kan let fås fra forskellige leverandører af laboratorieudstyr. Men der er mere omkostningseffektive og tilpasselig løsninger tænkelige, hvis en passende voltammeter er selv samlet. Det overordnede formål med denne publikation er at oprette en pålidelig enhed med programmerbar udgangsfrekvens, der kan anvendes med kommercielt tilgængelige Chopstick elektroderne til måling af TEER.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Epitelial og endotelceller fungerer som cellulære grænser, adskille de apiske og basolaterale sider af kroppen. Hvis de er forbundet gennem stramme kryds, er passiv stof diffusion gennem de paracellulære rum begrænset1, hvilket resulterer i dannelsen af en selektivt gennemtrængelig barriere. Flere kunstige barrieresystemer er blevet udviklet2 ved hjælp af microvaskulære endotelceller (hbmec, blod-hjernebarrieren 3,4,5,6,7), chorioideus plexus epiteliale celler (hibcpp/pcpec, blod-cerebrospinalvæske barriere8,9,10,11,12,13,14), kolorektal adenokarcinom celler (CaCO-2, gastrointestinale modeller15), eller luftveje/alveolære cellelinjer (pulmonale modeller16,17). Disse systemer består typisk af celler, der dyrkes i et enkeltlags på gennemtrængelig membraner (dvs. filter indsætnings systemer) for at give adgang til de apiske og basolaterale sider. Det er vigtigt, at model systemets integritet svarer til in vivo-betingelserne. Derfor er flere teknikker blevet udviklet til at analysere barriere funktion ved at måle paracellulær diffusion af Tracer forbindelser på tværs af cellelag. Disse stoffer omfatter radioaktivt mærket saccharose, farvemærket albumin, FITC-mærket inulin eller farvemærket dextrans2. Kemiske farvestoffer kan dog gøre cellerne ubrugelige til yderligere eksperimenter. For at overvåge barrieresystemer ikke-invasivt, måling af transepithelial/transendothelial elektrisk modstand (teer) på tværs af en cellulær enkeltlags kan anvendes2,18,19. Da bipolar elektrode systemer påvirkes af elektrode polariserings impedansen ved elektrode elektrolyt-grænsefladen, anvendes tetrapolære målinger generelt til at overvinde denne begrænsning20. Underlægnings teknikken er en fire-Terminal sensing (4T), der først blev beskrevet i 1861 af William Thomson (Lord Kelvin)21. Kort fortalt indsprøjtes strømmen af et par strømbærende elektroder, mens et andet par spændings målings elektroer bruges til at måle spændingsfaldet20. I dag består de såkaldte Chopstick-elektroder af et par dobbelte elektroder, som hver indeholder en sølv/sølv-chloridpellet til måling af spænding og en sølv elektrode til at passere strøm2. Den elektriske impedans måles mellem det apiske og det basolaterale rum med cellelag i mellem (figur 1). Et kvadrat bølge signal med en frekvens på typisk 12,5 Hz påføres ved de ydre elektroder og den resulterende vekselstrøm (AC) målt. Desuden måles det potentielle fald på tværs af cellelaget af det andet (indre) elektrode par. Elektrisk impedans beregnes derefter i henhold til Ohm's lov. TEER-værdier normaliseres ved at multiplicere impedans og cellelag overfladeareal og udtrykkes typisk som Ω cm2.

Der er systemer, hvor cellerne og elektroderne er arrangeret på en mere sofistikeret måde, men er også baseret på 4T-Måleprincippet og kan bruges med de samme måleanordninger. EndOhm systemer, for eksempel, hvor filteret er indsat, indeholder et kammer og hætte med et par koncentriske elektroder med samme struktur som Chopstick elektroden. Formen af elektroderne giver mulighed for en mere ensartet strømtæthed flow over membranen og derved reducere variation mellem aflæsninger. Endnu mere kompleks (men også mere præcis) er et Ussing kammer, hvor et celle lag adskiller to kamre fyldt med Ringer's Solution22. Selve kammeret kan gasses med oxygen, CO2eller N2og omrøres eller suppleres med eksperimentelle stoffer. Som iontransporten på tværs af cellelaget opstår, kan en potentiel forskel måles ved to spændings følende elektroder i nærheden af vævet. Denne spænding er annulleret af to strømbærende elektroder placeret ved siden af cellelag. Den målte strøm vil derefter give netto iontransporten og den transepitheliale modstand, som afspejler barriere integriteten, kan bestemmes22. Teer måling kan også anvendes på Body-on-a-chip systemer, der repræsenterer barriere-vævs modeller23,24. Disse systemer efterligner in vivo betingelser af cellerne og består ofte af flere typer celler, stablet oven på hinanden i lag.

Følgende protokol forklarer, hvordan man konfigurerer en omkostningseffektiv og pålidelig voltammeter med programmerbar udgangsfrekvens, der ikke producerer statistisk signifikante forskelle i TEER sammenlignet med kommercielt tilgængelige målesystemer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. samling af et grundlæggende volt-amperemeter til måling af TEER

  1. Forbered en standard USB oplader som 5 V DC strømforsyning, en USB forlængerledning, en microcontroller, der vil blive brugt som en programmerbar kvadratisk bølge generator, to standard multimetre, der er i stand til at måle vekselstrøm og spænding som root Mean Square ( True-RMS), fire kabler med banan stik, en telefon forlængerledning med et RJ14 hunstik, herunder seks stifter med de indre fire kablede (6P4C), to korte kabler, en Luster terminal, en 120 kΩ præ-modstand, wire end ferrules og lodning lugs. De nødvendige værktøjer er en isolerings stripper, et krympe værktøj og en loddekolbe.
  2. Tilslut først USB-udvidelsen til microcontroller-kortet.
  3. Strip enden isolering af to korte kabler. Lodde ene side per kabel enten direkte til stifter 0 og 2 af mikrocontrolleren eller til lodning lugs, som igen er klippet på de respektive stifter. Crimp de andre ender til wireende tyller og forbinde dem til en Luster Terminal som afbildet i figur 1.
  4. Link banan stikkene til multimetre. Strip og krympe den anden ende af hver af de fire kabler.
  5. Skær telefon forlængerledningen i to stykker og demontere og krympe lederne af siden, der indeholder det kvindelige stik. Kontroller for kontinuiteten af ledere og stifter.
  6. Den første multi måler vil blive brugt til at måle strømmen i μA (Bemærk, at AC-tilstanden skal indstilles eksplicit). Tilslut det i en serie med en 120 kΩ præ-modstand til stifter fem og seks af RJ14-stikket, svarende til den ydre elektrode par af chopstick elektroden.
  7. Endelig, link den anden multimeter, som vil blive brugt til at måle transepithelial spændingsfald i mV, via Luster terminalen til stifter tre og fire af RJ14 Connector, svarende til den indvendige elektrode par af chopstick elektroden.
  8. Hvis det ønskes, monteres installationen i et chassis.

2. programmering af mikrocontrolleren

  1. Rediger den medfølgende kildekode (supplerende kodnings fil 1) efter behov. I den givne form vil Pins 0 og 2 skifte mellem jord og + 5 V med 40 MS Halvtid af svingning. Således vil der blive genereret et kvadrat bølge signal med en amplitude på 5 V og en frekvens på ca. 12,5 Hz. De reelle værdier kan variere på grund af unøjagtighed af mikrocontrollerens tid emitter.
  2. Tilslut microcontroller til en stationær computer via en USB-port og uploade kildekoden med matchende software25.

3. optagelse af spændings oscillogrammer (valgfrit)

  1. Bypass stifter fem og seks af RJ14 stikket med en 1 kΩ test modstand og forbinde til en Oscilloscope.
  2. Kontroller frekvensen, spids spændingen og bølgeformen. Digitalisere og eksportere dataene.
  3. Hvis det ønskes, Optag oscillogrammer fra en referenceenhed (EVOM) og den selv monterede voltammeter til sammenligning.
    Bemærk: i dette tilfælde blev dataene registreret med et digitalt opbevaringsområde HM 208. At være en meget grundlæggende digital Oscilloscope, billedet kunne være internt digitaliseret (frosset), men måtte plottet ved hjælp af en analog PM 8143 X-Y-optager. Billedet blev efterfølgende scannet.

4. celledyrkning og TEER måling

  1. Seed Human choroid plexus papilloma (HIBCPP) celler på cellekultur filter skær med en porestørrelse på 3 μm i DMEM/F12 (Se tabel over materialer) indeholdende 10% føtal kalv serum9. Cellerne vokser ved 37 °C i en vand mættet atmosfære, der indeholder 5% CO2 som beskrevet af Dinner et al.9.
  2. Når filtrene når en impedans på 70 Ω ∙ cm2, skal du skifte til SERUMFRIT DMEM/F12 og definere tidspunktet som dag 0.
  3. Tilslut elektroden til RJ14-porten på den selv monterede voltammeter, og Tilslut USB-strømforsyningen. Indstil henholdsvis multimetre til AC-spændingstilstand (mV) og AC-strømtilstand (μA).
    1. Alternativt kan du slutte elektroden til en kommercielt tilgængelig reference anordning og tænde den i henhold til producentens anvisninger.
  4. Elektroden steriliseres i 80% ethanol i 10 minutter og ækvibrere i det passende medium i yderligere 10 minutter.
  5. Sæt elektroden i begge rum i et cellekultur filter-indsætnings system (den længere del af elektroden i det nedre rum og den korteste del i det øvre rum), der indeholder et HIBCPP-cellelag, indtil måleværdierne forbliver konstante.
  6. Bemærk impedansen direkte for en reference anordning, eller Beregn impedansen i henhold til Ohm's lov (R = U/I) for den selv monterede voltammeter. Vær opmærksom på, at elektrode vinklen påvirker målingerne.
  7. Gentag TEER-målingen (trin 3 − 6) fra dag 0 til dag 4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

For at sammenligne driften af en selv samlet voltammeter med sin kommercielt tilgængelige modpart, blev der registreret en spændings ske af begge enheder.

Som vist i figur 2agenererede Referenceinstrumentet et kvadratisk bølge signal med en amplitude på 80 mv og en svingningstid på 80 MS, hvilket svarer til en frekvens på 12,5 Hz, når der drives on-Load med en 1 kΩ test modstand.

I modsætning hertil skiftede mikrocontrolleren til den selv monterede enhed forsyningsspændingen til et kvadrat bølge signal med en amplitude på 5 V (figur 2B), hvis der ikke var sat nogen præ-modstand. Det blev klart, at den resulterende strøm ødelægger enhver barriere funktion og er ikke anvendelig til cellekultur eksperimenter (data ikke vist). Et andet problem er, at i dette setup en 1 kΩ test modstand forårsagede en overbelastning med en resulterende fald i spænding (figur 2B). Desuden var mikrocontrollerens effektive Oscillations tidspunkt 60 MS (frekvens = 16,7 Hz) og varierede derved fra den programmerede forsinkelsestid på grund af unøjagtigheden af tids emitter. Hvis der blev installeret en 120 kΩ-forudplace ring, faldt amplituden til en værdi af 40 mV, som var egnet til cellekultur (figur 2C). Som det ses i oscillogram, var signal-støj-forholdet betydeligt forringet (figur 2c), men påvirkede ikke målingerne mærkbart.

Begge anordninger blev anvendt til at bestemme impedansen af en kunstig blod-cerebrospinalvæske barriere (forenklet kredsløb diagram vist i figur 2D). HIBCPP-celler blev dyrket på cellekultur filter skær og TEER blev målt over 6 dage: starter en dag før cellerne blev flyttet til serum-fri betingelser (dag-1) og op til 4 dage efter udskiftning af mediet (dag 4). Alle målinger blev udført i firkanter ved brug af fire HIBCPP-filtre tilberedt på samme måde. Der blev opnået lignende værdier for Referenceinstrumentet og den selv monterede voltammeter (figur 3). Målingerne var reproducerbare, og standardafvigelser var inden for samme interval. TEER værdierne varierede fra 20 − 550 Ω cm2. Med 0,33 cm2 filtre svarer dette til en absolut impedans på 83 − 1660 Ω.

Figure 1
Figur 1: layout diagram af et grundlæggende volt-amperemeter til måling af TEER. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: Oscillogrammer og måling setup. A) kommercielt tilgængelige evom. (B) selv monteret voltammeter uden præ-modstand. C) selv monteret voltammeter med 120 kΩ-præ-modstand. (D) kredsløb diagram af måling setup. Bemærk, at C-elektroden kun vises i de elektriske kredsløb, når der anvendes bipolare systemer. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3: teer målinger af HIBCPP-cellelag på cellekultur filterindsatser før Skift til serumfrit kulturmedium (dag-1), på dagen for Skift (dag 0) og op til 4 dage efter (dage 1 − 4). Fejllinjer angiver standardafvigelsen for de fire HIBCPP-filtre, der blev forberedt på samme måde. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Supplerende kodnings fil 1. Venligst klik her for at downloade denne fil. 

Supplerende kodnings fil 2. Venligst klik her for at downloade denne fil. 

Supplerende kodnings fil 3. Venligst klik her for at downloade denne fil. 

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Før en selvstændig lavet voltammeter kan bruges i en daglig rutine, er det vigtigt at kontrollere enheden for korrekt funktion. I vores tilfælde, en halv-tid af svingning af 40 MS (12,5 Hz) var programmeret, men den effektive svingning tid viste sig at være 60 MS (16,7 Hz). Denne unøjagtighed af mikrocontrollerens tids emitter havde ingen påviselige virkninger på TEER målingerne. Det kan være bedst at bestemme den faktiske frekvens ved hjælp af frekvens indstillingen for en af multimetre. Hvis der findes en afvigelse, kan kildekoden justeres i overensstemmelse hermed. Desuden anbefales det kraftigt at kontrollere, om en test modstand eller andre definerede opsætninger giver korrekte og reproducerbare resultater. Hvis du arbejder med kunstige cellulære barrieresystemer, kan det være bedst at altid korrelere molekyle flux med impedans måling.

I dette tilfælde var den anvendte strøm begrænset ved hjælp af en 120 kΩ præ-modstand. Hvis man antager, at typiske TEER værdier spænder fra 100 Ω − 2000 Ω, kan spændingsfaldet over cellelaget beregnes til 4 − 83 mV. En TEER på 1 kΩ blev simuleret af en test modstand, og det resulterende potentielle fald blev bekræftet at være 40 mV (figur 2C).

Kommercielt tilgængelige enheder giver ofte en måleområde switch til at skifte pre-resistor og dermed begrænse udgangsstrømmen til forskellige værdier. I dette tilfælde er det muligt at installere forskellige præ-modstande eller endda udskifte modstanden med et potentiometer.

Den viste opsætning repræsenterer et omkostningseffektivt alternativ til kommercielt tilgængelige instrumenter til måling af TEER. Værdier, der er målt med den selv monterede voltammeter, var sammenlignelige med reference anordningen over en bred vifte. Det samme gælder for standardafvigelserne. Støjen i kvadrat bølge signalet påvirkede ikke målingerne især. Protokollen kan støtte videnskabsfolk, der er begrænset af begrænsede finansielle ressourcer, eller som ønsker at udføre indledende eksperimenter til lave omkostninger.

Desuden kan mikrocontrolleren nemt programmeres til forskellige udgangsfrekvenser. Dette kan være gavnligt, da den tilsyneladende impedans består afr medium, rteer, samt kapaciteten Ccelle lag26 (figur 2D). Derudover vises der en C-elektrode , hvis der anvendes bipolar systemer, hvorimod indflydelsen fra elektrode polariserings impedansen reduceres i tetrapolære systemer. Det betyder, at den målte impedans vil blive domineret af Rteer ved lave frekvenser og, i bipolare systemer, af elektrodernes kapacitet, hvorimod den totale impedans ved høje frekvenser konvergerer til mellem26' s modstand 27. I mellem, impedansen påvirkes af C-cellelag, som derfor er tilgængelig ved hjælp af elektrisk impedans spektroskopi28.

Vi leverer to (uafprøvede) eksempelkoder for at give en idé om, hvordan enheden kan optimeres eller omprogrammeres til forskellige applikationer. Først, en meget grundlæggende impedans spektroskopi kunne realiseres ved at skifte output frekvens i 20 sekunders intervaller mellem 12,5, 500 og 5000 Hz (supplerende kodning fil 2). I dette tilfælde kan en tetrapolar20,28 eller bipolar27 elektrode anvendes. Anvendt frekvens kan vises af den indbyggede multimeter (eller enhver skærm eller LED, der er tilsluttet mikrocontrolleren). For det andet kan enheden bruges til at måle buffere og mediers ledningsevne. Dette gøres typisk ved hjælp af tetrapolar elektroder med høje frekvenser i et interval på 1-110kHz. Koden i supplerende kodning fil 3 indeholder ingen forsinkelse tid og (med vores enhed) genereret en frekvens på ca 70kHz.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen konkurrerende finansielle interesser eller andre interessekonflikter.

Acknowledgments

Forfatterne vil gerne takke Herman Liggesmeyer og Marvin bende for deres ekspertrådgivning inden for Elektroteknik og informatik.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
120 kOhm resistor General (generic) equipment
Banana plug cables General (generic) equipment
Cables General (generic) equipment
Chopstick electrode Merck Millicell MERSSTX01
Chopstick electrode (alternative) WPI World Precision Instruments STX2
Crimping tool General tool
Digispark / ATtiny85 AZ-Delivery Vertriebs GmbH Digispark Rev.3 Kickstarter
DMEM:F12 Gibco (Thermo Fisher) 31330038
Fetal calf serum (FCS)/Fetal Bovine Serum (FBS) Life Technologies 10270106
Filter inserts 3µm translucent Greiner Bioone 662631
HIBCPP Hiroshi Ishikawa / Horst Schroten
Insulation stripper General tool
Luster terminal General (generic) equipment
Oscilloscope HAMEG Digital Storage Scope HM 208
Plotter PHILIPS PM 8143 X-Y recorder
Software Arduino https://www.arduino.cc Arduino 1.8.9
Soldering iron General tool
Soldering lugs General (generic) equipment
Telephone cable with RJ14 (6P4C) connector General (generic) equipment
Test resistor Merck Millicell MERSSTX04
True-RMS multimeters VOLTCRAFT VC185
USB charger General (generic) equipment
USB extension cord General (generic) equipment
Voltohmmeter for TEER measurement WPI World Precision Instruments EVOM
Voltohmmeter for TEER measurement (alternative) Merck Millicell ERS
Wire end ferrules General (generic) equipment

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Matter, K., Balda, M. S. Functional analysis of tight junctions. Methods. 30, 228-234 (2003).
  2. Srinivasan, B., et al. TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems. Journal of Laboratory Automation. 20, 107-126 (2015).
  3. Daniels, B. P., et al. Immortalized human cerebral microvascular endothelial cells maintain the properties of primary cells in an in vitro model of immune migration across the blood brain barrier. Journal of Neuroscience Methods. 212, 173-179 (2013).
  4. Weksler, B. B., et al. Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line. Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 19, 1872-1874 (2005).
  5. Lippmann, E. S., Al-Ahmad, A., Azarin, S. M., Palecek, S. P., Shusta, E. V. A retinoic acid-enhanced, multicellular human blood-brain barrier model derived from stem cell sources. Scientific Reports. 4, 4160 (2014).
  6. Stins, M. F., Badger, J., Sik Kim, K. Bacterial invasion and transcytosis in transfected human brain microvascular endothelial cells. Microbial Pathogenesis. 30, 19-28 (2001).
  7. Muruganandam, A., Herx, L. M., Monette, R., Durkin, J. P., Stanimirovic, D. B. Development of immortalized human cerebromicrovascular endothelial cell line as an in vitro model of the human blood-brain barrier. Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 11, 1187-1197 (1997).
  8. Ishiwata, I., et al. Establishment and characterization of a human malignant choroids plexus papilloma cell line (HIBCPP). Human Cell. 18, 67-72 (2005).
  9. Dinner, S., et al. A Choroid Plexus Epithelial Cell-based Model of the Human Blood-Cerebrospinal Fluid Barrier to Study Bacterial Infection from the Basolateral Side. Journal of Visualized Experiments. (2016).
  10. Schwerk, C., et al. Polar invasion and translocation of Neisseria meningitidis and Streptococcus suis in a novel human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. PLoS One. 7, e30069 (2012).
  11. Tenenbaum, T., et al. Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro. Cellular Microbiology. 11, 323-336 (2009).
  12. Gath, U., Hakvoort, A., Wegener, J., Decker, S., Galla, H. J. Porcine choroid plexus cells in culture: expression of polarized phenotype, maintenance of barrier properties and apical secretion of CSF-components. European Journal of Cell Biology. 74, 68-78 (1997).
  13. Haselbach, M., Wegener, J., Decker, S., Engelbertz, C., Galla, H. J. Porcine Choroid plexus epithelial cells in culture: regulation of barrier properties and transport processes. Microscopy Research and Technique. 52, 137-152 (2001).
  14. Strazielle, N., Ghersi-Egea, J. F. Physiology of blood-brain interfaces in relation to brain disposition of small compounds and macromolecules. Molecular Pharmaceutics. 10, 1473-1491 (2013).
  15. Hilgendorf, C., et al. Caco-2 versus Caco-2/HT29-MTX co-cultured cell lines: permeabilities via diffusion, inside- and outside-directed carrier-mediated transport. Journal of Pharmaceutical Sciences. 89, 63-75 (2000).
  16. Mathia, N. R., et al. Permeability characteristics of calu-3 human bronchial epithelial cells: in vitro-in vivo correlation to predict lung absorption in rats. Journal of Drug Targeting. 10, 31-40 (2002).
  17. Fuchs, S., et al. Differentiation of human alveolar epithelial cells in primary culture: morphological characterization and synthesis of caveolin-1 and surfactant protein-C. Cell and Tissue Research. 311, 31-45 (2003).
  18. Furie, M. B., Cramer, E. B., Naprstek, B. L., Silverstein, S. C. Cultured endothelial cell monolayers that restrict the transendothelial passage of macromolecules and electrical current. The Journal of Cell Biology. 98, 1033-1041 (1984).
  19. Hidalgo, I. J., Raub, T. J., Borchardt, R. T. Characterization of the human colon carcinoma cell line (Caco-2) as a model system for intestinal epithelial permeability. Gastroenterology. 96, 736-749 (1989).
  20. Yeste, J., et al. Geometric correction factor for transepithelial electrical resistance measurements in Transwell and microfluidic cell cultures. Journal of Physics D Applied Physics. 49, (37), 3754 (2016).
  21. Northrup, E. VI: The Measurement of Low Resistance. Methods of Measuring Electrical Resistance. McGraw-Hill. 100-131 (1912).
  22. Li, H., Sheppard, D. N., Hug, M. J. Transepithelial electrical measurements with the Ussing chamber. Journal of Cystic Fibrosis. 3, (Suppl 2), 123-126 (2004).
  23. Griep, L. M., et al. BBB on chip: microfluidic platform to mechanically and biochemically modulate blood-brain barrier function. Biomedical Microdevices. 15, 145-150 (2013).
  24. Esch, M. B., et al. On chip porous polymer membranes for integration of gastrointestinal tract epithelium with microfluidic 'body-on-a-chip' devices. Biomedical Microdevices. 14, 895-906 (2012).
  25. Arduino IDE. Arduino Web Editor. https://www.arduino.cc/en/Main/Software (2019).
  26. Benson, K., Cramer, S., Galla, H. J. Impedance-based cell monitoring: barrier properties and beyond. Fluids and Barriers of the CNS. 10, 5 (2013).
  27. Hufnagl, M. Time Resolved Transepithelial Impedance Spectroscopy Of Caco 2 Monolayers Relying on Lithographically Patterned Basolateral Electrode Cell Arrays. University of Vienna. (2010).
  28. Guimerà, A., Gabriel, G., Parramon, D., Calderón, E., Villa, R. Portable 4 Wire Bioimpedance Meter with Bluetooth Link. World Congress on Medical Physics and Biomedical Engineering. International Federation of Medical and Biological Engineering Proceedings. Dössel, O., Schlegel, W. C. 25/7, Springer. Berlin, Heidelberg. (2009).
En enkel tilgang til at udføre TEER målinger ved hjælp af en selv lavet volt-amperemeter med programmerbar Udgangsfrekvens
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Theile, M., Wiora, L., Russ, D., Reuter, J., Ishikawa, H., Schwerk, C., Schroten, H., Mogk, S. A Simple Approach to Perform TEER Measurements Using a Self-Made Volt-Amperemeter with Programmable Output Frequency. J. Vis. Exp. (152), e60087, doi:10.3791/60087 (2019).More

Theile, M., Wiora, L., Russ, D., Reuter, J., Ishikawa, H., Schwerk, C., Schroten, H., Mogk, S. A Simple Approach to Perform TEER Measurements Using a Self-Made Volt-Amperemeter with Programmable Output Frequency. J. Vis. Exp. (152), e60087, doi:10.3791/60087 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter