Summary
इस पशु मॉडल शोधकर्ताओं चूहों के hindlimb में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण माध्यमिक लिम्फेडेमा प्रेरित करने के लिए सक्षम बनाता है, कम से कम 8 सप्ताह तक चलने. मॉडल लिम्फेडेमा के pathophysiology का अध्ययन करने के लिए और उपन्यास उपचार विकल्पों की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Abstract
पशु मॉडल रोग के pathophysiology को समझने के लिए, लेकिन यह भी संभावित उपचार विकल्पों का पता लगाने के क्रम में लिम्फेडेमा के अनुसंधान में सर्वोपरि महत्व के हैं। इस माउस मॉडल शोधकर्ताओं महत्वपूर्ण lymphedema कम से कम 8 सप्ताह तक चलने प्रेरित करने के लिए अनुमति देता है. लसीकाओं के भिन्न रेडियोथेरेपी और सर्जिकल अपाहिज के संयोजन का उपयोग करके लिम्फेडेमा प्रेरित होता है। इस मॉडल की आवश्यकता है कि चूहों से पहले और सर्जरी के बाद 10 ग्रे (जी) विकिरण की एक खुराक मिलता है. मॉडल के सर्जिकल भाग में तीन लसीका वाहिकाओं का लिगेशन और माउस हिंदलिम्ब से दो लिम्फ नोड्स की निकासी शामिल है। चूहों के छोटे शारीरिक संरचनाओं के कारण माइक्रोसर्जिकल उपकरणों और माइक्रोस्कोप तक पहुंच होना आवश्यक है। इस मॉडल का लाभ यह है कि यह सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण लिम्फेडेमा में परिणाम है, जो विभिन्न उपचार विकल्पों के मूल्यांकन के लिए एक अच्छा आधार प्रदान करता है. यह भी microsurgical प्रशिक्षण के लिए एक महान और आसानी से उपलब्ध विकल्प है. इस मॉडल की सीमा यह है कि प्रक्रिया समय लगता है, खासकर अगर अग्रिम में अभ्यास नहीं किया जा सकता है. मॉडल चूहों में निष्पक्ष परिमाणात्मक लिम्फेडेमा में परिणाम, गंभीर रुग्णता के कारण के बिना और तीन अलग अलग परियोजनाओं में परीक्षण किया गया है.
Introduction
लसीका द्रव का संचय है जो स्थानीय ऊतक सूजन की ओर जाता है, जो मुख्य रूप से लसीका वाहिकाओं में लसीका तरल पदार्थ के बिगड़ा या बाधित प्रवाह के कारण होताहै 1. लसीका प्रवाह लसीका प्रणाली2में संक्रमण, बाधा, चोट या जन्मजात दोषों से बाधित या बाधित हो सकता है। इन etiologies लसीका तरल पदार्थ के संचय में परिणाम है, जो सूजन की एक पुरानी स्थिति की ओर जाता है, बाद में फाइब्रोसिस में जिसके परिणामस्वरूप, साथ ही वसा ऊतक3के जमाव. लिम्फेडेमा को प्राथमिक या द्वितीयक लिम्फेडेमा के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है। प्राथमिक लिम्फेडेमा विकासात्मक असामान्यताओं या आनुवंशिक उत्परिवर्तन2,4के कारण होता है . माध्यमिक लिम्फेडेमा अंतर्निहित प्रणालीगत रोग, शल्य चिकित्सा या आघात2,4के कारण होता है . द्वितीयक लिम्फेडेमाविश्व2 में लिम्फेडेमा का सबसे सामान्य रूप है। विकसित देशों में, माध्यमिक लिम्फेडेमा का सबसे आम कारण सहायक रेडियोथेरेपी और लिम्फ नोड विच्छेदन5जैसे ओन्कोलॉजिकल थेरेपी है। लिम्फेडेमा स्तन कैंसर के रोगियों के बीच सबसे अधिक बार होता है, लेकिन यह भी gynecologic, मेलेनोमा, genitourinary या गर्दन के कैंसर6के साथ रोगियों में विकसित कर सकते हैं। यह सुझाव दिया गया है कि स्तन कैंसर के साथ का निदान सभी महिलाओं में से, 21% लिम्फेडेमा7का विकास होगा.
लिम्फेडेमा रोगी के लिए शारीरिक और मानसिक रूप से तनावपूर्ण हो सकता है। लिम्फेडेमा के रोगियों में संक्रमण का खतरा बढ जाता है5,8,9, जीवन की खराब गुणवत्ता और अवसाद10के सामाजिक चिंता और लक्षण विकसित कर सकते हैं . पुरानी लिम्फेडेमा की जटिलताओं के कारण देखभाल की लागत अधिक होती है और रोग का बोझ9,11में बढ जाता है . निष्कर्षों से यह भी पता चला है कि लिम्फेडेमा स्तन कैंसर के उपचार के बाद मृत्यु का खतरा बढ़ सकता है12. प्रभावित क्षेत्र के संपीड़न, मैनुअल लसीका जल निकासी और सामान्य skincare के रूप में कंजर्वेटिव प्रबंधन पहली पंक्ति दृष्टिकोण रहते हैं. वर्तमान में कोई उपचारात्मक उपचार6है . हालांकि शल्य चिकित्सा और चिकित्सा चिकित्सा के क्षेत्र में प्रगति की गई है, वहाँ अभी भी सुधार के लिए जगह है. अधिक शोध, रोग के pathophysiology और प्रगति में अंतर्दृष्टि प्रदान करने के लिए चिकित्सकों रोगियों के लिए बेहतर उपचार विकल्प प्रदान करने के लिए सक्षम करने की जरूरत है5.
पशु मॉडल रोगों के pathophysiology को समझने और संभावित उपचार विकल्प विकसित करने के लिए पूर्व नैदानिक अनुसंधान में इस्तेमाल किया जा रहा है। कई अलग लिम्फेडेमा पशु मॉडल कैनियों13,14,खरगोश15, भेड़16, सूअर17,18 और कृन्तकों19,20में स्थापित किया गया है, 21,22,23,24. कृंतक मॉडल सबसे अधिक लागत प्रभावी मॉडल लगता है, जब लसीका समारोह के पुनर्निर्माण की जांच, कृन्तकों के कारण आसानी से सुलभ और अपेक्षाकृत कम कीमत25जा रहा है. अधिकांश चूहों के मॉडलों ने चूहों की पूंछ में लिम्फेडेमा को प्रेरित करने पर ध्यान केंद्रित किया है21,22,23. पूंछ मॉडल बहुत विश्वसनीय है, लेकिन lymphedema प्रेरित करने के लिए सटीक शल्य तकनीक पिछले प्रकाशित सामग्री में काफी भिन्न होता है. इसके परिणामस्वरूप ज्ञात कूड़े-कचरे में प्रस्तुत विकसित लिम्फेडेमा की अवधि में उतार-चढ़ाव और मजबूतीहोतीहै . विभिन्न तकनीकों को भी hindlimb मॉडल में lymphedema inducing के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है और वे भी अलग परिणाम उपज, लेकिन hindlimb मॉडल एक translational परिप्रेक्ष्य से समझने के लिए आसान हो सकता है. पिछला लिम्फेडेमा मॉडल सहज लिम्फेडेमा संकल्प द्वारा बाधित किया गया है और इसलिए एक पुन: उत्पादनीय और स्थायी लिम्फेडेमा मॉडल की आवश्यकता है25. शोधकर्ताओं ने पहले विकिरण की खुराक बढ़ाने की कोशिश की है, सहज लिम्फेडेमा संकल्प को रोकने के लिए, लेकिन यह अक्सर बाद में गंभीर रुग्णता के लिए नेतृत्व किया है25.
इस मॉडल सांख्यिकीय महत्वपूर्ण लिम्फेडेमा में परिणाम, गंभीर रुग्णता के कारण के बिना, विकिरण के साथ microsurgery के संयोजन के द्वारा. मॉडल एक पिछले शल्य चिकित्सा मॉडल से संशोधित किया गया है विकिरण की एक खुराक है कि lymphedema लाती है, गंभीर रुग्णता के कारण के बिना जोड़ने के द्वारा26. यह भी microsurgical प्रशिक्षण के लिए एक महान अवसर प्रदान करता है. चूहों के छोटे शारीरिक संरचनाओं के कारण माइक्रोसर्जिकल उपकरणों और माइक्रोस्कोप तक पहुंच होना आवश्यक है। शल्य प्रक्रिया जब उपयोगकर्ता बुनियादी microsurgical तकनीक सिखाया गया है किया जा सकता है, इस तरह के microsurgical उपकरणों के साथ suturing के रूप में. ऑपरेटरों है कि इस प्रक्रिया का प्रदर्शन सभी microsurgical कौशल (1981) और बुनियादी microsuture तकनीक (1985) की पूर्व शर्तों पर Acland द्वारा ट्यूटोरियल वीडियो देखा. हम इसे अनुसंधान में उपयोग करने से पहले शल्य प्रक्रिया 8 -10 बार अभ्यास की सलाह देते हैं। प्रक्रिया का अभ्यास सुनिश्चित करता है कि कम गलतियाँ की जाती हैं और प्रक्रिया और अधिक कुशलता से किया जा सकता है. जब महारत हासिल है, शल्य प्रक्रिया 45 मिनट में किया जा सकता है.
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Protocol
संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार दक्षिणी डेनमार्क पशु देखभाल सुविधा विश्वविद्यालय में जानवरों को रखा गया था। पशु विषयों से संबंधित सभी प्रक्रियाओं को पशु प्रयोग निरीक्षकालय, पर्यावरण और खाद्य मंत्रालय द्वारा अनुमोदित किया गया है।
1. पूर्व शल्य चिकित्सा विकिरण
नोट: पूर्व सर्जरी विकिरण सर्जरी से पहले 7 दिन जगह लेता है।
- संज्ञाहरण को प्रेरित करें।
- माउस को प्रेरण बॉक्स में रखें और वाष्पाइज़र को 3% आइसोफ्लुरेन के लिए सेट करें, जिसमें ऑक्सीजन प्रवाह दर 0.8$1.2 L/min है जो इनहेलेशन संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए है।
नोट: वैकल्पिक रूप से, इंजेक्शन एनेस्थेटिक्स का उपयोग किया जा सकता है लेकिन विकिरण की छोटी अवधि के लिए इनहेलेशन संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त था। इस लेख में प्रस्तुत परिणाम प्राप्त करने के लिए, 9 सप्ताह पुरानी महिला C57BL6 चूहों का इस्तेमाल किया गया. - सुनिश्चित करें कि माउस पूरी तरह से पूंछ या पंजा चुटकी परीक्षण द्वारा एनेस्थेट किया गया है।
- माउस को प्रेरण बॉक्स में रखें और वाष्पाइज़र को 3% आइसोफ्लुरेन के लिए सेट करें, जिसमें ऑक्सीजन प्रवाह दर 0.8$1.2 L/min है जो इनहेलेशन संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए है।
- विकिरण के लिए माउस की स्थिति.
- यदि पूरी तरह बेहोश हो जाए, तो माउस को प्रेरण बॉक्स से ले जाएं और इसे विकिरण के स्रोत के नीचे सुपिन स्थिति में रखें और टेप के साथ पिछले अंगों को धीरे से ठीक करें।
नोट: माउस विकिरण की छोटी अवधि के लिए बेहोश रहेगा. - यह सुनिश्चित करने के लिए 1.5 मिमी मोटी लीड पैड रखें कि केवल उस क्षेत्र में सर्जरी (यानी, घुटने के चारों ओर 25 मिमी के व्यास के साथ परिपत्र क्षेत्र) विकिरणित हो जाता है।
- यदि पूरी तरह बेहोश हो जाए, तो माउस को प्रेरण बॉक्स से ले जाएं और इसे विकिरण के स्रोत के नीचे सुपिन स्थिति में रखें और टेप के साथ पिछले अंगों को धीरे से ठीक करें।
- 5.11 Gy/min (100 kVp, 10 mA) की खुराक दर पर 10 Gy विकिरण की एक खुराक प्रशासन।
चेतावनी: विकिरण के साथ काम करते समय सुरक्षा सावधानियों लिया जाना चाहिए. इस प्रयोग के दौरान, सभी विकिरण एक विकिरण अछूता कमरे में प्रदर्शन किया गया था, और विकिरण का स्रोत केवल पर दिया गया था जब सभी कर्मियों को छोड़ दिया था और कमरे को सील. - माउस को अपने पिंजरे में वापस रखें।
2. उपकरण सेटअप
नोट: सर्जरी शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के लिए समर्पित एक कमरे में किया जाना चाहिए. ऑपरेटिव सतह बाँझ होना चाहिए।
- 70% इथेनॉल के साथ सभी ऑपरेटिव सतहों को अच्छी तरह से साफ करें। हेयरनेट और कवरल पहनें। बाँझ शल्य चिकित्सा उपकरणों और बाँझ दस्ताने का प्रयोग करें.
- संज्ञाहरण तैयार करें।
- 1 एमएल फेनेटाइल (0.315 मिलीग्राम/एमएल), मिडाज़ोलम का 1 एमएल (5 मिलीग्राम/एमएल), और 2 एमएल बाँझ पानी ड्रा करें। विभिन्न घटकों के लिए विभिन्न सिरिंजों और सुइयों का उपयोग करें।
- धीरे-धीरे एक बाँझ गिलास ट्यूब में सिरिंजों खाली करके fentanyl और बाँझ पानी मिक्स। मिश्रित होने पर, कार्य समाधान को पूरा करने के लिए मिडाज़ोलम जोड़ें।
- एनेल्जेसिया तैयार करें।
- 0.2 एमएल buprenorphine (0.3 mg/mL) और 2 एमएल लवण का ड्रा करें।
- काम कर समाधान को पूरा करने के लिए धीरे-धीरे एक बाँझ ग्लास ट्यूब में सिरिंजों को खाली करके वॉल्यूम मिलाएं।
- माइक्रोस्कोप चालू करें और सुनिश्चित करें कि प्रकाश पर्याप्त है, और यह कि माइक्रोस्कोप ऑपरेटर की आंखों के लिए अच्छी तरह से समायोजित किया जाता है।
नोट: सभी शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के तहत किया जाना चाहिए। 4x $25x से एक आवर्धन रेंज पर्याप्त है.
3. तैयारी
- एक खाली कंटेनर में एक साफ पैमाने पर माउस रखकर माउस पूर्व सर्जरी वजन.
- संवेदनाहारी व्यवस्था करें।
- माउस बॉडीवेट के प्रति 10 ग्राम एनेस्थेटिक का 0.1 एमएल ड्रा करें। एनेस्थेटिक subcutaneously एक बोलस इंजेक्शन के रूप में इंजेक्शन.
- माउस पूरी तरह से बेहोश होने तक लगभग 10 मिनट के लिए बहुत बिस्तर और आश्रय के साथ एक पिंजरे में आराम करते हैं। मांसपेशी छूट का आकलन करके संवेदनाहारी गहराई की जांच करें और पंजा या पूंछ चुटकी परीक्षण करें।
- जब पूरी तरह से बेहोश हो, बिजली क्लिपर का उपयोग कर प्रक्रिया के लिए चुना पिछले अंग दाढ़ी. अतिरिक्त बालों का सफाया करने के लिए सुनिश्चित करें।
- हीटिंग डिवाइस को चालू करें, जैसे हीटिंग पैड और इसे सर्जिकल कपड़े से ढक दें।
- ऑक्सीजन के प्रवाह को 0.8 L/min पर सेट करें और इसे एक नोकोन से कनेक्ट करें। 100% ऑक्सीजन का प्रयोग करें.
नोट: नोज़कोन केवल ऑक्सीजन वितरण के लिए है न कि संज्ञाहरण के लिए। - नेत्र मलम लागू करें और सर्जरी के दौरान हाइपोवोलेमिया को रोकने के लिए, बेहतर रूप से माउस की स्क्रफ में, 0.5 एमएल के नीचे से काटना।
- सर्जरी के लिए माउस की स्थिति.
- चूहे को शल्य चिकित्सा के कपड़े पर सुपाच्य स्थिति में रखें। नाक को स्नाउट पर रखें।
- सर्जरी के दौरान माउस को स्थानांतरण से रोकने के लिए टेप के साथ धीरे से hindlimbs के अंत को ठीक करें।
- अल्कोहल/क्लोरहेक्सिडीन या अल्कोहल/पोविडोन आयोडीन का उपयोग करके त्वचा का बंध्याकरण करें।
4. सर्जरी
नोट: इस उदाहरण में, बाएँ पिछले अंग (जब माउस supine स्थिति में देखा जाता है), प्रक्रिया के लिए चुना गया है.
- एक परिपत्र चीरा बनाओ.
- चिकनी forceps के साथ त्वचा लिफ्ट और एक छोटे से खोलने लगभग क्लिप 5 popliteal खात के लिए proximal.
- तेज कैंची को खोलने में स्लाइड करें और घुटने की ओर क्लिप करें ताकि चीरा घुटने के ठीक ऊपर समाप्त हो। कतरन के दौरान संदंश के साथ त्वचा उठाने से अंतर्निहित जहाजों पंचर करने के लिए सुनिश्चित करें।
- प्रवण स्थिति के लिए माउस ले जाएँ और परिधीय चीरा पूरा हो गया है जब तक popliteal खात की ओर घुटने से क्लिप करने के लिए जारी है।
- घुटने के नीचे त्वचा को अलग करें।
- धीरे से कुंद टखने के ऊपर मिलीमीटर के एक जोड़े के लिए घुटने के नीचे क्षेत्र विच्छेदन, धीरे धीरे खोलने और microscissors बंद करके, जबकि forceps के साथ त्वचा उठाने.
- माइक्रोसेस्टर का उपयोग करके शेष दृश्य मानणों को सावधानी पूर्वक ठीक करें। पूरी प्रक्रिया के दौरान ऊतक को नम रखने के लिए नियमित रूप से बाँझ नमकीन का प्रयोग करें।
- परिधीय चीरा के निकट रिम पर त्वचा को अलग करें ताकि इसे एक लोचदार रिट्रैक्टर के साथ वापस लिया जा सके।
नोट: आकुंचक ऑपरेटर समीपस्थ लसीका पोत का एक बेहतर दृश्य की अनुमति देता है और शल्य चिकित्सा के दौरान स्थानांतरण से समीपस्थ रिम को रोकता है. - जबकि अभी भी प्रवण स्थिति में है, Hindlimb धीरे बारी बारी से और यह टेप के साथ fixate, ताकि ischiatic नस सबसे दूर बिंदु को उजागर क्षेत्र के सबसे निकट बिंदु से दिखाई देता है.
- एक 30 जी सुई के साथ एक 0.5 एमएल सिरिंज का उपयोग कर दूसरे और तीसरे के लिए कड़ी के बीच पेटेंट ब्लू वी subcutaneously के लगभग 0.01 एमएल इंजेक्शन. धीरे से पेटेंट ब्लू वी वितरित करने के लिए समय की एक जोड़ी पंजा दबाएँ लसीका वाहिकाओं और लिम्फ नोड माइक्रोस्कोप के माध्यम से कल्पना के रूप में पेटेंट ब्लू वी लसीका वाहिकाओं भरता है.
नोट: यदि लसीका वाहिकाओं का नीला रंग प्रक्रिया के दौरान फीका हो जाता है, तो धीरे से तेजी को बढ़ावा देने के लिए पंजा की मालिश करें, बजाय अधिक पेटेंट ब्लू वी का अतिरिक्त उपयोग पेटेंट ब्लू वी के रिसाव और लसीका वाहिकाओं के आसपास के ऊतकों के रंग के लिए नेतृत्व कर सकते हैं जो हो सकता है प्रक्रिया से समझौता करें। - महत्वपूर्ण संरचनाओं का पता लगाएँ: popliteal लिम्फ नोड (PLN), दो लिम्फ वाहिकाओं लिम्फ नोड (DLV1 और DLV2) के लिए distal, और एक लिम्फ पोत लिम्फ नोड (PLV) के लिए निकट.
नोट: सभी लसीका वाहिकाओं ischiatic नस के बगल में पाया जा सकता है. समीपस्थ लसीका वाहिका आमतौर पर शिरा के लिए मध्यस्थ पाया जाता है, दो दूरस्थ लसीका वाहिकाओं को नस के लिए मध्यस्थ और पार्श्व पाया जाता है। साथ वाले वीडियो में संरचनाओं के संक्षिप्त नाम का उपयोग किया जाता है। - पीएलवी को स्पष्ट रूप से कल्पना करने के लिए मैग्नाइज करें और इसे माइक्रो-नेडल होल्डर और माइक्रोफोर्स का उपयोग करके 10-0 नायलॉन सीवन के साथ ligate करें। पंजा समय की एक जोड़ी प्रेस करने के लिए सुनिश्चित करें कि कोई पेटेंट ब्लू वी सीवन के लिए निकट गुजरता है.
नोट: लसीका पोत के आसपास वसा ट्रिमिंग आवश्यक हो सकता है. - दो दूरस्थ लसीका वाहिकाओं ligate करने के लिए चरण 4.7 दोहराएँ. पंजा कई बार प्रेस करने के लिए सुनिश्चित करें कि कोई पेटेंट ब्लू वी लिगेचर के लिए निकट गुजरता है. यदि लसीका वाहिकाओं ischiatic नस के करीब झूठ, आगे भी distally विच्छेदन की कोशिश करो.
नोट: इस उदाहरण में, यह देखा जा सकता है कि लसीका वाहिकाओं में से एक लिग्चर के कारण फट लसीका प्रवाह में बाधा. लसीका वाहिकाओं अक्सर आगे नीचे नस से विभाजित हो जाएगा. - पॉपलाइटल लिम्फ नोड निकालें.
- पॉपलाइटल लिम्फ नोड का पता लगाएँ और इसे एक्सेस करने के लिए माइक्रोसाइकोर्स के साथ एक छोटा सा छेद क्लिप करें और इसे माइक्रोफोर्स और माइक्रोसाइसेर्स के साथ निकालें।
नोट: लिम्फ नोड आसपास के वसा ऊतक के विपरीत एक चिकनी मोती की तरह सतह है. - यदि हटाऊतक एक लिम्फ नोड है, तो परीक्षण करने के लिए, इसे पानी से भरी एक टेस्ट ट्यूब में रखें।
नोट: यदि ऊतक वसा के शामिल है, ऊतक तैर जाएगा. यदि ऊतक एक लिम्फ नोड है, तो यह नीचे तक डूब जाएगा।
- पॉपलाइटल लिम्फ नोड का पता लगाएँ और इसे एक्सेस करने के लिए माइक्रोसाइकोर्स के साथ एक छोटा सा छेद क्लिप करें और इसे माइक्रोफोर्स और माइक्रोसाइसेर्स के साथ निकालें।
- वंजाय वसा पैड और लिम्फ नोड निकालें.
- वानुकरण वसा पैड को हटाने से पहले, वसा के माध्यम से चल रहे जहाजों cauterize करने के लिए एक द्विध्रुवी स्कंदक का उपयोग करें.
- माइक्रोफोर्स और माइक्रोसाइकोर्स का उपयोग करके वंजाय वसा पैड को पुन: काटें। वसा के माध्यम से चल रहे कॉटरीकृत वाहिकाओं को धीरे से क्लिप करें। फिर धीरे से कांटुआना क्षेत्र में वसा ऊतक resect.
नोट: वसा में स्थित लिम्फ नोड शायद ही कभी पेटेंट ब्लू वी द्वारा रंग का है और वसा से अंतर करने के लिए मुश्किल हो सकता है. एक टुकड़ा में वसा पैड निकाल रहा है लिम्फ नोड हटा दिया गया है यह सुनिश्चित करने के लिए सबसे अच्छा तरीका है.
- बाँझ नमकीन के साथ अच्छी तरह से पैर कुल्ला और माइक्रोस्कोप के माध्यम से पुष्टि करें कि किसी भी छोटे बाल और कणों को अच्छी तरह से घाव संदूषण और संक्रमण से बचने के लिए शल्य चिकित्सा क्षेत्र से हटा दिया गया है। सुनिश्चित करें कि कोई सक्रिय रक्तस्राव नहीं है।
- संदंश और सुई धारक का उपयोग कर के साथ एक 6-0 नायलॉन सीवन सीवन के साथ मांसपेशियों facia करने के लिए नीचे त्वचा किनारों सीवन, सतही लिम्फ प्रवाह को विवश करने के लिए 2 डिग्री 3 मिमी के एक अंतर छोड़ने.
नोट: साथ वीडियो समाप्त टांके का एक उदाहरण दिखाता है। - analgesia प्रशासन. माउस बॉडीवेट के 30 ग्राम प्रति एनेल्गेसिया के 0.1 एमएल को ड्रा करें। एक बोलस इंजेक्शन के रूप में analgesia subcutaneously इंजेक्शन इंजेक्शन इंजेक्शन इंजेक्शन इंजेक्शन।
- तुलना के लिए पोस्ट-सर्जरी के लिए माउस वजन.
- वसूली के लिए गर्म एक कैबिनेट में एक पिंजरे में माउस प्लेस.
5. पोस्टऑपरेटिव देखभाल
- पानी और भोजन विज्ञापन libitum के साथ सर्जरी के बाद ठीक करने के लिए चूहों व्यक्तिगत पिंजरों दे.
- एक बोलस subcutaneous खुराक के प्रशासन 0.02 एमएल buprenorphine 3x के दैनिक 3 दिन analgesia के लिए.
- उचित घाव भरने, दर्द और संक्रमण के लक्षण के लिए दैनिक पशु की निगरानी करें। यदि संक्रमण के लक्षण मौजूद हैं, एंटीबायोटिक मरहम का उपयोग करें।
6. पोस्ट-सर्जरी विकिरण
- सर्जरी के तीन दिन बाद, पूर्व सर्जरी विकिरण के लिए प्रक्रिया को दोहराने (कदम 1.1 डिग्री 1.4).
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Representative Results
यह कार्यविधि पहले तीन अलग-अलग प्रयोगों में उपयोग की गई है. सभी प्रयोगों के विभिन्न नेतृत्व जांचकर्ताओं जो सभी इस लेख के सह लेखक हैं द्वारा किए गए थे. सभी तीन प्रयोगों में, महान ध्यान इस प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में एक ही प्रक्रिया का पालन करने के लिए लिया गया था. सभी तीन प्रयोगों में, माध्यमिक लिम्फेडेमा एक हिंदिम्ब में प्रेरित किया गया था, जबकि अन्य हिंदलिंब एक नियंत्रण के रूप में सेवा की। सभी तीन प्रयोगों में हिंडन की मात्रा प्राथमिक परिणाम थे। चित्र 1 अध्ययन अभिकल्प को दर्शाने के लिए है।
सभी चूहों ने हिंडम की मात्रा को मापने के लिए सर्जरी के बाद सप्ताह में माइक्रो-कम्प्यूटेड टोमोग्राफी (जेडसीटी) स्कैन किया। [सीटी स्कैन एक multimodality पूर्व नैदानिक स्कैनर पर प्रदर्शन किया गया (सामग्री की तालिका) और hindlimbs की मात्रा संबद्ध सॉफ्टवेयर में क्षेत्र के हित के (आरओआई) समारोह के माध्यम से मापा गया था के रूप में पहले से वर्णित26. दूरस्थ tibiofibular संयुक्त तीन आयामी (3 डी) axonal छवियों में स्थित था एक विधि का उपयोग कर पहले27वर्णित . आरओआई दूरस्थ tibiofibular संयुक्त पर शुरू कर दिया और उस बिंदु के लिए सभी ऊतक distal शामिल थे. विश्लेषण के लिए Hounsfield रेंज -500 से 4000 के लिए सेट किया गया था.
सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर (सामग्री तालिका ) का उपयोग करके सभीआंकड़ों काविश्लेषण किया गया। Sidak के एकाधिक तुलना परीक्षण प्रेरित लिम्फेडेमा Hindlimb की मात्रा की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, नियंत्रण hindlimb के साथ. नियंत्रण Hindlimb और लिम्फेडेमा Hindlimb के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर एक पी-मूल्य के रूप में परिभाषित किया गया है;0.05.
चित्रा 1: अध्ययन डिजाइन और परिणाम माप के लिए समय अंक. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
प्रयोग 126 शामिल 32 चूहों चार के समूहों में वितरित. उद्देश्यों में से एक विकिरण के कई अलग अलग खुराक का अध्ययन और सबसे बेहतर खुराक खोजने के लिए किया गया था, गंभीर रुग्णता के कारण के बिना स्थायी लिम्फेडेमा प्रेरित करने के लिए. समूह है कि 10 Gy विकिरण की दो खुराक दी गई थी चार चूहों शामिल थे. चित्रा 2 से पता चलता है कि लिम्फेडेमा की एक सुसंगत राज्य सभी 8 सप्ताह में प्राप्त किया गया था. तालिका 1 से पता चलता है कि वहाँ lymphedema hindlimb और नियंत्रण Hindlimb के बीच की मात्रा में एक महत्वपूर्ण अंतर था सप्ताह में 1, 7, और 8. जबकि प्रेरित लिम्फेडेमा की एक सुसंगत राज्य हासिल किया गया था, वहाँ सभी 8 सप्ताह के दौरान hindlimbs के बीच एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर नहीं था. यह परिणाम दो अन्य प्रयोगों से अलग है और चार चूहों के अपेक्षाकृत छोटे नमूना आकार के कारण समझाया जा सकता है. मापनकी की संख्या में वृद्धि से अध्ययन की शक्ति में वृद्धि होगी और यदि अंतर28है तो अंतर का पता लगाने की संभावना .
चित्र 2: माध्य हिंदखंड आयतन: प्रयोग 1। समूह है कि 10 Gy विकिरण की दो खुराक दी गई थी से 4 चूहों के माप इस आंकड़े में शामिल हैं. इस ग्राफ में सर्जरी के बाद 8 सप्ताह में मिमी3 में मतलब hindlimb मात्रा से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. त्रुटि पट्टियाँ मानक विचलन (SD) का प्रतिनिधित्व करती हैं. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| सप्ताह | लिम 3 में लसीका-मात्रा (द र् 4) | मिमी3 में नियंत्रण मात्रा (द र् 4) | P-मान | 95% विश्वास अंतराल |
| 1 | 218.53 ] 9.3 | 136.78 ] 2.48 | 0.002 | 53.77$109.73 |
| 2 | 202.25 ] 10.24 | 141.88 ] 8.02 | 0.066 | (-6.53)$127.28 |
| 3 | 193.28 ] 10.80 | 141.20 $ 6.80 | 0.060 | (-3.7)]107.85 |
| 4 | 194.95 ] 21.05 | 141.50 ] 8.03 | 0.224 | (-41.85)]148.75 |
| 5 | 193.75 ] 7.07 | 141.70 $ 8.60 | 0.051 | (-0.27)$104.37 |
| 6 | 193.23 ] 3.42 | 141.78 ] 10.29 | 0.054 | (-1.56)$104.46 |
| 7 | 194.95 ] 7.26 | 143.23 ] 8.90 | 0.050 | 0.17$103.28 |
| 8 | 195.8 $ 9.65 | 152.18 ] 5.81 | 0.009 | 19.88$67.38 |
तालिका 1: Sidak के एकाधिक तुलना परीक्षण: प्रयोग 1. इस तालिका में प्रेरित लिम्फेडेमा hindlimbs और नियंत्रण hindlimbs सर्जरी के बाद 8 सप्ताह के दौरान मतलब मात्रा के बीच सांख्यिकीय तुलना से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. मान के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं: मतलब - मिमी3में एसडी . P-value; 0.05 नियंत्रण hindlimb और लिम्फेडेमा हिंदलिम्ब के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर के रूप में माना जाता है। द (टिप्पणियों की संख्या) र् 4।
प्रयोग 2 45 चूहों शामिल थे. 15 चूहों नियंत्रण के रूप में सेवा की और नमकीन इंजेक्शन दिया गया. नियंत्रण प्रतिनिधि परिणाम के रूप में उपयोग किया जाता है के रूप में हम मानते हैं कि नमकीन इंजेक्शन प्रेरित लिम्फेडेमा की मात्रा पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा. चित्र 3 से पता चलता है कि लिम्फेडेमा प्रयोग 1 की तुलना में कम स्थिर था। इसके अतिरिक्त, 8 सप्ताह के दौरान नियंत्रण hindlimbs की मात्रा में वृद्धि हुई. इससे सारणी 2में प्रस्तुत सापेक्ष अंतर कम हो जाता है। यह अनुमान लगाया गया है कि चूहों उनके गैर संचालित Hindlimb अधिक का उपयोग करें, सर्जरी के बाद सप्ताह में, और यह अतिवृद्धि की ओर जाता है और गैर संचालित Hindlimb के अंग मात्रा में वृद्धि. सबसे महत्वपूर्ण बात, तालिका 3 से पता चलता है कि वहाँ lymphedema hindlimb और सर्जरी के बाद सभी 8 सप्ताह के दौरान नियंत्रण hindlimb के बीच सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर है. चूहों की उच्च संख्या साबित होता है कि इस प्रक्रिया को कम से कम 8 सप्ताह के लिए सांख्यिकीय महत्वपूर्ण लिम्फेडेमा प्रेरित कर सकते हैं.
चित्र 3: माध्य हिंदखंड आयतन: प्रयोग 2। नियंत्रण समूह से 15 चूहों के मापन इस आंकड़े में शामिल हैं. इस ग्राफ में सर्जरी के बाद 8 सप्ताह में मिमी3 में मतलब hindlimb मात्रा से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. SD का प्रतिनिधित्व करने वाले त्रुटि पट्टियाँ इस आकृति का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| प्रयोग 1 | प्रयोग 2 | प्रयोग 3 | प्रयोग 1, 2 और 3 संयुक्त | |||||
| सप्ताह | निरपेक्ष अंतर (मिमी3) | सापेक्ष अंतर (%) | निरपेक्ष अंतर (मिमी3) | सापेक्ष अंतर (%) | निरपेक्ष अंतर (मिमी3) | सापेक्ष अंतर (%) | निरपेक्ष अंतर (मिमी3) | सापेक्ष अंतर (%) |
| 1 | 81.75 ] 7.20 | 0.60 $ 0.04 | 104.34 ] 25.96 | 0.76 ] 0.23 | 85.20 $ 35.05 | 0.64 ] 0.27 | 94.02 ] 29.57 | 0.69 ] 0.24 |
| 2 | 60.38 ] 17.21 | 0.43 ] 0.14 | 107.12 ] 44.33 | 0.79 ] 0.33 | 85.63 ] 37.94 | 0.63 ] 0.29 | 92.77 ] 41.68 | 0.68 ] 0.31 |
| 3 | 52.08 ] 14.35 | 0.37 ] 0.11 | 78.77 ] 39.45 | 0.57 ] 0.28 | 74.67 ] 49.57 | 0.54 ] 0.38 | 73.74 ] 41.51 | 0.53 ] 0.31 |
| 4 | 53.45 ] 24.51 | 0.38 ] 0.19 | 50.67 ] 29.94 | 0.36 ] 0.21 | 50.62 ] 16.35 | 0.37 ] 0.11 | 51.01 $ 24.03 | 0.37 ] 0.17 |
| 5 | 52.05 ] 13.46 | 0.37 ] 0.11 | 32.74 ] 24.66 | ०.२२ ] 0.17 | 42.67 ] 11.81 | 0.31 ] 0.07 | 39.08 ] 20.02 | 0.27 ] 0.14 |
| 6 | 51.45 ] 13.63 | 0.36 ] 0.11 | 26.80 ] 22.35 | 0.18 ] 0.14 | 32.86 ] 10.90 | ०.२२ ] 0.08 | 32.32 ] 18.96 | ०.२१ ] 0.13 |
| 7 | 51.73 ] 13.26 | 0.36 ] 0.11 | 19.04 ] 17.22 | 0.12 ] 0.11 | - | - | 25.92 ] 21.15 | 0.17 ] 0.15 |
| 8 | 43.63 ] 6.11 | 0.29 ] 0.04 | 15.15 ] 11.70 | 0.10 $ 0.08 | - | - | 21.15 ] 15.96 | 0.14 ] 0.10 |
तालिका 2: निरपेक्ष और सापेक्ष अंतर. इस तालिका में लिम्फेडेमा- और नियंत्रण हिंदलिंब्स के बीच मात्रा में पूर्ण अंतर को दर्शाता है - मिमी3 में एसडी और सापेक्ष अंतर - प्रतिशत में एसडी।
| सप्ताह | लिम 3 में लसीका-मात्रा (द ] 15) | मिमी3 में नियंत्रण मात्रा (द ] 15) |
P-मान | 95% विश्वास अंतराल |
| 1 | 241.82 ] 35.69 | 137.48 ] 21.54 | (lt;0.001 | 82.21$126.47 |
| 2 | 242.41 ] 45.13 | 135.29 ] 5.81 | (lt;0.001 | 69.33]144.89 |
| 3 | 216.85 ] 41.47 | 138.08 ] 5.31 | (lt;0.001 | 45.15$112.39 |
| 4 | 193.10 ] 31.27 | 142.43 ] 5.29 | (lt;0.001 | 25.15$76.18 |
| 5 | 180.03 ] 26.03 | 147.29 ] 6.45 | 0.002 | 11.72$53.76 |
| 6 | 179.89 $ 25.00 | 153.09 ] 6.56 | 0.004 | 7.74$45.85 |
| 7 | 176.45 ] 19.77 | 157.41 ] 7.49 | 0.008 | 4.35]33.71 |
| 8 | 166.97 ] 11.8 | 151.82 ] 10.07 | 0.002 | 5.18$25.12 |
तालिका 3: Sidak के एकाधिक तुलना परीक्षण: प्रयोग 2. इस तालिका में प्रेरित लिम्फेडेमा hindlimbs और नियंत्रण hindlimbs सर्जरी के बाद 8 सप्ताह में मतलब मात्रा के बीच सांख्यिकीय तुलना से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. मान के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं: मतलब - मिमी3में एसडी . P-value; 0.05 नियंत्रण hindlimb और लिम्फेडेमा हिंदलिम्ब के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर के रूप में माना जाता है। द (टिप्पणियों की संख्या) र् 15।
प्रयोग 3 36 चूहों शामिल थे. 12 चूहों नियंत्रण के रूप में सेवा की और नमकीन इंजेक्शन दिया गया. नियंत्रण प्रतिनिधि परिणाम के रूप में उपयोग किया जाता है के रूप में हम मानते हैं कि नमकीन इंजेक्शन प्रेरित लिम्फेडेमा की मात्रा पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा. इस प्रयोग में चूहों के hindlimb मात्रा के बजाय 6 सप्ताह के लिए मापा गया 8. प्रयोग केवल 6 सप्ताह तक चला जब प्रयोग किया गया था सैन्य कठिनाइयों के कारण. चित्र 4 प्रयोग 2 की तुलना में अधिक सुसंगत लिम्फेडेमा दर्शाता है। तालिका 4 से पता चलता है कि वहाँ सांख्यिकीय महत्वपूर्ण लिम्फेडेमा सर्जरी के बाद 6 सप्ताह में है.
चित्र 4: माध्य हिंदखंड आयतन: प्रयोग 3। नियंत्रण समूह से 12 चूहों के माप इस आंकड़े में शामिल हैं. इस ग्राफ में सर्जरी के बाद 6 सप्ताह में मिमी3 में मतलब hindlimb मात्रा से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. SD का प्रतिनिधित्व करने वाले त्रुटि पट्टियाँ इस आकृति का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| सप्ताह | लिम 3 में लसीका-मात्रा (द र् 12) | मिमी3 में नियंत्रण मात्रा (द र् 12) | P-मान | 95% विश्वास अंतराल |
| 1 | 219.06 ] 35.00 | 133.86 ] 10.02 | (lt;0.001 | 51.66$118.74 |
| 2 | 220.90 ] 36.98 | 135.27 ] 5.89 | (lt;0.001 | 49.33]121.94 |
| 3 | 211.74 ] 47.30 | 137.07 ] 7.56 | 0.002 | 27.24$122.11 |
| 4 | 186.09 ] 20.36 | 135.47 ] 5.70 | (lt;0.001 | 34.98$66.27 |
| 5 | 182.35 ] 18.25 | 139.68 ] 7.45 | (lt;0.001 | 31.37$53.98 |
| 6 | 183.44 ] 12.11 | 150.58 ] 8.37 | (lt;0.001 | 22.42 $43.29 |
तालिका 4: Sidak के एकाधिक तुलना परीक्षण: प्रयोग 3. इस तालिका में प्रेरित लिम्फेडेमा hindlimbs और नियंत्रण hindlimbs सर्जरी के बाद 6 सप्ताह में मतलब मात्रा के बीच सांख्यिकीय तुलना से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. मान के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं: मतलब - मिमी3में एसडी . P-value; 0.05 नियंत्रण hindlimb और लिम्फेडेमा हिंदलिम्ब के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर के रूप में माना जाता है। द (टिप्पणियों की संख्या) र् 12.
चित्र 5 और सारणी 5 संयुक्त तीन प्रयोगों के माध्य हिंदिम आयतन को दर्शाता है। तालिका 5 से पता चलता है कि इस प्रक्रिया के उपयोग सांख्यिकीय महत्वपूर्ण लिम्फेडेमा में परिणाम कम से कम 8 सप्ताह तक चलने. पहले 6 सप्ताह से डेटा, प्रयोगों से 31 चूहों की संयुक्त माप कर रहे हैं 1, 2 और 3. सप्ताह में 7 "8 हम केवल प्रयोगों से डेटा था 1 और 2 19 चूहों से संयुक्त माप में जिसके परिणामस्वरूप.
चित्र 5: संयुक्त माध्य हिंदखंड आयतन: प्रयोग 1, 2 और 3. तैंतीस चूहों सर्जरी के बाद पहले 6 सप्ताह में शामिल थे और 19 चूहों अगले 2 सप्ताह में शामिल थे. इस ग्राफ में सर्जरी के बाद 8 सप्ताह में मिमी3 में मतलब hindlimb मात्रा से पता चलता है. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. SD का प्रतिनिधित्व करने वाले त्रुटि पट्टियाँ इस आकृति का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| सप्ताह | लिम 3 में लिम्फेडेमा मात्रा (Week 1 "6 n ] 31) (Week 7 "8 n ] 19) |
मिमी3 में नियंत्रण मात्रा (Week 1 "6 n ] 31) (Week 7 "8 n ] 19) |
P-मान | 95% विश्वास अंतराल |
| 1 | 230.00 $ 34.46 | 135.99 ] 16.03 | (lt;0.001 | 78.19$109.84 |
| 2 | 228.90 $ 40.91 | 136.13 ] 6.32 | (lt;0.001 | 70.47$115.07 |
| 3 | 211.83 ] 41.15 | 138.09 ] 6.36 | (lt;0.001 | 51.53 ]95.95 |
| 4 | 190.63 $ 25.81 | 139.62 ] 6.54 | (lt;0.001 | 38.15$63.87 |
| 5 | 182.70 $ 21.52 | 143.62 ] 7.79 | (lt;0.001 | 28.36$49.79 |
| 6 | 182.98 ] 19.11 | 150.66 ] 8.36 | (lt;0.001 | 22.18$42.47 |
| 7 | 180.34 ] 19.31 | 154.43 ] 9.60 | (lt;0.001 | 11.61]40.22 |
| 8 | 173.04 ] 16.42 | 151.89 ] 9.19 | (lt;0.001 | 10.35]31.94 |
तालिका 5: Sidak के एकाधिक तुलना परीक्षण: प्रयोग 1, 2 और 3 संयुक्त. इस तालिका में प्रेरित लिम्फेडेमा hindlimbs के मतलब मात्रा के बीच सांख्यिकीय तुलना से पता चलता है और नियंत्रण hindlimbs 31 चूहों के पहले 6 सप्ताह में सर्जरी के बाद और अगले 2 सप्ताह में 19 चूहों. सभी चूहों की एक खुराक प्राप्त 10 Gy विकिरण पूर्व और बाद सर्जरी. मान के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं: मतलब - मिमी3में एसडी . P-value; 0.05 नियंत्रण hindlimb और लिम्फेडेमा हिंदलिम्ब के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर के रूप में माना जाता है। द (टिप्पणियों की संख्या) ] 31.
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Discussion
इस प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण चरण हैं। सबसे पहले, यह महत्वपूर्ण है कि शोधकर्ताओं ने सुरक्षा सावधानियों ले जब रेडियोधर्मिता के साथ काम कर रहा है. दूसरे, इस प्रोटोकॉल के सर्जिकल भाग के दौरान, माउस को एनेस्थेट ीकृत कर दिया गया है और अनावश्यक ब्रेक के बिना इसे समाप्त करने के बाद प्रक्रिया शुरू करना महत्वपूर्ण है। यह जानवर के लिए एक जरूरत से ज्यादा लंबी शल्य चिकित्सा अवधि से बचने के लिए और रोकने के लिए महत्वपूर्ण है कि संज्ञाहरण सर्जरी के दौरान प्रभाव खो देता है. यह केवल संवेदनाहारी के एक बोलस इंजेक्शन प्रशासन और एक बैठक में शल्य प्रक्रिया को पूरा करने के लिए सिफारिश की है। यह भी एक महत्वपूर्ण कदम है, बहुत ज्यादा पेटेंट ब्लू वी प्रशासन के लिए नहीं, अतिरिक्त पेटेंट ब्लू वी के रूप में लसीका वाहिकाओं के आसपास के ऊतकों को रंग देगा. यदि आसपास के ऊतक फीका हो जाता है यह लगभग लसीका वाहिकाओं कल्पना करने के लिए असंभव हो सकता है और इस प्रक्रिया समझौता. यहां तक कि अगर एक लसीका वाहिकाओं कल्पना करने के लिए प्रबंधन करता है, फीका ऊतक यह आकलन करने के लिए कि पेटेंट ब्लू वी लिगेचर के लिए निकट से गुजरता है या नहीं मुश्किल कर देगा. यह समस्याग्रस्त है क्योंकि ऑपरेटर यकीन है कि रखा ligatures लसीका प्रवाह constricting रहे हैं होना चाहिए, यह सुनिश्चित करने के लिए कि प्रक्रिया सफल हो जाएगा. घाव को बंद करते समय 2 डिग्री 3 मिमी के अंतराल को छोड़ना भी महत्वपूर्ण है। एक अस्थायी त्वचा अंतर के रूप में अक्सर मानव घाव भरने की प्रक्रिया29नकल करने की जरूरत है .
इस विधि की सीमाएं हैं कि यह एक समय लेने वाली प्रक्रिया है कि एक माइक्रोस्कोप और पिछले microsurgical प्रशिक्षण के लिए उपयोग की आवश्यकता है. जब इस प्रोटोकॉल के सर्जिकल भाग प्रदर्शन, यह शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के बीच में समय की योजना के लिए महत्वपूर्ण है. समय की एक बहुत जानवर एनेस्थेटाइज़ किया जा करने के लिए इंतजार कर में चला जाता है, hindlimb हजामत बनाने और आम तौर पर प्रत्येक शल्य प्रक्रिया के लिए तैयार करते हैं। इसलिए, पहले से आवास और संवेदनाहारी तैयार करने की सिफारिश की जाती है। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि यह निश्चित किया जाना चाहिए कि पुरानी लिम्फेडेमा को प्रेरित किया गया है, हिस्टोपैथोलॉजी का विश्लेषण किया जाना चाहिए। हमने इस लेख में हिस्टोपैथोलॉजी को शामिल नहीं किया है, जो एक सीमा है। हिस्टोपैथोलॉजी के बिना इस तथ्य का समर्थन किया गया है कि हिस्टोलॉजिक परिवर्तन लसीका वाहिकाओं के साथ हुआ है, हिंडम्स में मात्रा में परिवर्तन को केवल एडीमा के रूप में वर्णित किया जा सकता है। लेख है कि प्रयोग से चार चूहों पर सभी डेटा शामिल हैं 126 हिस्टोपैथोलॉजी भी शामिल है और पता चलता है कि इस तकनीक का उपयोग कर हिस्टोपैथोलॉजी के लिए महत्वपूर्ण परिवर्तन किए गए थे. लेख भी लसीका इमेजिंग शामिल हैं. एक ही प्रक्रिया प्रयोग में चूहों पर इस्तेमाल किया गया था 2 और 3, लेकिन हिस्टोपैथोलॉजी लिम्फेडेमा Hindlimb और इन प्रयोगों में नियंत्रण Hindlimb के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर दिखाया. हिस्टोपैथोलॉजी सहित आगे के अध्ययन इस मॉडल के लिए स्पष्ट है कि क्या लिम्फेडेमा एक हिस्टोलॉजिकल स्तर पर प्रेरित है की जरूरत है. प्रयोग 2 और 3 अभी तक प्रकाशित नहीं किया गया है और इसलिए हम उन्हें उल्लेख नहीं कर सकते.
जबकि hindlimb मात्रा को मापने के लिए $CT स्कैन का उपयोग कर पानी विस्थापन विधि या परिधीय माप का उपयोग करने की तुलना में अधिक उद्देश्य होने के लिए तर्क दिया जा सकता है, यह अभी भी अपनी सीमाएं हैं. मापने तकनीक महंगा है, समय लेने वाली है और एक $CT-स्कैनर और सॉफ्टवेयर का विश्लेषण करने के लिए उपयोग की आवश्यकता है.
सामान्य में कृंतक लिम्फेडेमा मॉडल के साथ सबसे बड़ी चुनौतियों में से एक, सहज लिम्फेडेमा संकल्प किया गया है, जब तक अत्यधिक विकिरण25प्रदर्शन किया गया था. जब इस मॉडल के विकास, हम विकिरण के कई अलग अलग खुराक का परीक्षण करने के लिए एक खुराक है कि गंभीर रुग्णता के कारण के बिना स्थायी lymphedema प्रेरित होगा खोजने के लिए26. पहले, लिम्फेडेमा मॉडल लिम्फेडेमा प्रेरण या परिणाम मूल्यांकन के तरीकों में मानकीकृत नहीं किया गया है। Oashi एटअल. 20 30 Gy विकिरण की एक एकल खुराक का इस्तेमाल किया, और तीन अलग अलग बिंदुओं पर प्रत्येक लसीका पोत ligated. उस अध्ययन में, शल्य चिकित्सा प्रक्रिया 90 मिनट के लिए प्रदर्शन लिया. हालांकि इस लेख में प्रस्तुत विधि समय लेने वाली माना जा सकता है, प्रक्रिया के शल्य पार्ट अभी भी लगभग दो बार के रूप में तेजी से Oashi एट अल द्वारा प्रस्तुत विधि के रूप में किया जा सकताहै. वे भी 6 महीने की एक अनुवर्ती अवधि है, जो काफी इस लेख में प्रस्तुत अध्ययन के किसी भी तुलना में अब है था. हालांकि, वे केवल एक माउस शामिल हैं और वे मैन्युअल रूप से अंग परिधि मापा सूजन का आकलन करने के लिए, जबकि इस लेख में प्रस्तुत मात्रा पर मापा गया था 31 चूहों का उपयोग कर $CT स्कैन और 3 डी विश्लेषण सॉफ्टवेयर. कोमात्सु एट अल30 एक बिजली चाकू का उपयोग कर वंक्ुआइनल लिम्फ नोड्स और जुड़े परिधीय लिम्फ वाहिकाओं और वसा ऊतक हटा दिया। एक बिजली के चाकू का उपयोग करना एक सरल तरीका है जो microsurgical प्रशिक्षण की आवश्यकता नहीं है हो सकता है, लेकिन प्रेरित edema दिन के बाद हल 4 जबकि इस लेख में प्रस्तुत विधि लगातार लिम्फेडेमा कम से कम 8 सप्ताह तक चलने प्रदान करता है.
इस प्रोटोकॉल उम्मीद शोधकर्ताओं सीमाओं और संशोधित लिम्फेडेमा मॉडल के लाभ पर विचार करने के लिए सक्षम हो जाएगा. प्रोटोकॉल भी सफलतापूर्वक मॉडल को दोहराने के लिए शोधकर्ताओं की सहायता करनी चाहिए. विधि भविष्य अवलोकन और हस्तक्षेप अध्ययन में इस्तेमाल किया जा सकता है लिम्फेडेमा और अनुसंधान उपन्यास उपचार विकल्पों के pathophysiology समझने के लिए. भविष्य के अध्ययनों में, यह भी एक अनुवर्ती से अधिक समय के लिए दिलचस्प होगा 8 सप्ताह का निरीक्षण करने के लिए बस कितनी देर तक प्रेरित लिम्फेडेमा रहता है. यह भी चूहों पूर्व और बाद सर्जरी के अधिक लक्षित विकिरण प्रदर्शन के प्रभाव का निरीक्षण करने के लिए दिलचस्प होगा। यह एक सीटी स्कैन करने और एक लक्ष्य वॉल्यूम की योजना बना कर किया जा सकता है। भविष्य के अध्ययनों में, इस मॉडल को फ्लोरोसेंट निर्देशित लसीका इमेजिंग, पेरोमेट्री या बायोमिपेडेंस अध्ययन द्वारा भी समर्थित किया जा सकता है। इस विधि सांख्यिकीय महत्वपूर्ण लिम्फेडेमा कम से कम 8 सप्ताह तक चलने प्रदान करता है, जो विभिन्न नेतृत्व जांचकर्ताओं द्वारा तीन अलग-अलग प्रयोगों में सीटी volumetric के माध्यम से सीधे मापा गया है.
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Disclosures
लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
लेखक पीटर Bollen, माइक्रोस्कोप के माध्यम से देखा फुटेज रिकॉर्ड करने के लिए आवश्यक उपकरण उधार देने के लिए जैव चिकित्सा प्रयोगशाला के प्रमुख धन्यवाद.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10-0 Nylon suture | S&T | 12051-10 | |
| 6-0 Nylon suture - Dafilon | B Braun | C0933112 | |
| Coagulator - ICC 50 | ERBE | ||
| Cotton tipped applicators | Yibon medical co | ||
| Dissecting forceps | Lawton | 09-0190 | |
| Elastic retractors | Odense University Hospital | ||
| Electrical clipper | Aesculap | GT420 | |
| Fentanyl 0,315 mg/ml | Matrix | ||
| Heating pad - PhysioSuite | Kent Scientific Corp. | ||
| Isoflurane 1000mg Attane | Scan Vet | ||
| Isoflurane vaporizer - PPV | Penlon | ||
| Micro jewler forceps | Lawton | 1405-05 | |
| Micro Needle holder | Lawton | 25679-14 | |
| Micro scissors | Lawton | 10128-15 | |
| Micro tying forceps | Lawton | 43953-10 | |
| Microfine U-40 syringe 0,5ml | BD | 328821 | |
| Microlance syringe 25g | BD | ||
| Microlance syringe 27g | BD | ||
| Midazolam 5 mg/ml (hameln) | Matrix | ||
| Needle holder - Circle wood | Lawton | 08-0065 | |
| Non woven swabs | Selefa | ||
| Opmi pico microscope F170 | Zeiss | ||
| Patent blue V - 25 mg/ml | Guerbet | ||
| Scissors - Joseph | BD | RH1630 | |
| Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner | Siemens pre-clinical solutions | ||
| Source of radiation - D3100 | Gulmay | ||
| Stata Statistical Software: Release 15 | StataCorp LLC | ||
| Temgesic - 0,2 mg | Indivior | ||
| Vet eye ointment - viscotears | Bausch & Lomb |
References
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