Summary
Detta protokoll visar korrekt och reproducerbar mätning av syreförbrukning i icke-mänskliga primater pankreasöar. Den holme lastning tekniker och beläggning av mikroplattan ger en ram för effektiv mätning av andning i andra typer av odlade spheroids.
Abstract
Mätningen av syreförbrukning i sfäroid kluster av celler, såsom ex vivo pankreasöar, har historiskt varit utmanande. Vi visar mätning av ös syreförbrukning med hjälp av en 96-brunn mikroplatta avsedd för mätning av syreförbrukning i spheroids. I denna analys, sfäroid mikroplattor är belagda med en cell och vävnad lim på dagen före analysen. Vi använder en liten volym av limlösning för att uppmuntra Holmen anslutning till endast botten av brunnen. På dagen för analysen, 15 öar lastas direkt i basen av varje brunn med hjälp av en teknik som garanterar optimal positionering av holkar och noggrann mätning av syreförbrukning. Olika aspekter av mitokondriell andning sonderade farmakologiskt i icke-mänskliga primater öar, inklusive ATP-beroende andning, maximal andning, och Proton läcka. Denna metod möjliggör konsekventa, reproducerbara resultat med endast ett litet antal holkar per brunn. Det kan teoretiskt tillämpas på alla odlade spheroids av liknande storlek.
Introduction
För att bibehålla normala blodglukosnivåer, bukspottskörteln β-cellen måste känna förhöjning av glukos och utsöndra insulin i enlighet därmed. Kopplingen av insulinsekretion med glukosnivåer är direkt kopplad till glukosmetabolismen och produktionen av ATP genom mitokondriell oxidativ fosforylering. Således, mitokonan spela en kritisk roll i stimulans-sekretion koppling1. Bedömning av β-cells mitokondriefunktion kan avslöja defekter som leder till försämrad insulinsekretion. Utsöndringen av glukagon av α-celler i bukspottskörteln är också nära knuten till mitokondriell funktion2. Även om förevigade ö-cellinjer har visat sig användbara för vissa typer av analyser, fysiologin i dessa celler inte exakt recapitulate hela Holmen funktion, vilket illustreras av potentiering av insulinsekretion av glukagon3,4 och hämning av glukagon sekretion av insulin/somatostatin5,6 i intakt öar. Detta visar på behovet av att mäta syreförbrukningen med hjälp av hela, intakt öar.
Tekniker för mätning av ö-cell respirometri har utvecklats med tiden, från användning av syre-känsligt fluorescerande färgämnen7 till solid-state sensorer som direkt mäter syreförbrukning8. Ursprungligen avsedd för monolayer, anhängare celler, vanligen används cellkultur plattan system har visat sig vara ineffektiva för pankreasöar. Eftersom kobbar inte naturligt följa brunnar, de är benägna att pressas till periferin av kulturen väl resulterar i felaktig mätning av syreförbrukning9. För att bekämpa detta problem, specialiserade 24-well tallrikar med en central depression som kunde innehålla holkar utvecklades9. Men den 24-well plattan systemet begränsades av det stora antalet öar som krävs (50-80 per brunn) och antalet villkor som skulle kunna testas samtidigt10. Den senaste utvecklingen av 96-väl mikroplattor som utformats speciellt för extracellulär Flux analys i spheroids har övervinna dessa hinder, vilket möjliggör mätning av ö respirometri med 20 eller färre holkar per brunn10.
Här demonstrerar vi användandet av detta system för att mäta syreförbrukning i skär från japansk makak (Macaca fuscata), en djurmodell med liknande ö-biologi till människor11,12. I detta protokoll analyseras 15 makak-öar per brunn. 15 öar per brunn producerade i våra händer högre syreförbrukning Vidbaslinjen än färre öar, med robust aktivering och förtryck av andning som svar på farmakologisk manipulation. Vi belyser stegen för att förbereda för analysen, en effektiv metod för konsekvent lastning av öar i mitten av varje brunn, och gemensamma utmaningar när de utför denna analys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. beredning av mikroplatta och sensor patron på dagen innan analysen körs
Islets isolerades från tre år gamla japanska makaker som tidigare beskrivits13. Denna metod är mycket lik den som används för att isolera mänskliga öar från kadaver givare, men skiljer sig från möss, där pancreata ofta uppblåsta med kollagenase lösning medan djuret är under sedering och före avlägsnande av organ. Ö-hämtning utfördes i enlighet med riktlinjerna från den institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) i Oregon National Primate Research Center (ONPRC) och Oregon Health and Science University och godkändes av ONPRC IACUC. Den ONPRC följer av lagen om djurens välfärd och förordningar som upprätthålls av Förenta staternas jordbruksdepartement (USDA) och Public Health Service policy om Human Care och användning av försöksdjur i enlighet med handledning för vård och användning av försöksdjur som publicerats av National Institutes of Health.
- Beredning av sfäroid Microplate
- Bered 3 mL 0,1 M lösning av natriumbikarbonat. Filter sterilisera lösningen. Vi utnyttjade ett 0,45 μm filter (tabell över material).
- I en cellkultur huva, tillsätt 200 μL av cell-och vävnadslim (tabell över material) till 2,8 ml 0,1 m natriumbikarbonat. Tillsätt sedan 20 μl av denna lösning till botten av varje brunn på den 96-brunn sfäroid mikroplattan (tabell över material). Se till att luftbubblor avlägsnas från Pipettera spets och endast botten av plattan är täckt. Beläggning av mikroplattan hindrar skär från att flytta upp sidorna av brunnarna när läkemedel tillsätts och blandas in i brunnen under analysen.
Anmärkning: det är bara nödvändigt att belägga så många brunnar som kommer att användas för kobbar när analysen körs. Om endast ett fåtal brunnar kommer att användas, kan den celladhesiva lösningen skalas ner på lämpligt sätt. Det celllim som används i analysen är en formulerad proteinlösning som utvinns ur marin musslan. Alternativt kan mikroplattbrunnar beläggas med 20 μL 100 μg/mL Poly-D-lysin. - Inkubera plattan i en 37 ° c, icke-CO2 inkubator i en timme.
- I en steril miljö, aspirera cell adhesiv lösning från plattan. Tvätta varje brunn två gånger med 400 μL av 37 ° c sterilt vatten med ett flerkanaligt pipet. Låt lufttorka.
- Efter 30-40 minuter, täck plattan och förvara över natten vid 4 ° c.
- Hydrering av sensor patronen
- I en steril miljö, öppna sensor patron paketet (tabell över material) och ta bort innehållet. Placera sensor patronen upp och ned bredvid verktygs plattan.
- Fyll varje brunn på bruks plattan med 200 μL sterilt vatten och sänk tillbaka sensor patronen i bruks plattan. Placera monterad sensor patron och bruks plåt i en 37 ° c, icke-CO2 inkubator över natten.
- Beredning av Kalibrant
- Aliquot 25 mL kalibrant (tabell över material) i ett 50 ml koniskt rör. Placera röret i en 37 ° c, icke-CO2 inkubator över natten.
2. protokoll för förberedelse av media, lastning av kobbar och lastning av sensor patron på provnings dagen
- Beredning av media
- Till 48,5 mL basmedia (minimal DMEM, se tabell över material), tillsätt 500 μl vardera av 1 mm natriumpyruvat och 2 mm glutamin. Dessutom, tillsätt 496 μL av 200 mg/ml glukos (slutlig koncentration av glukos i media är 5,5 mM).
Anmärkning: glukos koncentrationen vid baseline hölls konstant för dessa experiment. Men glukos kan också användas för att stimulera andning utöver de farmakologiska manipulationer beskrivs slag10. - Kontrollera att pH-värdet är 7,4 +/-0,1, justera vid behov.
- Till 48,5 mL basmedia (minimal DMEM, se tabell över material), tillsätt 500 μl vardera av 1 mm natriumpyruvat och 2 mm glutamin. Dessutom, tillsätt 496 μL av 200 mg/ml glukos (slutlig koncentration av glukos i media är 5,5 mM).
- Beredning av sensor patron
- Ta ut sensor patronen ur inkubatorn, ta bort locket till sensor kassetten och dumpa ut vatten från brunnar. Placera 200 mL förvärmd kalibrant i varje brunn och Byt ut locket till sensor kassetten.
- Placera sensor patronen tillbaka i inkubator i ca 1 timme (tills det behövs).
- Beredning av läkemedel för mitokondriell stress analys
- Öppna stresstest satsen (tabell över material) och ta bort innehållet. Gör upp lager och arbetslösningar för Oligomycin, Karbonylcyanid-4-(trifluorometoxi) phenylhydrazone (FCCP) och Rotenon/Antimycin A (AA) enligt följande.
- Oligomycin: Tillsätt 630 μL av monterade media till röret för att göra 100 μM lager. Späd sedan till 45 μM med media för att få port koncentrationen (slutlig brunn koncentration efter injektion kommer att vara 4,5 μM)
- FCCP: Tillsätt 720 μL sammansatt media till röret för att göra 100 μM lager. Späd till 10 μM med media för att få port koncentrationen (slutlig brunn koncentration kommer att vara 1 μM)
Anmärkning: BSA och/eller FBS bör inte tillsättas till media, eftersom detta kan påverka effekten av mitokondriella uncouplers14. - Rotenon/AA: Tillsätt 540 μL av monterade media till röret för att göra 50 μM lager. Späd till 25 μM med media för att få port koncentrationen (slutlig brunn koncentration kommer att vara 2,5 μM)
Anmärkningar: ovanstående koncentrationer har gett konsekventa resultat i våra händer. Ytterligare FCCP ledde till ingen ytterligare ökning av andningen. Emellertid, läkemedelskoncentrationer kan behöva justeras beroende på Holme storlek, och särskilt med öar från olika arter eller icke-Holmen spheroids. För referens, den genomsnittliga diametern på en icke-mänsklig primater Holmen är ca 150 μm15.
- Öppna stresstest satsen (tabell över material) och ta bort innehållet. Gör upp lager och arbetslösningar för Oligomycin, Karbonylcyanid-4-(trifluorometoxi) phenylhydrazone (FCCP) och Rotenon/Antimycin A (AA) enligt följande.
- Beredning av spheroidplåt och överföring av skär
- Hand-Pick pankreasöar i en 60 mm x 15 mm cellkultur maträtt som innehåller sammansatta media för att få nära 100% renhet.
Observera: holkar bör visas rundade, med en klart definierad periferi, och förefaller tätare än exokrina vävnads föroreningar. Undvik öar som verkar skadade eller slitna. I detta experiment var Islet storlek inte direkt mätt, även om vi försökte plocka kobbar av ungefär likvärdig storlek för varje brunn och prov. - Ladda varje brunn av sfäroid mikrotiterplattor med 175 μl sammansatt media med hjälp av en multikanalpipett.
- Med hjälp av en P20 pipett inställd på 15 μL, aspirera 15 öar från cellkultur skålen. Islets bör vara synlig i pipettspetsen till blotta ögat.
- Att överföra öar till sfäroid Microplate, lägre pipettspetsen till botten av brunnen, knappt lyfta upp, och sakta pipett ut en mycket liten volym (~ 5 μL). Kontrollera att alla öar har lämnat pipettspetsen. Varje brunn bör få 15 öar. Kontrollera ibland sfäroid mikroplatta under mikroskop för att kontrollera att holarna är på botten av varje brunn snarare än fastnat på sidorna.
Obs: Undvik att lasta hörn brunnarna med skär. Syre och pH flöde ur plasten kan inträffa under analysen, och detta förvärras i de fyra hörn brunnar. - När alla öar har överförts till sfäroid mikrotiterplattor, inkubera mikroplattan i en 37 ° c, icke-Co2 inkubator medan du slutför stegen nedan.
- Hand-Pick pankreasöar i en 60 mm x 15 mm cellkultur maträtt som innehåller sammansatta media för att få nära 100% renhet.
- Ladda sensor patronen och köra analysen
- Ta bort sensor patronen från inkubator. Portarna A-C för varje brunn måste laddas med antingen läkemedel eller media. Brunnar som innehåller holme och de fyra hörn brunnarna ska lastas med läkemedel. Icke-hörnbrunnar utan skär ska lastas med media. Port D kan lämnas tom. Fyll på port A (överst till vänster på varje sensor) med 20 μL Oligomycin eller media. Ladda port B (överst till höger) med 22 μL FCCP eller media. Ladda port C (nederst till vänster) med 25 μL Rotenon/AA eller media.
- Program mera en extracellulär Flux Analyzer-analys för en 30 minuters andnings period vid baseline (5 cykler om 3 minuters 3 minut mätning), 42 minuters Oligomycin mätperiod (7 cykler av 3 minuters blandning, 3 minuters mätning), 30 minuter FCCP (5 cykler av 3 minuters blandning, 3 minuters åtgärd), och 30 minuter Rotenon/AA (5 cykler av 3 minuters blandning, 3 minuters åtgärd).
- Kör analysen och följ instruktionerna på skärmen för kalibrering av sensorn och sätta in mikroplattan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att lasta kobbar i mikroplattan bör 15 kobbar aspireras i 15 μL media, vilket visas i figur 1A. Holkar kommer naturligtvis att bosätta sig mot botten av Pipettera spetsen inom några sekunder. Sedan sänks Pipettera spetsen till botten av brunnen. Spetsen är mycket lätt Upplyft, och en liten volym (ca 5 μL) pipetteras ut tillsammans med kobbar. Denna teknik resulterar i konsekvent placering av Holmen på botten av mikroplattan väl (figur 1B) möjliggör noggranna mätningar syreförbrukning.
Figur 2 visar representativa resultat av individuell brunn för syreförbrukning i hela analysen. Detta särskilda experiment visar vad som kan hända när brunnar lastas dåligt, med många holnor stack upp på sidorna av brunnen snarare än på botten av brunnen. Detta kan orsakas av att Pipettera för mycket media i brunnen efter att kobbar redan har pipetterats ut ur spetsen. Flödet av ytterligare media pressar holarna ur botten av brunnen. När detta händer, baslinjen nivån av syreförbrukning kommer att vara mycket låg, och detta väl kommer att visa lite eller inget svar på FCCP. Den boldade linjen i figur 2 demonstrerar detta fenomen.
Figur 3 visar ett annat experiment där de flesta brunnar visade betydande respirationstid och respons på läkemedel. Men, två brunnar (med fetstil linjer) visade inget svar på Rotenon/AA. Detta tyder på att drogen inte släpptes ordentligt i brunnen. I detta fall, som med fall av ingen basal syreförbrukning, dessa brunnar kan uteslutas från ytterligare analys.
Figur 4 visar resultatet av en lyckad analys. Här visar vi ett exempel på sammanfattande data från ett separat experiment där brunnar var korrekt laddade med holkar och korrekt injicerade med droger. ATP-beroende mitokondriell syreförbrukning hämmas effektivt av Oligomycin, maximal andning-långt över basala nivåer-inducerades av FCCP, och mitokondriell andning var helt stänga-under Oligomycin nivåer-genom hämning av elektrontransportkedjan med rotenon/AA.
Figur 1: Pipetterande teknik för lastning av öar i mikroplattan. A) cirka 15 kobbar (röd pil) som pipetteras med 15 μl media. (B) kobbar centrerade längst ner på sfäroid mikroplattan. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: väl till väl variation på grund av skillnaden i Holmen lastning. Brunnar lastas felaktigt (fet blå linje) visar liten eller ingen basal syreförbrukning och minimal respons på cell stresstest droger. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: misslyckad injektion av läkemedel. Två brunnar (fet blå linjer) injicerades inte med rotenon/AA och visar ingen signifikant minskning av syreförbrukningen. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: genomsnittliga data över alla brunnar i ett experiment efter uteslutning av dåligt belastade eller injicerade brunnar. Genomsnittlig syreförbrukning i hela cell stresstest analysen i ett separat experiment, inklusive 16 tekniska replikat. Felstaplar visar standardavvikelse för n = 16 brunnar. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Studiet av ön syreförbrukning har tidigare hämmats av den sfäriska formen av öar, deras bristande följsamhet till kulturen ytor, och antalet öar som krävs per brunn. I detta protokoll lyfter vi fram effekten av 96-och sfäroid-mikroplattan för mätning av ö-syreförbrukning på ett litet antal holkar och uppvisar en teknik för hantering och lastning av öar som är tekniskt genomförbara och som ger konsekvent Resultat.
För att kobbar ska hålla sig till botten av mikroplattan och vara ogenomtränglig under blandning steg hela analysen, 96-väl mikroplattan är belagd med en cell adhesiv lösning dagen före analysen. Även om detta är allmänt fördelaktigt, om holmar inte lastas ordentligt de är skyldiga att hålla sig till sidan av brunnen snarare än botten, vilket påverkar eller utesluter korrekt mätning. För att motverka detta rekommenderar vi beläggnings brunnar med en mycket liten mängd limlösning-endast 20 μL. Dessutom, den pipettering teknik vi visar säkerställer att holkar lastas till botten av brunnen och inte knuffade upp sidorna med flödet av ytterligare media .
Den 96-brunn sfäroid mikrotiterplattor har övervinna tidigare begränsningar av mätning ö syreförbrukning, inklusive det stora antalet öar som krävs och antalet villkor som kan testas samtidigt. I själva verket visade en nyligen studie10 användningen av detta system med en enda mänsklig holme per brunn. Mätning av syreförbrukning med enkelkobbar resulterade dock i mycket låga basala mätningar av syreförbrukning, som var betydligt högre än bakgrunden i endast de största holarna (diameter över 290 μm). NHP-kobbar tenderar att vara mindre än humana öar, med en genomsnittlig diameter på endast 150 μm15. I våra händer visade 15 NHP-öar per brunn högre baslinje och en mer responsiv profil under cell stresstestet än färre öar. Vi testade också fem och tio öar per brunn, men fann att basal syreförbrukning och signal till buller minskades betydligt.
Förutom möjligheten att använda ett lågt antal holkar per brunn, ger 96-well mikroplattan för testning av flera olika förhållanden på en gång. Detta är fördelaktigt i fall där kobbar behandlas med olika föreningar eller genetiskt manipuleras. Men när man jämför grupper av mänskliga eller icke-mänskliga primater öar som kommer från olika källor (t. ex., diabetiker kontra icke-diabetiska öar), prover tas ofta på olika dagar. Således, i dessa fall är det inte möjligt att dra full nytta av detta system.
För att kvantifiera olika aspekter av mitokondriell syreförbrukning, manipulerade vi olika aspekter av andning farmakologiskt. Läkemedelskoncentrationer som användes baserades på en pervious studie på humana öar10. Dosen av FCCP optimerades för att inducera maximal mitokondriell andning i våra händer. Specifikt var koncentrationen av Oligomycin 4,5 μM, FCCP var 1 μM, och Rotenon/AA var 2,5 μM. Dessa koncentrationer måste dock sannolikt kalibreras för olika tillämpningar av detta protokoll.
De data som produceras kan antingen analyseras direkt eller normaliseras med hjälp av ett antal metoder. I detta experiment användes lika många öar av liknande storlekar för varje prov, och data normaliserades inte av cell nummer eller holme storlek, vilket kan vara svårt att direkt kvantifiera. En alternativ metod för normalisering är av totalt cellulärt protein, vilket innebär lyseringslösning celler efter analysen utförs och kvantifiera proteinnivåer. Data kan också normaliseras till basala andnings nivåer. Detta kan vara informativt i vissa fall, såsom kvantifiering av reservkapacitet i procent av basnivåerna. Men med dessa normaliserings metoder och andra, information kan förloras under normalisering som tidigare beskrivits16.
Det system som beskrivs här ger ett unikt verktyg för att bättre förstå ö-fysiologi. Faktum är att vikten av syreförbrukning i ö-hälsa illustreras av iakttagelsen att Holmen syreförbrukning priser är nära knutna till Holmen hälsa och sannolikheten för lyckad ö transplantation17. Detta system ger en utmärkt plattform för konsekvent kvantifiering av ön syreförbrukning som kan, i teorin, också tillämpas på alla liknande storlek odlade sfäreoider.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Författarna skulle vilja erkänna Vanderbilt hög genomströmning screening kärna för användning av deras anläggningar, Agilent bio Technologies, Dr Paul Kievit (Oregon Health and Science University) för icke-mänskliga primater ö isoleringar, och Eric Donahue (Vanderbilt University) för hjälp med figur 1. J.M.E. stöddes av NIGMS av National Institutes of Health under tilldelnings nummer T32GM007347. M.G. stöddes av NIH/NIDDK (R24DK090964-06) och avdelningen för Veterans Affairs (BX003744).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture dish, 60 mm X 15 mm style | Corning | 430166 | |
| Cell-Tak Cell and Tissue Adhesive | Corning | 354240 | |
| Conical tube, 50 mL | Falcon | 352070 | |
| Dextrose anhydrous | Fisher Scientific | BP350-1 | For glucose solution, 200 mg/ml, sterile filetered |
| Disposable reservoirs (sterile), 25 ML | Vistalab | 3054-1033 | for loading multichannel pipet |
| EZFlow Sterile 0.45 μm PES Syringe Filter, 13 mm | Foxx Life Sciences | 371-3115-OEM | |
| L-glutamine | Gibco | 25030-081 | 200 mM (100x) |
| Multichannel pipette tips | ThermoFisher Scientific | 94410810 | |
| Multichannel pipette, 15-1250 μL | ThermoFisher Scientific | 4672100BT | Recommended |
| P20, P200, and P1000 pipettes | Eppendorf | 2231000602 | |
| pH Probe | Hanna Instruments | HI2210-01 | |
| Pipette tips, 20 μL, 200 μL, 1000 μL | Olympus | 24-404, 24-412, 24-430 | |
| Seahorse XF Base Media | Agilent | 103334-100 | |
| Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit | Agilent | 103015-100 | Includes Oligomycin, FCCP, and Rotenone/Antimycin A |
| Seahorse XFe96 Analyzer | Agilent | S7800B | Including prep station with 37 °C non-CO2 incubator |
| Seahorse XFe96 Spheroid Fluxpak Mini | Agilent | 102905-100 | Includes sensor cartridge, spheroid microplate, and calibrant |
| Sodium bicarbonate | Fisher Scientific | BP328-500 | |
| Sodium pyruvate | Gibco | 11360-070 | 100 mM (100x) |
| Stereo Microscope | Olympus | SZX9 | |
| Syringe (sterile), 5 mL | BD | 309603 | For sterile filtration |
| Water (sterile) | Sigma | W3500-500mL |
References
- Mulder, H. Transcribing β-cell mitochondria in health and disease. Molecular Metabolism. 6 (9), 1040-1051 (2017).
- Maechler, P., Wollheim, C. B. Mitochondrial signals in glucose-stimulated insulin secretion in the beta cell. The Journal of Physiology. 529 (Pt 1), 49-56 (2000).
- Curry, D. L. Glucagon Potentiation of Insulin Secretion by the Perfused Rat Pancreas. Diabetes. 19 (6), 420 (1970).
- Song, G., Pacini, G., Ahrén, B., D'Argenio, D. Z. Glucagon Increases Insulin Levels by Stimulating Insulin Secretion Without Effect on Insulin Clearance in Mice. Peptides. 88, 74-79 (2017).
- Vergari, E., et al. Insulin inhibits glucagon release by SGLT2-induced stimulation of somatostatin secretion. Nature Communications. 10 (1), 139 (2019).
- Watts, M., Ha, J., Kimchi, O., Sherman, A. Paracrine regulation of glucagon secretion: the β/α/δ model. American Journal of Physiology--Endocrinology and Metabolism. 310 (8), E597-E611 (2016).
- Sweet, I. R., et al. Continuous measurement of oxygen consumption by pancreatic islets. Diabetes Technology & Therapeutics. 4 (5), 661-672 (2002).
- Agilent Seahorse XF Instruments Overview and Selection Guide. , Agilent Technologies. https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/seahorse-xf-instruments-selection-guide (2019).
- Wikstrom, J. D., et al. A novel high-throughput assay for islet respiration reveals uncoupling of rodent and human islets. PLoS One. 7 (5), e33023 (2012).
- Taddeo, E. P., et al. Individual islet respirometry reveals functional diversity within the islet population of mice and human donors. Molecular Metabolism. 16, 150-159 (2018).
- Conrad, E., et al. The MAFB transcription factor impacts islet alpha-cell function in rodents and represents a unique signature of primate islet beta-cells. American Journal of Physiology--Endocrinology and Metabolism. 310 (1), E91-E102 (2016).
- Steiner, D. J., Kim, A., Miller, K., Hara, M. Pancreatic islet plasticity: interspecies comparison of islet architecture and composition. Islets. 2 (3), 135-145 (2010).
- Elsakr, J. M., et al. Maternal Western-style diet affects offspring islet composition and function in a non-human primate model of maternal over-nutrition. Molecular Metabolism. , (2019).
- Soutar, M. P. M., et al. FBS/BSA media concentration determines CCCP's ability to depolarize mitochondria and activate PINK1-PRKN mitophagy. Autophagy. , 1-10 (2019).
- Hirshberg, B., et al. Pancreatic Islet Transplantation Using the Nonhuman Primate (Rhesus) Model Predicts That the Portal Vein Is Superior to the Celiac Artery as the Islet Infusion Site. Diabetes. 51 (7), 2135-2140 (2002).
- Divakaruni, A. S., Paradyse, A., Ferrick, D. A., Murphy, A. N., Jastroch, M. Analysis and interpretation of microplate-based oxygen consumption and pH data. Methods in Enzymology. 547, 309-354 (2014).
- Papas, K. K., et al. Islet Oxygen Consumption Rate (OCR) Dose Predicts Insulin Independence in Clinical Islet Autotransplantation. PLoS One. 10 (8), e0134428 (2015).
