Summary

Montering och karakterisering av Polyelektrolyt Complex Micelles

Published: March 02, 2020
doi:

Summary

Vi tillhandahåller protokoll och representativa data för design, montering och karaktäriserande polyelektrolyt komplexa miceller, core-shell nanopartiklar som bildas av polyelektrolyter och hydrofila laddade block sampolymerer.

Abstract

Polyelektrolyt komplexa miceller (PCMs), core-shell nanopartiklar som bildas av självmontering av laddade polymerer i vattenlösning, ger en kraftfull plattform för att utforska fysikpolyelektrolytinteraktioner och erbjuder också en lovande lösning på det akuta problemet med att leverera terapeutiska oligonukleotider in vivo. Att utveckla prediktiva struktur-egendom relationer för PCMs har visat sig svårt, delvis på grund av förekomsten av starka kinetiska fällor under nanopartikel självmontering. I den här artikeln beskrivs kriterier för att välja polymerer för PCM-konstruktion och ger protokoll baserade på saltglödgning som möjliggör montering av repeterbara nanopartiklar med låg polydispersity. Vi diskuterar också PCM karakterisering med ljusspridning, liten vinkelröntgenspridning och elektronmikroskopi.

Introduction

När motsatta laddade polyelektrolyter blandas i vattenlösning, entropi vinst från utsläpp av sina kontringar orsakar avblandning av lösningen i en polymer-rik kondenserad fas och en polymer-utarmade supernatant1,2,3,4,5, ett fenomen som kallas polyelektrolyt komplexation. Om ett neutralt hydrofiliskt block konjugeras till en eller båda av polyelektrolyterna, uppstår nanoskalafasseparation istället (figur 1A). De resulterande självmonterade kärnskalnanopartiklarna kallas omväxlande polyelektrolytkomplexa miceller (PCMs), polyjonkomplexa miceller, blockjonomerkomplex eller coacervate-core micelles analogt till ytaktiva micellization, även om alla komponenter i systemet är hydrofila6,7. En PCM förmåga att kapsla in hydrofila molekyler såsom proteiner och nukleinsyror, liksom den omfattande tunability som erbjuds av blocket sampolymer bärare arkitektur gör dem attraktiva kandidater för att leverera terapeutiska molekyler in vivo8,9,10,11,12,13.

Att leverera terapeutiska nukleinsyror till cellulära mål är en särskilt viktig utmaning, och en utmaning för vilken PCMs erbjuder flera fördelar. Terapeutiska nukleinsyror (genetiska DNA, mRNA och oligonukleotider såsom siRNA) har en enorm potential för att förbättra människors hälsa, men måste övervinna många biologiska och fysiska hinder för att inse att potentiella14,15,16. Nakna nukleinsyror bryts ned av serum och cellulära nucleases, snabbt rensas från cirkulationen, och deras starka negativa laddning gör det svårt för dem att penetrera cellmembran utan hjälp. Nuvarande metoder för att övervinna dessa hinder inkluderar kostsamma kemiska modifieringar för att förhindra skador från nucleases och / eller inkapsling i olika lipid nanopartiklar monteras via hydrofoba interaktioner15,17,18. Medan dessa metoder har visat sig vara effektiva för lokala injektioner och lever inriktning, systemisk användning presenterar betydande begränsningar av toxicitet, immunogenicitet, och begränsad biodistribution16. Däremot använder PCMs den negativa laddningen av nukleinsyror för att kondensera dem inom den fasseparerade kärnan, medan den neutrala koronan ger en steric barriär mot nedbrytning samt en plattform för att införliva ligands för att förbättra inriktning eller internalisering11,19. In vitro och djurstudier har visat att PCM-datorer effektivt kan leverera olika nukleinsyra nyttolaster20,21,22,23,24, men svagheter i vår förmåga att förutsäga PCM egenskaper såsom storlek, form och stabilitet från egenskaperna hos de ingående polymererna har hindrat deras bredare antagande.

Senaste arbetet av vår grupp och andra inom området har börjat ta itu med detta problem genom att utveckla struktur-egendom, och i vissa fall struktur-egendom-funktion relationer för PCMs bildas från nukleinsyror och olika cationic-neutrala polymerer7,25,26,27. Två konsekventa teman som har uppstått ur dessa studier är vikten av att utveckla välkontrollerade, repeterbara protokoll för PCM-montering och fördelen med att använda flera tekniker för att karakterisera de resulterande nanopartiklarna. Polyelektrolyter, särskilt de med hög laddningstäthet som nukleinsyror, interagerar mycket starkt med varandra och verkar lätt fastna vid blandning, vilket resulterar i PCM-preparat som är mycket känsliga för små variationer i förfarandet och uppvisar hög polydispersity och dålig repeterbarhet från parti till parti. PCMs har också visat sig anta ett brett spektrum av former och storlekar beroende på atomnivå konfigurationer av sina komponenter, och fånga denna mångfald med någon enskild karakterisering teknik är mycket svårt, särskilt eftersom vissa vanliga tekniker såsom dynamisk ljus spridning (DLS) kräver antaganden om partikelform för deras tolkning.

I den här artikeln diskuterar vi materialdesign och urval för PCM, med fokus på oligonukleotider och katjoniska-neutrala diblock sampolymerer. Vi beskriver sedan ett salt glödgning protokoll som använder höga saltkoncentrationer följt av långsam dialys för att undvika kinetisk fångst under PCM montering. Polyelektrolyterna blandas i höga saltförhållanden där elektrostatiska attraktioner screenas, då sänks saltkoncentrationen långsamt för att polyelektrolyterna ska kunna bosätta sig i sina mest energiskt gynnsamma konfigurationer, analoga med den långsamma kylningsprocessen av termisk glödgning. Med hjälp av detta protokoll, vi regelbundet kunna uppnå exceptionellt låg polydispersity och hög repeterbarhet för oligonucleotide PCMs7,26. Slutligen beskriver vi hur fyra separata mättekniker kan användas för att karakterisera PCMs över ett mycket brett spektrum av längdskalor, från extern morfologi till intern struktur: DLS, multi-vinkel ljus spridning (MALS), liten vinkel röntgen spridning (SAXS), och överföring elektronmikroskopi (TEM). Vi hoppas att dessa protokoll kommer att göra det möjligt för fler forskare att effektivt utforska kapaciteten hos dessa intressanta nanopartiklar.

Polymerval och beredning
PCM egenskaper påverkas starkt av de fysiska och kemiska egenskaperna hos de ingående polymererna, vilket gör polymerval ett kritiskt steg i designprocessen. De mest välkarakteriserade blocksampolymererna för nukleinsyrapcms är linjära diblocks såsom poly (lysin)-poly (etylenglykol) (pLys-PEG), men PCMs kan bildas mellan polyelektrolyter och en mängd hydrofila neutrala laddade polymerer, som kan genereras i en hög genomströmning sätt28. Valet av laddad grupp påverkar starkt stabiliteten i jonparning och form av miceller26, och PCM storlek har visat sig öka med längden på den laddade blocket5,7,26 (figur 2), vilket gör PCM egenskaper som skall justeras för kraven på en önskad ansökan. För linjära diblocks har vi funnit att det laddade blocket ska ha minst 10 avgifter och laddas starkt vid önskat pH. Längre laddade block kan främja PCM-bildning med oligonukleotider såsom siRNA, som är svåra att komplexa med kortare block21. Vi har framgångsrikt observerat PCM-bildning med blocklängder upp till 200, och litteraturen beskriver längre polymerer. Mer flexibilitet finns i valet av neutrala block24, men erfarenheten har visat att mycket korta neutrala block leder till aggregering snarare än nanopartikelbildning, och att den minsta neutrala längden ökar med laddad blocklängd. För pLys-PEG krävs en PEG MW på minst 3 000–5 000 för pLys-längder under ~50, och längre längder krävs eftersom det laddade blocket höjs ytterligare. Ökad neutral blocklängd resulterar i ökad PCM-storlek, särskilt skaltjocklek, på grund av steric trängsel av neutrala polymerer.

Detta manuskript presenterar ett protokoll för att förbereda PCMs från lyophilized hög renhet pLys-PEG och oligonukleotider av känd kvantitet, men bör lätt anpassas till andra system också. Vi har testat det framgångsrikt med flera laddade polypeptider, inklusive polyarginin och polyglutamussyra, samt flera syntetiska polyelektrolyter, såsom polyakrylsyra och poly(vinylbensyltrimethylammonium). Vi beskriver också förbereda PCMs med ett stoichiometriskt förhållande av polyelektrolyt avgifter, men detta är lätt att ändra. Vi tycker att det är lättast att arbeta med laddningskoncentrationsenheter (c.c.), som också naturligt rymmer polymerer som inte är fulladdade. Om antingen polymer inte är väl karakteriserad, bör man se till att exakt bestämma polymerlängder / massor och se till att överflödigt salt inte finns utöver vad som behövs för laddning neutralisering genom dialys, till exempel. Förekomsten av allt behållat vatten bör också redovisas när koncentrationerna beräknas. Nukleinsyrakoncentrationen kan enkelt kvantifieras genom absorbans vid 260 nm, och förekomsten eller frånvaron av terminalfosfater bör beaktas vid beräkning av c.c.

Vid användning av oligonukleotider som polyanioner, hybridisering tillstånd och kemisk struktur bidra till att bestämma benägenheten för självmontering och egenskaperna hos den resulterande PCM5,7,26. Optimera dessa, inom kraven för biologisk effekt om du använder PCM för leverans, kommer att öka sannolikheten för att bilda de önskade strukturerna. Användbara verktyg för att analysera hybridisering inkluderar MATLAB-funktioner för nukleinsyror, NUPACK29och IDT OligoAnalyzer. Vi rekommenderar att analysera en kandidat sekvens för att förstå styrkan i bindning till 1) själv i en hårnål formation; 2) en annan kopia av samma sekvens (själv-dimer); och 3) till andra oligonukleotider som finns i systemet. DNA och RNA-smälttemperaturer för en viss sekvens kan också beräknas med hjälp av närmaste grannemetod 30,31. Termisk glödgning av nukleinsyror (steg 2.3) denaturerar eventuell akvariesekundär struktur i de enskilda nukleotiderna och främjar jämviktsvikning.

PCM karakterisering och analys
Ett brett spektrum av tekniker finns tillgängliga för att karakterisera nanopartiklar, inklusive statisk och dynamisk ljusspridning, liten vinkelspridning av elektroner eller neutroner och elektronmikroskopi. I den här artikeln tillhandahåller vi protokoll för två ljusspridningstekniker, liten vinkelröntgenspridning och två elektronmikroskopitekniker.

DLS mäter autokorrelationen av tidsmässiga fluktuationer i spridningsintensiteten i en vinkel från Brownian motion av provet. Montering av dessa data kan ge hydrodynamisk radie och polydispersity för sfäriska miceller(figur 3). Mals (Flera vinkelvinklar) mäter den statiska spridningsintensiteten i många vinklar. Detta kantiga beroende beskriver formen på nanopartikelen men är begränsad till längdskalor längre än ~50 nm för synligt ljus, vilket begränsar dess effektivitet för mindre nanopartiklar. Båda teknikerna är baserade på brytningsindex obalans och främst beskriva de yttre dimensionerna av nanopartikel.

Små vinkel röntgen spridning (SAXS) använder röntgenstrålar som spridning sonden, och deras kortare våglängd tillåter mätningar över en räckvidd på ~ 0,1-100 nm. Montering av den observerade spridningsintensiteten kontra vinkeln (konventionellt uttryckt som momentumöverföring q)ger information om PCM-morfologi (dvs. storlek och form) och även intern struktur. Om en absolut intensitetkalibrering finns tillgänglig, och om spridningsintensiteten kan extrapoleras till nollvinkel kan PCM-massa och aggregering också uppskattas32,vilket gör SAXS till en extremt mångsidig och värdefull metod. Liten vinkel neutron spridning (SANS) är känslig över ett liknande spektrum av längdskalor men är endast tillgänglig på specialiserade anläggningar och kommer inte uttryckligen diskuteras i denna artikel33,34,35.

De senaste åren har sett tillkomsten av bänksaxs instrument, men vi tycker att synkrotron källor är bättre lämpade för PCM karakterisering, eftersom deras högre intensitet tillåter data som ska samlas in mycket snabbare för dessa låg kontrast prover. Vi tillhandahåller ett kort protokoll för att förvärva PCM SAXS-data på Beamline 12-ID-B på Advanced Photon Source (Argonne National Laboratory, USA) ur ett användarperspektiv. Detta protokoll bör tillämpas på de flesta synkroniseringskällor, men samråd med lokal personal innan du föreslår ett experiment rekommenderas starkt. Vi tillhandahåller också ett datareducerings- och analysprotokoll med Irena36, en fri uppsättning makron skrivna för Igor Pro. Irena innehåller en mångsidig uppsättning formfaktorer för modellering AV SAXS-data och möjliggör konstruktion av multikomponentmodeller som kan beskriva pcms komplexa spridningsprofil (se representativa resultat, figur 4). Irena har också omfattande dokumentation och handledning finns tillgängliga online. Innan du försöker förfarandena nedan rekommenderar vi förtrogenhet med dessa, särskilt handledningen “Modellering av SAXS-data med två huvudsakliga scatterer populationer”.

Strålningsskador är ett problem för röntgenspridning, men flera åtgärder kan användas för att minimera den. I synnerhet rekommenderar vi att du använder en flödescellinställning med en sprutpump och PCM-prov som flödar under datainsamling, snarare än en förseglad kapillär. Detta förenklar också kraftigt bakgrunden subtraktion. Vi föreslår också att ta flera exponeringar av det flödande provet snarare än en längre för att begränsa flödet som en enda volym av prov ser och för att möjliggöra jämförelse av exponeringsdata för att identifiera eventuella skador.

I motsats till spridningsteknikerna, som i allmänhet kräver montering för att tolka, ger transmissionselektronmikroskopi (TEM) en verklig visuell bild av nanopartiklarna genom att passera en elektronstråle genom provet och projicera en bild på en scintillationsskärm (figur 5). Vi presenterar protokoll för två TEM tekniker i denna artikel. Cryo TEM fryser glimmerprover i ett tunt lager glasaktig is, bevara strukturell konformation med minimala främmande ämnen, optimalför miceller ≤~10-100 nm i radie. Negativ fläck TEM använder ett tungmetallsalt (t.ex. uran) för att omge provet efter att det har torkats på ytan av ett rutnät. Den täta fläcken sprider fler elektroner än provet, lägger kontrast och producerar en negativ bild av provet. Cryo TEM rekommenderas för högkvalitativa bilder. Det är dock dyrare, tidskrävande, och kanske inte ger tillräcklig kontrast. När detta är ett problem bör negativa färgade prover användas. Exempel på var och en visas i figur 5.

Var och en av dessa tekniker rapporterar om något olika aspekter av nanopartiklar, med olika styrkor och begränsningar. Ljusspridning är lätt tillgänglig och är ofta den snabbaste metoden, men har betydande begränsningar i storlek och formupplösning. SAXS kan ge information om ett stort antal längdskalor vid någorlunda hög genomströmning, men kräver specialiserad utrustning för att förvärva data, samt modellering för att tolka den. TEM-bilder är enkla att tolka men kan begränsas i kontrast och är i sig lågt genomströmning. Vår erfarenhet har visat att använda flera tekniker för karakterisering ökar kraftigt den information som kan erhållas om PCM egenskaper och förenklar tolkningen av datauppsättningar som erhållits från var och en ensam. Saxs och TEM undersöker till exempel i första hand ett PCM-tals täta kärna, medan ljusspridningsrapporter om nanopartikelens övergripande dimensioner. Således, kombinera dem tillåter mätning av både kärna och korona storlek. TEM: s förmåga att förvärva verkliga rymdbilder kan ge mark sanningsdata för att möjliggöra val av lämpliga formfaktorer för modellering SAXS data som annars skulle vara tvetydiga. I den här artikeln beskrivs protokoll för alla fyra tekniker och en exempelprocess för att använda dem för att karakterisera ett okänt exempel anges i avsnittet Diskussion.

Protocol

1. Beredning av material Väg ut lyophilized diblock polymer och tillsätt vatten upp till nästan den volym som krävs för en lagerlösning på 10 mg/ml slutlig koncentration. Virvel vid maximal hastighet i 2 min. Sonicate i 5 min. Mycket långa diblocks kan kräva ytterligare ultraljudsbehandling. Lagerlösningen bör verka helt transparent och homogen. Justera pH till 7,4 med NaOH eller HCl efter behov. Tillsätt vatten till den slutliga volymen. pLys-PEG-lösningar är ganska stabila me…

Representative Results

För att illustrera karakteriseringsmetoder som beskrivs ovan visar vi typiska resultat för PCMs monterade från oligonukleotider och blocksampolymerer av olika längder och kemister(figur 1). Figur 2 ger ett exempel på hur PCM-kärnstorlek (enligt saxs och TEM, figur 4 och figur 5)varierade med laddad blocklängd. Figur 3 visar DLS-data och passande resultat för sfäris…

Discussion

Som nämnts ovan, de protokoll som presenteras här är skrivna med fokus på oligonucleotides som polyanion komponent och pLys-PEG som cationic-neutral block sampolymer, men vi har testat dem med en mängd olika polymerer, såsom poly (akrylsyra), polyglutamat, och PEG-poly (vinylbensyl trimetylammonium), och tror att de kommer att vara allmänt tillämpliga för de flesta polyelektrolytpar. En parameter som kan behöva optimeras är saltkoncentrationen som används för glödgning, eftersom det bör vara tillräckligt …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vi tackar Phil Griffin och Tera Lavoie från Soft Matter Characterization Facility och Advanced Electron Microscopy Facility, respektive vid University of Chicago. Vi tackar också Xiaobing Zuo och Soenke Seifert av Advanced Photon Source på Argonne National Laboratory och NIST Center for Hierarchical Materials Design (CHiMaD) för stöd. Vi tackar Jeff Ting och Michael Lueckheide för deras bidrag till detta arbete.

Materials

70 mm circle filter paper Whatman 1001-070 Filter paper for wicking during grid prep
Carbon Film TEM grid Electron Microscopy Sciences CF200-Cu TEM grid
DAWN Wyatt Technology DAWN MALS instrument
DNA oligonucleotide Integrated DNA Nanotechnologies Inc Custom oligonucleotide
Lacey Carbon TEM grid Electron Microscopy Sciences LC200-Cu TEM grid
Methoxy-poly(ethylene glycol)-block-poly(l-lysine hydrochloride) PEG5k – PLKC50 Alamanda Polymers Inc mPEG5K-b-PLKC50 Example block copolymer
Milli-Q Millipore Sigma Ultrapure water
NanoDrop Thermo Scientific For measuring nucleic acid concentration
negative-action tweezers Dumont N7 Tweezers for grid preparation
Parafilm "M" Bemis Company Inc PM996 Laboratory film
Quantifoil Holey Carbon TEM grid Electron Microscopy Sciences Q210CR1.3 TEM grid
Research Goniometer and Laser Light Scattering System Brookhaven Instruments BI-200SM DLS/MALS instrument
Slide-A-Lyzer G2 2K 0.5 mL Thermo Scientific Pierce Protein Biology 87723 Dialysis cartridge
small volume cuvette Brookhaven Instruments BI-SVC Cuvette for DLS/MALS
Solarus 950 Advanced Plasma System Gatan Solarus 950 Plasma system for TEM grids
Talos TEM FEI Talos TEM used for cryo samples
Tecnai Spirit TEM FEI Spirit TEM used for dry samples
Uranyl Formate SPI-Chem 16984-59-1 For negative staining samples for TEM
Vitrobot FEI Vitrobot Vitrification robot for cryo grid preparation

References

  1. Spruijt, E., Westphal, A. H., Borst, J. W., Cohen Stuart, M. A., van der Gucht, J. Binodal compositions of polyelectrolyte complexes. Macromolecules. 43 (15), 6476-6484 (2010).
  2. van der Gucht, J., Spruijt, E., Lemmers, M., Cohen Stuart, M. A. Polyelectrolyte complexes: bulk phases and colloidal systems. Journal of Colloid and Interface Science. 361 (2), 407-422 (2011).
  3. Priftis, D., Laugel, N., Tirrell, M. Thermodynamic characterization of polypeptide complex coacervation. Langmuir. 28 (45), 15947-15957 (2012).
  4. Fu, J., Schlenoff, J. B. Driving Forces for Oppositely Charged Polyion Association in Aqueous Solutions: Enthalpic, Entropic, but Not Electrostatic. Journal of the American Chemical Society. 138 (3), 980-990 (2016).
  5. Vieregg, J. R., et al. Oligonucleotide-Peptide Complexes: Phase Control by Hybridization. Journal of the American Chemical Society. 140 (5), 1632-1638 (2018).
  6. Voets, I. K., de Keizer, A., Cohen Stuart, M. A. Complex coacervate core micelles. Advances in Colloid and Interface Science. 147-148, 300-318 (2009).
  7. Lueckheide, M., Vieregg, J. R., Bologna, A. J., Leon, L., Tirrell, M. V. Structure-Property Relationships of Oligonucleotide Polyelectrolyte Complex Micelles. Nano Letters. 18 (11), 7111-7117 (2018).
  8. De Kruif, C. G., Weinbreck, F., de Vries, R. Complex coacervation of proteins and anionic polysaccharides. Current Opinion in Colloid & Interface Science. 9 (5), 340-349 (2004).
  9. Vieregg, J. R., Tang, T. Y. D. Polynucleotides in cellular mimics: Coacervates and lipid vesicles. Current Opinion in Colloid & Interface Science. 26, 50-57 (2016).
  10. Marciel, A. B., Chung, E. J., Brettmann, B. K., Leon, L. Bulk and nanoscale polypeptide based polyelectrolyte complexes. Advances in Colloid and Interface Science. 239, 187-198 (2017).
  11. Cabral, H., Miyata, K., Osada, K., Kataoka, K. Block Copolymer Micelles in Nanomedicine Applications. Chemical Reviews. 118 (14), 6844-6892 (2018).
  12. Tan, Z., et al. Block Polymer Micelles Enable CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein Delivery: Physicochemical Properties Affect Packaging Mechanisms and Gene Editing Efficiency. Macromolecules. 52 (21), 8197-8206 (2019).
  13. Horn, J. M., Kapelner, R. A., Obermeyer, A. C. Macro- and Microphase Separated Protein-Polyelectrolyte Complexes: Design Parameters and Current Progress. Polymers. 11 (4), 578 (2019).
  14. Juliano, R. L. The delivery of therapeutic oligonucleotides. Nucleic Acids Research. 44 (14), 6518-6548 (2016).
  15. Kanasty, R., Dorkin, J. R., Vegas, A., Anderson, D. Delivery materials for siRNA therapeutics. Nature Materials. 12 (11), 967-977 (2013).
  16. Lorenzer, C., Dirin, M., Winkler, A. M., Baumann, V., Winkler, J. Going beyond the liver: progress and challenges of targeted delivery of siRNA therapeutics. Journal of Controlled Release. 203, 1-15 (2015).
  17. Allen, T. M., Cullis, P. R. Liposomal drug delivery systems: from concept to clinical applications. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (1), 36-48 (2013).
  18. Li, W., Szoka, F. C. Lipid-based nanoparticles for nucleic acid delivery. Pharmaceutical Research. 24 (3), 438-449 (2007).
  19. Miyata, K., Nishiyama, N., Kataoka, K. Rational design of smart supramolecular assemblies for gene delivery: chemical challenges in the creation of artificial viruses. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2562-2574 (2012).
  20. Oishi, M., Nagasaki, Y., Itaka, K., Nishiyama, N., Kataoka, K. Lactosylated poly(ethylene glycol)-siRNA conjugate through acid-labile ss-thiopropionate linkage to construct pH-sensitive polyion complex micelles achieving enhanced gene silencing in hepatoma cells. Journal of the American Chemical Society. 127 (6), 1624-1625 (2005).
  21. Christie, R. J., et al. Targeted polymeric micelles for siRNA treatment of experimental cancer by intravenous injection. ACS Nano. 6 (6), 5174-5189 (2012).
  22. Kuo, C. H., et al. Inhibition of atherosclerosis-promoting microRNAs via targeted polyelectrolyte complex micelles. Journal of Materials Chemistry B. 2 (46), 8142-8153 (2014).
  23. Ge, Z., et al. Targeted gene delivery by polyplex micelles with crowded PEG palisade and cRGD moiety for systemic treatment of pancreatic tumors. Biomaterials. 35 (10), 3416-3426 (2014).
  24. Van Bruggen, C., Hexum, J. K., Tan, Z., Dalai, R. J., Reineke, T. M. Nonviral Gene Delivery with Cationic Glycopolymers. Accounts of Chemical Research. 52 (5), 1347-1358 (2019).
  25. Hayashi, K., et al. Influence of RNA Strand Rigidity on Polyion Complex Formation with Block Catiomers. Macromolecular Rapid Communications. 37 (6), 486-493 (2016).
  26. Marras, A. E., Vieregg, J. R., Ting, J. M., Rubien, J. D., Tirrell, M. V. Polyelectrolyte Complexation of Oligonucleotides by Charged Hydrophobic-Neutral Hydrophilic Block Copolymers. Polymers. 11 (1), 83 (2019).
  27. Phillips, H. R., et al. Glycopolycation-DNA Polyplex Formulation N/P Ratio Affects Stability, Hemocompatibility, and in Vivo Biodistribution. Biomacromolecules. 20 (4), 1530-1544 (2019).
  28. Ting, J. M., Wu, H., Herzog-Arbeitman, A., Srivastava, S., Tirrell, M. V. Synthesis and Assembly of Designer Styrenic Diblock Polyelectrolytes. ACS Macro Letters. 7 (6), 726-733 (2018).
  29. Zadeh, J. N., et al. NUPACK: Analysis and design of nucleic acid systems. Journal of Computational Chemistry. 32 (1), 170-173 (2011).
  30. Santa Lucia, J. A unified view of polymer, dumbbell, and oligonucleotide DNA nearest-neighbor thermodynamics. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (4), 1460-1465 (1998).
  31. Xia, T., et al. Thermodynamic parameters for an expanded nearest-neighbor model for formation of RNA duplexes with Watson-Crick base pairs. Biochemistry. 37 (42), 14719-14735 (1998).
  32. Orthaber, D., Bergmann, A., Glatter, O. SAXS experiments on absolute scale with Kratky systems using water as a secondary standard. Journal of Applied Crystallography. 33 (2), 218-225 (2000).
  33. Srivastava, S., et al. Gel phase formation in dilute triblock copolyelectrolyte complexes. Nature Communications. 8, 14131 (2017).
  34. Lindhoud, S., et al. Salt-induced disintegration of lysozyme-containing polyelectrolyte complex micelles. Langmuir. 25 (19), 11425-11430 (2009).
  35. Lindhoud, S., de Vries, R., Schweins, R., Stuart, M. A. C., Norde, W. Salt-induced release of lipase from polyelectrolyte complex micelles. Soft Matter. 5 (1), 242-250 (2009).
  36. Ilavsky, J., Jemian, P. R. Irena: tool suite for modeling and analysis of small-angle scattering. Journal of Applied Crystallography. 42 (2), 347-353 (2009).
  37. Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. . Molecular Cloning: a Laboratory Manual. , (1989).
  38. Jakeš, J. Regularized positive exponential sum (REPES) program-A way of inverting laplace transform data obtained by dynamic light scattering. Collection of Czechoslovak Chemical Communications. 60 (11), 1781-1797 (1995).
  39. Schillen, K., Brown, W., Johnsen, R. M. Micellar Sphere-to-Rod Transition in an Aqueous Triblock Copolymer System – a Dynamic Light-Scattering Study of Translational and Rotational Diffusion. Macromolecules. 27 (17), 4825-4832 (1994).
  40. Provencher, S. W. Contin – a General-Purpose Constrained Regularization Program for Inverting Noisy Linear Algebraic and Integral-Equations. Computer Physics Communications. 27 (3), 229-242 (1982).
  41. Provencher, S. W. A Constrained Regularization Method for Inverting Data Represented by Linear Algebraic or Integral-Equations. Computer Physics Communications. 27 (3), 213-227 (1982).
  42. Sarachan, K. L., Curtis, J. E., Krueger, S. Small-angle scattering contrast calculator for protein and nucleic acid complexes in solution. Journal of Applied Crystallography. 46 (6), 1889-1893 (2013).
  43. Beaucage, G. Approximations leading to a unified exponential power-law approach to small-angle scattering. Journal of Applied Crystallography. 28 (6), 717-728 (1995).
  44. Marras, A. E., Vieregg, J. R., Ting, J. M., Rubien, J. D., Tirrell, M. V. . Materials Data Facility. , (2018).
  45. Modena, M. M., Rühle, B., Burg, T. P., Wuttke, S. Nanoparticle Characterization: What to Measure. Advanced Materials. , (2019).
  46. Mourdikoudis, S., Pallares, R. M., Thanh, N. T. K. Characterization techniques for nanoparticles: comparison and complementarity upon studying nanoparticle properties. Nanoscale. 10 (27), 12871-12934 (2018).

Play Video

Cite This Article
Marras, A. E., Vieregg, J. R., Tirrell, M. V. Assembly and Characterization of Polyelectrolyte Complex Micelles. J. Vis. Exp. (157), e60894, doi:10.3791/60894 (2020).

View Video