Summary
Biz manşet üzerinde evert yardımcı olmak için fare servikal heterotopik kalp nakli için manşet tekniği bir iç tüp yaklaşım tanıtmak. İki deneyimli cerrah arasındaki işbirliğinin ameliyat süresini belirgin bir şekilde kısalttAdığını gördük.
Abstract
40 yılı aşkın bir süredir rüren kalp nakli yapılmaktadır. Mikrocerrahideki gelişmelerle birlikte cerrahi verimliliği artırmak için bazı yeni teknikler kullanılmıştır. Laboratuvarımızda manşet tekniğini iki ana adımla optimize ettik. İlk olarak, iç tüp tekniğini kullanarak dış juguler vene ve karotis arter kan damarına geçici bir iç tüp yerleştirerek kabın manşet üzerinde eversiyonını kolaylaştırdık. İkinci olarak, iki deneyimli cerrahın işbirliği ile tam heterotopik kalp nakli gerçekleştirdik. Bu modifikasyonlar çalışma süresini %95'lik bir başarı oranıyla 25 dakikaya indirdi. Bu raporda, bu yordamları ayrıntılı olarak açıklar ve ek bir video sağlarız. Geliştirilmiş manşet tekniği ile ilgili bu raporun, murine heterotopik kalp nakli için pratik rehberlik sunacağına ve temel araştırmalar için bu fare modelinin yararını artıracağına inanıyoruz.
Introduction
1973 yılında karın içinde uçtan uca anastomoz yoluyla fare heterotopik kalp nakli kurulması temel transplantasyon immünoloji araştırma1önemli bir kilometre taşı oldu. Bu model iskemi reperfüzyon yaralanma mekanizmaları analiz etmek için önemli ve geçerli bir araç sağlanan2, immünolojik ret, ve tolerans3,4. Ancak, cerrahinin karmaşık ve zaman alıcı doğası nın yanı sıra enfeksiyon potansiyeli ciddi perioperatif abdominal yapışıklıklara ve inflamatuar reaksiyonlara neden olabilir ve heterotopik kalp transplantasyonu modelinde düşük verimlilik sağlar.
Servikal heterotopik kalp nakli tekniği ilk olarak Chen tarafından 19915yılında tanımlanmıştır. Bu modelde, alıcının dış juguler ven greft pulmoner arter ekadar ve karotis arter artan aort anastomosed. Bu yöntemin başlıca avantajları izleme kolaylığı ve alıcıya travma azaltılması vardır. Aynı yıl, Matsuura geliştirilmiş bir teknik tarif, hangi dış juguler ven ve karotis arter sonunda bir Teflon manşet üzerinde everted ve bir çevresel ipek ligature ile sabit6. Bazı araştırmacılar da alıcının dış juguler ven içine manşet eklemeden önce donör kalp sağ pulmoner arter manşet sabit7. Şimdiye kadar, manşet tekniği yaygın akciğer8,karaciğer9,ve renal10 transplantasyonu için olanlar da dahil olmak üzere çeşitli vasküler pedikül nakli modelleri, uygulanmıştır.
Bugüne kadar, manşet tekniği ile ilgili çeşitli zorluklar vardır. Örneğin, karotis arter ek elastikiyet nedeniyle manşet üzerinde evert zordur, doku geriye doğru takla ile sonuçlanan. Bu nedenle bu adımı tamamlamak için ek uygulama ve mikrocerrahi dilatör gerekebilir. Buna ek olarak, servikal damar hazırlanması 25 dakika kadar sürebilir.
Bu sorunları çözmek için, biz manşet tekniğine dayalı ve damar duvarının eversion yardımcı olmak için bir iç tüp kullanarak dış juguler ven ve karotis arter üzerinde manşet sabitleme içeren iç tüp tekniği, tanıtmak. Buna ek olarak, basit eğitim ile, alıcı hazırlık 15,5 dakika ya da azalır. Bu teknik operasyonun karmaşıklığını azaltır ve ek uygulama veya vasküler dilatör kullanımını gerektirmez. Tüm transplantasyon immün araştırmalarda uygulanabilir, özellikle alıcı iki kardiyak allografts alır sırasında üçüncü taraf bağışıklık toleransı doğrulamak için, karın içinde ve boyun diğer11. Ayrıca bu modeli oluşturmak için iki yetenekli cerrah arasında işbirliği yapmanızı öneriyoruz, bir cerrah alıcı hayvanı hazırlarken diğeri donör kalbi hasat edip implante eder. Bu tür işbirliği çalışma süresini 25 dakikaya kısaltabilir. Bu optimize prosedürü kullanarak, biz syngeneic kurduk, allojenik12,13,14,15,16,17,18,19, ve ksenojenik fare kalp nakli modelleri20.
İç tüp tekniğinin geliştirilmesinin mantığı, yüksek başarı oranına sahip bir fare kalp nakli modelinin kurulması için çalışma süresini kısaltmaktı. Servikal kalp nakli modelinin optimizasyonu, geleneksel dikiş ve manşet tekniğine göre kısa bir süre içinde yüksek başarı oranlarının elde edilmesine yardımcı olur21. Ayrıca, işbirliği modeli daha da tek bir operatör ile yapılan ameliyatlar ile karşılaştırıldığında donör kalbin sıcak iskemik süresini azaltabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvanlar (BALB/c, C57BL/6, erkek, 8-12 hafta) Xiamen Üniversitesi Laboratuvar Hayvan Merkezi'nde özel bir patojensiz tesiste bulunmaktadır. C57BL/6 alıcı olarak, BALB/c donör olarak kullanılır. Tüm işlemler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) yönergelerine göre gerçekleştirilir.
NOT: Operasyon için mikro makas, mikro düz forseps, mikro kavisli forseps ve mikro iğne tutucular gibi bir dizi mikrocerrahi alet gereklidir(Tablo ve Malzemeler, Şekil 1B, C, D, E). Tek kullanımlık bulldog kelepçeler bir çift(Şekil 1F)gereklidir. Dış juguler ven ve karotis arter için iki manşet bir mikroskop altında no. 10 neşter ile özelleştirilmiş poliamid tüpler kesilerek hazırlanır. Ven ve arter manşetinin çapı sırasıyla 0.9 mm ve 0.55 mm'dir. Buna ek olarak, ilgili ven manşet için iç tüpün çapı 0.6 mm, ve bu ilgili arter manşet için iç tüp 0.28 mm(Şekil 1G).
1. Alıcı nın hazırlanması
- Pentobarbital (60 mg/kg, i.p) ile alıcı fareyi anestezi edin. Sağ lateral servikal bölgede saç kaldırmak için atravmatik mekanik makası kullanın.
- İyot antiseptik ve ardından %70 etanol ile cerrahi alanı silmek için steril bir pamuk ucu aplikatör kullanın.
- Fareyi işlem platformunda supine pozisyonunda yerleştirin. Fareyi steril gazlı bezle örtün.
- Sağ omuz köprücük kemiği eklem alt üçte bir boyun orta hat bir enine kesi yapmak için bir oftalmik makas kullanın.
- Mikro kavisli forceps ile doğru dış juguler ven yeterli uzunlukta ortaya çıkarmak için izole, elektrokoagülasyon yoluyla dalları kesmek, ve 6-0 ipek sütür kullanarak distal ucunda damar ligate.
- Bir bulldog kelepçe kullanarak proksimally harici juguler ven kelepçe ve daha sonra bir mikro makas kullanarak ligatür için proksimal ven transect.
- Damar lülesini 100 U/mL 0-4 °C heparinize salin ile yıkayın ve artık kanı temizler.
- Mikro düz forceps kullanarak damar manşet içip harici juguler ven çekin; bir stent olarak lümen içine damar iç tüp yerleştirin ve mikro düz forceps ile manşet üzerinde damar duvarı evert(Şekil 2A).
- Bir circumferential 8-0 kullanarak manşet proksimal ucunda everted damar endotel düzeltmek ipek sütür (Şekil 2B).
- Damar damarından damar iç tüpünü çekmek için mikro düz forceps kullanın.
- Sternokleidomastoid iç kenarına bitişik sağ karotis arter izole etmek için mikro kavisli forceps ile künt diseksiyon gerçekleştirin.
- Bir bulldog kelepçe kullanarak sağ karotis arter proksimally kelepçe, 6-0 ipek sütür kullanarak distal karotis arter ligate, ve ligatür yakın karotis arter transect için bir mikro makas kullanın.
- Karotis arteri 100 U/mL 0-4 °C heparinize salin ile yıkayın ve artık kanı temizler.
- Arter manşet yoluyla karotis arter geçirin ve mikro düz forceps kullanarak arter damar içine arter iç tüp eklemek (Şekil 2C).
- Mikro düz forceps kullanarak manşet üzerinde gemi Evert; bir çevre 8-0 kullanarak everted damar endotel düzeltmek ipek sütür (Şekil 2D).
- Mikro düz forceps ile arter damarından arter iç tüp çekin.
NOT: Alıcının submandibular bezini koruyun.
2. Donör hazırlanması
- Pentobarbital (60 mg/kg, i.p) ile donör fareanestezik. Karın bölgesindeki saçı çıkarmak için travmatik mekanik makaslar kullanın.
- Fareyi işlem platformunda supine pozisyonunda yerleştirin. Fareyi steril gazlı bezle örtün.
- İyot antiseptik ve ardından %70 etanol ile cerrahi alanı silmek için steril bir pamuk ucu aplikatör kullanın.
- Bir oftalmik makas ile bir karın orta hat insizyonu yapmak ve karın boşluğu maruz.
- Inferior vena kavasını ortaya çıkarmak için mikro kavisli forceps kullanın ve daha sonra intravenöz olarak 200 μL 100 U/mL 0-4 °C heparinize salin iline inferior vena kava yoluyla 20 g vücut ağırlığı.
- Oftalmik makas ile torakotomi yapın, iki taraflı midaxillary line kesiler aracılığıyla kaburga kesmek, torasik boşluğu ortaya çıkarmak için ön göğüs duvarı dışa doğru çevirin.
- Timusu mikro kavisli forceplarla boşaltın.
- Aort maruz, ve sonra aort kemer imal koroner arter e-koroner arter e-100 U/mL 0-4 °C heparinize salin 200 μL perfuse.
NOT: Donör kalbine gaz kabarcıkları sokmaktan kaçının. - Aort kemerbaşında artan aort transect için bir mikro makas kullanın.
- Pulmoner arteri iki ana dalı mikro makasla geçirin.
- 6-0 ipek sütür kullanarak superior vena kava ve inferior vena cava proximally ligate ve ligature distal ven transect ven için bir mikro makas kullanın.
- Pulmoner damarları birlikte, çevresel olarak, tek bir 6-0 ipek sütür kullanarak ligate ve bir mikro makas kullanarak ligatür distal ven dalları kesti.
- Çevredeki yumuşak dokulardan kalp greftini çıkarın; 0-4 °C heparinize tuzlu olarak muhafaza edin.
3. Kalp implantasyonu
- Donör kalbini alıcının sağ boyun bölgesine ters çevirin.
- Donör kalbin pulmoner arterini mikro düz forcep'lerle 6-0'lık bir ipek halkasına sok.
- Damar manşetetrafında damar lümen sarın ve sonra damar eklem bant manşet etrafında 6-0 ipek dikiş döngüleri sıkın.
- 3.2 adımda açıklanan adımları izleyerek greft ve arter manşetinin aort anastomozisini gerçekleştirin.
- Kenetlenmiş juguler ven ve ardından kenetlenmiş juguler arteri bırakın. Damar eklemini bükülmemiş tutun ve kan akışının engellenmediğinden emin olun.
NOT: 1 dk içinde 200'den fazla kez dönen sinüs ritmi normal kabul edilir. - Sıcak (37 °C) tuzlu su yla donör kalbini nemlendirin ve greftin kanama olup olmadığını kontrol edin. Pulsing kalp greftini deri altı uzaya ayarlayın ve sonra kesiyi dikin.
4. Postoperatif Bakım ve Greft Değerlendirmesi
- Postoperatif greft fonksiyonunu izlemek için kelepçe salımdan sonra en az 5 dakika normal sinüs ritmine ve normal sinüs ritminin korunmasına kadar süreyi kaydedin.
- Alıcı anesteziden uyanana kadar alıcıyı sıcak bir battaniyenin üzerine tek başına yerleştirin. Ameliyat sonunda ve ameliyat sonrası 72 saat boyunca her 12 saatte bir buprenorfin analjezisi, 0.05 mg/kg, s.c uygulayın.
- Alıcının ağırlığını ve ameliyat sonrası iyileşme durumunu günlük olarak kaydedin. Ameliyat tarihinde buna göre %>%15 kilo kaybı, hemiplejik felç veya enfeksiyon durumunda, terminal isofluran inhalasyonu21ile alıcıyı ötenazi yedirin.
- Her gün palpasyon ile greft sağkalımlarını izleyin. Mürin allograft >72 saat hayatta ise ameliyat başarılı olarak kabul edilir. Daha önce bildirilen greft fonksiyonu,22: Ölçek 3 - şiddetle zonklama ve sıklığı; Ölçek 2 - daha az pulsate; Ölçek 1- fibrilasyon ve yakın ret; veya Ölçek - 0, kalp atışı kaybı ve tam reddi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Cerrahi Operasyon Süresi
Eğitimden sonra, yetenekli bir cerrah ameliyatı iç tüp tekniğini kullanarak 35 dakika içinde başarıyla gerçekleştirebilir, alıcının hazırlanması için yaklaşık 15,5 dakika, donör hazırlanması için 10,9 dakika, donör kalp anastomozları için ise 4,4 dakika gereklidir. Soğuk ve sıcak iskemi süresi (donör preparatından kalp implantasyonuna kadar) iç tüp tekniği ve dikiş tekniği olmadan manşet tekniği kullanılarak yapılan operasyona göre 15,3 dakikaya düşürülür (Tablo 1)21.
Operasyonun verimliliğini daha da artırmak için bir işbirliği modeli tasarladık. Şematikte gösterildiği gibi(Şekil 3),bir cerrah önce alıcı hazırlığı, ardından 4-5 dakika sonra ikinci bir cerrah tarafından donör hazırlığının başlatılması başlar. 15-16 dakika sonra, ilk cerrah alıcı nın hazırlıkını bitirmiş olmalıdır, bu noktada donör kalbini hasat etmeyi bitiren ikinci cerrah, alıcının içindeki donör kalbini anastomosing yapmaya başlamalıdır. Bu işbirliği modeli, her cerrahın manşet tekniğinin sadece tek bir bölümünde eğitilmelerini gerektirir ve toplam ameliyat süresini yaklaşık 25 dakikaya kadar kısaltır. Xiamen Üniversitesi Organ Nakli Enstitüsü'nde son iki yılda iki cerrah arasında işbirliği ile yapılan >600 heterotopik trür naklinin analizi, %95'e varan bu teknik kullanılarak kardiyak transplantasyonda başarı oranı olduğunu göstermektedir.
Majör Histokompatibilite Kompleksi Kardiyak Uyumsuz luk ve Eşleşen Kardiyak Greftlerin Sağkalımı
"H-2" olarak tanımlanan Majör Histokompatibilite Kompleksi (MHC), genetik eşitsizlikleri ve benzerlikleri belirlemek için kullanılmıştır. Donör uyumsuz MHC antijenleri doğrudan alıcı T hücreleri ile etkileşim egörebilirsiniz veya dolaylı olarak donör MHC kaynaklı peptidler alıcı MHC molekülleri üzerinde ifade olarak greft reddi tetikleyebilir23. Tam MHC uyumsuz BALB/c (H-2d)allogreft kalp reddedilebilir, transplantasyondan sonra ortalama 7.5 gün c57BL/6 (H-2b)alıcı farelere(Şekil 4A)ortanca sağkalım süresi ile. Çalışmalarımızda, singenik kalp nakli 100 günden fazla sürse de, ameliyat öncesi normal kiloya göre %15'lik bir kilo kaybı na bağlı nadir bir vaka dışında.
Kalp allogreftleri ret sırasında histopatolojik inceleme için hasat edilebilir. Şekil 4B, inflamatuar hücre infiltrasyonu, doku ödemi ve mikrovasküler oklüzyon gibi hücre aracılı ret karakteristiklerinin görünümünü göstermektedir. Singenik greftler miyosit nekroz veya inflamatuar hücre infiltrasyonu bulgusu olmadan normale yakındır.
İç Tüpün Vasküler Endotel Üzerine Etkisi
Singenik kalp naklinden 100 gün sonra, lümen içine iç tüp yerleştirildikten sonra vasküler endotel hasarı değerlendirmek için, anastomoz bölgesinin vasküler endotel toplanabilir ve immünoresans ile lekeli. Bu analizde vasküler duvarda belirgin bir daralma, tromboz veya intimakalınlığı gözlenmemiştir(Şekil 4C). Elektron mikroskobik görüntüleme, pürüzsüz bir endotel ve düzenli boylamsal ibik oluşumu, endotel hücreleri düzgün ve yakından düzenlenmiş, yüzeyde belirgin tortular ile ortaya(Şekil 4D).
Şekil 1: Steril Cerrahi Aletler kümesi:
(A) İnce çerkesler ve oftalmik makas; (B) Mikro kavisli forceps; (C) Mikro düz forceps; (D) Mikro iğne tutucular; (E) Mikro makas; (F) Bulldog kelepçeler; (G) Bir arter iç tüp (kırmızı noktalı ok) ve manşet (kırmızı katı ok), bir damar iç tüp (siyah noktalı ok) ve manşet (siyah katı ok) ile birlikte. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Alıcı hazırlığı.
(A) Dış juguler ven damar içine damar iç tüp takın; (B) Manşet üzerinde damar damarEvert ve bir çevre 8-0 kullanarak düzeltmek ipek sütür; (C) Arter damarı lümen içine arter iç tüp eklemek; (D) Manşet üzerinde damar damarEvert ve bir çevre 8-0 kullanarak düzeltmek ipek sütür. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Heterotopik Mürin Transplantasyonunda Her Adımın Çalışma Süresi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: (A) Kardiyak greft Sağkalım Süresi. C57BL/6 alıcı farelere (n=12 fare/grup) nakledilen donör farelerden kalp allogreftlerinin (BALB/c) ve sinjenenik greftlerin (C57BL/6) sağkalımını gösteren Kaplan-Meier komplosu; (B) Transplantasyon dan sonra 7 Gün C57BL/6 (solda) İzogreft ve Yabani Tip BALB/c Allograft 'ın mikroskobik muayenesi (Ölçek çubukları, 50 um; büyütme ×400); (C) İmmünofloresans (Ölçek çubukları, 50 μm; büyütme ×400) (D) Transplant (solda) ve Naif (sağda) Alıcıda Vasküler Endotel Elektron Mikroskobu Taraması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Anastomoz tekniği | Alıcı nın hazırlık süresi | Donör hazırlama süresi | Kalp implantasyon süresi | Soğuk ve sıcak iskemi zamanı | Toplam çalışma süresi | |
| 5.000 Servikal Heterotopik | Dikiş | N | N | N | < 45 dk | N |
| 6.000 Servikal Heterotopik | Manşet | 45 dk | 15 dk | 10 dk | N | N |
| 24.000 Servikal heterotopik | Manşet | 15 dk | 20 dk | 15 dk | 25-40 dk | < 60 dk |
| 25.000 Karın Heterotopik | Dikiş | N | N | N | N | 35 dk |
| 7.000 Servikal Heterotopik | Manşet | N | 20 dk | N | 30 dk | 35 dk |
| 26.000 Servikal Heterotopik | Manşet | N | 20 dk | 20 dk | < 35 dk | N |
| 4.2.2 Karın Heterotopik | Dikiş | 60-70 dk | 6-7 dk | N | N | 75 dk |
| 21.000 Servikal Heterotopik | Manşet | N | N | 7 dk | 20 dk | 45 dk |
| 27.000 Karın Heterotopik | Dikiş | N | 10-15 dk | N | N | 45-60 dk |
| 28.000 Servikal Heterotopik | Manşet | 25 dk | 20 dk | 15 dk | 20 dk | 60 ± 8 dk |
| 29.000 Servikal Heterotopik | Manşet | 31,9 dk | 21,1 dk | 5,1 dk | 28,5 dk | 57.8±3.9 dk |
| 29.000 Servikal Heterotopik | Dikiş | 25,2 dk | 20,5 dk | 30,8 dk | 51,3 dk | 83.9±2.9 dk |
| Protokolümüzde Servikal Heterotopik | Manşet | 15,5 dk | 10,9 dk | 4,4 dk | 15,3 dk | 35 dk |
| (Tek İşlem) | ||||||
| 23 dk | ||||||
| (İşbirliği) |
Tablo 1: Farklı Fare Kalp Nakli Tekniklerinde Farklı Evrelerin ZamanLarının Karşılaştırılması.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fare kalp nakli modelleri nakil immünoloji araştırmaları için önemli araçlardır, çünkü bu modelin bağışıklık mekanizmalarını değerlendirmek için gerekli araç ve gereçler ve çok sayıda gen modifiye edilmiş fare mevcuttur. Ancak, damar sütür ve eversiyon gibi mikrocerrahi teknik zorluklar, yaygın kullanımını sınırlandırmış. Bu çalışmada, mindik kalp naklinin bazı temel teknik zorluklarını araştırdık ve iyi sonuçlar elde ettik. Protokolün kritik bir adım manşet üzerinde damar duvarı evert için bir stent olarak lümen içine bir iç tüp ekleme. Bu optimizasyon adımı, geniş bir esneme ihtiyacı nedeniyle arter damarı everting teknik sorun çözer. Mikrocerrahi becerisi olmayan bireyler iki aylık bir eğitimden sonra bu tekniği uygulamaya başlayabilirler ve bu da bu modelin geniş çaplı uygulanmasına yardımcı olacaktır.
Deneyimlerimize göre, uygun bir iç tüp transplantasyon sonuçlarını artıracaktır. İç tüpün dış çapı alıcı kan damarının iç çapındakinden biraz daha küçük olmalıdır. Ayrıca, künk polipropilen tüpler veya kaygan bir yüzeye sahip silindirler vasküler endotel zarar önlemek için geçici iç çekirdek olarak kullanılmalıdır. Elimizde, trombüs dikiş tekniği kullanılarak anastomoz sonrası başarısızlık için önemli bir faktör olmasına rağmen, başarısız modellerin% 5 tromboz oluştu. Bu olgun modelleri kullanarak, bizim laboratuvarları akran gözden geçirenler tarafından kabul edilmiştir çeşitli temel araştırma makaleleri yayınladı14,15, 16,,1717,18,19.
35 dakika içinde yapılan ameliyatlar geleneksel manşet tekniğine göre anlamlı olarak farklı değildi, ancak soğuk ve sıcak iskemi süresi diğer tekniklere göre anlamlı olarak düşüktü(Tablo 1). İşbirliği modelinin kullanılması ortalama çalışma süresini 23-25 dakikaya düşürür ve bu süre alıcı farenin anestezi süresine ve donör kalp implantasyon süresine yansır. Manşet tekniğinin sıcak iskemik zamanı sınırlamasının bir diğer avantajı da(Tablo 1). Hiçbir buz torbası fare alıcının sıcak vücut sıcaklığından kalp grefti korumak için kullanılır gibi, sıcak iskemik zaman anastomoz zaman eşdeğerdir. Optimize edilmiş manşet tekniği, anastomoz işlemini kolaylaştırmak için alıcıüzerinde her iki manşetin hazırlanmasını içerir ve buna göre anastomoz süresini kısaltır. Bu nedenle, manşet tekniği sıcak iskemik süreyi ortalama 4,4 dakika ile sınırlar.
Ancak, tartışılan yeni teknikle dikkat edilmesi gereken bazı önemli adımlar vardır. Submandibular bezi kalp greftdüzeltmek ve damarların bükülmesini önlemek için kullanılabilir submandibular bezi olarak servikal heterotopik kalp nakli30alıcı farenin submandibular bezi korumak için emin olun. Dış juguler ven ve karotis arter izole ederken vagus sinirzarar kaçının, yaralanma alıcı boyun hemiplejiyol açabilir gibi. Mukabele kelepçelerinin basıncı klips yaralanmasını veya damar sızıntısını önlemek için 20-25 gram da muhafaza edilmelidir. Damarların lümenini ve manşetleri 0-4 °C heparinize tuzlu tuzlu ile yıkayın ve artık kan ve gaz kabarcıklarını temizle; reperfüzyon sonrası greftlerde emboliyi önler. 0-4 °C heparinize tuzlu ile donör perfüzyon için 1 mL şırınga kullanın ve uygun bir basınç korumak için saniyede 50 μL hızını artırmak. Anastomoz sırasında, çevre 8-0 bant yok dikişler (manşet everted vasküler endotel düzeltmek için kullanılan) greft arterlerin lümen içine.
İşbirliği modelinde mikrocerrahi tekniklere duyulan ihtiyaç, iki eşzamanlı mikroskopun bulunması ve yetenekli cerrah sayısının iki katına kadar sınırlamalar olmasına rağmen, vaskülarize organ naklinin başarılı bir yaklaşım olduğu gösterilmiştir. Daha geniş uygulaması, yeni immünsupresif protokollerin geliştirilmesine ve nakil alanında akut ve kronik ret mekanizmalarının incelenmesine katkıda bulunabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Acknowledgments
Bu çalışma Fujian İl Sağlık Eğitimi Ortak Araştırma Projesi (WKJ2016-2-20), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81771271 ve 81800664), Çin Ulusal Temel Ar-Ge Programı (2018YFA0108) tarafından desteklendi. 304) ve Fujian Eyaleti Genç ve Orta Yaşlı Öğretmenler için Eğitim ve Bilimsel Araştırma Projesi (JAT170714), Çin Hunan Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2019JJ50842) ve Hunan Eyaleti Huxiang Genç Yetenekler (2019RS2013).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Artery cuff | Self-made | Polyamide tube. diameter: 0.55 mm,length: 1.0 mm | |
| Artery inner tube | Self-made | Polyamide tube. Diameter: 0.28mm | |
| Micro curved forceps | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA3050 | 1/8 arc, 0.3-mm tip without a hook |
| Micro needle holders | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA2050 | 0.2-mm tip |
| Micro scissors | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA1050 | Straight, blade length: 10 mm |
| Micro straight forceps | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA3060 | 0.15-mm tip without a hook |
| Scanlan Vascu-Statt Bulldog Clamps | Scanlan International Inc | 1001-531 | Clamping pressure 20–25 grams |
| Vein cuff | Self-made | Polyamide tube. diameter: 0.9 mm,length: 1.2 mm | |
| Vein inner tube | Self-made | Polyamide tube. Diameter: 0.6 mm |
References
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Heart transplantation in congenic strains of mice. Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).
- Que, W., et al. Prolonged cold ischemia time in mouse heart transplantation using supercooling preservation. Transplantation. , (2019).
- Wang, C. Y., et al. Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions. Circulation. 105 (13), 1609-1614 (2002).
- Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).
- Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).
- Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).
- Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice. Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).
- Li, W., et al. Surgical technique for lung retransplantation in the mouse. Journal of Thoracic Disease. 5 (3), 321-325 (2013).
- Kamada, N., Calne, R. Y. A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat. Surgery. 93 (1), Pt 1 64-69 (1983).
- Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis. PLoS One. 8 (10), 77278 (2013).
- Miller, M. L., et al. Spontaneous restoration of transplantation tolerance after acute rejection. Nature Communications. 6, 7566 (2015).
- Lin, Y., et al. Overexpression of Jagged-1 combined with blockade of CD40 pathway prolongs allograft survival. Immunology and Cell Biology. 93 (2), 213-217 (2015).
- Xie, B., et al. Combined costimulation blockade inhibits accelerated rejection mediated by alloantigen-primed memory T cells in mice. Immunological Investigations. 38 (7), 639-651 (2009).
- Shao, W., et al. Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice. Immunology Letters. 138 (2), 122-128 (2011).
- Dai, H., et al. Blockade of CD27/CD70 pathway to reduce the generation of memory T cells and markedly prolong the survival of heart allografts in presensitized mice. Transplant Immunology. 24 (4), 195-202 (2011).
- Yan, G., et al. Inhibition of accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonged allograft survival by arsenic trioxide. Immunological Investigations. 42 (5), 438-454 (2013).
- Yan, G., et al. Inhibiting accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonging allograft survival by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D(3) in nude mice. Immunology Letters. 149 (1-2), 54-61 (2013).
- Lin, Y., et al. Arsenic trioxide is a novel agent for combination therapy to prolong heart allograft survival in allo-primed T cells transferred mice. Transplant Immunology. 25 (4), 194-201 (2011).
- Shao, W., et al. CD44/CD70 blockade and anti-CD154/LFA-1 treatment synergistically suppress accelerated rejection and prolong cardiac allograft survival in mice. Scandinavian Journal of Immunology. 74 (5), 430-437 (2011).
- Li, Y., et al. A highly reproducible cervical cuff technique for rat-to-mouse heterotopic heart xenotransplantation. Xenotransplantation. , (2017).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
- Blanchard, J. M., Pollak, R. Techniques for perfusion and storage of heterotopic heart transplants in mice. Microsurgery. 6 (3), 169-174 (1985).
- Felix, N. J., et al. H2-DMalpha(-/-) mice show the importance of major histocompatibility complex-bound peptide in cardiac allograft rejection. Journal of Experimental Medicine. 192 (1), 31-40 (2000).
- Tomita, Y., et al. Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice. Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).
- Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon. Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).
- Wang, K., Zhang, N., Li, H. Improved technique of mouse heterotopic heart graft retransplantation. Microsurgery. 26 (3), 200-202 (2006).
- Plenter, R. J., Grazia, T. J. Murine heterotopic heart transplant technique. Journal of Visualized Experiments. (89), (2014).
- Ratschiller, T., et al. Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice. Journal of Visualized Experiments. (102), e52907 (2015).
- Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Experimental and Clinical Transplantation. 8 (3), 245-249 (2010).
- Fukunaga, N., Bissoondath, V., Rao, V. Submandibular Gland-preserving Technique for Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice. Transplantation. 102 (11), 464-465 (2018).
