Summary
इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य फसल संकुचन को मापना और ड्रोसोफिला आंत में खाद्य वितरण की मात्रा बताना है।
Abstract
अधिकांश जानवर भोजन को पचाने के लिए गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल (जीआई) ट्रैक्ट का उपयोग करते हैं। जीआई ट्रैक्ट में निगले गए भोजन की गति पोषक तत्व अवशोषण के लिए आवश्यक है। अव्यवस्थित जीआई मोटिविटी और गैस्ट्रिक खाली करने से कई बीमारियां और लक्षण होते हैं। एक शक्तिशाली आनुवंशिक मॉडल जीव के रूप में, ड्रोसोफिला का उपयोग जीआई मोटिविटी अनुसंधान में किया जा सकता है। डीरोसोफिला फसल एक अंग है जो भोजन को आगे पाचन के लिए मिडगुट में ले जाता है, कार्यात्मक रूप से स्तनधारी पेट के समान होता है। प्रस्तुत सरल माप उपकरणों का उपयोग कर ड्रोसोफिला फसल गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए एक प्रोटोकॉल है। फसल की गतिशीलता का मूल्यांकन करने के लिए फसल संकुचन की गिनती के लिए एक विधि और खाद्य पासेजिंग पर फसल के प्रभाव की जांच करने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके फसल और आंत के बीच भोजन रंगे नीले रंगे के वितरण का पता लगाने के लिए एक विधि का वर्णन किया गया है। इस विधि का उपयोग नियंत्रण और nprl2 उत्परिवर्ती मक्खियों के बीच फसल गतिशीलता में अंतर का पता लगाने के लिए किया गया था। यह प्रोटोकॉल लागत कुशल और फसल की गतिशीलता के प्रति अत्यधिक संवेदनशील दोनों है।
Introduction
अधिकांश जानवरों में पर्यावरण से ऊर्जा और पोषक तत्वों को अवशोषित करने के लिए गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल (जीआई) ट्रैक्ट नामक पाचन नली होती है। मानव जीआई पथ चार भागों से बना है: घेघा, पेट, छोटी आंत, और बड़ी आंत (पेट) । पोषक तत्व अवशोषण के लिए पेट से आंत तक भोजन मार्ग आवश्यक है। कुछ प्रभावक, जैसे उम्र बढ़ने, विषाक्त दवाएं, और संक्रमण, अव्यवस्थित जीआई ट्रैक्ट मोटिविटी और गैस्ट्रिक खाली करने का कारण बनते हैं, जो कुछ बीमारियों और उनके लक्षणों जैसे अपच, गैस्ट्रोसोफेगल भाटा रोग, और कब्ज1से संबंधित है।
फल मक्खी(ड्रोसोफिला मेलानोगेस्टर)अपने आसान आनुवंशिक हेरफेर के कारण जैव चिकित्सा अनुसंधान में एक व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला मॉडल जानवर है। महत्वपूर्ण बात यह है कि मानव रोग से जुड़े लगभग 77% जीन ड्रोसोफिला2में एक होमोलॉग है। ड्रोसोफिला का उपयोग करके अनुसंधान ने कई रोग तंत्रों की हमारी समझ में भारी प्रगति की है। एक शक्तिशाली आनुवंशिक मॉडल जीव के रूप में, ड्रोसोफिला का उपयोग जीआई ट्रैक्ट रिसर्च 3 में व्यापक रूप से कियाजाताहै। ड्रोसोफिला में एक सरल पाचन तंत्र होता है, जिसे तीन असतत डोमेन में विभाजित किया जाता है: फोरगुट, मिडगुट और हिंडगट4। फसल, फोरगट का एक हिस्सा, एक बैग जैसी संरचना है जो खाद्य भंडारण के लिए एक साइट के रूप में कार्य करती है। मिडगट एक लंबी ट्यूब है और एपिथेलियल परत के माध्यम से भोजन पाचन और पोषक तत्व अवशोषण के लिए साइट के रूप में कार्य करता है, जिसमें अवशोषण आंत्रप्रेन्योट्स (ईसीएस) और स्राविक आंत्रप्रेन्योर (ईई) कोशिकाएं5होती हैं। दिलचस्प बात यह है कि ड्रोसोफिला में पेट के कार्य को दो भागों में विभाजित किया गया है: फसल खाद्य भंडारण के रूप में कार्य करती है और तांबा सेल क्षेत्र (सीसीआर) एक पीएच एंड एलटी; 36के साथ एक अत्यधिक अम्लीय क्षेत्र है। ड्रोसोफिलामें शुरू में भोजन को फसल में ले जाया जाता है और बाद में मिडगुट 7 में पंप कियाजाताहै । इस प्रकार, फसल भोजन पासिंग में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। आंत की मांसपेशियों से घिरा हुआ है और वाल्व और स्फिंकर की एक जटिल सरणी से मिलकर, फसल आगे पाचन के लिए मिडगट में भोजन को अनुबंधित और चलती रहती है।
यह प्रोटोकॉल ड्रोसोफिलामें फसल से मिडगिट तक खाद्य आंदोलन का पता लगाने की अनुमति देता है। फसल संकुचन का मूल्यांकन फसल संकुचन आवृत्ति की गणना करके किया जाता है। इसके अलावा फसल और आंत के बीच भोजन वितरण का पता लगाकर भोजन पासिंग पर फसल के प्रभाव की जांच की जाती है। इसके अलावा, खाद्य वितरण का उपयोग विभिन्न भोजन अवधियों का उपयोग करके तत्काल खाद्य आंदोलन या बुनियादी खाद्य स्थिति को प्रतिबिंबित करने के लिए किया जा सकता है। एक साथ लिया गया, यह प्रोटोकॉल ड्रोसोफिलामें फसल गतिशीलता और भोजन पासिंग का तेजी से मूल्यांकन करने के तरीके प्रदान करता है।
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Protocol
1. प्रयोगात्मक मक्खियों को बनाए रखना और तैयार करना
- 60% आर्द्रता के साथ 25 डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में 10 एमएल हौसले से बने भोजन (1% एगर, 2.4% शराब बनानेवाला खमीर, 3% सुक्रोज, 5% कॉर्नमील) वाली शीशियों में मक्खियों को बनाए रखें। इनक्यूबेटर के प्रकाश चक्र को 12-h प्रकाश: 12-एच अंधेरे में सेट करें।
- यह सुनिश्चित करने के लिए कि वांछित जीनोटाइप की एक बड़ी संख्या एक साथ निकलती है, संस्कृति युवा मक्खियों (1−3 दिन पुराना) मानक भोजन में 3 दिनों के लिए सतह पर शुष्क खमीर के साथ। अंडे बिछाने की अनुमति देने के लिए 2 दिनों के लिए गीले खमीर सहित मानक भोजन के साथ वयस्कों को एक नए भोजन की शीशी में स्थानांतरित करें। अधिक अंडे इकट्ठा करने के लिए वयस्क मक्खियों को एक नई शीशी में विकसित करने और स्थानांतरित करने के लिए इनक्यूबेटर में अंडे छोड़ दें।
- प्रत्येक दिन eclosed पुरुष या महिला मक्खियों को इकट्ठा करें और वांछित उम्र के रखरखाव की स्थिति में मानक भोजन के साथ नई शीशियों में उन्हें संस्कृति दें।
नोट: अधिक समान आयु की मक्खियों को प्राप्त करने के लिए, वांछित जीनोटाइप की कई शीशियों को एक साथ स्थापित किया जा सकता है। वयस्क फ्लाई कल्चर के लिए शीशियों को हर 3−5 दिनों में बदला जाना चाहिए।
2. फसल संकुचन की गिनती
- सीओ2 के साथ मक्खियों को एनेस्थेटाइज करें और एक फ्लाई को एक विच्छेदन प्लेट में लें जिसमें 1x फॉस्फेट बफर नमकीन (पीबीएस, पीएच = 7.4) 136.89 mM NaCl, 2.67 mM KCl, 8.1 m M Na2HPO4,और 1.76 m M KH2पीओ4से बना है।
- चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग करके अपने छाती पर फ्लाई को पकड़ें, चिमटी की एक और जोड़ी का उपयोग करके छाती को आसानी से खोलें, और फिर पेट को खोलने के लिए विपरीत दिशाओं में अंत खींचें। फसल और आंत को शरीर से सावधानी से बाहर निकालें।
- उड़ान भरने के लिए प्रतीक्षा करें और फिर फसल की कल्पना करें और 1 मिनट में अनुबंधित होने वाली संख्या की गणना करें।
नोट: केवल फसल पालि पर एक पूरी लहर एक संकुचन के रूप में गिना जाता है । - 30 एस अंतराल के बीच 5x के लिए चरण 2.3 दोहराएं।
- प्रति मिनट फसल संकुचन की औसत संख्या की गणना करें।
नोट: संकुचन गिनती के दौरान, मक्खी जीवित होना चाहिए, और आंत बरकरार होना चाहिए और विच्छेदन के बाद अपने पूर्वकाल और पीछे समाप्त होता है पर संलग्न होना चाहिए ।
3. रंगे हुए भोजन की तैयारी
- 20% (w/v) की एकाग्रता पर पीबीएस में नीले रंग(सामग्रीकी तालिका) को तौलें और भंग करें।
- खाद्य शीतलन प्रक्रिया के दौरान 0.5% (w/v) की अंतिम एकाग्रता के लिए 1:40 कमजोर पड़ने के साथ उबला हुआ तरल रखरखाव भोजन (चरण 1.1) में 20% नीले रंग जोड़ें।
नोट: नीले रंग को ठंडा करने से पहले जोड़ा जाता है और सरगर्मी के साथ अच्छी तरह से मिलाया जाता है। पीबीएस में नीले रंग को भंग करना वैकल्पिक है; आसुत जल भी उपयुक्त है।
4. रंगे हुए भोजन के साथ मक्खियों को खिलाना
- भोजन का सेवन सुनिश्चित करने के लिए 4 घंटे के लिए भुखमरी भोजन (आसुत पानी में 1% एगर) के साथ शीशियों में एक ही आयु वर्ग के समूहों का स्थानांतरण करें।
- मक्खियों को भोजन रंगे नीले और संस्कृति के साथ नई शीशियों में स्थानांतरित करें वांछित समय के लिए मक्खियों।
नोट: भोजन का समय एक महत्वपूर्ण कारक है और अनुसंधान उद्देश्य पर निर्भर करता है। कम भोजन, भोजन के समय के भीतर, फसल से पेट तक भोजन की गतिशीलता की गति का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। रखरखाव की स्थिति में, भोजन लगभग 2 घंटे में से गुजरता है। हालांकि, गुजरने का समय संस्कृति की स्थितियों से संबंधित हो सकता है । लंबे समय तक खिला, कुछ दिनों तक, फसल और आंत के बीच लगातार खाद्य वितरण स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
5. मक्खियों को विच्छेदन करना और फसल और आंत में डाई के नमूने एकत्र करना
- सीओ2 के साथ मक्खियों को एनेस्थेटाइज करें और एक फ्लाई को एक विच्छेदन प्लेट में लें जिसमें 1x पीबीएस के 200 माइक्रोन शामिल हैं।
- चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग कर अपने छाती पर मक्खी को समझें और चिमटी की एक और जोड़ी का उपयोग करके शरीर से सिर ले जाएं। शेष शरीर को 1x पीबीएस के 200 माइक्रोन युक्त एक नए कुएं में ले जाएं।
- मक्खी शरीर से जुड़े डाई को साफ करने के लिए चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग करके 1x PBS के 200 माइक्रोन में धीरे-धीरे मिलाते हुए शरीर को 2x धोएं।
- धीरे और आसानी से चिमटी के दो जोड़े का उपयोग कर पेट खुला और ध्यान से शरीर से पूरे पेट को अलग।
- ध्यान से पूरे पेट से फसल को उतार लें और इसे 1x पीबीएस के 100 माइक्रोन के साथ एक ट्यूब में डाल दें।
- अंत में, 1x पीबीएस के 100 माइक्रोन के साथ एक और ट्यूब में फसल के बिना पूरे पेट (इसके बाद पेट के रूप में संदर्भित) डाल दिया।
- पीबीएस में डाई को भंग करने के लिए पिपेट टिप्स का उपयोग करके ट्यूबों में क्रमशः फसल और आंत को पीसें।
- जब तक पर्याप्त फसलों और हिम्मत को डिजाइन किए गए प्रयोग के लिए एकत्र नहीं किया जाता है तब तक चरण 5.1−5.7 दोहराएं।
नोट: फसल और आंत को पूरी तरह से समरूप होना चाहिए, और सभी डाई को बफर में भंग किया जाना चाहिए। अनुसंधान प्रयोजनों के लिए, एक ट्यूब में एक या कई फसलों या हिम्मत एकत्र की जा सकती है।
6. फसल और आंत में डाई मात्रा की गणना
- 1 मिनट के लिए उच्चतम गति से नमूना ट्यूबों को अपकेंद्रित्र करें और 96 अच्छी प्लेट के कुओं में सुपरनैंट के 90 माइक्रोन स्थानांतरित करें।
- मानकों के रूप में 1 x 10-7 ग्राम/एमएल से 1 x 10-4 ग्राम/एमएल तक सांद्रता पर नीले डाई कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला बनाएं।
- 96 अच्छी तरह से प्लेट के कुओं के लिए 90 μL मानकों की एक श्रृंखला जोड़ें।
- प्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ 630 एनएम पर नमूनों और मानकों के अवशोषण को मापें।
- एक मानक वक्र बनाने के लिए, प्रत्येक मानक के लिए अवशोषण बनाम एकाग्रता की एक पंक्ति ग्राफ प्लॉट। फिर नमूनों में डाई एकाग्रता की गणना करने के लिए उपयोग किए जाने वाले समीकरण प्राप्त करने के लिए अंकों के माध्यम से सर्वश्रेष्ठ फिट की एक पंक्ति खींचें।
- 0.1 एमएल द्वारा नमूना एकाग्रता गुणा करके डाई की मात्रा की गणना करें।
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Representative Results
फसल संकुचन दर की गणना करने और रंगे हुए खाद्य वितरण का पता लगाने के लिए इन तरीकों का उपयोग खाद्य गतिशीलता पर फसल समारोह का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है। फसल संकुचन पेट में भोजन को धकेलने की आवृत्ति को दर्शाता है। एक छोटी भोजन अवधि के बाद फ्लाई में डाई का वितरण फसल से मिडगुट तक तत्काल भोजन को इंगित करता है।
रैपामाइसिन कॉम्प्लेक्स 1 (TORC1) का लक्ष्य एक मास्टर रेगुलेटर है जो पोषक तत्वों और सेल मेटाबॉलिज्म को मध्यस्थता करता है। TORC1 अवरोध ड्रोसोफिलासहित कई जीवों में उम्र का विस्तार करता है । TORC1 के अवरोधक के रूप में, एनपीआरएल2 उत्परिवर्ती फ्लाई TORC1 और जीआई पाचनदोषों 8,,9के अतिसक्रियण को प्रदर्शित करती है। एनपीआरएल2 म्यूटेंट में फसल का आकार 3 दिन पुराना है और 15 दिन की उम्र में बढ़ा हुआ है, इसकी तुलना में इसके आनुवंशिक पृष्ठभूमि नियंत्रण(yw)8। फसल की गतिशीलता परख का मूल्यांकन करने के लिए, 3 दिन पुरानी nprl2 उत्परिवर्ती मक्खियों और yw नियंत्रण का उपयोग किया गया था। प्रत्येक फसल को पांच बार गिना गया और औसत मूल्य का उपयोग किया गया(पूरक तालिका 1)। पांच दोहराता के दौरान फसल संकुचन की संख्या समान थे, जो पता चलता है कि PBS कम खिला में फसल शरीर विज्ञान को प्रभावित नहीं हो सकता है और फसल संकुचन गिनती के लिए उपयुक्त है । एनपीआरएल2 म्यूटेशन से फसल संकुचन(चित्र 1)की दर में काफी कमी आई ।
स्तनधारी पेट के समान, ड्रोसोफिला फसल भोजन को पेट में ले जाने के लिए अनुबंधित रखती है। फसल पर Nprl2 के कार्य की पुष्टि करने के लिए, खाद्य आंदोलन का पता चला। मक्खियों को 30 मिनट के लिए रंगे हुए भोजन के साथ खिलाया गया था और स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग करके फसल और आंत में डाई की मात्रा का पता लगाने के लिए तुरंत विच्छेदित किया गया था। जैसा कि चित्र 2 एमें दिखाया गया है, नियंत्रण और nprl2 म्यूटेंट की फसलों में नीले रंग की मात्रा समान थी, जो पहले से सूचित तुलनीय फसल आकार8के अनुरूप थी। nprl2 म्यूटेंट आंत में कम डाई था, जो घट संकुचन दर(चित्रा 2B)के साथ जुड़ा हो सकता है ।
चित्रा 1: नियंत्रण और nprl2 उत्परिवर्ती पुरुषों के बीच फसल संकुचन अंतर। 3 दिन की नर मक्खियों का विच्छेदन किया गया, और फसल संकुचन दर की गणना की गई। प्रत्येक फ्लाई की फसल संकुचन आवृत्ति को डेटा बिंदु के रूप में प्रदर्शित किया जाता है। त्रुटि सलाखों के संकेत डेटा बिंदु से एसडी का प्रतिनिधित्व करते हैं । , पी एंड एलटी; 0.001। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: एक छोटे से खिलाने के समय के बाद नियंत्रण और nprl2 उत्परिवर्ती पुरुषों के बीच खाद्य वितरण अंतर । 3 दिन पुराने पुरुष मक्खियों को 30 मिनट के लिए ०.५% नीले रंग वाले भोजन के साथ खिलाया गया और फिर डाई की मात्रा का पता लगाने के लिए तुरंत विच्छेदित किया गया । }Aफसल में डाई की राशि। (ख)फसल के बिना पेट में डाई की राशि । **, पी एंड एलटी; 0.01; एनएस, महत्वपूर्ण नहीं है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
पूरक तालिका 1: चित्रा 1में उपयोग किए जाने वाले फसल संकुचन का मूल डेटा। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Discussion
ड्रोसोफिला में भोजन पाचन के लिए फसल से पेट तक ले जाता है। इस प्रक्रिया के दौरान, पोषक तत्वों को अवशोषित कर लिया जाता है, और कचरे को मल के रूप में शरीर से बाहर निकाल दिया जाता है। इस प्रकार, मल इंजेक्शन के साथ भोजन घूस की तुलना मोटे तौर पर शरीर में खाद्य आंदोलन की गति का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। केशिका फीडर (सीएएफए) की विधि का व्यापक रूप से उपयोग भोजन के घूस को मापने के लिए किया जाता है10,,11। मल संख्या गणना की विधि का उपयोग मल निर्माण की मात्राकाअनुमान लगाने के लिए किया जा सकता है । हालांकि, ड्रोसोफिला शरीर में खाद्य आंदोलन फसल गतिशीलता सहित कई कारकों के नियंत्रण में है। क्रॉप फंक्शन का मूल्यांकन कैफे और मल गिनती के तरीकों का आसानी से नहीं किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल ड्रोसोफिलामें फसल की गतिशीलता और भोजन का मात्रात्मक रूप से फसल से पेट तक मूल्यांकन कर सकता है ।
भोजन पासिंग और ड्रोसोफिला अस्तित्व के लिए फसल की गतिशीलता आवश्यक है। फसल के कार्य को प्रभावित करने वाले कुछ जीन उत्परिवर्तन या विषाणु संक्रमण के परिणामस्वरूपआयु 7,13,,14में कमी आई . इस प्रोटोकॉल का उपयोग फसल गतिशीलता को प्रभावित करने वाले म्यूटेंट और दवाओं को स्क्रीन और मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है। फसल संकुचन गणना का उपयोग फसल मोटिविटी फ्रीक्वेंसी का पता लगाने के लिए किया जाता है और फसल और आंत में खाद्य वितरण को मापने वाले स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग फसल मोटिविटी दक्षता की भविष्यवाणी करने के लिए किया जाता है। इन दोनों तरीकों को प्रदर्शन करने के लिए आसान और अत्यधिक संवेदनशील हैं। इसके अलावा, ड्रोसोफिलामें खाद्य उपयोग का पता लगाने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री विधि को संशोधित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, पूरे पेट में डाई की मात्रा का पता लगाकर थोड़े समय के भीतर भोजन का मूल्यांकन किया जा सकता है। फसल और आंत के बीच निरंतर खाद्य वितरण स्थिति का आकलन कुछ दिनों के लिए डाई भोजन के साथ खिलाया मक्खियों में डाई मात्रा का पता लगाने के द्वारा किया जा सकता है ।
इस प्रोटोकॉल में कुछ तकनीकी विचार हैं । फसल संकुचन गिनती विधि के लिए, पीबीएस बफर में फसल को सावधानी से विच्छेदन और बाहर निकालना आवश्यक है। खारा समाधान फसल का शारीरिक वातावरण नहीं है। फसल को शरीर से जुड़ा रहना चाहिए, और मक्खी को जीवित और जागना चाहिए; अन्यथा, फसल अनुबंध करने की क्षमता खो देती है। यह सुझाव दिया जाता है कि फसलों के संकुचन को अक्षुण्ण मक्खियों में भीगिना जाए. स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री विधि के लिए, विच्छेदित जीआई से फसलों का पृथक्करण और भोजन डाई फीडिंग के बाद 96 अच्छी तरह से प्लेट में उनका स्थानांतरण सावधानीपूर्वक और जल्दी किया जाना चाहिए। डाई का उपयोग फसल और आंत में भोजन की मात्रा को इंगित करने के लिए किया जाता है। विच्छेदन प्रक्रिया के दौरान, फसल और आंत संपर्क में होना चाहिए। यदि विच्छेदन मीडिया में डाई लीक होती है, तो नमूना का उपयोग नहीं किया जा सकता है। अभ्यास के साथ, एक कुशल तकनीशियन 30 एस के भीतर विच्छेदन और फसल जुदाई खत्म कर सकते हैं ।
पहले, इन तरीकों का उपयोग 15 दिन पुरानी nprl2 उत्परिवर्ती मक्खियों में फसल की गतिशीलता का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता था जिसमें बढ़ी हुई फसलें8थीं। इस मामले में, सामान्य फसल आकार वाले 3 दिन पुराने nprl2 म्यूटेंट में फसल संकुचन और खाद्य वितरण की मात्रा निर्धारित की गई थी। फसल संकुचन दर में कमी के अनुरूप, nprl2 म्यूटेंट पेट में कम खाद्य डाई प्रदर्शित किया । इन परिणामों से पता चलता है कि nprl2 म्यूटेंट में कम उम्र में भी फसल की गतिशीलता में कुछ दोष होते हैं । yw पृष्ठभूमि एक जंगली प्रकार के नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था क्योंकि यह nprl2 उत्परिवर्ती की आनुवंशिक पृष्ठभूमि है । अन्य प्रयोगों के लिए, कैंटन एस और डब्ल्यू118जैसे उपभेदों को नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जासकता है। अन्य समूह फसलसंकुचन,14,का पता लगाने के लिए एक अलग विच्छेदन समाधान (123 mM NaCl, 2 mM KCl, 1.8 mCl2,8 mM MgCl2,35.5 m m m सुक्रोज, पीएच = 7.1) का उपयोग करतेहैं। इस अध्ययन में नियंत्रण मक्खियों में पाई जाने वाली फसल संकुचन दर सोलारी एट अल15द्वारा रिपोर्ट की गई तुलना में कम है, लेकिन चेटरबानोवा एट अल से अधिक है ।14 और पेलर एट अल ।13। यह अंतर विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि या विच्छेदन मीडिया के कारण हो सकता है।
कुल मिलाकर, फसल संकुचन के साथ नीले रंग की स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग फसल गतिशीलता का मूल्यांकन करने के लिए कुशलतापूर्वक किया जा सकता है। यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल ड्रोसोफिला को जीआई ट्रैक्ट फिजियोलॉजी अध्ययन के लिए एक अच्छा मॉडल बनाने में मदद करता है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (नंबर ३१८७२२८७), जियांग्सू प्रांत के नेचुरल साइंस फाउंडेशन (NO) ने सपोर्ट किया । BK20181456) और जियांग्सू प्रांत में छह प्रतिभा चोटियों परियोजना (नहीं । SWYY-146) ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 96-well plate | Thermo fisher | 269620 | |
| Brillant Blue FCF | Solarbio | E8500 | also called FD&C Blue No. 1 |
| Centrifuge | Thermo fisher | Heraeus Pico 17 | |
| Spectrophotometer | Spectra Max | cMax plus | |
| Tweezers | Dumont | 11252-30 |
References
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