O objetivo deste protocolo é medir a contração da cultura e quantificar a distribuição de alimentos no intestino de Drosophila.
A maioria dos animais usa o trato gastrointestinal (GI) para digerir alimentos. O movimento dos alimentos ingeridos no trato GI é essencial para a absorção de nutrientes. Motilidade desordenada e esvaziamento gástrico causam múltiplas doenças e sintomas. Como um poderoso organismo de modelo genético, o Drosophila pode ser usado em pesquisas de motilidade gi. A cultura Drosophila é um órgão que contrai e move alimentos para o meio para uma digestão mais aprofundada, funcionalmente semelhante a um estômago mamífero. Apresentado é um protocolo para estudar a motilidade da cultura Drosophila utilizando ferramentas de medição simples. Descreve-se um método de contagem de contrações agrícolas para avaliar a motilidade da cultura e um método para detectar a distribuição de alimentos tingidos de azul entre a cultura e o intestino usando um espectrofotômetro para investigar o efeito da cultura na passagem de alimentos. O método foi usado para detectar a diferença na motilidade da cultura entre o controle e as moscas mutantes nprl2. Este protocolo é ao mesmo tempo econômico e altamente sensível à motilidade das culturas.
A maioria dos animais tem um tubo digestivo chamado trato gastrointestinal (GI) para absorver energia e nutrientes do ambiente. O trato gi humano é composto de quatro partes: esôfago, estômago, intestino delgado e intestino grosso (cólon). A passagem de alimentos do estômago para o intestino é essencial para a absorção de nutrientes. Alguns efeitos, como envelhecimento, drogas tóxicas e infecção, causam motilidade do trato GI desordenado e esvaziamento gástrico, que está relacionado a algumas doenças e seus sintomas como dispepsia, doença do refluxo gastroesofágico e constipação1.
A mosca-das-frutas (Drosophila melanogaster) é um animal modelo amplamente utilizado em pesquisas biomédicas devido à sua fácil manipulação genética. É importante ressaltar que cerca de 77% dos genes associados à doença humana têm um homólogo em Drosophila2. Pesquisas usando Drosophila fizeram enormes avanços em nossa compreensão de muitos mecanismos de doença. Como um poderoso organismo de modelo genético, o Drosophila é amplamente utilizado na pesquisa do trato GI3. A drosophila possui um trato digestivo mais simples, que é dividido em três domínios discretos: foregut, midgut e hindgut4. A cultura, uma parte do foregut, é uma estrutura semelhante a uma bolsa que serve como um local para armazenamento de alimentos ingeridos. O midgut é um tubo longo e funciona como local para digestão alimentar e absorção de nutrientes através da camada epitelial, que consiste em enterócitos absortivos (CEs) e células enteroendócrinas secretas (EE)5. Curiosamente, a função estomacal em Drosophila é dividida em duas partes: a cultura funciona como armazenamento de alimentos e a região da célula de cobre (CCR) é uma região altamente ácida com pH < 36. Em Drosophila,o alimento ingerido é inicialmente movido para a cultura e posteriormente bombeado para o midgut7. Assim, a cultura desempenha um papel fundamental na passagem de alimentos. Envolta por músculos viscerais e consistindo de uma complexa variedade de válvulas e esfíncteres, a cultura continua contraindo e movendo alimentos para o meio para uma digestão adicional.
Este protocolo permite a detecção do movimento alimentar da cultura até o midgut em Drosophila. A contração da cultura é avaliada pela contagem da frequência de contração da cultura. Além disso, o efeito da cultura na passagem de alimentos é investigado pela detecção da distribuição de alimentos entre a cultura e o intestino. Além disso, a distribuição de alimentos pode ser usada para refletir o movimento alimentar imediato ou o status alimentar básico usando diferentes períodos de alimentação. Em conjunto, este protocolo fornece métodos para avaliar rapidamente a motilidade da cultura e a passagem de alimentos em Drosophila.
Em Drosophila ingerido alimentos se move da cultura para o intestino para digestão. Durante esse processo, os nutrientes são absorvidos, e os resíduos são expelidos para fora do corpo como fezes. Assim, comparar a ingestão de alimentos com a ejeção das fezes pode ser usado para avaliar aproximadamente a velocidade do movimento alimentar no corpo. O método de alimentador capilar (CAFE) é amplamente utilizado para medir a ingestão de alimentos10,11</su…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi apoiado pela National Natural Science Foundation of China (nº 31872287), Fundação de Ciência Natural da Província de Jiangsu (NO). BK20181456) e Seis talentos picos projeto na província de Jiangsu (No. SWYY-146).
96-well plate | Thermo fisher | 269620 | |
Brillant Blue FCF | Solarbio | E8500 | also called FD&C Blue No. 1 |
Centrifuge | Thermo fisher | Heraeus Pico 17 | |
Spectrophotometer | Spectra Max | cMax plus | |
Tweezers | Dumont | 11252-30 |