Summary
Denne protokol beskriver metoder, der anvendes til at forberede rotte vokal folder til histokemisk neuromuskulær undersøgelse.
Abstract
Formålet med denne tutorial er at beskrive forberedelsen af rotte vokal fold for histokemisk neuromuskulær undersøgelse. Denne protokol skitserer procedurer for rotte larynx dissektion, flash-frysning, og cryosectioning af vokal folder. Denne undersøgelse beskriver, hvordan man cryosection vokal folder i både langsgående og tværsnit fly. En nyhed i denne protokol er larynx tracking under cryosectioning, der sikrer præcis identifikation af de iboende larynx muskler og reducerer risikoen for vævstab. Tal viser den progressive kryosectioning i begge fly. 29 rotte hemi-larynges blev cryosectioned og spores fra fremkomsten af skjoldbruskkirtlen brusk til udseendet af det første afsnit, der omfattede den fulde vokal fold. Den fulde vokalfold blev visualiseret for alle dyr i begge planer. Der var høj variation i afstanden fra udseendet af skjoldbruskkirtlen brusk til udseendet af den fulde vokal fold i begge fly. Vægten var ikke korreleret til dybden af larynx landemærker, hvilket tyder på individuelle variabilitet og andre faktorer i forbindelse med vævspræparat kan være ansvarlig for den høje variation i udseendet af landemærker under afsnit. Denne undersøgelse beskriver en metode og præsenterer morfologiske data til forberedelse af rotte vokal fold til histokemisk neuromuskulær undersøgelse. På grund af høj individuel variation bør larynx landemærker spores nøje under kryosektion for at forhindre tilsyn med væv og vævstab. Brugen af en konsekvent metode, herunder tilstrækkelig vævsforberedelse og bevidsthed om landemærker inden for rottestrubehovedet, vil hjælpe med ensartede resultater på tværs af undersøgelser og hjælpe nye forskere, der er interesseret i at bruge rottevokalfolden som model til at undersøge larynx neuromuskulære mekanismer.
Introduction
Rottestrubehovedet er en veletableret model til at undersøge strukturelle og funktionelle neuromuskulære larynx tilpasninger til udvikling, aldring, sygdom og farmakologiske agenser1,2,3,4,5. Konsistensen af histologiske metoder er afgørende for denne branche, da der er flere snørklede involveret i muskelforberedelse og -analyse samt udfordringer forbundet med larynx størrelse, form og topografi af musklerne indkapslet i larynx brusk1,6,7,8,9,10,11 . På grund af den lille størrelse af rotten iboende larynx muskler, systematisk indlejring, frysning, og cryosectioning er afgørende for at opnå konsekvente og præcise resultater. For eksempel, når du sektionerer rottevokalfolden i koronarplanet, er de neuromuskulære knudepunkter (NMJs) af fire af de iboende larynxmuskler placeret inden for mindre end 1,8 mm vævsdybde11. Derfor er præcis overvågning af larynx muskel anatomi under cryosectioning er afgørende for præcist at identificere de afsnit (r) af interesse og forhindre tilsyn med væv. Tilsyn med målet muskel kan resultere i unøjagtig identifikation af antal og topografi af NMJs11 eller kan resultere i samlede reduktioner i stikprøvestørrelsen, hvis målet muskel kasseres på grund af skelsættende orientering forvirring12. Som nye modeller for studiet af larynx muskel og deres respektive tilpasninger er udviklet, standard driftsprocedurer er afgørende for at sikre resultaterne er præcise, pålidelige og reproducerbare på tværs af undersøgelser.
Formålet med denne artikel er at detaljeret forberedelse af rotte vokal fold for optimal langsgående og tværsnit analyse. Detaljerede metoder, der anvendes regelmæssigt i vores laboratorium er beskrevet til at identificere mål muskel vartegn under cryosectioning. Selvom lignende metoder anvendes i flere laboratorier, gives der større detaljer her end i litteraturen for at sikre pålidelig og præcis replikation, når de implementeres af nybegyndere. Målet med denne tutorial er at give en standard metode til immunohistokemisk (IHC) evaluering af rotte vokal fold for at forbedre konsistensen på tværs af laboratorier og undersøgelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne undersøgelse blev udført i overensstemmelse med den institutionelle Animal Care and Use Committee of New York University School of Medicine.
1. Dissekere rotte strubehovedet
- Aflive rotte i henhold til den institutionelt godkendte protokol. Barber ventral hals fra underkæben til manubrium og vatpind med alkohol for at forhindre pelsforurening i vævsprøverne.
- Under en dissekering omfang med 10x forstørrelse punktafgifter hele strubehovedet ved at skabe en midline hals snit med en skalpel, indtil luftrøret er udsat.
- Adskil de ventrale ydre larynx muskler i midterlinjen for at udsætte strubehovedet ved hjælp af sammentrækninger og dissekere saks eller en skalpel.
- Skær luftrøret caudal til den tredje luftrør ring og lav et snit rostral til hyoid knoglen til punktafgifter hele strubehovedet ved hjælp af dissekere saks.
- Fjern de ydre larynx væv (spiserøret, skjoldbruskkirtlen, og ydre larynx muskler) fra strubehovedet ved hjælp af mikrodissement værktøjer (pincet, stifter, og mikroscissorer) under forstørrelse.
- Med mikroscissorer, bisect strubehovedet dorsally mellem arytenoider ved hjælp af midterlinjen mellem de bageste cricoarytenoid muskler som et vartegn. Pin lateral vægge af strubehovedet til at udsætte vokal folder og derefter bisect ventrally gennem midterlinjen af skjoldbruskkirtlen brusk mellem den forreste commissure af vokal folder med microscissors (Figur 1).
BEMÆRK: Dette trin kan være valgfrit. det kan springes over for at holde strubehovedet hele. Bisection af strubehovedet tillader flere immunstaining teknikker ved separat ved hjælp af højre og venstre side af samme strubehovedet. - Skyl hver hemi-strubehovedet i fosfat buffered opløsning (PBS) for ~ 10 s og fint tør med en opgavevisker for at reducere iskrystal dannelse under frysning.
2. Fix og / eller flash-fryse larynx væv
BEMÆRK: Fiksering er muligvis ikke ideel til alle immunstainingprotokoller. Ofte larynx væv er flash-frosne frisk umiddelbart efter dissektion. Spring trin 2.1 over for at flash-fryse larynxvæv uden fiksering.
- For at fastsætte hemi-larynges placere væv i centrifuge rør fyldt med 4% formaldehyd i PBS i 1 time ved stuetemperatur på en orbital shaker ved 70 rpm. Overfør væv til et rent centrifugerør og skyl 3x i 20 min i PBS. Derefter overføres til et rent centrifugerør og nedsænkes i en 20% saccharose/5% glycerolopløsning (~ 18 timer eller indtil væv synker) ved 4 °C.
FORSIGTIG: Formaldehyd er farligt og bør anvendes i en røghætte sammen med passende personlige værnemidler. - Placer alle hemi-larynges i en ensartet position i en kryo-mug fyldt med optimal skæretemperatur (OCT) sammensatte. For en hemilarynx skal du placere vævet med vokalfoldens mediale overflade mod bunden af cryomolden og det langsgående aspekt af vokalfolden parallelt med underkanten af kryomoldåbningen. For hele strubehovedet skal du placere vævet med de bageste cricoarytenoider, der vender mod bunden af cryomolden og det langsgående aspekt af vokalfolden parallelt med underkanten af kryomoldåbningen.
BEMÆRK: Konsekvent larynx orientering inden for OCT sammensatte er afgørende for cryosectioning af rotte vokal fold. Når hæmilarynx er indlejret og frosset, skal det optøs for at ændre sin orientering, og dermed indføre risiko for vævsskader fra flere optø-fryse cyklusser. - Flash-fryse væv ved hjælp af isopentane (2-methylbutan) kølet i et stålbæger omgivet af flydende nitrogen.
BEMÆRK: Isopentane når optimal temperatur for vævsfrysning, når hvide bundfald begynder at danne sig på siderne og bunden af bægerglaset13. Isopentane anvendes, fordi det har en højere termisk ledningsevne end flydende nitrogen, hvilket hjælper med at forhindre revner i vævsblokken under hurtig frysning. For en mere detaljeret beskrivelse af frysevæv i OTC henvises til Kumar et al.13. - Pak hver form ind i præmærket folie, og læg den i en individuel frysepose for at forhindre dehydrering, og opbevar straks på tøris, indtil den er overført til opbevaring i en fryser på -80 °C.
3. Cryosection hemilarynx i tværsnit fly
- Indstil kammertemperaturen i kryostaten til -20 °C, som er midt i det temperaturområde (15−25 °C), der anbefales til muskelvævssektion ved fabrikantens manual.
- Indstil kryostat sektion tykkelse til 10 μm tykke sektioner.
BEMÆRK: Til muskel fiber tværsnit analyse, 10 μm tykke sektioner er optimale for at give mulighed for fuldstændig farvning og robust billeddannelse intensitet af de mærkede muskelfibre til fiber skrive analyse14,15,16. Nogle protokoller kan kræve forskellige sektion tykkelse afhængigt af neuromuskulære mål. - Overfør væv til kryostatkammeret, tilsæt et ensartet lag OCT-forbindelse på kryostatprøvedisken (chuck), og placer den indlejrede vævsblok oven på OCT-forbindelsen på prøveskiven. For at opnå tværsnit af vokal fold for thyroarytenoid (TA) muskel fiber analyse, anbringe prøven til chuck, således at ventral skjoldbruskkirtlen brusk vender cryostat bladet og arytenoid brusk vender prøven disken.
BEMÆRK: Det er vigtigt at bemærke, at disse landemærker ikke er synlige på nuværende tidspunkt, på grund af at OCT-forbindelsen bliver hvid og uigennemsigtig, når den fryses. Denne mangel på synlighed er grunden til, at det er afgørende at bemærke hæmilarynxens orientering under flashfrysningsfasen. - Trim OCT sammensatte ved at fremme prøvehovedet med 100 μm indtil den ventrale del af skjoldbruskkirtlen brusk vises.
- Derefter trim og spor 30 μm sektioner fra starten af skjoldbruskkirtlen brusk, indtil lamina propria, mediale TA muskler, og laterale TA muskel er udsat.
BEMÆRK: Larynx landemærker skal spores og bemærkes fra starten af skjoldbruskkirtlen brusk hver 100 μm for at sikre vinklen på sektion er ikke skrå. Figur 2 repræsenterer de to sæt larynx landemærker i tværsnitsplanet ved 10x forstørrelse. - Når målet TA muskel er nået, indsamle sektioner på positivt ladede dias på 10 μm.
- Opbevar sektioner i PBS ved 4 °C for at bevare fugten, indtil de er klar til at blive farves.
BEMÆRK: Fast væv kan opbevares i PBS op til en uge afhængigt af IHC-målet, mens fast væv straks skal behandles.
4. Cryosection hemilarynx i langsgående plan
- Når kryostatkammeret igen er indstillet til -20 °C, skal sektionstykkelsen ændres til 30 μm.
BEMÆRK: Til NMJ-analyse kan en vævstykkelse mellem 30−60 μm bruges til at fange flere komplette NMJs i larynxmusklerne uden fragmentering af hverken nerveterminalen eller motorens endeplade11,12,17. - For at opnå langsgående vokalfold sektioner til NMJ analyse af TA muskel, anbringe prøverne til chuck, således at epiglottis er orienteret mod kryostat bladet og tracheal lumen vender ned mod prøven disken.
- Trim OLT-forbindelsen ved at fremrykke prøvehovedet med 100 μm, indtil skjoldbruskkirtlen opstår.
- Trim og spor sektioner på 30 μm fra starten af skjoldbruskkirtlen, indtil lamina propria og mediale og laterale afdelinger af TA muskel er udsat.
BEMÆRK: Fem sæt larynx landemærker i længderetningen flyet anbefales at spore væv dybde progression mod målet TA muskel. Figur 3 repræsenterer larynx landemærker i længderetningen flyet ved 10x forstørrelse. - Når målet TA muskel er nået, indsamle sektioner på positivt ladede dias på 30 μm.
- Opbevar sektioner i PBS ved 4 °C for at bevare fugten, indtil de er klar til at blive farves.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De repræsentative resultater var en del af en igangværende undersøgelse af virkningerne af vokal motion på larynx neuromuskulære system. 29 hanner Fischer 344/brune norgesrotter (12 9 måneder gamle, 17 24 måneder gamle) blev vejet og aflivet med CO2-indånding efterfulgt af en bilateral thoracotomi.
Procedurerne fulgte den skitserede protokol til mærkning NMJs og fiber størrelse af de laterale og mediale TA muskler. Afstanden mellem larynx landemærker blev sporet i både langsgående og tværsnitslige planer ved hjælp af larynx muskler og omgivende brusk til at bestemme progression under cryosectioning (tabel 1). Sporing begyndte ved den første forekomst af skjoldbruskkirtlen brusk i begge retningslige fly. Figur 2 illustrerer forekomsten af larynx landemærker under tværsnit cryosectioning i tidsmæssig rækkefølge med skjoldbruskkirtlen (Figur 2a, b) vises forud for mediale TA muskel og til lamina propria (Figur 2c, d). Figur 3 illustrerer forekomsten af larynx landemærker under langsgående kryosectioning i tidsmæssig rækkefølge med alar muskel (Figur 3a, b) vises forud for mediale TA muskel (Figur 3c, d) og til lamina propria (Figur 3e,f).
I begge retningslige planer varierede afstandene mellem landemærker meget for individuelle dyr.
Vægt og larynx skelsættende udseende havde svage til moderate korrelationer for unge rotter og svage korrelationer for ældre rotter (tabel 2 og tabel 3). Afstande mellem landemærker inden for hvert fly var moderat til stærkt korreleret for begge aldersgrupper, men svagt korreleret mellem de to dissektionsplane. Derfor kunne variation i skelsættende udseende ikke redegøres for efter vægt eller individuelle variationer i larynx størrelse.
Figur 1: En rotte strubehovedet dorsally delt mellem arytenoid brusk (ArC).
Højre side af hemi-larynx er kommenteret med landemærker i længderetningen (LZ1-LZ5), der svarer til de fem langsgående vartegn i tabel 1. Den venstre side af hemi-strubehovedet er kommenteret med landemærker i tværsnit flyet (CZ1 og CZ2), der svarer til begyndelsen af den laterale TA muskel og hele tværsnit af vokal fold henholdsvis. VF = vokal fold, CrC = cricoid brusk, AlC = alar brusk, og T1 = første luftrør ring. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: To tværsnit afbildet ved 10x forstørrelse i brightfield (højre) og i fluorescerende 488 kanal (venstre) efter immunstaining for laminin at skitsere muskelfibre.
Sektionerne (fra top til bund) viser progressionen under kryosektion i tidsmæssig rækkefølge med skjoldbruskkirtlen (a,b) vises før den mediale TA muskel og til lamina propria af vokal fold (c,d). ThC = skjoldbruskkirtelbrusk, LTA = lateral thyroarytenoid, og MTA = mediale thyroarytenoid. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Tre langsgående sektioner afbildet ved 10x forstørrelse i lysfelt (højre) og i fluorescerende 488 kanal (venstre) efter immunstaining for neuromuskulære vejkryds.
Sektionerne (fra top til bund) viser progressionen under kryosectioning i tidsmæssig rækkefølge med alarmusklen (a,b) vises før den mediale TA-muskel (c,d) og til vokalfoldens lamina propria (e,f). AlC = alar brusk, ThC = skjoldbruskkirtlen brusk, ArC = arytenoid brusk, LTA = lateral thyroarytenoid, MTA = mediale thyroarytenoid, og SCA = overlegen cricoarytenoid. Klik her for at se en større version af dette tal.
| Langsgående vartegn | Middelværdi (standardafvigelse) i μm | Rækkevidde i μm | |
| 1. Alle tre store brusk (skjoldbruskkirtlen, alar, arytenoid) dukkede op med fremkomsten af muskelfibre | 1,591 (665) | 350–2,800 | |
| 2. Overlegen cricoarytenoid (SCA), alar cricoarytenoid (ACA), og laterale thyroarytenoid (LTA) muskler dukkede op | 2,344 (591) | 91–3,500 | |
| 3. ACA og LTA muskler forlænget helt uden fragmentering | 2,631 (532) | 1505–3,640 | |
| 4. Arytenoid brusk forstørret, ACA forsvandt, mediale thyroarytenoid (MTA) muskel opstod | 2,948 (606) | 1765–4,305 | |
| 5. Target fuld vokal fold sektion: LTA og MTA muskler forlænget helt uden fragmentering og lamina propria opstod | 3,131 (542) | 2205–4410 | |
| Tværsnitsmærker | |||
| 1. LTA muskel dukkede op | 303 (138) | 110–690 | |
| 2. MTA muskel dukkede op og var ~ 50% af LTA størrelse med klar lamina propria og epitel noteret. | 482 (167) | 210–850 | |
Tabel 1: Afstande i μm fra skjoldbruskkirtlens første udseende brusk til hvert larynx vartegn under kryosektion (n = 29).
| CSA | Langsgående | |||||||
| LTA | MTA | Brusk | Alar/SCA | LTA | MTA | LP | ||
| CSA | LTA | 1 | ||||||
| MTA | 0.88 | 1 | ||||||
| Langsgående | Brusk | 0.42 | 0.42 | 1 | ||||
| Alar/SCA | 0.57 | 0.47 | 0.77 | 1 | ||||
| LTA | 0.59 | 0.47 | 0.71 | 0.98 | 1 | |||
| MTA | 0.53 | 0.39 | 0.72 | 0.97 | 0.98 | 1 | ||
| LP | 0.53 | 0.41 | 0.76 | 0.96 | 0.97 | 0.99 | 1 | |
| Vægt | -0.55 | -0.35 | 0.08 | -0.45 | -0.46 | -0.46 | -0.41 | |
Tabel 2: Resultater af Pearson korrelation mellem vægt og dybden af larynx landemærker i tværsnit (CSA) og langsgående planer for unge hanrotter. LTA = lateral thyroarytenoid, MTA = mediale thyroarytenoid, SCA = overlegen cricoarytenoid, og LP = lamina propria.
| CSA | Langsgående | |||||||
| LTA | MTA | Brusk | Alar/SCA | LTA | MTA | LP | ||
| CSA | LTA | 1 | ||||||
| MTA | 0.9 | 1 | ||||||
| Langsgående | Brusk | 0.21 | 0.33 | 1 | ||||
| Alar/SCA | 0.05 | 0.07 | 0.73 | 1 | ||||
| LTA | -0.06 | -0.04 | 0.64 | 0.96 | 1 | |||
| MTA | -0.02 | -0.02 | 0.6 | 0.79 | 0.84 | 1 | ||
| LP | -0.17 | -0.15 | 0.52 | 0.76 | 0.85 | 0.91 | 1 | |
| Vægt | 0.23 | 0.13 | -0.24 | -0.07 | -0.15 | -0.15 | -0.3 | |
Tabel 3: Resultater af Pearson korrelation mellem vægt og dybden af larynx landemærker i tværsnit (CSA) og langsgående planer for gamle hanrotter. LTA = lateral thyroarytenoid, MTA = mediale thyroarytenoid, SCA = overlegen cricoarytenoid, og LP = lamina propria.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Forberedelse rotte vokal folder til neuromuskulær analyse kan præsentere med forskellige udfordringer. Ikke alene er larynx muskler små og omgivet af brusk, hvilket gør det vanskeligt at direkte udtrække målmuskel, høj variation blev også fundet mellem dyr i dybden af larynx anatomiske vartegn. For muskel tværsnit plan protokol, komplet vokal fold sektioner dukkede op mellem 21−85 sektioner (10 μm per sektion) efter den første forekomst af den ventrale skjoldbruskkirtlen brusk, som er en hel del færre end de 63−126 sektioner (35 μm per sektion) i længderetningen plan for NMJ analyse protokoller (tabel 1).
Variabilitet blev noteret i afstande mellem larynx vartegn på trods af ensartet indlejring, orientering og sektion af væv for hver type protokol. Desuden tog forskelle i kropsvægt ikke højde for variation i de store vævsdybder fra det ene sæt larynxmærker til det næste. Denne variation i afstanden mellem larynx landemærker kan skyldes individuelle forskelle i larynx anatomi på tværs af dyr, små forskelle i orientering af strubehovedet i cryomold i OLT sammensatte på tidspunktet for dissektion, eller hvordan prøverne blev placeret på prøvedisken i kryostat ved indsnitning (dvs. mængden af OLT sammensatte placeret på prøvedisken før montering eller små forskelle i vinkel placering).
Med en forståelse af, at disse små forskelle i prøveforberedelse kan føre til betydelig variation i dybden af larynx væv vartegn, er det afgørende, at nybegyndere efterforskere har et referencekort, hvorfra man kan arbejde. Skitserede studieprotokoller, der definerer metoder til at identificere de muskel(er) af interesse og forhindre protokol faldgruber - såsom dem, der er skitseret i dette dokument - kan forbedre reproducerbarheden og forhindre uønsket vævstab.
Selv om denne undersøgelse fokuserede på TA muskel, denne metode er gældende for andre iboende larynx muskler samt. For eksempel, indsnit i langsgående vokal fold plan giver langsgående muskel fiber dele af alar, lateral TA, mediale TA, laterale cricoarytenoid, og overlegen cricoarytenoid muskler, og tværsnit af de bageste cricoarytenoid muskler. Indsnit i tværsnit vokal fold plan giver tværsnit af alar, lateral TA, mediale TA, laterale cricoarytenoid, overlegen cricoarytenoid, og cricothyroid muskler, samt langsgående dele af de bageste cricoarytenoid muskler. Derudover, selv om denne undersøgelse ikke omfattede hunrotter, forskelle mellem mandlige og kvindelige rotter i larynx skelsættende udseende forventes ikke, fordi seksuel dimorfisme i rotte strubehovedet er muskelspecifik og ikke relateret til larynx ramme anatomi16,18.
Variationen i afstanden mellem larynx vartegn kan gøre cryosectioning rotten vokal fold vanskeligt for nybegyndere efterforskere. Denne undersøgelse viste, at på trods af konsistens i, hvordan rottestrubehovedet blev frosset, indlejret og cryosectioned, varierede afstanden mellem larynx landemærker meget; animalsk vægt ikke tegnede sig for denne variabilitet. Denne undersøgelse giver detaljerede procedurer med tilhørende billeder om, hvordan man passende forberede larynx muskelvæv og identificere larynx vartegn for neuromuskulær histologisk undersøgelse af rotte vokal fold.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Denne forskning blev støttet af tilskud F31DC017053-01A1 (Lenell, PI) og K23DC014517 (Johnson, PI) fra National Institute on Døvhed og andre kommunikationsforstyrrelser fra National Institutes of Health.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2-Methylbutane Certified | Fisher Chemical | 35514 | |
| Aluminum Foil | Fisherbrand | 1213101 | |
| Cryo Tongs SS | Thermo Scientific | 11679123 | |
| Cryostat | Leica Biosystems | CM3050 | |
| Cryostat blades | C.L. Sturkey D554X50 | 22-210-045 | |
| Disposable Base Molds 15mm x 15mm | Thermo Scientific | 41-741 | |
| Disposable Underpads | Medline | 23-666-062 | |
| Dissection kit | Thermo Scientific | 9996969 | |
| DPBS - Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Gibco | 14190136 | |
| Frozen Section Medium | Fisher Healthcare | 23-730-571 | |
| Ice Bucket | Bel-Art | 11999054 | |
| Immunostain Moisture Chamber | Ted Pella Inc | NC9425474 | |
| Needle holders | Assi | ASSI.B148 | |
| Non-Woven Sponges, 4 Ply | Quick Medical | 9023 | |
| Orbital shaker | Troemner | 02-217-987 | |
| Pap pen | |||
| Paraformaldehyde, 16% w/v aq. soln., methanol free | Alfa Aesar | 50-00-0 | |
| Premium Microcentrifuge Tubes | Fisherbrand | 5408129 | |
| Specimen Storage Bags | Fisherbrand | 19240093 | |
| Stainless Steel Graduated Measure 32 oz/100 mL | Polar Ware | 114231B | |
| Superfrost Plus Microscope Slides | Fisherbrand | 12-550-15 | |
| Task wiper | Kimberly-Clark Professional™ 34155 | 06666A | |
| Timer | Fisherbrand | 2261840 | |
| Vannas Pattern Scissors | Assi | ASSI.SAS15RV | |
| NOTE: For all supplies, these are examples of equipment to purchase. The exact model is not necessary to complete our methods. |
References
- Connor, N. P., Suzuki, T., Lee, K., Sewall, G. K., Heisey, D. M. Neuromuscular junction changes in aged rat thyroarytenoid muscle. Annals of Otology, Rhinology and Laryngology. 111 (7), Pt 1 579-586 (2002).
- Suzuki, T., et al. Age-Related Alterations in Myosin Heavy Chaing Isoforms in Rat Intrinsic Laryngeal Muscles. Annals of Otology, Rhinology and Laryngology. 111 (11), 962 (2002).
- Johnson, A. M., Grant, L. M., Schallert, T., Ciucci, M. R. Changes in Rat 50-kHz Ultrasonic Vocalizations During Dopamine Denervation and Aging: Relevance to Neurodegeneration. Current Neuropharmacology. 13 (2), 211-219 (2015).
- Wright, J. M., Gourdon, J. C., Clarke, P. B. Identification of multiple call categories within the rich repertoire of adult rat 50-kHz ultrasonic vocalizations: effects of amphetamine and social context. Psychopharmacology. 211 (1), 1-13 (2010).
- Bowers, J. M., Perez-Pouchoulen, M., Edwards, N. S., McCarthy, M. M. Foxp2 mediates sex differences in ultrasonic vocalization by rat pups and directs order of maternal retrieval. Journal of Neuroscience. 33 (8), 3276-3283 (2013).
- Basken, J. N., Connor, N. P., Ciucci, M. R. Effect of aging on ultrasonic vocalizations and laryngeal sensorimotor neurons in rats. Experimental Brain Research. 219 (3), 351-361 (2012).
- Ciucci, M. R., et al. Reduction of dopamine synaptic activity: degradation of 50-kHz ultrasonic vocalization in rats. Behavioral Neuroscience. 123 (2), 328-336 (2009).
- Ciucci, M. R., Vinney, L., Wahoske, E. J., Connor, N. P. A translational approach to vocalization deficits and neural recovery after behavioral treatment in Parkinson disease. Journal of Communication Disorders. 43 (4), 319-326 (2010).
- Nagai, H., Ota, F., Konopacki, R., Connor, N. P. Discoordination of laryngeal and respiratory movements in aged rats. American Journal of Otolaryngology. 26 (6), 377-382 (2005).
- Ma, S. T., Maier, E. Y., Ahrens, A. M., Schallert, T., Duvauchelle, C. L. Repeated intravenous cocaine experience: development and escalation of pre-drug anticipatory 50-kHz ultrasonic vocalizations in rats. Behavioural Brain Research. 212 (1), 109-114 (2010).
- Inagi, K., Schultz, E., Ford, C. N. An anatomic study of the rat larynx: establishing the rat model for neuromuscular function. Otolaryngology and Head and Neck Surgery. 118 (1), 74-81 (1998).
- Lenell, C., Newkirk, B., Johnson, A. M. Laryngeal Neuromuscular Response to Short- and Long-Term Vocalization Training in Young Male Rats. Journal of Speech, Language, and Hearing Research. 62 (2), 247-256 (2019).
- Kumar, A., Accorsi, A., Rhee, Y., Girgenrath, M. Do's and don'ts in the preparation of muscle cryosections for histological analysis. Journal of Visualized Experiments. (99), e52793 (2015).
- McMullen, C. A., Andrade, F. H. Functional and morphological evidence of age-related denervation in rat laryngeal muscles. Journals of Gerontology. Series A: Biological Sciences and Medical Sciences. 64 (4), 435-442 (2009).
- McMullen, C. A., et al. Chronic stimulation-induced changes in the rodent thyroarytenoid muscle. Journal of Speech, Language, and Hearing Research. 54 (3), 845-853 (2011).
- Lenell, C., Johnson, A. M. Sexual dimorphism in laryngeal muscle fibers and ultrasonic vocalizations in the adult rat. Laryngoscope. 127 (8), 270-276 (2017).
- Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Connor, N. P. Vocal training mitigates age-related changes within the vocal mechanism in old rats. Journals of Gerontology. Series A: Biological Sciences and Medical Sciences. 68 (12), 1458-1468 (2013).
- Feng, X., Zhang, T., Ralston, E., Ludlow, C. L. Differences in neuromuscular junctions of laryngeal and limb muscles in rats. Laryngoscope. 122 (5), 1093-1098 (2012).
