Summary
Vi presenterar en icke-dödlig och automatiserad mekanism för att samla pollen från humle bi (Bombus) arbetare återvänder till en bikupa. Instruktioner för att producera, förbereda, installera och använda enheterna ingår. Genom att använda 3D-utskrivna objekt var modifieringen av designen läglig, effektiv och möjliggjorde snabb vändning för testning.
Abstract
För att kontrollera de växtkällor från vilka humlor foder för pollen måste individer samlas in för att avlägsna sina korbicular pollenbelastningar för analys. Detta har traditionellt gjorts genom att näta födosökare vid boingångar eller på blommor, kyla bina på is och sedan ta bort pollenbelastningen från korbiculae med tång eller en borste. Den här metoden är tids- och arbetsintensiv, kan ändra normalt födosöksbeteende och kan resultera i stickande incidenter för arbetaren som utför uppgiften. Pollenfällor, som de som används på honungsbikupor, samlar pollen genom att lossa korbicular pollenbelastningar från arbetarnas ben när de passerar genom skärmar vid boets ingång. Fällor kan ta bort en stor mängd pollen från att returnera foderbin med minimal arbetskraft, men hittills är ingen sådan fälla tillgänglig för användning med humlebikolonier. Arbetare inom en humle bikoloni kan variera i storlek vilket gör storleksval av ingångar svåra att anpassa denna mekanism till kommersiellt uppfödda humlor. Med hjälp av 3D-utskriftsprogram skapade vi en pollenfälla som framgångsrikt tar bort korbicular pollenbelastningarna från benen på återvändande humlebrädsfoder. Denna metod minskar avsevärt den tid som forskare kräver för att samla pollen från humle bifoder som återvänder till kolonin. Vi presenterar designen, resultaten av pollenborttagningseffektivitetstester och föreslår områden med modifieringar för utredare för att anpassa fällor till en mängd olika humlearter eller bokartongdesigner.
Introduction
Humlor (Bombus spp.) är stora robusta insekter som finns över de tempererade, alpina och arktiska regionerna i världen1. De är viktiga för växtsamhällen och ger viktig pollineringstjänst för de jordbruksgrödor som de besöker2. Den senaste tidens minskningar av förekomsten och utbredningen av flera arter har fört deras betydelse som pollinatörer till förgrunden för allmänhetens medvetenhet3. Forskare har identifierat flera stressfaktorer som sannolikt bidrar till befolkningsminskningar, inklusive brist på olika och rikliga blommiga resurser på vilka humlor foder4. Genom att identifiera vilka växtarter humle bin från kan forskare och markförvaltare förstå hur humlor kan svara på förändringar i resurstillgänglighet, konkurrens och antropogena störningar5,6.
Studier som undersöker pollenförädlingspreferenser hos humlor utförs ofta av forskare som fångar enskilda bin som födosöker på blommor och sedan tar bort korbicular pollenbelastningarna från prover för vidare bearbetning och identifiering7,8,9,10. Medan denna metod ger insikt i hur en art eller en sammansättning av humlebiarter utnyttjar resurserna i ett område7, är det tidsintensivt och potentiella skillnader i preferenser bland nässelfeber kan inte urskiljas utan ytterligare molekylära analyser för att identifiera kolonin av ursprunget för födosöksbiet11.
För vissa studier av födosöksdynamik är det önskvärt att genomföra studierna vid enskilda kolonier; Vilda humlebo ligger dock i allmänhet under jord eller på marknivå vilket gör dem svåra att hitta12. Kommersiellt producerade humlor ger forskare större tillgång och bättre experimentell kontroll och avlägsnandet av pollen från arbetare utförs fortfarande främst genom att fånga födosökare när de återvänder till bikupan och manuellt avlägsnar sina korbicular pollenbelastningar13,14. Avlägsnandet av pollen för hand från biets korbicula är tidsintensivt med ett lågt timutbyte av pollen, särskilt vid bikupor där andelen återvändande pollenfoder kan vara låg. Dessutom kan manuell borttagning av pollen från bin resultera i sting från störda arbetare.
Pollenfällor har använts för experimentellt avlägsnande av pollen från honungsbin i årtionden15; Ändå har en passiv metod för att avlägsna pollen från humlor inte utvecklats. Det främsta hindret för att utveckla en mekanism för att avlägsna pollen från återvändande födosöks humlor är den stora variationen av arbetarstorlekar som finns i en humlebikoloni16. Honungsbipollenfällor är effektiva till stor del eftersom honungsbiarbetarens storlek inte varierar mycket. Dessutom kräver dessa fällor endast mindre manipuleringar efter installationen och kräver inte att bin offras17. Detta uppnås med hjälp av skärmar eller plastytor som lossar pollen från bakbenen hos arbetare när de återvänder till bikupan. Dessa fällor tar bara bort en del av pollenbelastningen från återvändande födosökare och de olika designerna av dessa resulterar i varierande effektivitet vid pollenuppsamling. När pollen avlägsnas från bibenen faller det genom en skärm och in i en uppsamlingsbassäng som bina inte har tillgång till, så att forskaren kan ta bort den med endast mindre störningar i bikupan.
Syftet med denna studie är att anpassa de tekniker som används för att samla pollen från honungsbikupor och applicera dem på humlebibo med hjälp av 3D-tryckta strukturer och testa fällans mönster på kolonier av Bombus huntii. Designprocessen följde antagandet att fällorna skulle vara billiga att producera, anpassningsbara till en mängd olika humlearter, orsaka minimal skada eller störning för bina och att pollenborttagningen bör överstiga handinsamlingen av pollen. Tredimensionell tryckteknik är mångsidig, lättillgänglig och ett kostnadseffektivt verktyg som gör det möjligt för forskare att replikera och modifiera objekt för specifika ändamål18. Tekniken som presenteras här instruerar användaren att bygga pollenfällor och fästa dem på kommersiellt tillgängliga humlebikolonier. Fällorna är inte utformade för att användas med vilda kolonier. Dessa fällor tar passivt bort de korbicular pollenbelastningarna från bakbenen på pollen som bär humlor när de återvänder till sina bolådor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Skriv ut pollenfällor
- Ladda ner lämplig STL-fil för bolådan som humlor häckar i (t.ex. biobest- eller koppert-stilkupor, https://www.ars.usda.gov/pacific-west-area/logan-ut/pollinating-insect-biology-management-systematics-research/docs/pollen-traps/). Filerna är tillgängliga för allmänheten, gratis för nedladdning och modifiering av slutanvändaren.
- Öppna STL-filen i skrivarprogrammet. Följ skrivartillverkarens anvisningar för att bygga de fyra svällningskomponenterna.
OBS: Låt svällningskroppen skriva ut ca 3 timmar, 2 h för att fångstbassängen ska skrivas ut och 30 minuter vardera för att filter- och svällningsinsatsen ska skrivas ut. Fällans kroppsstorlek är 6 cm x 3,8 cm x 7 cm.
2. Pollenfälla montering
- Ta bort stödkonstruktionerna som är tryckta med fällans kropp och fångstbassäng, inklusive de som har sållstrukturen i svällningskroppen (figur 1).
- Använd en 0,476 cm borrkrona monterad i en handborr för att rensa eventuella plaststrängar som korsar pollenfiltrets upphöjda kanter som kan hindra ett bi från att röra sig genom filterhålen. Använd en låda som skär rakblad och sandpapper för att jämna ut eventuella stötar eller upphöjda kanter på pollenfiltrets plana sida.
- Placera pollenfiltret i fällans kropp genom att försiktigt trycka plastfiltret genom ena sidan av fällans kropp. Filtret passar bara på ett sätt, eftersom den vänstra sidan av fällan har en större öppning för att rymma passagen av de upphöjda filterkonerna.
- Om sidoslitsarna är för små för att pollenfiltret ska glida igenom smidigt, skrapa bort tillräckligt med plast från slitsen i fällans kropp med en rakhyvel eller annat verktyg som kan ta bort små delar av plast åt gången. Se till att pollenfiltret sitter ordentligt på plats med högst 2 mm mellanrum mellan pollenfiltret och fällans kropp.
- Fäst fångstbassängen på fällans kropp genom att skjuta de upphöjda kanterna på botten av spärrkroppen i spåret på toppen av fångstbassängen. Fångstbassängen bör placeras direkt under sållområdet i fällans kropp (figur 1A\u2012E).
- Gör lämpliga ändringar genom att skära eller slipa plasten för att möjliggöra smidig placering och avlägsnande av fångstbassängen från fällans kropp. Placeringen av fångstbassängen säkrar pollenfiltret på plats och det kan inte avlägsnas förrän fångstbassängen har avlägsnats, och pollenfiltret kan inte heller sättas in medan fångstbassängen är på plats.
OBS: Om flera nässelfeber placeras nära varandra, ger varje bikupa en unik färgkombination av fällans kropp, fångstbassäng och pollenfilterstrukturer förutom att distribuera nässelfeber med varierad orientering hjälper återvändande arbetare att hitta sina bon.
3. Humle bi koloni beredning
- Stoppa pollenmatning 24\u201248 h innan du distribuerar kolonier. Detta kommer att få arbetare att använda upp lagrat pollen och stimulera dem att lämna boet på jakt efter pollen.
- Förbered hive trap-kroppen för installation genom att sätta in en fälla stängningsinsats i filterfacket för att förhindra att bin flyr när du installerar fällan.
- Arbeta under rött ljus för att förhindra att bina flyger, lyft plastbolådan ur kartongens yttre låda.
- Leta reda på plastboets ingång på framsidan av boet. Det finns två stilar av entré beroende på boleverantör: Koppert-stil lådor (steg 3.5) och Biobest-stil lådor (steg 3.6).
- För Koppert-stil hive ingångar, montera pollenfällan på boets ingång genom att dra upp på ingångsfliken tills båda ingångshålen är öppna.
- Sätt in pollenfällans två rör i ingångshålen, se till att pollenfällans sikt ligger på botten. Tryck försiktigt ner på plastingångfliken för att säkra pollenfällan på plats.
- För att installera pollenfällan i Biobest-stil hive ingångar, använd en platt huvud skruvmejsel för att försiktigt bända plastingånganordningen från bolådan. Sätt in pollenfällan i boets ingångshål tills pollenfällan är ordentligt mot boet (figur 1E).
- Fäst fällan i boet med tejp eller snabbtorkande lim där fällan kontaktar bolådan om det behövs.
- Sätt tillbaka plastbokartongen i kartongen. Kartong kan behöva skäras bort för att rymma pollenfällan.
4. Utplacering av bon
- Placera bolådor i studieområdet. Ge skydd för att skydda mot nederbörd och förankring för vind eftersom dessa kan påverka kvaliteten och mängden pollen som samlas in negativt. Ge nässelfeber placerade i växthus med tillräckligt solskydd för att minska överhettning.
- Ta bort fällans stängningsinsats från fällans kropp så att bin kan foder fritt så att födosökare kan orientera sig med det omgivande området och platsen för deras bo. Orienteringstiden ska vara klar om 24 timmar under normala förhållanden.
5. Pollensamling
- För att koppla in fällan, skjut in pollenfiltret i filterfacket och se till att det är ordentligt på plats.
- Montera fångstbassängen genom att skjuta den på fällans kropp framifrån tills den är helt stängd. Om fångstbassängen är alltför lös eller faller av fällans kropp, använd ett gummiband för att fästa det på fällans kropp.
- Observera bin som kommer in och ut ur pollenfällan vid första utplaceringen för att säkerställa att pollenfilterhålen är tillräckligt stora för att rymma bina.
- Om arbetarna inte kan passera genom pollenfiltret, ta bort filtret och använd sedan borrkronor större än 0,476 cm för att öka hålstorlekarna. Gör det på ett sekventiellt sätt, öka håldiametern 1/32 in. (0,079 cm) varje gång, eftersom hål som är för stora inte samlar in något pollen.
- När bin kan passera genom filtret, fortsätt att observera ingången för att säkerställa att pollen avlägsnas vid återinträde.
OBS: Bin bör ha vissa svårigheter att röra sig genom pollenfilterhålen, särskilt de första gångerna de passerar igenom. Om de passerar för lätt kan pollen inte lossas från korbiculae.
- Efter den angivna perioden av pollensamling, skjut och ta bort fångstbassängen från fällans kropp.
- Bearbeta pollenbelastningen enligt din experimentella design.
- Ta bort pollenfiltret så att arbetarna kan foder fritt fram till nästa period av polleninsamling. Fällans kropp kan förbli fäst vid bikupan under hela experimentet.
OBS: Pollenfällor kan vara engagerade så länge forskaren vill samla pollen från en koloni. Utplacering av pollen fällor för över 24 h i en vecka kan dock resultera i svält av kull i en bikupa och fördröja koloni utveckling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Åtta olika pollenfilterdesigner testades för att bestämma deras effektivitet och effektivitet för att avlägsna korbicular pollenbelastningar från återvändande humle biarbetare. Alla mönster lyckades ta bort minst en korbicular pollen last från en återkommande förfalskare. Vissa befanns dock bromsa arbetare från att lämna eller komma in i bikupan eller misslyckades med att ta bort pollenbelastningar(tabell 1). Pollenfällor med olika filter testades sekventiellt på 4 laboratorieuppfödda kolonier av B. huntii Greene födosök på Phacelia tanacetifolia odlad i växthus för sammanlagt 138,5 h och 229 korbicular pollenbelastningar(tabell 1) som samlats in under 7-dagarsperioden (3/2/16\u20123/8/16). Videokameror placerades framför boets ingångar medan pollenfällor var inkopplade för att registrera födosöksaktivitet. Trap entré design fortsatte med försök och fel under den perioden. 52 timmars videoobservation och 142 korbicular pollenbelastningar samlades in under testperioden(tabell 1). Effektivitetsvinster beräknades genom att dividera antalet korbicular pollenbelastningar som samlats in med antalet observerade pollenbelastade födosökare som passerade genom ett filter. Pollenfilterdesignens effektivitet varierade från 2\u201258.9% av full korbicular pollen last bort. Corbicular pollen laster togs bort från benen och föll som sammanhängande pellets av pollen i fångstbassängen. På grund av denna tendens att korbicular laster tas bort som en pellet, partiell corbicular pollen last avlägsnande var ovanligt, men vissa partiella belastningar kan ha räknats som full borttagning eftersom vi inte kunde verifiera att vissa pollen förblev i en korbicula efter biet gick in i boet. Övergripande filteröppningar som var cirkulära förbättrade polleninsamlingen och förflyttningen av arbetare till bomiljön. Dessutom förbättrade filterkonstruktioner som hade upphöjda strukturer som sträckte sig bort från bolådan pollenborttagning från bakbenen på foder. I en tidigare fältstudie med hjälp av en tidigare filterdesign var den genomsnittliga vikten av pollen som samlades in efter 24 timmar insamling 1,017 g över 11 inkassodagar. Variationen (0,22\u20122,94 g per dag) var stor bland den totala massan pollen som samlats in från varje bo. Dessa värden representerar ett förväntat massintervall som pollen kan samlas in med denna metod. Den slutliga designen i nedladdnings pollen trap utskriftsfilen är design nummer 8, en cirkulär fälla ingång med upphöjda kanter.
Figur 1: Pollenfälla monterad på humla bikupa. ( A) Framifrån pollenfällan där arbetare landar och färdas över sikten mot pollenfiltret. (B) Bakre vy av monterad pollenfälla som visar fällans räfflade kanter som gör att fångstbassängen kan glida på och fästa. c)Sidovy av monterad pollenfälla som visar pollenfilterslitsen som gör att pollenfiltret kan placeras i fällans kropp och säkras av fångstbassängen. ( D) Bottenvy av fällans kropp med pollenfilter insatt, sikten gör det möjligt för korbicular pollenlaster att falla in i fångstbassängen och begränsar arbetstagare från att komma åt uppsamlat pollen. (E) Sidovy av monterad pollenfälla fäst vid en bolåda. Klicka här för att se en större version av den här figuren.
Figur 2: Mekanism genom vilken korbicular pollenbelastningar avlägsnas från arbetstagarnas ben. ( A) Sidovy av en arbetstagare och dess relativa storlek till en monterad pollenfälla. (B) Sidovy av arbetstagaren som närmar sig ett pollenfilterhål. (C) Sidovy av arbetaren som passerar genom ett pollenfilterhål och tvingar korbicular pollenbelastningarna att komma i kontakt med filtret och ventrala ytan av buken. ( D) Bakre bild av arbetstagare som passerar genom ett pollenfilterhål och tvingar korbicular pollenbelastningar att komma i kontakt med filtret och bukytan. (E)Bakre vy över arbetstagare som passerar genom pollenfilterhålet när korbicular pollen laster har tagits bort från dess korbiculae och släppa genom sikten och in i fångstbassängen, och (F) sidovy av arbetare som passerar genom pollenfilterhål när korbicular pollen laster har tagits bort från dess korbiculae och släppa genom sikten och in i fångstbassängen.
| Ackumulerade summor | Video Observation | ||||||||
| Design-ID | Ingångsform | Distribution (timmar) | Korbicular pollen laster samlade | Insamlingshastighet (pollenbelastningar/timme) | Observation (timmar) | Korbicular pollen laster samlade | Pollen Födosökare | Individuell effektivitet* | Total effektivitet** |
| 1 | Diamant | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 9 | 0.11 | 5.56% |
| 2 | Diamant | 3.5 | 2 | 0.57 | 3.5 | 2 | 50 | 0.04 | 2.00% |
| 3 | Torg | 4.5 | 2 | 0.44 | 4.5 | 2 | 2 | 1 | 50.00% |
| 4 | Cirkel | 9.5 | 7 | 0.74 | - | - | - | - | - |
| 5 | Cirkel | 17.5 | 10 | 0.57 | 5.75 | 5 | 23 | 0.22 | 10.87% |
| 6 | Cirkel | 18 | 36 | 2 | 13 | 35 | 54 | 0.65 | 32.41% |
| 7 | Cirkel | 49.5 | 48 | 0.97 | 6.25 | 11 | 17 | 0.65 | 32.35% |
| 8 | Cirkel | 35 | 123 | 3.51 | 18 | 86 | 73 | 1.18 | 58.90% |
| Total | 138.5 | 229 | - | 52 | 142 | 228 | - | - | |
| *Genomsnittligt antal korbicular pollen laster samlas in från återvändande pollenfoder. | |||||||||
| **Procentandel av de totala korbicular pollenbelastningar som samlats in från återvändande födosökare (Individ/2). | |||||||||
Tabell 1: Sammanfattande tabell över de totala utplaceringstimmarna, korbicular pollen laster samlade, insamlingshastighet tillsammans med timmar, antal pollenfoder, individuell och total effektivitet verifieras genom videofilmer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Insamling av pollen från humlekoloniingångar kan möjliggöra en mängd olika ekologiska och jordbruksstudier. Att identifiera de blommiga källorna från vilka humlor samlar pollen ger värdefull information och insikt i mångfalden av växter som bidrar till en kolonis totala kost19. Identifiering av pollenkällan har konsekvenser för både jordbruksproduktion och studier av ekosystemtjänster i vilda länder12,20. Genom att samla relativt stora provstorlekar av korbicular pollenbelastningar kan forskare avgöra om humlor födosöker på den målskörd för vilken de placeradesut 21, andra viktiga beståndsdelar i humlan diet8, och föredraget foder av specifika arter inom ett område7. Automatisering av pollensamling från humlebikolonier med hjälp av en pollenfälla möjliggör utökade studier av humlebisfödsling, näring och exponering för bekämpningsmedel.
Handborttagning av pollen från bin, som har använts för de flesta studier som undersöker humlela pollenpreferenser, är tids- och arbetsintensiv10. Däremot samlade passiv insamling av pollen med hjälp av pollenfällans design över 200 korbicular pollenbelastningar från fyra kolonier under en vecka. Således tillåter denna metod forskare att samla pollen från flera nässelfeber på olika platser vilket ökar både provtagningsinsatsen och den statistiska robustheten för framtida studier.
För att utveckla och förbättra pollenfilterdesignerna var videoinspelning av humlorna som passerade genom fällamekanismen avgörande. Vi observerade att när en humla bi passerar genom ett trångt utrymme sträcker sig bakbenen bakom och under buken (figur 2C \u2012E). Observation av detta beteende resulterade i ändringar i 3D-utskriftsdesignen och försöks- och feltestning av pollenfilter(tabell 1). Användning av videoinspelningar för observation vid utplacering av fällor rekommenderas innan det formella experimentet påbörjas för att säkerställa att fällorna fungerar korrekt och effektivt så att ändringar kan göras om det behövs. För att ta hänsyn till skillnader i kroppsstorlek både inom en bikupa och bland nässelfeber och studiens mål kan fällans ingångsstorlek varieras. Vi observerade att justering av fällan ingången för att tillåta de större foderträdarna att gå ut och komma in i bikupan gav minimala störningar i födosöksaktiviteter och rimlig effektivitet (>50%) avlägsnande av korbicular pollen belastningar. Den 3D-printade plasten modifieras enkelt med handverktyg och tryckdesigner kan manipuleras för specifika projekt eller när boxingens ingångsdesign ändras18.
Begränsningarna med denna metod är att pollenfilterdesignen är unik för den art av humlor som provtas. Denna metod använder en enhetlig storlek på ingångshål som i teorin kan begränsa de större individerna i boet från födosök och mindre arbetstagare som foder inte får provtas. Vår design tillät dock stora arbetare att passera igenom och vi kvantifierade inte effektiviteten baserat på kroppsstorlek. Den konstruktion som är tillgänglig för nedladdning är utformad på den genomsnittliga storleken på B. huntii-arbetare (3,22 mm bröstbredd22) och det skulle därför behöva utökas enligt beskrivningen för arbetstagare i B. impatiens (3,38 mm23) eller B. terrestris (4,77 mm24). I en studie med B. terrestrisnoterades större individer för att samla pollen oftare än mindre arbetare25; Ett efterföljande arbete fann dock inget samband i arbetstagarnas storlek och frekvensen av pollenförsörjar av den nordamerikanska humlebiet B. impatiens26,27,28. Dessutom kan arbetstagarnas storlek variera under säsong12, så pollenfilter bör inspekteras regelbundet för att säkerställa att pollensamlingen sker effektivt. Att förstå de arter av intresse och de specifika forskningsfrågor som behandlas kommer att vara avgörande för att bedöma nyttan av denna fälla design från fall till fall.
Beteendemässiga svar som uppvisades genom att returnera foder till förekomsten av engagerade pollen fällor var varierande. Dessa inkluderade: i) arbetstagare som acklimatiserar sig till den ytterligare ansträngning som krävs för att komma in i bomiljön igen, ii) arbetstagare som gör flera försök att passera genom filtret, iii) arbetare som försöker kringgå filteröppningen och i stället passerar genom fällans kroppssikte, och iv) arbetare som undviker filtret och byter till nektarsamling och överföring till bobeor genom ventilationshål längs botten av bolådan. Humle bi födosökare som försöker hitta alternativa ingångar till bikupan hade observerats i en tidigare studie av denna art29 även när boets ingångar inte är blockerade. Även om dessa svar observerades var de ovanliga nog att vi inte kvantifierade andelen födosökare som ändrade beteendet på grund av fällans närvaro, förutom att de flesta bin acklimatiserade sig till fällorna strax efter trap-distributionen.
Framtida tillämpningar av denna metod omfattar anpassning av befintliga mönster för andra kommersiellt producerade humlor, särskilt B. terrestris och B. impatiens som främst används för pollinering av växthusgrödor över hela världen19. Användning av dessa pollenfällor på kommersiella nässelfeber på platser utanför deras ursprungliga sortiment gör det möjligt för forskare att bestämma vilka nischöverlappningar och konkurrensinteraktioner som kan uppstå med inhemska Bombus arter30,31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Vi tackar Colby Carpenter och Spencer Mathias för deras hjälp med 3D-utskriftsdesign. Vi tackar Ellen Klinger för hjälpen med att producera de fotografiska figurerna och Jonathan B. Koch för att ha hjälpt till med revideringar. Finansiering tillhandahölls av USDA-ARS-Pollinating Insect Biology, Management, and Systematics Research Unit.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MakerBot Replicator+ | MakerBot | Model PABH65 | |
| MakerBot Tough Material | PLA Filament | various colors | |
| Nest Box | Biobest | Not sold publicly without bee purchase |
References
- Michener, C. D. The bees of the world. , JHU press. (2000).
- Corbet, S. A., Williams, I. H., Osborne, J. L. Bees and the pollination of crops and wild flowers in the European Community. Bee world. 72 (2), 47-59 (1991).
- Cameron, S. A., et al. Patterns of widespread decline in North American bumble bees. Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (2), 662-667 (2011).
- Goulson, D., Nicholls, E., Botías, C., Rotheray, E. L. Bee declines driven by combined stress from parasites, pesticides, and lack of flowers. Science. 347 (6229), 1255957 (2015).
- Jha, S., Stefanovich, L. E. V., Kremen, C. Bumble bee pollen use and preference across spatial scales in human-altered landscapes. Ecological Entomology. 38 (6), 570-579 (2013).
- Thomson, D. Competitive interactions between the invasive European honey bee and native bumble bees. Ecology. 85 (2), 458-470 (2004).
- Kleijn, D., Raemakers, I. A retrospective analysis of pollen host plant use by stable and declining bumble bee species. Ecology. 89 (7), 1811-1823 (2008).
- Harmon-Threatt, N. H., Kremen, C. Bumble bees selectively use native and exotic species to maintain nutritional intake across highly variable and invaded floral resource pools. Ecological Entomology. 40, 471-478 (2015).
- Harmon-Threatt, N. H., Valpine, P., Kremen, C. Estimating resource preferences of a native bumblebee: the effects of availability and use-availability models on preference estimates. Oikos. , (2016).
- Martin, A. P., Carreck, N. M. L., Swain, J. L., Goulson, D. A modular system for trapping and mass-marking bumblebees: applications for studying food choice and foraging range. Apidologie. 37, (2006).
- Saifuddin, M., Jha, S. Colony-level variation in pollen collection and foraging preferences among wild-caught bumble bees. (Hymenoptera: Apidae). Environmental Entomology. 42 (2), 393-401 (2014).
- Heinrich, B. Bumblebee Economics. , Harvard University Press. (2004).
- Leonhart, S. D., Bluthgen, N. The same, but different: pollen foraging in honeybee and bumblebee colonies. Apidologie. 43, (2012).
- Kriesell, L., Hilpert, A., Leonhardt, S. D. Different but the same: bumblebee species collect pollen of different plant sources but similar amino acid profiles. Apidologie. 48, 102-116 (2017).
- Al-Tikrity, W. S., Benton, A. W., Hillman, R. C., Clarke, W. W. The relationship between the amount of unsealed brood in honeybee colonies and their pollen collection. Journal of Apicultural Research. 11 (1), 9-12 (1972).
- Spaethe, J., Weidenmüller, A. Size variation and foraging rate in bumblebees (Bombus terrestris). Insectes Sociaux. 49 (2), 142-146 (2002).
- Goodwin, R. M., Perry, J. H. Use of pollen traps to investigate the foraging behaviour of honey bee colonies in kiwifruit. New Zealand Journal of Crop and Horticulture Science. 20 (1), 23-26 (1992).
- Chua, C. K., Leong, K. F. 3D PRINTING AND ADDITIVE MANUFACTURING: Principles and Applications (with Companion Media Pack) of Rapid Prototyping. , World Scientific Publishing Co Inc. (2014).
- Kearns, C. A., Inouye, D. W. Techniques for Pollination Biologists. , University Press of Colorado. (1993).
- Velthuis, H. H., van Doorn, A. A century of advances in bumblebee domestication and the economic and environmental aspects of its commercialization for pollination. Apidologie. 37 (4), 421-451 (2006).
- Moisan-Deserres, J., Girard, M., Chagnon, M., Fournier, V. Pollen loads and specificity of native pollinators of lowbush blueberry. Journal of Economic Entomology. 107 (3), 1156-1162 (2014).
- Medler, J. T. A nest of Bombus huntii Greene (Hymenoptera: Apidae). Entomological News. 70, 179-182 (1959).
- Husband, R. W. Observation on colony of bumblebee species (Bombus spp). Great Lakes Entomologist. 10, 83-85 (1977).
- Buttermore, R. E. Observations of successful Bombus terrestris (L), (Hymenoptera: Apidae) colonies in Southern Tasmania. Australian Journal of Entomology. 36, 251-254 (1997).
- Goulson, D., Peat, J., Stout, J. C., Tucker, J., Darvill, B. Can alloethism in workers of the bumblebee, Bombus terrestris, be explained in terms of foraging efficiency. Animal Behaviour. 64 (1), 123-130 (2002).
- Couvillon, M. J., Jandt, J. M., Duong, N. H. I., Dornhaus, A. Ontogeny of worker body size distribution in bumble bee (Bombus impatiens) colonies. Ecological Entomology. 35 (4), 424-435 (2010).
- Russell, A. L., Morrison, S. J., Moschonas, E. H., Papaj, D. R. Patterns of pollen and nectar foraging specialization by bumblebees over multiple timescales using RFID. Scientific Reports. 7 (1), 1-13 (2017).
- Hagbery, J., Nieh, J. C. Individual lifetime pollen and nectar foraging preferences in bumble bees. Naturwissenschaften. 99 (10), 821-832 (2012).
- Baur, A., Strange, J. P., Koch, J. B. Foraging economics of the Hunt bumble bee, a viable pollinator for commercial agriculture. Environmental Entomology. 48 (4), 799-806 (2019).
- Winter, K., et al. Importation of non-native bumble bees into North America: potential consequences of using Bombus terrestris and other non-native bumble bees for greenhouse crop pollination in Canada, Mexico, and the United States. San Francisco. 33, (2006).
- Ruz, L., Herrera, R. Preliminary observations on foraging activities of Bombus dahlbomii and Bombus terrestris (Hym: Apidae) on native and non-native vegetation in Chile. Acta Horticulturae. 561, 165-169 (2001).
