Summary
不同的小脑区域被牵连到不同的行为输出中发挥作用，但潜在的分子机制仍然未知。本文描述了一种可重复和快速解剖半球、前部和后部区域以及深小脑核的方法，以便通过分离RNA和测试基因表达差异来探测分子差异。
Abstract
Cerebellum 在控制运动、平衡、认知、奖励和影响等几个关键功能中起着重要作用。成像研究表明，不同的小脑区域有助于这些不同的功能。研究区域小脑差异的分子研究是滞后的，因为它们大多是在整个小脑提取物上完成的，从而掩盖了特定小脑区域之间的任何区别。在这里，我们描述了一种可重复和快速剖析四种不同小脑区域的技术：深小脑核（DCN）、前体和后脑小脑皮层以及半球小脑皮层。剖析这些不同的区域可以探索分子机制，这些分子机制可能是它们对平衡、运动、影响和认知的独特贡献的基础。该技术还可用于探索不同小鼠疾病模型中这些特定区域的病理易感性差异。
Introduction
小脑包含超过一半的神经元在大脑中，历史上被称为运动控制和平衡中心在大脑1。最近，研究表明，小脑在认知、奖励处理等各种其他功能中起着关键作用，并影响2、3、4、5。
小脑有很好的解剖学：皮层区域由颗粒、普金耶和分子层组成。颗粒细胞形成颗粒细胞层，并通过平行纤维将输入发送到分子层的Purkinje细胞树突，该分子层的Purkinje细胞树突也从源自劣质橄榄的攀爬纤维中接收输入。Purkinje细胞向深小脑核（DCN）中的细胞发送抑制性投影，而深小脑核是小脑的主要输出。这种小脑回路的输出进一步调节在小脑皮层的抑制内周素的活动，包括高尔吉，石柱和篮子细胞4。这个小脑功能单元分布在小脑皮层的所有叶。尽管小脑的电路相对统一，但人类神经成像文献和患者研究表明小脑6、7的功能异质性。
小脑皮层可分为两个主要区域：中线定义的紫杉和横半球。紫杉可以进一步分为前叶和后叶。小脑的这些不同区域与促成不同行为有关。任务唤起或无任务的活动模式牵连到，前区域的vermis对运动功能的贡献更大，而后维米斯对认知6，7的贡献更大。真语也与影响和情绪有关，而小脑半球有助于执行，视觉空间，语言和其他助记符功能8。此外，解剖学研究提供了证据，功能上不同的小脑区域与不同的皮质区域9有关。病变症状映射显示，影响前叶（延伸至叶六）的中风患者在精细运动任务上表现较差，而后叶区域和半球受损的患者在没有小脑运动综合征10的情况下表现出认知缺陷。最后，区域小脑病理学表明，功能上不同的小脑区域也不同易患11、12病。
虽然探索较少，但初步证据表明，小脑皮质区域有不同的基因表达特征。Zebrin II的Purkinje细胞表达在动词中显示了区域特异性模式，因此后叶中有更多的泽布林II阳性细胞，前叶13中较少。这也与区域独特的生理功能相关，因为泽布林II负普金耶细胞显示更高的补品发射频率比Purkinje细胞是泽布林II阳性14。
除了小脑皮层外，小脑还包括作为小脑主要输出的深小脑核（DCN）。核由中间体 （MN）、插话 （IN） 和横向核 （LN） 组成。功能成像和患者研究表明，DCN也参与各种行为15，但很少有研究检查基因表达变化在DCN。
分子技术的进步使得评估大脑中的区域基因表达成为可能，并发现了生理学和疾病状态16中不同大脑区域的异质性。这种研究暗示小脑不同于其他大脑区域。例如，与其他大脑区域1相比，小脑中神经元与胶质细胞的比例是倒置的。即使在正常的生理条件下，与17个大脑区域相比，小脑中宣炎基因的表达也受到调节。分子技术在确定导致小脑疾病发病机制的途径方面也非常有用。例如，整个小脑提取物的RNA测序发现，与野生类型对照相比，在Purkinje细胞特异性转基因小鼠模型中，脊柱细胞1型（SCA1）中改变了基因。这些证据揭示了小脑Purkinje细胞中潜在的主要分子通路，并有助于确定潜在的治疗目标18。然而，最近的研究表明，小脑区域11、12、19的易患疾病的易患性存在差异。这可能表明，在不同的小脑区域发生了关键变化，这些变化可能被整个小脑提取物掩盖或未被发现。因此，有必要开发技术，使研究人员能够检查不同小脑区域的分子特征。
这里提出的技术描述了一种可重复的方法来解剖小鼠小脑的四个不同区域，以便将RNA与这些区域分离出来，并探索基因表达的区域差异。 图1A 中鼠标小脑的示意图突出了蓝色和黄色半球的真语。具体来说， 这种技术使得分离四个区域成为可能：深小脑核（DCN）（ 图1A中的红点盒），前紫杉（CCaV）的丘脑皮层（深蓝色） 图1A），后体的丘脑皮层（CCpV）（ 图1A中的浅蓝色）和半球的小脑皮层（图 1A中的黄色）。通过分别评估这些区域的基因表达，将有可能研究这些不同区域独立功能背后的分子机制，以及它们在疾病中的脆弱性的潜在差异。
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Protocol
1. 设置
- 收集必要的设备，包括斩首剪刀、钝钳、解剖剪刀、血管剪刀、微铲、下垂鼠脑基质、剃须刀刀片、200 μL 管尖、玻璃培养皿、玻璃滑梯和冰桶。将所有设备放在吸水垫上。
- 将培养皿、玻璃板和大脑基质放在冰上。
- 使用垂直角度的剃须刀刀片，修剪约 5 mm 的 200 μL 管道尖端。这使得尖端末端的开口大小大约为 1 mm 宽。这应该足以冲出 DCN 。但是，这也可以根据需要根据解剖进行调整。有许多提示，便于更换和调整。
- 标记 1.5 mL 微融合管，具有动物识别和小脑区域（每只动物四根管）。
- 提取后，用液氮填充冷冻安全容器以闪存冷冻组织。
2. 大脑提取和解剖
所有实验都是根据明尼苏达大学动物护理委员会的指导方针进行的。
- 使用 5% CO2 暴露对鼠标实施安乐死。一旦呼吸停止，进行颈椎错位。用斩首剪刀斩首鼠标，并将尸体丢弃在适当的容器中。
- 沿着头部的中垂线，从鼻子开始，一直往回走，用剃刀刀片切开。分离皮肤，分开到中线的两侧。使用剃须刀刀片切除两侧的肌肉，切开耳道。
- 使用解剖剪刀，修剪任何脊髓区域，直至脑干与小脑相遇的地方，小心不要损坏小脑。
- 将一个血管剪刀刀片插入脑干和椎柱之间的空间，切向耳道，用剪刀抬起来干净地切开骨头，但限制对组织的损伤。
- 继续沿着头骨的边缘向嗅球切开，继续抬起来，同时切割以限制对脑组织的损伤。
- 使用钝钳，轻轻剥去头骨的背面，露出大脑和小脑的后部区域。
- 使用刚切开的头骨边缘的钝钳，将头骨的其余部分剥到大脑上。这一步应该去掉大部分的头骨帽，露出大脑。
- 用血管剪刀和钝钳修剪头骨的其余部分，从大脑顶部清除大部分头骨。
- 使用微铲，稍微抬起大脑，铲下并向上滑动，从剩余的头骨中取出嗅球，断开光路纤维。在这一点上， 大脑应该很容易自由。
- 将大脑放入冰上，取出剩余的头骨或其他碎屑。
- 使用微铲，轻轻地将大脑放入脑基质中，并向上倾斜。需要时间来确保它在矩阵中设置水平，特别是中线落在矩阵的中心。此基质专为成年小鼠脑组织设计，来自较年轻或患病动物的组织可能在基质中处于较低水平，但仍可在样本中实现可重复的结果。
- 沿着下垂的中线放置一把剃须刀刀片，确保刀片一直推到矩阵底部（图 1B）。
- 将另一把剃须刀刀片 1 mm 放在第一刀片的侧面（图 1B）。将另外两个刀片分开 1 毫米。最终结果应该是三个刀片放在大脑的一侧，所有1毫米分开。对另一边也做同样的事。总共将放置7个刀片（图1C）。
- 小心地抓住剃须刀刀片的前端和后端，然后直接从矩阵中抬起来。剃须刀刀片外部的组织可以丢弃。
- 慢慢地，一次将一把剃须刀刀片与其他刀片分开，小心不要损坏组织部分。
- 小心地将组织部分从剃须刀刀片上滑落，然后用微型铲子滑到玻璃滑梯上。总共将有六个下垂的大脑部分（图1D）。
- 4个最横向的部分将有DCN可见（紫色框， 图1D）。要隔离 DCN，将修剪过的 200 μL 管道尖端垂直固定在 DCN 上，并牢牢地向下推过组织，向四面八方摇晃，以完全解剖 DCN 与周围组织。直接抬起来，干净地去除DCN，并直观地确认组织在尖端的存在。
- 将一根手指放在尖端顶部并向下推，导致组织凸出。将尖端放入正确标记的微融合管中，并确保将组织冲孔放置在管子底部。重复 2.17 用于其余三个部分，将 DCN 冲孔放在同一管中。将管子放入液氮中以闪烁冻结。 图1E中每拳大小的表示。
- 提取了 DCN 的部分符合小脑半球的资格。推开这些部分小脑周围的脑组织其余部分。使用钝钳，轻轻地拿起这些半球小脑皮层部分，并放置到各自的微融合管。闪存冻结。
- 对于最后两个真实部分（浅蓝色框， 图1D），推开周围的脑组织只留下小脑。使用剃须刀刀片，将前叶与后叶分离。切割应在球体 6 形成后，不应包括球状 10 （图1F）。
- 使用钝钳，小心地将前小脑皮层部分和后小脑皮层部分放入各自的微充管中，将管子留在液氮中5分钟，以闪存冻结。从这里向前移动到RNA提取，或可能存储管在-80°C。
3. RNA提取
注：本协议是从冷泉港协议RNA提取与TRIzol20修改。TRIzol使生物材料溶解，从而有可能提取RNA。
- 将微融合管放入冰中，防止组织解冻过快，在微富管中涂抹 150 μL 的冷 TRIzol。与绝育害虫同质化。一旦组织被同质化，上下管道溶液，以确保没有剩余的组织完好无损。通过将小组织块拉入胰岛素注射器几次，进一步分解任何小组织块。
- 再添加 350 μL 的 TRIzol 和管道上下混合彻底。让在房间温度下坐5分钟。
- 在管子中加入 150 μL 氯仿，大力摇动，然后休息 2-3 分钟。氯仿将同质化组织溶液分相（RNA、DNA 和蛋白质）。
- 离心机在 12，000 x g，在 15°C 下，10 分钟。确保所有管子都处于相同的方向。
- 小心地取出管子，将离心机的温度设置为 4°C。仅将透明的交错阶段移入新管中（这是RNA），小心不要破坏不透明的相间（DNA）。 最低阶段为红色，含有蛋白质。管子中的剩余溶液可以保存或丢弃。
- 以1：2的比例加入100%异丙醇（如果去除200 ul的水相，加入100微升异丙醇）。通过上下管道彻底混合。让在室温下休息10分钟。异丙醇使RNA沉淀出溶液。
- 离心机在 12，000 x g，在 4°C 下，10 分钟。请务必将所有管子置于相同的方向，以便于可视化颗粒。产生的颗粒将是提取的RNA。
- 小心地取出管子，用管道取出超强的管子，小心不要打乱颗粒。颗粒有点像凝胶状，很难看到，但应该能够根据离心机中管子的方向来估计它的位置。
- 去除所有超高氨基剂后，在 4°C 下加入 500 微升 75% 乙醇、短暂涡流和离心机，7500 x g，4°C，5 分钟。乙醇进一步洗涤颗粒。
- 小心地取出超高超，而不会破坏颗粒。让盖打开以干燥样品。这通常需要5-10分钟，但可以根据颗粒上剩余的乙醇量而有所不同。不要过干。
- 干燥后，将颗粒重新注入无水区。在 DCN 样本中加入 20 μL，为所有其他样品添加 30 μL。
- 重新暂停后，样品可以储存在 -80 °C 或进行进一步测试。
4. 实时定量聚合酶链反应 （RTqPCR）
- 在此步骤之前，需要 DNase 治疗 RNA 以去除任何基因组 DNA，并利用 BioRad 中的 iScript 生成 cDNA。在制作 cDNA 之前，请务必使 RNA 的浓度正常化。此外，优化 qPCR 的引数也很重要。按照这里描述的方法完成这一步骤21。下面的 qPCR 的简要说明。
- 引引器均从 IDT 购买。前向和反向序列都在同一个样本管中，并存储在 20 倍浓度下。
Rps18（控制基因）：
前进 - 5 '- 克塔加加特卡卡特 - 3'
反向 - 5 '- 阿卡卡塔克 - 3'
帕瓦尔布明（钙结合蛋白，抑制细胞）：
前锋 - '5 - 阿特加格特加加加格特克 - 3'
反向 - '5 - 阿格特克塔格 - 3'
Kcng4 （钾通道子组）：
前进 - 5 '- CTTCTTCCTGTCGTGA-3'
反向 - 5 '- GCCCTCACTGTCAG-3'
阿尔多拉斯 C （泽布林二世， 小脑皮层的差别表达）：
前进 - 5 '- 阿加加加加塔塔特格 - 3'
反向 - 5 '- 塔格塔格特格特格克 - 3' - qPCR 条件如下。预孵化期，5分钟，95°C。放大期，50 个周期：95°C 10 分钟，62°C 10 分钟，72°C 10 分钟。熔化曲线周期，5 秒在 95°C，1 分钟在 65°C，并将坡道速率设置为 0.07°C/秒，直到目标温度达到 97°C。然后冷却 10 分钟至 40°C。 所有 qPCR 反应均以三倍体进行，使用 2+ Ct分析基因表达，以 Rps18 作为负载控制，使基因表达正常化。散装小脑提取物用作参考。
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Representative Results
在这些实验中，使用了四只11周大的雌性野生C57/Black6型小鼠。一只小鼠用于进行称为"散装小脑"的全小脑解剖，并允许将解剖区域的RNA水平与完全解剖进行比较。其他三只小鼠用于进行本协议中描述的小脑解剖。使用三只小鼠可以确保在小鼠身上检测到的RNA水平的趋势可重复。
图1A 代表小鼠小脑 - 蓝色和黄色半球。真人（深蓝色前部区域、浅蓝色后部区域）和半球（黄色）的萨吉塔尔示意图。DCN 在红色虚点框中突出显示。成功的解剖将从大脑中线下部的初始剃须刀刀片位置开始（图1B）：这指导以下六个刀片的成功放置（图1C）。这留下六个下垂部分（图1D），四个横向/半球部分（以紫色勾勒）和两个中线/边缘部分（以浅蓝色勾勒）。4 个横向部分包含 DCN; 图1E 描绘了一个成功的DCN冲孔解剖。中线白方部分很可能有一半最中间DCN存在在1毫米厚的部分，但它不会一直存在，不可能重复解剖。中线白象部分被分成图 1F中描绘的前部和后部。成功的解剖为成功的实验设置了其余部分。
实时定性聚合酶链反应 （RTqPCR） 结果证明了评估每个区域的基因表达水平以及验证解剖的可行性。我们使用引物检测基因，这些基因显示从前脑到后脑皮层的梯度表达和DCN中的浓缩，并将它们的表达与大小脑解质进行比较。
我们评估了三个基因的表达水平：阿尔多拉塞C、帕瓦尔布明和Kcng4。 阿尔多拉斯C，也称为泽布林II，是一种酶，通过小脑以一致的带状模式表达。它在后维米斯中表达得比前文更强烈。半球也有带13，14。帕瓦尔布明是一种钙结合蛋白，在抑制细胞中表达。根据艾伦大脑图集，帕瓦尔布明似乎在整个小脑皮层和DCN（http://mouse.brain-map.org/gene/show/19056）中表达相对均匀。Kcng4 是一种钾电压门控通道子组，与后叶（https://mouse.brain-map.org/gene/show/42576）相比，在 DCN 和前叶中似乎富集。定量表达分析表明，正如预期的那样，与散装小脑解剖（图2A）相比，在后脑角（CCpV）中，aldolase C表达得更高，但在DCN和紫杉（CCaV）前部区域表达得更低。帕瓦尔布明同样存在于DCN，前紫杉，后紫杉，和半球小脑皮质，如在散装小脑提取物（图2B）。Kcng4 在 DCN 和前紫杉 （CCaV） 中显著丰富，与批量萃取 （图 2C）相比，在后体 （CCpV） 或半球 （CCH） 中并没有显著丰富。这一结果遵循了根据艾伦大脑地图集中看到的模式所期望的结果。因此，基因表达分析验证了解剖方案，并确认可以获得和测试高质量的RNA。
要直接比较小脑皮层中阿尔多拉塞 C 的表达，则将表达水平与前体 （CCaV） （图 3）进行比较。后体（CCpV）中阿尔多拉塞C的表达水平显著较高，在小脑半球（CCH）中呈较高趋势，但幅度不大。小脑半球的这种趋势可能是因为半球有阿尔多拉塞C带，解剖捕获阿尔多拉塞负正波段。
图1： 小脑解剖的代表图像
A.小鼠小脑的示意图，蓝色有紫罗兰色，半球为黄色。维米斯和半球的射手座小脑示意图。Vermis 是蓝色的，深蓝色标记前维米斯，浅蓝色标记后维米斯。半球为黄色。每个箱子都标有红点框。B.全脑在下垂鼠脑基质，用剃须刀刀片下中线。C.在中线两侧放置相距 1 mm 的三把剃须刀刀片。D.由此产生的六个下垂的大脑部分。四个包含横向/半球小脑部分（前四个图像以紫色勾勒）。两个包含中/多脑小脑部分（下两个图像，以浅蓝色勾勒）。E.代表横向/半球小脑部分与DCN冲孔解剖到部分的右侧（部分概述在图1D的粉红色）。F.图 1D中的 Cerebellar 部分，周围有方形点缀的绿松石，解剖成前叶和后方的紫杉叶。请单击此处查看此图的较大版本。
图2：小脑分离特定区域的相对基因表达。
阿尔多拉塞C（2A）、帕瓦尔布明（2B）和Kcng4（2C）的相对表达正常化为Rps 18（与所有细胞中表达的核糖不出所料，阿尔多拉塞 C 表达在后维米斯中较高，在 DCN 和前 vermis（2A）中较低。不出所料，根据艾伦大脑图集，帕瓦尔布明表达在每个提取区域均匀表达，而Kcng4表达在DCN和CCaV中显著丰富。单向 ANOVA，带有图基的特设测试。*p<.005， ** p<.0001 相对于散装小脑提取物。直方图表示 N+3 的平均值，每个鼠标的值显示为点。错误条表示平均值的标准错误。DCN（深小脑核）、CCaV（前紫杉的丘脑皮层）、CCPV（后脑皮层）和CCH（半球小脑皮层）。小脑解剖区域的 N+3 小鼠。N=1批量提取物。在三重体中完成的实验。请单击此处查看此图的较大版本。
图3： RTqPCR 小脑皮层的阿尔多拉塞C相对基因表达
小脑皮层特定区域中阿尔多拉塞 C 的相对表达 - 前紫杉 （CCaV）、后紫杉 （CCpV） 和半球 （CCH）。aldolase C 的基因表达水平正常化为 Rps18，与前体中的表达水平进行比较。正如所料，阿尔多拉斯C表达在后维米斯中得到了丰富。单向 ANOVA，带有图基的特设测试。*p<.005 相对于 CcaV。错误条表示平均值的标准错误。CCAV（前紫杉的丘脑皮层）、CCpV（后紫杉的丘脑皮层）和CCH（半球小脑皮层）。N+3小鼠，实验在三重完成。请单击此处查看此图的较大版本。
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Discussion
这里描述的方法使得评估四个不同的小脑区域内的基本基因表达和分子机制成为可能 - 深小脑核 （DCN）、前小脑皮层 （CCaV）、后脑脊柱皮层 （CCpV） 和半球小脑皮层 （CCH）。单独评估这些区域的能力将扩大我们对特定小脑区域异质性的了解，并可能揭示它们对各种行为的贡献。
通过下垂分割整个脑组织，可以很容易地可视化和识别小脑的这四个区域，从而允许快速解剖。据作者所知，这是首次对分子分析的全小脑区域解剖进行描述。在最近发表的一篇论文中，研究人员对小脑前叶和小脑的节点叶进行了批量解剖，进行分子分析。但是，使用上述方法，他们无法对 DCN 进行解剖。试图用振动器分离DCN冲孔以切割300um厚片通常会遇到三个关键问题。首先，由于脑球的安装和组织切口的角度略有不同，很难在动物之间重复分离出相同的区域。其次，安装和切片需要时间，增加RNA降解的机会，降低下游应用RNA样本的质量。最后，300um 厚片的冲孔产生低产的RNA。
这里显示的数据表明，有可能使用这种技术来评估小脑区域的相对基因表达。阿尔多拉斯C在CCpV中受到高度监管。Kcng4在DCN和CCaV中受到高度监管，而帕瓦尔布明在小脑的所有区域表达相对平等。虽然这些只有三个基因，但这些结果表明，这种解剖方法可用于识别这些不同区域的基本分子特征。
在整个协议中，需要注意一些关键事项。将大脑定位在矩阵中是一个重要步骤。在某些情况下，大脑可能没有在矩阵中或中线完全设置水平。当查看每个下垂部分时，这一点将变得清晰起来。例如，如果正好在中线切口，则大多数中段小脑部分看起来几乎相同，并且没有可视的 DCN。由于这些地标可以通过眼睛识别，因此可以排除有多少部分符合真实或半球部分的资格，并且它们可以组合在同一微富管中。另一个关键步骤是提取DCN。在某些情况下，将手指压到 200 μl 管道尖端的顶部没有足够的压力来提取组织冲孔。如果是这样的话，就有必要用针鼻钳挖出拳头，把拳头放在正确的管子里。此协议的下一个关键步骤是 RNA 提取。虽然列出的体积已优化，以实现最大RNA提取，但可能还需要调整 RNA 提取协议中的溶液量，以满足实验室的个人需求。由于几乎没有组织可处理，因此最终RNA产品中苯酚污染的几率更高。这可以通过调整用于同质化组织的 TRIzol 量并确保同质化组织完全混合来管理。
此协议的局限性是，虽然 DCN 被分成三个单独的核（横向、介入和介质），但很难在 1 mm 部分中可视化和可重复地击打每个核，更不用说有足够的组织来提取 RNA 了。除了此限制，一半最中等的DCN出现在维米斯：然而，通过这种解剖，很难可视化和可重复地解剖出来。由于协议是目前，另一半的中DCN和剩余的DCN被解剖出来。在半球也有10个个体的白云和8个叶，但是要以可重复的方式对每一个叶进行单独剖析是很困难的，并导致非常低的RNA浓度产生。虽然这种方法确实能够更具体地深入到小脑区域，但它仍然将不同的解剖区域组合成一组，这些群体可能掩盖了单个叶或亚叶单位水平的独特变化。
总之，这种方法可以同时探索小脑的四个特定区域的区域分子差异。通过以这种特定区域的方式评估小脑，可以区分这些区域特征的基本分子机制和基因表达。这将进一步加深我们对不同小脑区域在不同行为中的作用的理解，并允许未来的工作特别集中在一个小脑区域，并探讨其在疾病或目标治疗中的作用。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
我们感谢Cvetanovic实验室的奥斯汀·费罗和朱奥-吉尔赫姆·罗莎在故障排除解剖、RNA提取和RTqPCR方面提供帮助。这项研究由M.Cvetanovic，R01 NS197387资助;HHS |国家卫生研究院。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 Microcentrifuge tubes | ThermoScietific | 3456 | |
| 100% Isopropyl Alcohol | VWR Life sciences | 1106C361 | |
| 200 ul Pipet tips | GeneMate | P-1237-200 | |
| Adult Mouse Brain Matrix Sagittal | Kent Scientific Corporation | RBMA-200S | |
| Blunt forceps | |||
| Chloroform | Macron | 220905 | |
| Decapitation Scissors | |||
| Dissecting Scissors | |||
| Ethyl Alcohol | Pharmco | 111000200 | |
| Glass Slide (for electrophoresis) | BIORAD | ||
| Homogenizer | Kimble | 6HAZ6 | |
| Ice Bucket | |||
| Insulin Syringe (.5ml) | BD | 329461 | |
| iScript Adv cDNA kit for RT-qPCR | BIORAD | 1725037 | |
| Micro Spatula | |||
| Needle Nose forceps | |||
| Petri Dish | Pyrex | ||
| Primetime Primer for Aldolase C | IDT | Mm.PT.58>43415246 | |
| Primetime Primer for Kcng4 | IDT | Mm.PT.56a.9448518 | |
| Primetime Primer for Parvalbumin | IDT | Mm.PT.58.7596729 | |
| Primetime Primer Rps18 | IDT | Mm.PT.58.12109666 | |
| Single Edge Rzor Blades | Personna GEM | ||
| Sterile, sigle-use pestles | FisherScientific | 12141364 | |
| TRIzol Reagent | Ambion by Life technologies | 15596018 | |
| Vascular Scissors |
References
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