Summary
כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להקים מודל עכברוש חדש של זיהום HIV פעיל באמצעות HIV כימרי (EcoHIV), שהוא קריטי לשיפור ההבנה שלנו של מאגרים נגיפיים HIV-1 במוח ומציע מערכת לחקור הפרעות נוירוקוגניטיביות הקשורות ל- HIV ותחלואה נלווית (כלומר, שימוש בסמים).
Abstract
נחקר היטב כי מודל העכבר הנגוע EcoHIV הוא בעל תועלת משמעותית בחקירת סיבוכים נוירולוגיים הקשורים ל- HIV. הקמת מודל עכברוש נגוע EcoHIV למחקרים של שימוש בסמים והפרעות נוירוקוגניטיביות, יהיה מועיל במחקר של neuroHIV ו- HIV-1 הקשורים הפרעות נוירוקוגניטיביות (HAND). במחקר הנוכחי, אנו מדגימים את היצירה המוצלחת של מודל חולדה של זיהום HIV פעיל באמצעות HIV כימרי (EcoHIV). ראשית, המבנה lentiviral של EcoHIV נארז בתאי FT 293 תרבותיים במשך 48 שעות. לאחר מכן, המדיום המותנה היה מרוכז וטריטר. לאחר מכן, ביצענו זריקות סטראוטקסיות דו-צדדיות של EcoHIV-EGFP לתוך רקמת מוח עכברוש F344/N. שבוע לאחר ההדבקה, אותות פלואורסצנטיים EGFP זוהו ברקמת המוח הנגועה, המציין כי EcoHIV בהצלחה גורם לזיהום HIV פעיל בחולדות. בנוסף, בוצעה חיסון עבור סמן התא המיקרוגליאלי, Iba1. התוצאות הצביעו על כך שמיקרוגליה היו סוג התא השולט ב-EcoHIV. יתר על כן, חולדות EcoHIV הציגו שינויים בעיבוד הטמפורלי, מנגנון נוירו-התנהגותי פוטנציאלי של HAND, כמו גם תפקוד סינפטי שמונה שבועות לאחר ההדבקה. באופן קולקטיבי, המחקר הנוכחי מרחיב את מודל EcoHIV של הידבקות ב- HIV-1 לחולדה המציעה מערכת ביולוגית בעלת ערך לחקר מאגרים נגיפיים HIV-1 במוח, כמו גם HAND ותחלואה נלווית כגון שימוש בסמים.
Introduction
מערכות ביולוגיות שיפרו את ההבנה שלנו של הפרעות נוירוקוגניטיביות הקשורות HIV-1 (HAND) ואת המנגנונים העצביים הבסיסיים שלהם2. קביעת איזו מערכת ביולוגית מתאימה ביותר לכל מחקר נתון תלויה לעתים קרובות בשאלת הריבית2. המגבלה של מגוון המודלים המארחים של בעלי חיים מאתגרת מחקרים על התפתחות מחלת HIV-1. כדי לחקור HIV-1 שכפול ויראלי פתוגנזה, אשלג ואח'3 יצר מודל העכבר של זיהום פעיל HIV-1, החלפת אזור הקידוד של גליקופרוטאין מעטפת משטח HIV, gp120, עם gp80 MLV ecotropic, אשר הוביל שכפול ויראלי מוצלח בעכברים4. לאחר זריקות וריד הזנב בעכברים HIV כימרי (EcoHIV), מאפיינים רבים נצפו דומים לאלה של אנשים seropositive HIV-1 (למשל, לימפוציטים נגועים מקרופאגים, ממוקד לתגובות חיסוניות אנטי ויראליות, ודלקת3,5,6).
למרות עכברים וחולדות הם שניהם חברים של Muridae, הבדלים מינים בסיסיים עשויים להשפיע על התאמתם לשאלות ניסיוניות ספציפיות7. לכן, ההרחבה של מודל זיהום EcoHIV לחולדות (נפוץ במחקרים של שימוש בסמים והפרעות נוירוקוגניטיביות) יהיה יתרון במחקר של neuroHIV. לדוגמה, גודלם הגדול יותר הופך את השתלת הקטטר הצווארי להליכי ניהול עצמי של תרופות למעשית יותר8. טכניקות ניהול עצמי סמים בחולדות נוצלו כדי להעריך את המוטיבציה ב-HIV-1 9. יתר על כן, משימות נוירוקוגניטיביות / התנהגותיות רבות תוכננו בתחילה עבור חולדות10. כאן, אנו מדווחים על ניצול של זריקות סטראוטקסיות של EcoHIV בחולדות כדי להרחיב את מודל הזיהום EcoHIV ולאפשר הזדמנות מפתח כדי לענות על שאלות חדשות הקשורות neuroHIV ו HAND.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל הפרוטוקולים של בעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דרום קרוליינה (מספר הבטחה פדרלית: D16-00028). שישה זכר בוגר F344 / N חולדה שוכנה בסביבה מבוקרת תחת אור 12/12: מחזור כהה עם גישה libitum המודעה למזון ומים. כל בעלי החיים טופלו באמצעות הנחיות שנקבעו על ידי המכונים הלאומיים לבריאות במדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.
1. אריזת וירוסים בתאי FT 293
- תרבות 293 תאי FT (5×105/ מ"ל) בג'לטין מצופה 75 ס"מ2 בקבוקים עם DMEM בתוספת 10% FBS11. לגדל תאים ב 37 °C (69 °F) להיות 50% קונדיטוריה ב transfection.
- לדלל 22.5 μL של מגיב transfection (למשל, Lipofectamine 3000) ב 750 μL של בינוני (למשל, Opti-MEM) בצינור מיקרו צנטריפוגה 1.5 mL ומערבולת עבור 3 s.
- לדלל 20 מיקרוגרם של EcoHIV פלסמיד DNA ב 750 μL של מדיום בצינור מיקרו צנטריפוגה 1.5 מ"ל ומערבבים היטב.
- מוסיפים דנ"א מדולל לצינור של מגיב טרנס-פקציה מדולל ומערבבים בעדינות. דגירה במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.
- מוסיפים את התערובת ל-10 מ"ל של מדיום DMEM שנחמר מראש בבקבוק 75 ס"מ2. דגירה תאים במשך 2 ימים ב 37 °C (69 °F).
- קציר ולשלב 24 מ"ל של מדיום מותנה משני בקבוקונים הכוללים lentivirus ארוז.
- צנטריפוגה כל 24 מ"ל של בינוני מותנה ב 500 x גרם במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. להעביר את supernatant הבהיר לצינור סטרילי 50 מ"ל.
- שלב 8 מ"ל של רכז Lenti-x עם 24 מ"ל של על-טבעי מובהק (יחס של 1:3). מערבבים על ידי היפוך עדין. תערובת דגירה ב 4 מעלות צלזיוס במשך יומיים.
- תערובת צנטריפוגה ב 1,500 x גרם במשך 45 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. בזהירות להסיר את supernatant.
- בעדינות להשעות את גלולה עם 100 μL של 100 מ"מ PBS.
- ריכוז וירוס טיטר עם ערכת אליזה p24.
2. ניתוחים סטראוטקסיים של וירוס EcoHIV-EGFP
- הרדמה חולדות באמצעות 3% sevoflurane. המשך לשלב 2.2 כאשר החולדות אינן מגיבות לגירויים רעילים ורפלקסים נעדרים.
- גילחו את השערות מאזור המוח ועקרו את העור פעמיים עם 70% אתנול וקרצוף על בסיס כלורקסידין. אבטח את החולדה בעמדה מועדת במנגנון הסטריאוטאקסי.
- בצע חתך (5-6 ס"מ) דרך העור לאורך קו האמצע הקרקפת.
- סמן שתי עמדות קידוח ב 0.8 מ"מ לרוחב, 1.2 מ"מ rostral כדי bregma. לקדוח חור (קוטר 0.4 מ"מ) בכל מיקום גולגולת.
- מלא פתרון לנטיוירוס EcoHIV (1.04 × 106 TU / mL) במזרק הזרקת 10 μL. אבטחו את המזרק למנגנון הסטריאוטאקסי.
- הזז במורד המחט קרוב לפני השטח של חור קידוח. למדוד ולהזיז 2.5 מ"מ לעומק.
- להחדיר 1 μL של פתרון וירוס בקצב של 0.2 μL / min. שמור את המחט בתוך אזור ההזרקה במשך 5 דקות. תזיז לאט את המחט עד שהיא מחוץ לגולגולת החולדה.
- לתפור את העור עם חוט משי 4-0.
- לעקר את החתך עם 70% אתנול פעם אחת. תת עורית להזריק butorphenol (דורולקס, 0.1 מ"ג / קילוגרם משקל גוף).
- מעבירים את החולדה לתא התאוששות עם כרית חימום עד שהיא מתעוררת.
3. הדמיה של חלקי מוח
הערה: המתן שבוע עד שמונה שבועות לאחר עירוי ויראלי EcoHIV.
- הרדמה החולדה עם 5% sevoflurane. המשך לשלב 3.2 כאשר החולדות אינן מגיבות לגירויים רעילים ורפלקסים נעדרים.
- תקן את החולדה בתנוחת על-חוש בתוך מכסה המנוע של אדים.
- להסית את העור לאורך קו האמצע של בית החזה. חותכים את הסרעפת ופותחים את חלל בית החזה.
- הכנס מחט 20 G × 25 מ"מ לתוך החדר השמאלי.
- מיד לפתוח את האטריום הנכון עם מספריים.
- לעיין 50 מ"ל של PBS מראש 100 מ"מ בקצב של 5 מ"ל / דקה.
- לחלחל 100 מ"ל של קר 4% paraformaldehyde בקצב של 5 מ"ל / דקה.
- לערוף את ראש החולדה, לפתוח את הקרקפת ולהסיר את המוח.
- פוסטפיקס לילה עם 4% פארפורמלדהיד.
- להעביר את המוח 40 מ"ל של 30% סוכרוז ב 100 מ"מ PBS בצינור 50 מ"ל עד המוח צף למטה (כ 3 ימים).
- הצמד להקפיא את המוח במתילבוטנול במשך 2 דקות ב - 80 מעלות צלזיוס.
- לאבטח את רקמת המוח על פלטפורמת מתכת בתוך -20 מעלות צלזיוס cryostat.
- חותכים 50 מיקרומטר עבה חלקי coronal באמצעות cryostat.
- מעבירים את פרוסות המוח לשקופיות זכוכית בעזרת מברשת עדינה.
- הר קטעים ב 0.3 מ"ל של בינוני נגד פשתן לכסות עם 22 מ"מ 50 מ"מ coverlips.
- שמור את מגלשות הזכוכית בחושך בטמפרטורת החדר עד לייבוש.
- תמונה נוירונים ממוקדים עם מיקרוסקופ confocal באמצעות מחסנית Z מבוסס על גבולות אזור המוח ומאפיינים מורפולוגיים של נוירונים.
הערה: הגדרות המיקרוסקופ הקונפוקל בהן נעשה שימוש היו: הגדלה של 60 X (A/1.4, שמן), ומרווח מישור Z של 0.15 מיקרומטר (גודל חור סיכה 30 מיקרומטר; רדיוס חור סיכה מוקרן לאחור 167 ננומטר) באמצעות אורך גל של 488 ננומטר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
המדיום מותנה נאסף מ lentivirus של EcoHIV-EGFP נגוע 293FT תאים. לאחר מכן, הוא היה מרוכז ו titered, אז מוזרק באופן סטריאוטקסי לתוך המוח (אזור קליפת המוח) של חולדות F344/N. שבעה ימים לאחר ההזרקה, חולדות הוקרבו ותמונות נלקחו מפרוסות מוח קורונל החל bregma 5.64 מ"מ כדי bregma -4.68 מ"מ. באיור 1A, ישנם אותות EcoHIV-EGFP משמעותיים בכל המוח, במיוחד בקליפת המוח ובג'ירואים משומנים בהיפוקמפוס. יתר על כן, שתי תיוג עם Iba1and EcoHIV-EGFP בדיקות סיפק ראיות חזקות כי microglia היו סוג התא השולט מחסה ביטוי EcoHIV במוח (איור 1B). יש לציין כי דפוס ההפצה של EcoHIV-EGFP עולה בקנה אחד עם הריכוזים האזוריים היחסיים של microglia במוח החולדה (כלומר, קליפת המוח וgyrus שקע של ההיפוקמפוס).
במחקר שלאחר מכן, אימתנו את התועלת של זיהום EcoHIV בחולדות כדי מודל היבטים מרכזיים של HAND. באמצעות הפרוטוקול המפורט לעיל, חולדות F344/N הוזרקו באופן סטראוטקסי עם EcoHIV-EGFP או מלוחים. ראשית, שמונה שבועות לאחר ההדבקה, עיבוד זמני, ממד יסוד פוטנציאלי של HAND12, הוערך באמצעות עיכוב prepulse פער חזותי (איור 2). בעלי חיים EcoHIV הפגינו חוסר רגישות יחסית למניפולציה של מרווח interstimulus (ISI), עדות פונקציית ISI מחמיא יחסית בהשוואה לבקרות מלוחים. באופן ספציפי, הבדלים משמעותיים במדרון של הפונקציה ISI מ 50 ms ISI כדי 200 ms ISI נצפו (Semilog Line-X הוא יומן, Y הוא ליניארי, R2s ≥ 0.99; F(1,2)=642.9, עמ≤0.001). שנית, תיוג בליסטי שימש כדי לחקור את ההשפעה של זריקות EcoHIV-EGFP על המורפולוגיה של קוצים דנדריטיים בנוירונים בינוניים קוצניים (MSN) של גרעין האקומבנס (NAc; איור 3; פרמטרים אשר ניתן להשתמש בהם כדי להסיק מסקנות על פונקציה סינפטית13. חולדות EcoHIV הציגו שינויים עמוקים במורפולוגיה של עמוד השדרה הדנדריטי, עדות לתדירות יחסית מוגברת של קוצים דנדריטיים קצרים יותר (גנוטיפ x Bin Interaction, F(16, 218) = 4.3, p ≤ 0.001) עם קוטר ראש מוגבר (גנוטיפ x Bin אינטראקציה, F(12, 96) = 18.7, p ≤ 0.001) וקוטר צוואר מוגבר (גנוטיפ x Bin אינטראקציה, F(15, 120) = 16.3, p ≤ 0.001) יחסית לבעלי חיים בקרה. מתודולוגיה מפורטת להערכת עיבוד זמני14 ותיוג בליסטי13 דווחו בעבר.
איור 1. התאים הנגועים EcoHIV-EGFP מופצים במוח החולדה. (A)התמונות הקונפוקליות הייצוגיות (20x) של ביטוי EcoHIV-EGFP באזורי gyrus או קליפת המוח בהיפוקמפוס 7 ימים לאחר ההזרקה. (ב) תמונות קונפוקל נציג (60X) של לוקליזציה משותפת של Iba1 immunostaining עם EcoHIV-EGFP תאים נגועים ב 7 ימים לאחר ההזרקה. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2. זיהום EcoHIV גרם לגירעונות נוירוקוגניטיביים בולטים בעיבוד זמני. עיכוב prepulse פער חזותי נערך שמונה שבועות לאחר זריקות סטראוטקסיות של EcoHIV או מלוחים. זיהום EcoHIV גרם לשינויים בולטים בעיבוד זמני המעידים על חוסר רגישות יחסי למניפולציה של מרווח ביניים יחסית לחולדות שליטה. מתודולוגיה מפורטת המתוארת במקלאורין ואח '13. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3. זיהומיות עם EcoHIV-EGFP שינתה את הפרמטרים המורפולוגיים של קוצים דנדריטיים, ותמכה בתפקוד סינפטי עמוק. חולדות EcoHIV הציגו שינויים עמוקים במורפולוגיה של עמוד השדרה הדנדריטי, עדות לתדירות יחסית מוגברת של קוצים דנדריטיים קצרים יותר (A) עם קוטר ראש מוגבר (B) וקוטר צוואר מוגבר (C) יחסית לבעלי חיים שליטה. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בפרוטוקול זה, הקמנו מודל זיהום איידס הנגרמת על ידי EcoHIV בחולדות. באופן ספציפי, תיארנו הזרקה סטראוטקסית דו-צדדית של EcoHIV לתוך קליפת המוח אשר בהצלחה גרמה לזיהום HIV פעיל במוח החולדה 7 ימים לאחר הזרקה. פית'מור, אנו מראים כי זיהום EcoHIV בחולדות יכול להיות מערכת ביולוגית טובה ללמוד היבטים מרכזיים של HAND. שמונה שבועות לאחר זיהום EcoHIV, חולדות הפגינו ליקויים נוירוקוגניטיביים משמעותיים, שכללו את השינויים בעיבוד זמני ותפקוד סינפטי ב- MSNs של NAc. בהתחשב בחשיבותם של מודלים של בעלי חיים לחקר neuroHIV ו HAND2, הפיתוח של מערכת ביולוגית חדשה עשוי להיות יתרון לטיפול בשאלות חדשניות בתחום. אשלג ואח '3 דיווחו לראשונה על השימוש ב- EcoHIV כדי לגרום לזיהום פעיל ב- HIV-1 בעכברים. באופן ספציפי, עכברים היו מחוסנים עם 0.1 מ"ל של פתרון של וירוס EcoHIV באמצעותזריקות ורידהזנב 3 . שישה שבועות לאחר ההדבקה, ה-DNA הנגיפי HIV-1 זוהה בתאי טחול ולימפוציטים. בנוסף, חיסון אחד של הזרקת EcoHIV הספיק כדי לגרום לזיהום ביותר מ-75% מהעכברים. ניצול של זריקות סטראוטקסיות דו-צדדיות, כמו במחקר זה, נגוע בהצלחה 100% מהחולדות (n = 6 או n = 4, בהתאמה) עדות לגילוי EcoHIV-EGFP במוח שבעה ימים לאחר ההזרקה.
מחקרים קודמים הראו כי זיהום על ידי EcoHIV בעכבר מעורב מאוד כי microglia המוח רגישים מאוד זיהום וירוס EcoHIV3. במחקר זה, בשילוב עם Iba1 (סמן תא microglial) immunostaining, לוקליזציה משותפת משמעותית של אות EGFP עם Iba1 + תאים נצפתה, מאוד מציע כי microglia היו סוג התא העיקרי עבור זיהום EcoHIV במוח החולדה. תצפיות של זיהום EcoHIV משמעותי microglia עולים בקנה אחד עם נתונים בעכברים נגועים EcoHIV6, כמו גם HIV-1 seropositive אנשים15 ומערכות ביולוגיות אחרות בשימוש נפוץ מודל HIV16,17. ביצענו גם הזרקה רטרו-מסלולית של EcoHIV-EGFP לחולדות F344/N והנתונים הצביעו גם על ביטוי גבוה של EcoHIV-EGFP הן בקליפת המוח והן בהיפוקמפוס לאחר שבעה ימים בלבד (הנתונים לא מוצגים). לעומת זאת, הזרקת I.P. של EcoHIV בחולדות F344/N הובילה לביטוי ויראלי בלתי ניתן לגילוי במוח החולדה, inspite של מינונים גבוהים של EcoHIV lentivirus.
לגבי פרוטוקול זה, החוקרים צריכים להבטיח כי המדיום המותנה, כולל אריזת EcoHIV lentivirus בתאי FT 293, מרוכז ו titered לפני השימוש להזרקה סטראוטקסית. שלבים אלה הם קריטיים להבטחת תוצאות עקביות וניתן לשכפול בניסויים. יתר על כן, מצאנו גם כי זיהום EcoHIV הופץ מהזרקה סטראוטקסית במוח לרקמת טחול ב 8 שבועות לאחר ההזרקה. בינתיים, ליקויי העיבוד הזמני נצפו בחולדות נגועות EcoHIV כבר 14 ימים ונשמרו עד 8 שבועות לאחר ההדבקה (זמן הטרמינל הניסיוני הנוכחי, איור 2). בהשוואה למודל הזיהום EcoHIV הכללי בעכברים, הזריקה הסטראוטקסית האזורית הספציפית יותר של EcoHIV יצרה זיהום HIV יעיל באזורי המוח ויצרה גירעון עיבוד זמני בחולדות, שהוא המפתח לחקר תפקוד לקוי של HIV הקשורים neurocognitive.
מגבלות המספקות הזדמנויות נוספות לפרוטוקול הנוכחי כוללות זיהוי של סוגי תאים אחרים כגון נוירונים ואסטרוציטים, מחקר קורס זמן של שינויים בביטוי EcoHIV-EGFP לאחר זיהום כדי להצביע על שכפול והשהיה ויראליים במוח, מחקר אורך כדי לטפל בהשפעות הפוטנציאליות של גירעונות נוירוקוגניטיביים הקשורים ל- HIV, והערכת אם ההזרקה הסטראוטקסית של EcoHIV מתחמקת ממערכת החיסון ומתפשטת עוד יותר אודי, אודי. בנוסף, זה צריך להיבדק על זנים אחרים חולדה כדי לאשר את הכללת זיהום EcoHIV בחולדות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
לאף אחד מהכותבים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.
Acknowledgments
עבודה זו מומנה על ידי NIH מענקי HD043680, MH106392, DA013137, ו NS100624.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 293FT cells | ThermoFisher Scientific | R70007 | |
| Antibiotic-Antimycotic solution | Cellgro | 30004CI | 100X |
| Corning BioCoatGelatin 75cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Vented Cap | Life Technologies | 354488 | |
| Corning DMEM with L-Glutamine, 4.5 g/L Glucose and Sodium Pyruvate | Life Technologies | 10013CV | |
| Cover glass | VWR | 637-137 | |
| drill | |||
| Dumont #5 Forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Dumont #7 Forceps | World Precision Instruments | 14097 | |
| Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Biopur Safe-Lock Tubes | Life Technologies | 22600028 | |
| Ethicon Vicryl Plus Antibacterial, 4-0 Polyglactin 910 Suture, 27in. FS-2 | Med Vet International | VCP422H | |
| Hamilton syringe | Hamilton | 1701 | |
| Invitrogen Lipofectamine 3000 Transfection Reagent | Life Technologies | L3000015 | |
| Iris Forceps | World Precision Instruments | 15914 | |
| Iris Scissors | World Precision Instruments | 500216 | |
| Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit | Cell Biolabs, inc. | VPK-107-5 | |
| Lenti-X Concentrator | Takara | PT4421-2 | |
| Opti-MEM I Reduced Serum Medium | Life Technologies | 11058021 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127-500G | |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | |
| ProLong Gold | Fisher Scientific | P36930 | |
| Sevoflurane | Merritt Veterinary Supply | 347075 | |
| stereotaxic apparatus | Kopf Instruments | Model 900 | |
| SuperFrost Plus Slides | Fisher Scientific | 12-550-154% | |
| Vannas Scissors | World Precision Instruments | 500086 |
References
- Illenberger, J. M., et al. HIV Infection and Neurocognitive Disorders in the Context of Chronic Drug Abuse: Evidence for Divergent Findings Dependent upon Prior Drug History. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 15 (4), 715-728 (2020).
- Joseph, S. B., Swanstrom, R. The evolution of HIV-1 entry phenotypes as a guide to changing target cells. Journal of Leukocyte Biology. 103 (3), 421-431 (2018).
- Potash, M. J., et al. A mouse model for study of systemic HIV-1 infection, antiviral immune responses, and neuroinvasiveness. Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 102 (10), 3760-3765 (2005).
- Albritton, L. M., Tseng, L., Scadden, D., Cunningham, J. M. A putative murine ecotropic retrovirus receptor gene encodes a multiple membrane-spanning protein and confers susceptibility to virus infection. Cell. 57, 659-666 (1989).
- Geraghty, P., Hadas, E., Kim, B. H., Dabo, A. J., Volsky, D. J., Foronjy, R. HIV infection model of chronic obstructive pulmonary disease in mice. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 312 (4), 500-509 (2017).
- Gu, C. J., et al. EcoHIV infection of mice establishes latent viral reservoirs in T cells and active viral reservoirs in macrophages that are sufficient for induction of neurocognitive impairment. PLoS Pathogens. 14 (6), 1007061 (2018).
- Ellenbroek, B., Youn, J. Rodent models in neuroscience research: is it a rat race. Disease Models, Mechanisms. 9 (10), 1079-1087 (2016).
- Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. Novel apparatus and method for drug reinforcement. Journal of Visualized Experiments. (42), e1998 (2010).
- Bertrand, S. J., Mactutus, C. F., Harrod, S. B., Moran, L. M., Booze, R. M. HIV-1 proteins dysregulate motivational processes and dopamine circuitry. Scientific Reports. 8 (1), 7869 (2018).
- McGaughy, J., Sarter, M. Behavioral vigilance in rats: task validation and effects of age, amphetamine, and benzodiazepine receptor ligands. Psychopharmacology. 117 (3), Berl. 340-357 (1995).
- Li, H., Aksenova, M., Bertrand, S., Mactutus, C. F., Booze, R. M. Quantification of filamentous actin (F-actin) puncta in rat cortical neurons. Journal of Visualized Experiments. (108), (2016).
- McLaurin, K. A., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. Disruption of Timing: NeuroHIV Progression in the Post-cART Era. Scientific Reports. 9 (1), 827 (2019).
- McLaurin, K. A., Moran, L. M., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents. Journal of Visualized Experiments. (146), e58659 (2019).
- Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture. Journal of Visualized Experiments. (158), (2020).
- Ko, A., et al. Macrophages but not Astrocytes Harbor HIV DNA in the Brains of HIV-1-Infected Aviremic Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 110-119 (2019).
- Sopper, S., et al. The effect of simian immunodeficiency virus infection in vitro and in vivo on the cytokine production of isolated microglia and peripheral macrophages from rhesus monkey. Virology. 220 (2), 320-329 (1996).
- Llewellyn, G. N., Alvarez-Carbonell, D., Chateau, M., Karn, J., Cannon, P. M. HIV-1 infection of microglial cells in a reconstituted humanized mouse model and identification of compounds that selectively reverse HIV latency. Journal of NeuroVirology. 24 (2), 192-203 (2018).
