Summary
Descrevemos um protocolo para amostrar, preservar e seção de raízes intactas e o solo circundante da rizosfera de ambientes pantanosos usando arroz(Oryza sativa L.) como espécie modelo. Uma vez preservada, a amostra pode ser analisada utilizando técnicas de imagem elementar, como a fluorescência química de raios-X síncrotron (XRF).
Abstract
As raízes interagem extensivamente com seu ambiente de solo, mas visualizar tais interações entre raízes e a rizosfera circundante é um desafio. A química da rizosfera das plantas úmidas é particularmente desafiadora de capturar por causa de gradientes de oxigênio íngremes das raízes para o solo a granel. Aqui é descrito um protocolo que preserva efetivamente a estrutura radicular e a química da rizofera de plantas úmidas através do congelamento de slam e secagem congelante. O congelamento de slam, onde a amostra é congelada entre blocos de cobre pré-resfriados com nitrogênio líquido, minimiza danos radiculares e distorção amostral que pode ocorrer com o congelamento de flash, minimizando ainda as alterações de especiação química. Embora a distorção da amostra ainda seja possível, a capacidade de obter várias amostras rapidamente e com custo mínimo aumenta o potencial de obter amostras satisfatórias e otimiza o tempo de imagem. Os dados mostram que este método é bem sucedido na preservação de espécies reduzidas de arsênico em raízes de arroz e rizosferas associadas a placas de ferro. Este método pode ser adotado para estudos de relações entre plantas e solo em uma ampla variedade de ambientes pantanosos que abrangem a concentração que abrange desde o ciclismo de elementos até aplicações de fitoremediação.
Introduction
As raízes e suas rizosferas são dinâmicas, heterogêneas e criticamente importantes para entender como as plantas obtêm nutrientes minerais e contaminantes1,2,3. As raízes são o caminho primário pelo qual nutrientes (por exemplo, fósforo) e contaminantes (por exemplo, arsênico) se movem do solo para as plantas e, assim, entender esse processo tem implicações para quantidade e qualidade dos alimentos, funcionamento do ecossistema e fitromediação. No entanto, as raízes são dinâmicas no espaço e no tempo crescendo em resposta às necessidades de aquisição de nutrientes e muitas vezes variam em função, diâmetro e estrutura (por exemplo, raízes laterais, raízes aventurárias, cabelos radiculares)2. A heterogeneidade dos sistemas radiculares pode ser estudada em escalas espaciais, do celular ao nível do ecossistema e em escalas temporais, de hora em hora para decadal. Assim, a natureza dinâmica e heterogênea das raízes e seu solo circundante, ou rizosfera, coloca desafios para capturar a química da rizosfera ao longo do tempo. Apesar desse desafio, é imprescindível estudar raízes em seu ambiente de solo para caracterizar essa relação crítica entre plantas e solo.
A química da rizosfera das plantas úmidas é particularmente desafiadora de investigar por causa de gradientes de oxigênio íngremes que existem do solo a granel para as raízes, que mudam no espaço e no tempo. Como as raízes precisam de oxigênio para respirar, as plantas úmidas adaptaram-se às baixas condições de oxigênio dos solos pantanosos, criando o aerenchyma4,5. Aerenchyma são tecidos cortical ocos que se estendem de brotos até raízes, permitindo a difusão do ar através da planta para as raízes. No entanto, parte desse ar vaza para a rizosfera em partes menos suberizadas das raízes particularmente perto de junções laterais radiculares, pontas radiculares menos maduras e zonas de alongamento6,7,8,9. Essa perda de oxigênio radial cria uma zona oxidada na rizofera das plantas úmidas que afeta a rizosfera (bio-geo)química e é distinta do solo a granel reduzido10,11,12. Para entender o destino e o transporte de nutrientes e contaminantes em rizosferas e raízes úmidas, é fundamental preservar o solo a granel quimicamente reduzido, a rizosfera oxidada e raízes de plantas úmidas para análise. No entanto, como o solo a granel contém constituintes reduzidos do solo que são sensíveis ao oxigênio, os métodos de preservação das raízes e do solo devem preservar estruturas radiculares e minimizar as reações sensíveis ao oxigênio.
Existem métodos para fixar tecidos vegetais e preservar a ultraestrutura para imagem, mas esses métodos não podem ser aplicados para preservar quimicamente raízes que crescem em solo pantanoso. Para investigações onde apenas a distribuição elementar dentro das células vegetais é desejada, as plantas são tipicamente cultivadas hidroponicamente e as raízes podem ser facilmente removidas da solução, fixadas sob substituição de congelamento e congelamento de alta pressão e seccionadas para uma variedade de aplicações de imagem, incluindo espectrometria de massa de íons secundários de alta resolução (nanoSIMS), microscopia eletrônica e análise de fluorescência de raios-X síncrotrons (S-XRF)análise 13, 14,15. Para investigar a placa fe na parte externa das raízes úmidas, esses estudos hidropônicos devem induzir artificialmente a formação de placas fe na solução16, que não representa com precisão a heterogeneidade da distribuição e composição mineral da formação da placa fe e elementos associados no situ17,18,19,20. Existem métodos para preservar o solo pantanoso e microrganismos associados com congelamento21,mas é difícil obter raízes com essa técnica. Os métodos atuais para visualizar raízes crescendo no solo e sua química rizosférica consistem em dois tipos de medição primária: fluxos elementares e concentração elementar total (e especiação). O primeiro é tipicamente medido usando gradientes difusivos em filmes finos (DGT)22,23,24, em que o solo é colocado em rizoboxes para apoiar o crescimento da planta em um ambiente de laboratório e elementos labile no solo difusos através de um gel em uma camada de ligação. Esta camada de ligação pode então ser imageda para quantificar os elementos labil de interesse. Esta técnica pode ilustrar com sucesso as relações entre raízes e a rizosfera24,25,26,27, mas artefatos de limitação de raízes podem existir cultivando plantas em rizoboxes, e informações sobre o interior da raiz não são capturadas com DGT. Este último envolve a amostragem das raízes e da rizosfera, preservando a amostra e analisando diretamente a distribuição elementar em uma seção amostral. Para esta amostragem ambiental das raízes das plantas úmidas e sua rizosfera circundante, é necessário um manuseio cuidadoso de amostras para evitar artefatos da preparação da amostra.
Aqui é descrito um protocolo que preserva efetivamente estruturas radiculares e química da rizofera de plantas úmidas por meio do congelamento e congelamento da secagem. O congelamento de flash pode retardar drasticamente as transformações de solutos sensíveis ao oxigênio, mas pode danificar raízes e causar mobilização quando as amostras secam. No entanto, o congelamento de slam onde a amostra é congelada entre blocos de cobre pré-resfriados com nitrogênio líquido minimiza danos radiculares e distorção amostral28. As amostras preservadas são então incorporadas em uma resina epóxi que preserva como especiação20,29 e pode ser cortada e polida para imagens de raízes dentro de seu solo rizosfera. As amostras deste relatório foram analisadas por imagem de especiação química S-XRF após secção fina. No entanto, outras técnicas de imagem também poderiam ser usadas, incluindo espectrometria de massa de plasma acoplada indutivamente a laser (LA-ICP-MS), emissão de raios-X induzida por partículas (PIXE), espectrometria de massa de íons secundário (SIMS) e imagem de espectroscopia induzida por laser (LIBS).
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Protocol
1. Preparação de equipamentos de congelamento de slam
- Coloque dois blocos de cobre (~5 cm x 5 cm x 15 cm) horizontalmente dentro de um refrigerador limpo capaz de segurar nitrogênio líquido e despeje nitrogênio líquido suficiente para submergir os blocos. Uma vez que o borbulhante diminua, coloque dois espaçadores em cima de um bloco de cobre em cada extremidade.
NOTA: A altura do espaçador determina a altura da amostra a ser congelada; este exemplo usa um espaçador de 2 cm para criar cubos de aproximadamente 3 cm x 3 cm x 2 cm. O volume do nitrogênio líquido dependerá do tamanho do refrigerador. Este exemplo usa aproximadamente 1 L para aproximadamente 5 cubos em série.
ATENÇÃO: Use equipamentos de proteção individual adequados e ventilação, pois o nitrogênio líquido é um criogeno e um asfixiante. - Usando pinças e luvas criogênicas, levante-se o outro bloco de cobre em sua extremidade, para facilitar a recuperação quando a amostra estiver no lugar.
2. Coleta de amostras e slam-freezing
- Extrair a planta desejada e a rizosfera do solo molhado usando uma pá e garantir que o buraco cavado seja muito maior do que o volume de raiz desejado. Coloque o solo e plante em um recipiente e coloque-o em um banco.
NOTA: Todo o solo em vasos e a planta de um estudo de vaso também podem ser usados. - Determine a localização desejada do solo onde as raízes devem ser tomadas (ou seja, profundidade e proximidade com a filmagem). Corte o excesso de solo usando uma lâmina de aço, tomando cuidado para não perturbar o solo na área desejada. Quando a área desejada for atingida, corte um "cubo" raiz de aproximadamente 3 cm x 3 cm x 2 cm e coloque imediatamente o cubo entre os dois espaçadores no bloco de cobre horizontal. Usando luvas criogênicas, pegue o bloco de cobre vertical e coloque-o em cima dos espaçadores para congelar o cubo de rizosfera.
- Depois de borbulhar subsídios (~5 min), recupere o cubo de rizosfera congelado dos blocos de cobre e enrole dentro de um quadrado de folha de alumínio pré-rotulado. Marque a orientação do bloco na folha, se desejar. Coloque em um segundo recipiente de nitrogênio líquido até o armazenamento em um congelador de -80 °C.
- Repita conforme necessário para obter o número desejado de cubos radiculares do local de campo ou do experimento. Certifique-se de que ambos os blocos de cobre têm tempo para esfriar entre as amostras.
3. Congelar e incorporar cubos de rizosfera
- Prepare a secadora de congelamento de acordo com as instruções do fabricante. Tenha cuidado para garantir que tenha obtido a pressão e temperatura adequadas do vácuo antes de remover amostras do congelador de -80 °C.
- Quando o secador congelado estiver pronto para receber amostras, coloque um cubo de rizosfera congelado dentro de um tubo limpo e lavado com ácido de 50 mL e cubra livremente com um lenço descartável limpo. Segure o lenço com um elástico. Repita conforme necessário para garantir um cubo por tubo.
NOTA: Se a amostra for muito grande para um tubo, ela pode ser colocada diretamente no recipiente de secador congelado usando a folha de alumínio como porta-amostras. - Coloque tubos contendo amostras em recipientes de secador congelado e congele por vários dias. O tempo exato de secagem dependerá das propriedades do solo.
NOTA: Armazene amostras secas no secador congelado ou em um desiccador para evitar a reidratação. - Use uma lâmina de aço para cortar cubos de solo secos ao tamanho para que eles se encaixem na forma desejada (por exemplo, a forma de 25 mm de diâmetro é ideal para a maioria das aplicações). Rotule cada forma, coloque os cubos de solo nas formas e coloque as formas dentro de um dessecador de vácuo.
- Prepare o epóxi de acordo com as instruções do fabricante. Certifique-se de que o epóxi escolhido não esteja contaminado e não cause alterações de especiação dos elementos desejados 20,29,30.
- Use um conta-gotas para adicionar epóxi à forma de um lado do solo, até cobrir inteiramente a amostra. O solo escurecerá de cor enquanto o epóxi molha o solo.
NOTA: Adicione o epóxi lentamente para permitir que o ar no solo escape. - Uma vez preenchidos formulários com epóxi, feche o desiccador de vácuo e ligue o vácuo. Dependendo da quantidade de ar presa no solo, mais epóxi pode precisar ser adicionado aos formulários periodicamente. Verifique o nível de epóxi a cada 30-90 min para as primeiras 1-4 h e adicione epóxi conforme necessário.
- Remova a amostra do formulário uma vez que o epóxi tenha endurecido (~5 dias).
4. Cortar e seccionar os cubos da rizosfera
- Corte a amostra usando uma serra molhada de precisão de lâmina de diamante. Corte as amostras em diferentes locais se não forem obtidas raízes no corte anterior.
- Lixe manualmente as amostras cortadas com lixa progressivamente mais fina (por exemplo, 220, 500, 1000 e 1500 grãos) no lado cortado para ~30 s.
- Realizar imagens superficiais das amostras utilizando técnicas como LA-ICP-MS.
NOTA: Para preparar seções finas para S-XRF, envie as amostras para uma empresa capaz de preparar as seções finas (polimento lateral único ou duplo) ou siga os passos 4.4 - 4.6 conforme descrito abaixo. - Cole o lado da amostra desejado em um slide de quartzo usando super cola e deixe curar durante a noite.
- Usando uma máquina de secção fina, corte o solo em lâminas até 2 mm de espessura e, em seguida, triture até a espessura desejada (tipicamente 30 μm). A superfície da amostra pode ser polida se desejar.
- Realize imagens S-XRF das seções. Siga as etapas apropriadas na instalação síncrotron desejada e na linha de feixe para solicitar e utilizar o tempo de imagem.
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Representative Results
Este método permite a preservação de raízes e espécies químicas nas raízes e rizosfera das plantas úmidas e no solo a granel. Neste trabalho, o método foi utilizado para avaliar como especiação e co-localização com óxidos fe e mn e nutrientes vegetais na rizosfera do arroz(Oryza sativa L.). O arroz foi cultivado na Instalação RICE da Universidade de Delaware, onde 30 mesocosmos de arroz (2 m x 2 m, 49 plantas cada) são usados para cultivar arroz sob várias condições de manejo do solo e da água com o objetivo de reduzir a absorção de As e Cd em grãos de arroz. Este experimento forneceu 1470 plantas individuais das quais as rizosferas poderiam ser amostradas ao longo da estação de cultivo.
Dado um número suficiente de amostras, seções finas foram capazes de capturar uma variedade de morfologias radiculares. A Figura 1A mostra vários diâmetros radiculares presentes dentro da matriz do solo como seções transversais. No entanto, algumas seções de solo podem conter poucas, se houver, raízes. Neste trabalho, 63 blocos de solo foram processados e cortados uma vez na serra úmida para determinar qual subconjunto de amostras eram adequados para secção fina. Das 63 amostras, 14 não continham raízes, 31 continham 1-3 raízes e 18 continham mais de 3 raízes. Observe que as raízes podem estar presentes em diferentes níveis de qualidade. A Figura 1B mostra uma raiz bem preservada, uma raiz distorcida pelo processo de secagem congelante e uma raiz que foi puxada durante o processo de secção fina.
Seções finas de raiz foram analisadas usando S-XRF para mapear a localização de elementos de interesse. A Figura 2B mostra uma seção transversal raiz com uma raiz lateral na seção longitudinal. A Figura 2C mostra esta seção raiz analisada pela XRF com um enredo tricolor de Fe, Mn e As. O Fe está presente no solo e ao redor da raiz na placa fe, e a placa fe também é visível nas imagens de micrografo de luz. O manganês está presente exclusivamente no córtex da raiz lateral, mas também co-localiza com Fe em algumas áreas da placa Fe, aparecendo como uma tonalidade verde-azul. Arsênico estava principalmente presente na vasculatura da raiz lateral, fundindo-se à vasculatura da raiz primária.
A imagem de especiação química separou as várias espécies de interesse, tomando mapas XRF repetidos em múltiplas energias de feixe de incidentes e usando o encaixe de combinação linear para o espectro padrão como espectro XANES. Os mapas de especiação são mostrados na Figura 2D e mostram variabilidade na localização de As espécies. A Figura 2E mostra os mesmos dados de uma trama tricolor. A trama tricolor mostra arsenita e glutationa arsenita intimamente associada na vasculatura, enquanto o arssenato está localizado principalmente no exterior da raiz associada à placa fe.
Figura 1 - Seções finas de raiz de arroz mostrando uma variedade de desfechos metodológicos em um solo de loam de silty (barras de escala são 0,5 mm). A) Numerosas seções transversais de diâmetro radicular são evidentes (em caixas brancas). B) As raízes podem ser danificadas durante o processo. A raiz na caixa branca permaneceu intacta e circular, enquanto a raiz na caixa laranja foi comprimida durante o processo de secagem congelante. A caixa vermelha mostra onde uma raiz foi puxada durante o processo de secção fina. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 - Seção transversa de uma raiz de arroz com uma seção longitudinal de uma raiz lateral em um solo de loam de silty. A) Seção de solo mostrando várias seções transversais radiculares em caixas brancas. Setas brancas denotam seções longitudinais. Barra de escala é de 2 mm. B) Seção de solo mostrando raiz do canto superior esquerdo do painel A. Retângulo branco denota área imagem por XRF síncrotron. Barra de escala é de 0,5 mm. C) Imagem Tricolor XRF de arsênico (vermelho), ferro (verde) e manganês (azul). A escala máxima de As, Fe e Mn está em uma razão de 1:50:2.5. A barra de escala é de 100 μm. D) Mapas de especiação de arsênico XRF para glutationa de arsenita, arsenita e arsênico, onde cores mais quentes indicam maiores concentrações de As. Barra de escala é de 100 μm. E) Parcela tricolor de As espécies, onde a intensidade máxima é dimensionada para arsenita (vermelho) = arsenato (verde) = 0,5 arsenite glutathione (azul). A barra de escala é de 100 μm. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Este artigo descreve um protocolo para obter solo a granel preservado + rizosferas de raízes vegetais úmidas usando uma técnica de congelamento de slam que pode ser usada para mapeamento de imagens elementares e/ou especiação química.
Existem vários benefícios deste método em relação aos métodos existentes. Em primeiro lugar, este método permite a investigação simultânea das raízes e das rizoferas circundantes. Atualmente existem métodos para preservar e quimicamente as raízes de seu ambiente do solo, lavando o solo e preservando raízes31,32 ou cultivando plantas em ambientes artificiais (por exemplo, rizoboxes) e usando métodos DGT para examinar as interações raiz-solo24,33,34, mas sem a capacidade de observar a raiz em si. O método descrito aqui permite a investigação direta da raiz e do solo da rizosfera circundante in situ para observação das relações raiz-solo. Uma técnica semelhante tem sido usada para examinar em raízes de arroz situ e rizosfera circundante, mas com a mergulhação da amostra em nitrogênio líquido11,35,36 em vez de slam-congelamento descrito aqui. Quanto mais rápido os tecidos são congelados, menor a probabilidade de formar cristais de gelo37. O congelamento de slam entre blocos de cobre pré-resfriados esfria rapidamente a amostra e, portanto, minimiza a formação de cristais de gelo e danos subsequentes nos tecidos vegetais que podem ocorrer com o congelamento de flash usando nitrogênio líquido a temperaturas ambientais11,38. Usando o método descrito aqui, várias amostras podem ser retiradas da mesma planta, várias plantas de um campo e/ou do ambiente em um período relativamente curto de tempo. Uma vez obtidas, muitas amostras podem ser congeladas, embutidas em epóxi, e cortadas com uma serra molhada de lâmina de diamante com custo mínimo. Essas amostras podem então ser investigadas com um microscópio de luz para identificar amostras promissoras que podem ser diretamente imagens (por exemplo, LA-ICP-MS) ou processadas posteriormente para secção fina e imagens sXRF. Uma seção fina pode capturar múltiplas raízes de vários tamanhos no mesmo slide, o que ajuda a capturar a rizosfera heterogênea e maximizar o tempo de imagem no instrumento. Este método também pode ser usado para observar diretamente as relações entre o solo vegetal, como o sequestro em placas fe sem perturbar a rizosfera. Os métodos existentes para induzir a formação de placas fe em raízes úmidas como o arroz usando experimentos hidropônicos39,40,41 não conseguem capturar a heterogeneidade da placa fe em termos de cobertura radicular e composição mineral que ocorre em plantas cultivadas no solo11,18,20,42,43,44.
Para que o método seja bem sucedido, é fundamental seguir alguns passos fundamentais. Primeiro, certifique-se de que o local da amostra e a orientação selecionadas abordam a pergunta desejada. Em segundo lugar, use um epóxi livre de contaminação de elementos de traço e tenha sido mostrado para preservar a especiação química de Como elementos de interesse20,29,30. Terceiro, adicione epóxi lentamente e coloque a amostra em epóxi sob vácuo para facilitar a motação epóxi da amostra e remoção de gás preso. Seguindo essas etapas fornecerá uma amostra de alta qualidade de solo a granel, rizosfera e raízes que podem ser usadas para análise de imagens.
Várias limitações do método devem ser consideradas. Primeiro, secar a amostra congelada em um secador congelado pode causar deformação do solo, o que pode afetar as raízes. Isso provavelmente será particularmente desafiador em solos com alto teor de argila e, portanto, propensão ao colapso à medida que as argilas secam. Como exemplo, foi preparada uma amostra de rizosfera de arroz obtida a partir de uma argila estiça e a rachadura do solo é aparente, enquanto a raiz de arroz revestida de placa fe não é afetada(Figura 3).
Figura 3 - Seção fina de raiz de arroz de um solo de argila silty. Numerosas rachaduras no solo ocorreram durante a secagem congelante, mas essas rachaduras não distorceram a seção longitudinal da raiz lateral, que é representada pelo retângulo branco. A barra de escala é de 0,5 mm. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Os dados mostram que essa técnica pode obter com sucesso informações em escala de micron em um lombo de lodo de lodo de lodo(Figuras 2, 3), e é provável que a técnica possa ser bem sucedida em solos texturizados mais grosseiros; no entanto, solos com maior teor de argila podem representar desafios e devem ser investigados mais adiante. Segundo, as raízes podem ser retiradas do solo após a secção. Este desafio não é exclusivo do protocolo descrito neste artigo, mas deve ser considerado. Em terceiro lugar, as raízes podem não estar presentes em todos os cubos de solo, por isso muitas amostras precisam ser obtidas e cortadas para capturar a rizosfera da planta desejada. Em quarto lugar, o método de preservação requer nitrogênio líquido, o que pode representar desafios para estudos de campo remoto. Aqui, o protocolo foi usado com sucesso no campo, que estava a menos de 3 km de um nitrogênio líquido Dewar. No entanto, se o nitrogênio líquido não estiver disponível a uma curta unidade a partir de um local de campo remoto, existem várias opções para obter a amostra. Isso inclui o uso de outra fonte para resfriar os blocos de cobre ou escavar toda a planta e o solo circundante com um grande anel de PVC, colocando-o em material impermeável a gás e transportando para a fonte de nitrogênio líquido mais próxima para preservação. Para isso, é importante garantir que a mísia não seja cortada de suas raízes antes de obter a amostra da rizosfera. Se necessário, a amostra também pode ser colocada sob refrigeração e enviada durante a noite ao laboratório para preservação. Uma vez recebidas em laboratório, as seções podem então ser preservadas usando blocos de cobre refrigerados a nitrogênio líquido. Finalmente, mudanças de especiação são possíveis com qualquer método de preservação de solos e rizosferas úmidas. Para evitar isso, as amostras devem ser obtidas e congeladas rapidamente ou outras medidas tomadas acima para evitar a exposição ao oxigênio. As bordas das amostras congeladas podem então ser raspadas para evitar bordas que possam ter tido maior exposição ao oxigênio. A preservação de espécies reduzidas de arsênico nas amostras de raiz e rizosfera aqui (Figura 1D, E) e em trabalhos anteriores28 sugere que esta técnica de congelamento de slam é capaz de preservar espécies químicas sensíveis ao oxigênio se cuidadosamente realizadas.
Este método pode ser usado para abordar várias questões-chave na ciência da rizosfera. Estas incluem aplicações relacionadas ao estudo de interações de nutrientes e contaminantes na rizosfera que podem incluir interações de contaminantes e nutrientes com placas fe ou mn. O método permite o estudo da heterogeneidade temporal e espacial das relações entre plantas e solo e o exame de como as morfologias radiculares interagem com elementos da rizosfera in situ. Pode ser usado em aplicações relacionadas à segurança alimentar, como na compreensão da absorção de arsênico pelo arroz, dinâmica de nutrientes na rizosfera ou aplicações relacionadas à fitoremedação, como a absorção de metal (loid) em plantas pantanosas.
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Disclosures
Os autores não têm nada a revelar.
Acknowledgments
Os autores reconhecem uma concessão conjunta de sementes a Seyfferth e Tappero para apoiar a colaboração entre a Universidade de Delaware e o Laboratório Nacional brookhaven. Partes desta pesquisa utilizaram a linha de luz XFM (4-BM) da Fonte Nacional de Luz Síncrotron II, um Escritório de Recursos do Usuário do Departamento de Energia dos EUA (DOE) operado para o DoE Office of Science pelo Laboratório Nacional brookhaven sob o contrato nº. DE-SC0012704.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Copper blocks | McMaster Carr | 89275K42 | |
| Diamond blade | Buehler | 15 LC, 102 mm x 0.3 mm | operation speed: 225 rpm |
| Epoxy forms | Struers | 40300085 | FixiForm |
| Epoxy | Epotek | 301-2FL | |
| Superglue | Loctite | 404 | |
| Thin sectioning machine | Buehler | PetroThin | |
| Wet saw | Buehler | IsoMet 1000 |
References
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