Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

טכניקות טיפול להפחתת מתח בעכברים

Published: September 25, 2021 doi: 10.3791/62593
Automatic Translation
1, 1,2, 3, 4, 5, 1,2,3, 1,2
1Campbell Family Mental Health Research Institute of CAMH, 2Department of Psychiatry, University of Toronto, 3Department of Pharmacology and Toxicology, University of Toronto, 4Departamento de Investigación, Universidad Central de Queretaro, 5Centre National de la Recherche Scientifique, UMR 5287, Institut de Neurosciences Cognitives et Intégratives d'Aquitaine, Université de Bordeaux

Summary

מאמר זה מתאר טכניקת טיפול בעכברים, טכניקת הטיפול בתלת-ממד, המאפשרת טיפול שגרתי על ידי הפחתת התנהגויות דמויות חרדה ומציגה פרטים על שתי טכניקות קשורות קיימות (טיפול במנהרה וזנב).

Abstract

חיות מעבדה נתונות למניפולציות מרובות על ידי מדענים או ספקי טיפול בבעלי חיים. הלחץ זה גורם יכול להיות השפעות עמוקות על רווחת בעלי חיים והוא יכול גם להיות גורם מבלבל עבור משתנים ניסיוניים כגון צעדי חרדה. במהלך השנים פותחו טכניקות טיפול הממזערות את הלחץ הקשור לטיפול עם דגש מיוחד על חולדות, ותשומת לב מועטה לעכברים. עם זאת, הוכח כי עכברים יכולים להיות מורגלים מניפולציות באמצעות טכניקות טיפול. התרגלות עכברים לטיפול מפחיתה את הלחץ, מקלה על טיפול שגרתי, משפרת את רווחת בעלי החיים, מפחיתה את השתנות הנתונים ומשפרת את האמינות הניסיונית. למרות ההשפעות המועילות של הטיפול, הגישה לאיסוף זנב, שהיא מלחיצה במיוחד, עדיין נמצאת בשימוש נרחב. מאמר זה מספק תיאור מפורט והדגמה של טכניקה חדשה לטיפול בעכבר שנועדה למזער את הלחץ שחוותה החיה במהלך אינטראקציה אנושית. טכניקה ידנית זו מבוצעת במשך 3 ימים (טכניקה לטיפול בתלת-ממד) ומתמקדת ביכולתו של בעל החיים להרגיל את הנסיין. מחקר זה מראה גם את ההשפעה של טכניקות טיפול במנהרות שהוקמו בעבר (באמצעות מנהרת פוליקרבונט) וטכניקת איסוף הזנב. נחקרו במיוחד הם ההשפעות שלהם על התנהגויות דמויי חרדה, באמצעות בדיקות התנהגותיות (מבוך גבוה פלוס והאכלה מדוכאת חידוש), אינטראקציה מרצון עם ניסויים ומדידה פיזיולוגית (רמות קורטיקוסטרון). טכניקת הטיפול בתלת-ממד וטכניקת הטיפול במנהרות הפחיתו פנוטיפים דמויי חרדה. בניסוי הראשון, באמצעות עכברים זכרים בני 6 חודשים, טכניקת הטיפול בתלת-ממד שיפרה באופן משמעותי את אינטראקציית הנסיין. בניסוי השני, באמצעות נקבה בת חודשיים וחצי, היא הפחיתה את רמות הקורטיקוסטרון. ככזה, טיפול בתלת-ממד הוא גישה שימושית בתרחישים שבהם נדרשת אינטראקציה עם הנסיין או מועדפת, או כאשר טיפול במנהרות עשוי שלא להיות אפשרי במהלך הניסוי.

Introduction

עכברים וחולדות הם נכסים חיוניים למחקרים פרה-קליניים1,2 למטרות מרובות, כולל אנדוקרינלית, פיזיולוגית, מחקרים פרמקולוגיים או התנהגותיים2. מהמספר ההולך וגדל של מחקרים הקשורים בבעלי חיים, עלה כי משתנים סביבתיים בלתי מבוקרים כולל אינטראקציה אנושית משפיעים על תוצאות שונות במחקר ביו-רפואי3,4,5. זה אחראי על שונות משמעותית שנצפו על פני ניסויים ומעבדות מחקר4,5, מהווה אזהרה גדולה במחקר בבעלי חיים.

גישות שונות יושמו במטרה להגביל את ההשפעה של גורמי לחץ סביבתיים והפחתת התגובה לאינטראקציה האנושית. לדוגמה, כדי להגביל את ההשפעה של גורמי לחץ סביבתיים, סטנדרטיזציה של תנאי הדיור ומערכות דיור אוטומטיות6,7 יושמו במעבדות. לגבי אינטראקציה עם בני אדם, גישות נפוצות לטיפול והובלת בעלי חיים לא התייחסו כלל לאי נוחות ומתח של בעלי חיים. לדוגמה, איסוף בעלי חיים בזנבם או באמצעות מלקחיים8 מגביר את החרדה הבסיסית9,10,11, מפחית את המחקר9,12 ותורם רבות לשונות בין אינדיבידואלית בתוך ומרחב מחקרים13,14. כתוצאה מכך, פותחו גישות אחרות, כגון טכניקת הטיפול בכוס, החלה על עכברים וחולדות. בגישה זו, בעלי החיים מכוסים מהכלוב שלהם, ומוחזקים על ידי הנסיינים עם ידיהם ויוצרים9,10,11. חלופה שימושית נוספת לטיפול בזנב כוללת שימוש במנהרת פוליקרבונט להעברת עכברים9,10,15. גישה זו מבטלת אינטראקציה ישירה בין העכבר לבין הנסיין. הן גישות הגביע והן גישות המנהרה הראו יעילות בהפחתת התנהגויות דמויי חרדה ופחד מהנסיין שניתן להגזים על ידי טכניקות טיפול מרתיעות, כגון איסוף זנב / טיפול בזנב9,10.

לכן, הגדלת הראיות מדגימה את התועלת של טיפול נכון בעכבר להפחתת השונות בין אנשים9,11, ושיפור רווחת בעלי החיים10. עם זאת, הטכניקות שהוזכרו לעיל עדיין מתמודדות עם מגבלות. טכניקת הטיפול בגביע יושמה עם לוחות זמנים הנעים בין 10 ימים (10 מפגשים על פני שבועיים16) עד 15 שבועות17, וזה כמות ניכרת של זמן עבור צוות המתקן והנסיינים. בנוסף, האפקטיביות של טיפול בכוס משתנה על ידיזן 9 וטיפול כוסות קונבנציונאלי בידיים פתוחות עלול להוביל עכברים נאיביים או זנים קופצים במיוחד לקפוץ מהיד9,18. טיפול במנהרות מביא לתוצאות עקביות יותר ובדרך כלל מהירות יותר בעדינות19. מנהרות משמשות גם כהעשרת כלוב ביתי. הם עוזרים לבעלי חיים להרגל להתמודד במהירות ומספקים את היתרונות הנוספים של העשרה. עם זאת, לטיפול במנהרות יש מגבלות בעת העברת בעלי חיים בין מכשירים. מעניין, הרסט ומערב9, והנדרסון ואח'20 הוכיח כי באמצעות טיפול ידני עדין וקצר כדי להעביר בעלי חיים מהמנהרה למנגנון אינו משפיע על הפנוטיפ שלהם.

כדי לספק חלופה לשיטות קיימות, עם הרגל בר השגה בפרק זמן קצר, מאמר זה מתאר טכניקה חדשנית המתרחבת על טכניקת הטיפול בגביע, ולכן אינה דורשת ציוד מסוים. גישה זו משתמשת באבני דרך כדי לאמוד את רמת הנוחות שיש לעכברים בתהליך הטיפול. הוא מראה יעילות בהפחתת תגובתיות העכבר ומתח (ברמות ההתנהגותיות וההורמונליות), מקל על טיפול שגרתי ותורם להפחתת השונות בין בעלי החיים. פרטים על טכניקה זו מסופקים כאן, ויעילותה בהפחתת התנהגויות דמויות חרדה, שיפור האינטראקציה עם הנסיינים והגבלת שחרור הורמון הלחץ ההיקפי (קורטיקוסטרון) מוצגים בשני מחקרים נפרדים (עכברים זכרים ונקביים), בהשוואה לטיפול במנהרות (שליטה חיובית) וטכניקות טיפול בזנב (שליטה שלילית).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

נהלים הנוגעים לנושאים בעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים CAMH ונערך בהתאם להנחיות המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים.

הערה: שיטת הטיפול המתוארת בזאת יכולה לשמש בזני עכבר שונים, כולל קווים לא מהונדסים (C57/BL6, BalbC, CD1, SV129 וכו ') וקווים מהונדסים. זה יכול לשמש גם עם עכברים צעירים או זקנים, וציין כי צעירים (4-6 שבועות) עכברים נוטים להיות קצת יותר פעילים מאשר עכברים מבוגרים או זקנים, במיוחד ביום 1.

1. הכנה ניסיונית

  1. לפני תחילת הלימודים, לפי הנחיות ARRIVE21, הקצה עכברים באופן אקראי לכל קבוצת טיפול (טיפול בתלת-ממד, טיפול במנהרות או טיפול בזנב).
  2. זהה את החדר לביצוע הטיפול. ניתן לבצע זאת בחדר הדיור, או בחדר נפרד. אם הטיפול מתבצע בחדר נפרד, המחייב את בעלי החיים להיות מועברים על עגלה נעה, לאפשר לבעלי החיים להרגיל לחדר החדש במשך 20-30 דקות לפני תחילת פרוטוקול הטיפול.
  3. עבור בעלי חיים ששוכנו בקבוצה, השתמש בכלוב זמני כדי לשכן עכברים לאחר הטיפול, לפני שארגן מחדש את כולם בכלוב הביתי הראשוני שלהם. זה מפחית את הקרבות הפוטנציאליים בין בעלי חיים לפני הטיפול (במיוחד אצל זכרים).
  4. עבודה על דלפק (רצוי משטח עבודה מנוקה) או בארון בטיחות ביולוגית, כאשר כלוב הדיור הרחק מהחיה מטופל. הקרבה לכלוב הדיור מגבירה את הסיכון לקפיצה. אם בעלי חיים הם קבוצה שוכנות, קפיצה של העכבר מטופל לתוך הכלוב הביתי עלול לגרום מתח לבני כלוב.
    הערה: עבודה בארון בטיחות ביולוגי מגבילה את הסיכון לעכברים לקפוץ על הרצפה, וניתן לדרוש זאת במתקנים מסוימים. טכניקה זו יכולה לשמש בארון בטיחות ביולוגית, הקפדה תמיד לבצע את כל השלבים בתוך ארון הבטיחות הביולוגית, והימנעות עכברים הליכה על זרועות המטפל.

2. יום 1: 5 דקות לעכבר

  1. פתחו בעדינות את הכלוב והניחו את המכסה בצד, הסירו חומרי קינון והעשרה אחרת כגון גלגלי ריצה או מקלטים.
  2. הציגו יד פתוחה בכפפות לכלוב הביתי, והניחו את היד באיטיות לאורך צד אחד של קיר הכלוב (הקיר הקרוב ביותר למפעיל, איור 1A).
    1. אל תנסה מיד להרים את העכבר.
  3. הישארו ללא תנועה ואפשרו לחיה להרגיל לנוכחות היד בכלוב במשך כ -30.
  4. נסה להרים את העכבר בכף היד (כלומר, להימנע להרים את החיה בזנבה).
    1. אם העכבר לא נאסף בקלות לאחר 3 ניסיונות, הנחה את העכבר לפינה וכוס בשתי הידיים.
    2. הזז בעדינות את הידיים מכוסות לכיוון העכבר כדי לנסות להרים אותו.
    3. אם לא מצליח לאחר מקסימום של 3 ניסיונות בשתי הידיים, הרם את העכבר בעדינות על ידי בסיס הזנב שלו, והעביר אותו לאמה או יד שטוחה.
  5. עם העכבר ביד, לשמור על היד שטוחה ופתוחה ככל האפשר.
    הערה: פעולה זו מספקת פלטפורמה שטוחה לעכבר לצעוד עליו, ומגבילה את הסיכון לעקיצות.
  6. מחזיקים את היד פתוחה ושטוחה עם כף יד למעלה, מניחים את היד השנייה צמודה ליד שמחזיקה את העכבר ומאפשרים לעכבר לנוע בחופשיות מיד ליד ללא כל מעצור(איור 1B).
  7. תן לעכבר לחקור ולנוע בין הידיים במשך דקה אחת.
    1. בשלב זה עכברים עשויים לנסות לקפוץ משם. מקם את הידיים כך שאם העכבר קופץ, הוא ינחת על משטח ולא על הרצפה.
    2. אם עכבר נראה כאילו הוא מתכונן לקפוץ (נע לכיוון קצה היד וגידול על הרגליים האחוריות), לאט למקם את היד השנייה מולו ולנסות להנחות אותו ללכת על היד הזאת. הימנע תנועות פתאומיות כפי שהוא מגביר את הסיכון שלהם לקפוץ.
    3. אם עכבר אכן קופץ, נסה להרים אותו ולהימנע מטיפול בזנב ולחדש את הפעלת הטיפול. אם העכבר נשאר על הרצפה או מחוץ לידיים במשך יותר מ -10 s, הוסף זמן נוסף לפגישת הטיפול כדי לפצות על כל פעם שהעכבר היה מחוץ לידיים.
    4. תציין את הקפיצה. המספר הכולל של קפיצות יכול לשמש כדי להעריך שונות פוטנציאלית בין בעלי חיים.
  8. לאחר דקה אחת של טיפול בידיים שטוחות, הרפה את כף היד, ועט העכבר ביד, לפני גלגול עדין של העכבר בין הידיים(איור 1C).
    1. כדי "לגלגל", למקם את העכבר בכף היד, על יד שטוחה, בניצב לאצבעות.
    2. סגור לאט את היד, מניח את האצבעות על גב העכבר.
    3. הנח את היד החופשית ישירות מתחת ליד מחזיק את העכבר.
    4. סובב/סובב את היד באיטיות עם העכבר כדי להעביר בעדינות את העכבר ליד השנייה (180° להעיף).
    5. חזור על זה הלוך ושוב בין הידיים.
  9. לסירוגין מגלגול עדין בין ידיים וחקירה חופשית על ידיים פתוחות במשך 60 s, לסירוגין בין טכניקות על כל 20 s.
  10. בצע "בדיקת מחסה"(איור 1D).
    1. תן לעכבר לזוז לקצה היד ואז לאחד את 2 הידיים.
    2. לאט מאוד, אותם כך העכבר מתאים בתוך מקלט שנוצר על ידי הידיים. השאר פתח כדי שהעכבר יוכל לברוח במידת הצורך.
    3. כוון לשמור את העכבר במקלט במשך 5-10 s, ללא כל איפוק.
    4. לסירוגין בין מבחן המקלט, להתגלגל בין הידיים וחקירה חופשית של ידיים פתוחות עוד 60 s, להיות בטוח לבצע את שלב המקלט 3 פעמים או יותר.
  11. בכל ההליכים המתוארים ב 2.10, לא למהר את התהליך. אם העכבר נראה לחוץ (כלומר, מהוסס לברוח, קופץ מהידיים, הימנעות ממגע עם הידיים וכו ') על ידי להיות מרותק בתוך הידיים, להמשיך עם גלגול בין הידיים וחקירה חופשית במשך 20 s, ולאחר מכן לנסות שוב.
  12. אבן דרך: בצע לפחות 1 מבחן מחסה מוצלח של 10 s להשלמת יום 1.
    1. שקול מבחן מחסה מוצלח כאשר העכבר נשאר בידיים. אם העכבר מוציא את ראשו וחוזר למקלט, הוא עדיין מבחן מוצלח. אם החיה יוצאת לחלוטין מהמקלט, זה כישלון.
  13. אפשר חקירה חופשית בידיים במשך 30 s.
  14. החלף בעדינות את העכבר בכלוב שלו. אם הקבוצה שוכנת, הנח את העכבר בכלוב הזמני עד שכל חברי הכלוב יטופלו. החזר את העכברים לכלוב המקורי שלהם על ידי הרמתם בכף היד. אין להשתמש באיסוף זנב.
  15. נקה את הספסל העליון של צואה פוטנציאלית ושתן עם 70% אתנול.
  16. יש לשטוף את הכפפות ביסודיות עם 70% אתנול (או תמיסת ניקוי מתאימה) או להחליף כפפות לפני הטיפול בעכבר הבא (ניתן לשמור את אותן כפפות עבור בני זוג בכלוב).
    הערה: מומלץ לבצע את הטיפול עם מספר סביר של בעלי חיים כדי למנוע עייפות מהמטפל. טיפול ב-24 עכברים אורך כ-2 שעות ומומלץ לא לחרוג מ-24 עכברים לכל מטפל. אם יש לטפל בבעלי חיים נוספים, מומלץ שיהיו להם מטפלים מרובים, או לפצל את הליכי הטיפול לקבוצות משנה, במשך מספר ימים.

3. יום 2: 3 עד 5 דקות לעכבר

  1. נסה להרים את העכבר בכף היד. בשלב זה, זה צריך להיות כבר ריאלי ועכברים לא צריכים לקפוץ מהיד.
  2. התחל עם כף יד פתוחה כמו ביום 1, ומאפשר לעכבר לחקור בחופשיות במשך 20s.
  3. לאחר מכן, לגלגל את העכבר בין הידיים כמה פעמים (4-5 פעמים).
  4. בצע את "מבחן מחסה" עבור 5 s.
  5. חזור על מבחן המקלט מספר פעמים (~ 5-6) על פני תקופה של 2 עד 3 דקות.
  6. במהלך אותה תקופה של 2 עד 3 דקות, לסירוגין עם רול בין הידיים וחקירה חופשית של ידיים פתוחות צעד מהיום 1 כדי לשפר את ההרגלה.
    1. גע בעכבר בראשו ובגבו(איור 1E),5-6 פעמים. סימן להרגלה הוא כאשר העכבר מאפשר לך לגעת בו מבלי לנסות לברוח.
    2. בצע "דחיפה באף": נסה לגעת חוטם של העכבר, 2 עד 3 פעמים (איור 1F).
      1. אם העכבר מנסה לנשוך או מראה סימנים ברורים של מתח על נגע, לא מיד לנסות את האף לתקוע שוב. במקום זאת, לסירוגין עם חקר יד שטוחה לגלגל. "הרגלה" משתקפת על ידי החיה לא בורחת או מפנה את ראשה במקרים של מגע אנושי.
  7. בכל ההליכים המתוארים 3.4-3.6, לא למהר את התהליך. אם העכבר נראה לחוץ על ידי להיות מרותק בתוך הידיים או לא רוצה לגעת, להמשיך עם גלגול בין הידיים במשך 20-30 s ולאחר מכן לנסות שוב.
  8. אבני דרך: בצע לפחות 1 דחיפה מוצלחת באף עבור 2-3 s להשלמת יום 2.
  9. עצור מושב זה לאחר כ 3 דקות של טיפול אם החיה מגיבה היטב "מקלט", "ליטוף ראש", "דחיפה באף", ואם העכבר נראה מוכן לחקור את הידיים ללא סימני לחץ.
  10. אם העכבר ממשיך להפגין סימני לחץ או אינו מגיב היטב לבדיקת "מבחן מחסה" או "דחיפה באף", המשך את הפגישה עד שתגיע ל -5 דקות כמו ביום 1.
  11. החלף את העכבר בכלוב שלו, לנקות את הספסל העליון וכפפות כמו ביום 1.

4. יום 3: כ-3 דקות לעכבר

  1. ביום השלישי, המשיכו באותם שלבים כמו ביום 2, למשך 2 עד 3 דקות.
    1. הרם את העכבר בכף היד.
    2. העברה וגלגל של העכבר בין הידיים
    3. בצע בדיקת מחסה.
    4. נסה ללטף את העכבר בגב ובראש.
  2. לסירוגין בין שלבים אלה על פני כ 1 עד 2 דקות.
  3. המשך את ההליך עד שהעכבר רגוע מספיק כדי לשבת בכף היד מבלי לנסות לברוח.
  4. לפני סוף היום השלישי, חזור על בדיקת המקלט ובדיקת דחיפה באף כמבחן להרגלה.
    1. אם ניתן להשלים את שתי הבדיקות בניסיון הראשון שלהן, תהליך ההרגלה הושלם. המשך לטפל בעדינות בעכבר במשך 30 עד דקה.
    2. אם העכבר עמיד בתחילה בפני כל אחת מהבדיקות, חזור על שלבים 4.1-4.3 עבור 20-30 s לפני חיבור מחדש של חבטת האף ובדיקת מחסה.
    3. אם העכבר נשאר עמיד לבדיקות אלה לאחר 3 דקות, היום השלישי עשוי לחזור על עצמו.
  5. אבני דרך: בצע לפחות 2 בדיקות מחסה מוצלחות של 10 s כל אחת, ו-2 בדיקות מוצלחות של דחיפה לאף להשלמת היום השלישי, והשלמת כל הליך הטיפול בתלת-ממד.
  6. החזירו את העכבר לכלוב שלו, נקו את הספסל והכפפות.

5. גישה אופציונלית לבעלי חיים להיות נתון לאיפוק להזרקה או gavage

הערה: ביום 3, אם החיה תהיה מרוסנת למטרות ניסיוניות (gavage אוראלי, הזרקה תוך-צפקית, וכו '), העכברים יכולים להיות כפופים לבדיקת צביטת הצוואר.

  1. תאפינו את העורף בין האגודל לאפרון(איור 1G).
  2. הרם את העכבר 3-5 ס"מ מעל היד עבור 2-3 s.
    הערה: זוהי בדרך כלל עמדה לא טבעית לעכברים בוגרים, ואם העכברים נשארים ליד אי תנועה, הם רגילים היטב לטיפול ויהיה קל לרסן למטרות ניסיוניות.
  3. הנח את העכבר בחזרה ביד השטוחה, או אם העכבר מגיב לצביטת הצוואר, שקול להניח אותו על שרוול הנסיין, מכסה הכלוב או משטח העבודה
    הערה: אם אתה עובד בארון בטיחות ביולוגית, אל תניח את העכבר על השרוול או שהוא יכול לעלות ולצאת מארון הבטיחות הביולוגית. מעדיף להניח את העכבר על השיש בתוך ארון הבטיחות הביולוגית.
  4. השאירו את העכבר כדי לחקור בחופשיות את ידו של הנסיין במשך דקה אחת.

6. גישה אופציונלית לימים נוספים של טיפול

  1. במקרה של קו עכבר לחוץ מאוד, להוסיף ימים נוספים כדי להקטין את התגובה ואת רמת הלחץ של בעלי החיים, באמצעות השיטות המתוארות ביום 2/3.
    הערה: גורמים רבים יכולים להשפיע על הלחץ הבסיסי של בעלי החיים כולל מתח, נוכחות של שינוי מהונדס, גיל, מין ותנאי דיור. אם גורמים אלה אינם עקביים בין קבוצות כגון בעלי חיים בגיל שנבדקו נגד פקדים צעירים או בעלי חיים מהונדסים הנבדקים נגד פקדי סוג בר, מומלץ כי אותו מספר של ימי מגורים משמשים עבור כל קבוצה.

7. טיפול במנהרות

הערה: טכניקה זו חלה רק על העכברים המטופלים במנהרה. המנהרות הן צינורות פוליקרבונט באורך של כ-13 ס"מ ובקוטר של 5 ס"מ.

  1. הנח את המנהרה בכלוב של העכבר.
  2. השאר את המנהרה בכלוב במשך 7 ימים לפני הטיפול.
  3. פתחו את הכלוב והניחו את המכסה בצד.
  4. להנחות בעדינות את העכבר לתוך מנהרת פוליקרבונט (כבר בכלוב).
  5. הרם את המנהרה מהכלוב, אופקית. במידת הצורך לכסות באופן רופף את קצות המנהרה כדי למנוע את החיה לקפוץ / ליפול מהמנהרה, פוטנציאל נופל בחזרה בכלוב שלה או על הרצפה.
  6. תזיז את החיה במנהרה הרחק מהכלוב הביתי ותרחיק אותה מכל משטח במשך 30 מעלות.
  7. הנח את המנהרה בחזרה בכלוב הביתי, ומאפשר לעכבר לצאת מהצינור.
  8. המתן 60 s ולאחר מכן חזור על שלבים 7.4-7.7 פעם אחת.
  9. יש לשטוף את הכפפות ביסודיות עם 70% אתנול או להחליף כפפות לפני ההרגלה של העכבר הבא.
  10. חזור על הליך זה במשך 10 ימים רצופים.

8. טיפול בזנב

הערה: טכניקה זו חלה רק על העכברים עם ידי זנב. הוא משמש להעברת עכברים מהכלוב שלהם למנגנון, ולהיפך.

  1. פתחו את הכלוב והניחו את המכסה בצד.
  2. תפוס את העכברים בבסיס הזנב בין האגודל לאבות.
  3. תרים את העכבר מהכלוב.
  4. ב 2-3 s, להעביר את העכבר לזרוע הנגדית של הנסיין תוך שמירה על אחיזה בזנב כדי למנוע את העכבר מתנדנד.
  5. כאשר נדרש טיפול בזנב ביישום ניסוי זה (למשל, לפני בדיקת דם לבדיקות קורטיזול) בעלי חיים מועברים לאמה של הנסיין על ידי טיפול בזנב ומוחזקים במשך 15 s לפני שהם מוחזרים לכלוב שלהם.

9. מבוך מוגבה פלוס

  1. הגדרת חדר
    1. הניחו את המבוך באמצע החדר, תחת מצלמה דיגיטלית המצוידת בכרטיס זיכרון.
    2. הגדר את אור החדר ב ~ 60 Lux באמצעות 2 מנורות עומדות להציב מאחורי המבוך.
    3. כבה כל תאורה תקורה כדי למנוע אור ישיר על המבוך שיוצר השתקפות ומשבש את זיהוי בעלי החיים במבוך.
    4. לאחר כל הציוד מוגדר, להעביר את החיות לחדר ולתת להם להתאקלם להגדרות האור והסביבה החדשה במשך 30 דקות.
  2. בדיקות
    1. נקה את המבוך עם 70% אתנול כדי למנוע ריחות מאבק או מן החיה שנבדקה בעבר.
    2. תפעיל את המצלמה.
    3. השתמש בחתיכת נייר עם מזהה החיה כדי להקליט את תעודת הזהות בסרטון, לפני הצבת החיה במבוך (זה יאפשר את הזיהוי הנכון של איזה עכבר מצולם בכל סרטון).
    4. השתמש בטכניקת הטיפול המתאימה לכל בעל חיים כדי להעביר אותו למבוך.
    5. הנח את העכבר על הרציף המרכזי, מול זרוע פתוחה.
    6. אפשר לעכבר לחקור את המנגנון במשך 10 דקות, ללא הפרעה.
    7. אחרי 10 דקות, לעצור את המצלמה.
    8. לאחזר את העכבר מהמבוך ולהחזיר אותו לכלוב שלה.
    9. צואה נקייה ושתן מהמבוך עם 70% אתנול.
    10. לאחר השלמת הבדיקה עם כל העכברים, העבר קטעי וידאו מכרטיס הזיכרון למחשב למעקב אחר וידאו.
    11. באמצעות תוכנת מעקב אוטומטית אחר בעלי חיים, עקוב אחר מספר הכניסות לזרועות הפתוחות והסגורות, ואת הזמן שהוקדש בזרועות פתוחות או סגורות (כאן Ethovision XT 14).

10. אינטראקציית נסיון (נגזר הרסט ומערב9)

  1. הגדרת חדר
    1. הנח שולחן באמצע חדר הבדיקות תחת מצלמה דיגיטלית המצוידת בכרטיס זיכרון.
    2. הגדירו את האור ב-50-70 Lux עם 4 נורות שהונחו בפינת החדר הפונה עד התקרה. כבה תאורה תקורה כדי למנוע אור ישיר על המבוך שיוצר השתקפות ולשבש את זיהוי בעלי החיים בזירה.
    3. תביאו את החיות לחדר.
    4. תן להם להתאקלם בחדר במשך 30 דקות.
  2. ניסוי
    1. הנח את כלוב הבית מתחת למצלמה הדיגיטלית.
    2. הסר את המכסה.
    3. הסר חומר קינון והעשרה אחרת שעלולה להפריע למעקב אחר בעלי חיים.
    4. תפעיל את המצלמה.
    5. השתמש בכרטיס הכלוב עם תעודת הזהות של החיה כדי לזהות את החיה בסרטון.
    6. מניחים יד בכלוב הביתי לאורך קיר הכלוב בצד ימין הקדמי.
      1. ודא שראש המטפל אינו חוסם את המצלמה כדי לצלם את העכבר.
    7. התחל שעון שעון.
    8. שמור את היד ללא תנועה במשך 2 דקות, ולתת לעכבר לחקור את היד.
    9. הסר את היד מהכלוב במשך 15s.
    10. נסה להרים את העכבר באמצעות ידיים מכוסות ולתעד אם העכבר בורח.
    11. חזור על הצעד האחרון עד חמש פעמים, כל 5 שניות, או עד שהעכבר מרשה לעצמו להיות הרים.
    12. הקלט את מספר הניסיונות הדרושים כדי להרים את העכבר.
    13. מחזירים חומר קינון והעשרה לכלוב.
    14. יש לנקות כפפות עם 70% אתנול או להחליף כפפות לפני שתמשיך לחיה הבאה.
    15. לאחר הבדיקה, העבר סרטוני וידאו מכרטיס הזיכרון למחשב.
    16. באמצעות תוכנת מעקב וידאו אוטומטית, לחלק את הכלוב לארבעה רבעים שווים ולתעד את הזמן בילה על ידי העכבר בכל רבע (כאן, Ethovision XT 14).

11. האכלה מודחקת חידוש

  1. מחסור במזון
    1. 3 ימים לפני הבדיקה, לבצע שינוי כלוב מלא, ובית יחיד בעלי החיים (דיור יחיד עדיף לבצע את בדיקות כלוב הבית).
      הערה: מתן מצעים טריים מסיר אבק פוטנציאלי או חתיכות קטנות של מזון המצטבר במצעים מאז שינוי הכלוב האחרון.
    2. יום לפני הבדיקות, לשקול את כל בעלי החיים סביב 18:00.
    3. הסר את כל המזון מן הופר מזון, ולוודא כי אין חתיכות של מזון בכלוב או במצעים.
  2. הגדרת חדר
    1. הנח את תא NSF על שולחן.
    2. מלאו את התא בשכבה דקה של מצעים תירס (או מצעים אחרים השונים ממצעים המשמשים בכלוב הביתי של בעלי החיים).
    3. הגדר את האור ב 70 Lux עם 4 נורות להציב בפינת השולחן שבו התא עומד, פונה עד התקרה. כבה את האורות התקורה כדי לשמור על תאורת חדר נמוכה.
    4. מניחים גלולה אחת של צ'או סטנדרטי המשמש במתקן, בצד התא מול הנסיין (≈10 ס"מ מהקיר).
  3. בדיקות
    1. בבוקר לאחר מחסור במזון, הביאו את בעלי החיים לחדר 30 דקות לפני הבדיקות כדי לאפשר להם להתאקלם להגדרות האור ולסביבה החדשה.
    2. שקול את כל בעלי החיים על מנת למדוד את הירידה במשקל שלהם בהתבסס על המשקל שנמדד יום קודם לכן. בעלי חיים צריכים לאבד 8-12% בן לילה כדי להיות מסוגל לבצע את המשימה כראוי.
    3. מיין את בעלי החיים לירידה במשקל, ומסך אותם החל מהעכבר שאיבד הכי הרבה לעכבר שאיבד את המשקל הנמוך ביותר.
    4. ודא כי התא מלא מצעים עם גלולה אחת.
    5. מניחים את החיה בצד השני של החדר, הרחק מכדור המזון.
    6. הפעל את שעון התזמן באופן מיידי.
    7. תן לעכבר לחקור את התא עד 12 דקות.
    8. למדוד את ההשהיה להתקרב להאכיל (בעלי חיים חייב לנשוך ולאכול) על גלולה המזון.
      1. קח את זה להיות גישה כאשר החיה מתקרבת לכדור, מריח אותו ולא לנשוך.
      2. הגדר נשיכה כמו כאשר החיה מתחילה לצרוך את הכדור.
    9. הקלט את ההשהיה כדי להתקרב ולהאכיל את הכדור בשניות.
    10. לאחר שהעכבר ניזון מכדור המזון, הסר את העכבר מהתא.
    11. להשליך את המצעים אבל לשמור את הכדור שישמש לבדיקת כונן תיאבון בכלוב הבית העכבר.
    12. אפס את התא עבור החיה הבאה ולהמשיך עם החיה הבאה.
    13. 15 דקות לאחר השלמת הבדיקה בחדר, זרוק את הכדור המשמש במהלך הבדיקה, בתוך הכלוב הביתי של העכבר, על הקיר בחלק הקדמי של הכלוב.
    14. למדוד את ההשהיה כדי להאכיל על הכדור כאשר הכדור הוא בכלוב הבית. זהו מדד לכונן תיאבון.
      1. עדיף להסיר את חומר הקינון כדי להבטיח שהעכבר יראה את הכדור נופל בכלוב שלו.

12. איסוף סרום ומדידת קורטיקוסטרון

  1. לטפל בבעלי חיים במשך 1 דקות באמצעות הטכניקה שהוקצתה, 15 דקות לפני איסוף הדם (זה יכול להיעשות עם קבוצה שוכנים או בעלי חיים בודדים, תוך התחשבות בסיכון לקרבות בעת ארגון מחדש של עכברים).
    1. עבור עכברים מטופלים במנהרה, להנחות אותם למנהרה, להרים את המנהרה מהכלוב במשך 1 דקות, ולהחליף את העכבר בכלוב שלה.
    2. לעכברים עם זנב, תפוס את בסיס הזנב של העכבר והסר את העכבר מהכלוב שלו. העבר את העכבר לשרוול הנסיינים למשך דקה אחת, והחזר את העכבר לכלוב שלו על ידי טיפול בזנב.
    3. עבור עכברים עם ידית תלת-ממדית, השתמש בידיים מכוסות כדי להסיר את העכבר מהכלוב שלו. החזק את העכבר בידיים מכוסות במשך 1 דקות, ולהחזיר אותו לכלוב שלה.
  2. 15 דקות לאחר הטיפול, להמשיך עם איסוף דם מן הווריד submandibular22.
  3. קשקוש בחוזקה את העכבר כך שראש העכבר משותק היטב.
  4. אתר את אתר הניקור.
    1. יש גומה קטנה ללא שיער לאורך הלסת של הפנים שיכול לשמש כציון דרך כדי לאתר את אתר הדקירה. ציור קו בין בסיס הלסת לבין גומה זו אתר הדקירה נמצא מאחורי גומה זו לכיוון האוזן על ידי בערך 5 מ"מ, ממש מאחורי הציר של הלסת.
  5. החזק מחט 23 G נקי בניצב לאתר הדקירה והשתמש בתנועת פנסים מהירה. קצה המחט צריך לחדור לעומק בין 1-2 מ"מ, הדם יזרום מיד ברגע הווריד מנוקב.
  6. לאסוף ~ 150 μL של דם בצינורות איסוף מצופה EDTA ולאחסן על קרח.
  7. החל לחץ קל עם כרית גזה סטרילית לאתר הדקירה עבור 5 s או יותר כדי לאפשר את הדם לקריש.
  8. לאחר שהדם נקרש, החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו.
  9. דם צנטריפוגות ב 4 °C 3,500 x g במשך 10 דקות.
  10. דקאנט סופר-טבעי.
  11. אחסן את supernatant ב -20 °C (50 °F) עבור ניתוחים במורד הזרם.
  12. מדוד את רמות הקורטיקוסטרון באמצעות ערכת ELISA קורטיקוסטרון בהתאם לפרוטוקול היצרן.
  13. השתמש בספקטרופוטומטר כדי לקרוא את תוצאות ELISA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

שני מחקרים נפרדים בוצעו עם עכברי C57BL/6. המחקר #1 כלל זכרים בני 6 חודשים ומחקר #2 כללו נקבות בנות חודשיים וחצי (N= 36/מחקר) ממעבדות ג'קסון (Cat #000664). עכברים הגיעו למתקן בגיל חודשיים. בעוד מחקר #2 נקבות טופלו ונבדקו שבועיים לאחר ההגעה, מחקר #1 זכרים טופלו ונבדקו רק בגיל 6 חודשים (עיכוב עקב השבתת המגפה העולמית). במהלך תקופה זו, עכבר אחד ממחקר #2 מת, לפני תחילת הטיפול בניסויים. המחקר #1 עכברים זכרים טופלו על ידי צוות מתקן בעלי חיים. כל העכברים נשמרו במחזור בהיר/כהה של 12 שעות (7:00 ON, 19:00 OFF), ניתנה גישה למזון ומים ad libitum. כלוב הבית שלהם היה מלא בעיתון ממוחזר כחומר מצעים, כמו גם חומר קינון. עכברים שוכנו בנפרד, על מנת להגביל התנהגות אגוניסטית פוטנציאלית אצל גברים השוכנים בקבוצה במהלך טיפול או לאחר הליכים כגון איסוף דם או בדיקות התנהגותיות. עכברים חולקו באקראי לשלוש קבוצות: טיפול בזנב, טיפול במנהרות וטיפול בתלת-ממד, יטופלובחדר הפתוח בהתאם לעיצוב הקבוצה שלהם(איור 2). הקבוצה המנוהלת על ידי המנהרה קיבלה את המנהרה כהעשרה במשך שבוע לפני הטיפול בישיבה. לאחר מכן הם טופלו במשך עשרה (10) ימים רצופים, לפני בדיקות התנהגותיות. שבוע לאחר סיום טיפולי הטיפול השונים החלו הבדיקות ההתנהגותיות. ביום ה -16, עכברים נבדקו ב- EPM, ולאחר מכן במבחן אינטראקציה הנסיין. יומיים לאחר מכן, עכברים נבדקו ב- NSF. לבסוף, ביום 24, דם נמשך 15 דקות לאחר מפגש טיפול של דקה אחת מאותו סוג כמו הטיפול הראשוני.

לצורך ניסויים התנהגותיים, בעלי חיים שעברו טיפול במנהרה הועברו מהכלוב שלהם למנגנון באמצעות המנהרה ככל האפשר. עם זאת, לניסוי מבוך מוגבה פלוס, ממדי המבוך הקשו על הסרת או למקם בעלי חיים במבוך באמצעות המנהרה. במקרה זה, בעלי חיים הועברו ממנהרות לידיים מכוסות, והועברו למבוך. עכברים עם ידית תלת-ממד טופלו במהלך שלושת הימים, במקביל לימים 8-10 של טיפול במנהרות(איור 2). עכברים שטופלו בזנב לא היו רגילים לטיפול, אלא טופלו בזנב במהלך אינטראקציות עם הנסיינים. במהלך המחקר, שינוי כלוב בוצע על ידי הנסיין כדי להבטיח את השימוש בטכניקת הטיפול המתאימה המשמשת עבור כל קבוצה.

במבחן האינטראקציה של הנסיין נבדקו בעלי חיים על נכונותם לקיים אינטראקציה מרצון עם הנסיין ועל קלות הטיפול בהקשר ניסיוני (איור 3). ANOVA שבוצע על מספר הניסיונות להרים את העכבר מהכלוב הראה השפעה משמעותית של גישת הטיפול במחקר #1 זכרים (F(2,31)= 6.36, p = 0.004), ובמחקר #2 נקבות (F(2,33)= 12.21, p = 0.0001). ניתוחי הפוסט הוק של שף העלו כי מספר הניסיונות הנדרשים לאסוף את העכברים צומצם באופן משמעותי הן בתלת-ממד (p=0.0061 במחקר #1 זכרים, והן p=0.0002 במחקר #2 נקבות) והן על ידי טיפול במנהרות (p = 0.04 במחקר #1 זכרים, ו- p = 0.003 במחקר #2 נקבות), בהשוואה לקבוצת הטיפול בזנב(איור 3A). ANOVA שבוצעה על הזמן שבילה באותו רבע כמו היד הראה השפעה משמעותית של טיפול במחקר #1 זכרים (F(2,31)= 5.38, p = 0.009), ובמחקר #2 נקבות (F(2,33)= 3.5, p = 0.04; איור 3B). ניתוחי הפוסט הוק של Scheffe הראו כי מחקר #1 עכברים זכרים שטופלו בטכניקת הטיפול בתלת-ממד בילו זמן רב יותר באופן משמעותי באותו רביע מאשר ידו של הנסיין, בהשוואה לעכברים עם זנב (p = 0.012). לא היו הבדלים משמעותיים בין קבוצות טיפול במחקר #2, 2.5 חודשים נקבות. מידת האינטראקציה עם הנסיין מודגמת עוד יותר על ידי מפות החום המשולבות של נקודות המרכז של העכברים(איור 3C-E). אלה ממחישים כיצד העכברים הזכרים עם ידית תלת-ממד ממחקר #1 בילו יותר זמן קרוב ליד, כולל אזורים ליד היד, בעוד לעכברים שטיפלו בזנב הייתה האינטראקציה הכי פחות כוללת עם היד.

ההשפעות של טיפול בתלת-ממד ובמנהרות הושוו לטיפול בזנב בשתי בדיקות של התנהגויות דמויות חרדה, מבחן האכלה מודחקת (NSF) והמבוך המוגבה פלוס (EPM). במבחן NSF, ANOVA ביצע על ההשהיה להתקרב הראה השפעה של טכניקת טיפול המשמשת במחקר #1 זכרים (F(2,31)= 3.5, p = 0.04). ניתוח הפוסט הוק של שף במחקר #1 הזכרים הראו מגמות של עכברים עם ידית תלת-ממדית (p = 0.08), ומהעכברים המטופלים במנהרה (p = 0.08), עם השהיה מופחתת להתקרב בהשוואה לעכברים מטופלים בזנב (איור 4A). לא נצפו תופעות במחקר #2. ANOVA שבוצע על ההשהיה להתקרב בכלוב הבית העכבר (נתונים לא הראו) לא הראה שום השפעה של טיפול (p = 0.88 במחקר #1 זכרים, ו p = 0.16 במחקר #2 נקבות). ANOVA שבוצעה על הזמן באחוז בזרועות הפתוחות ב- EPM חשפה השפעה משמעותית של טיפול במחקר #2 נקבות (F(2,33)= 3.5, p = 0.04). לא נצפו תופעות במחקר #1 זכרים (F(2,31)= 2.1, p = 0.1; איור 4ב. ניתוחי הפוסט הוק של שף רק חשפו מגמה של זמן מוגבר להקדיש את הזמן המושקע בזרועות הפתוחות בעכברים מטופלים במנהרה ממחקר #2, בהשוואה לעכברים עם זנב (p = 0.07). לגבי אחוזי הכניסה בזרועות הפתוחות(איור 4C),ANOVA לא גילה שום השפעה של טיפול, לא במחקר #1 זכרים ולא במחקר #2 נקבות (F(2,31)= 1.12, p = 0.33; ו- F(2,33)= 1.3, p = 0.26, בהתאמה). ציונים התנהגותיים סוכמו בציון z, כמו ב Guilloux ואח'23, המודיע על ירידה פוטנציאלית של התנהגויות דמויי חרדה לעומת עכברים מטופלים זנב (איור 4D). ANOVA על ציוני z הראה השפעה משמעותית של טיפול במחקר #1 זכרים (F(2,31)= 5.6, p = 0.008) אבל לא במחקר #2 נקבות (F(2,33)= 1.07, p = 0.35). ניתוחי הפוסט-הוק של Scheffe הראו כי טיפול בתלת-ממד וטיפול במנהרות הפחיתו באופן משמעותי את ציון ה-z (p =0.04 ו-0.01, בהתאמה), בהשוואה לטיפול בזנב, מה שמצביע על כך ששתי הגישות מפחיתות התנהגויות דמויות חרדה במחקר #1 גברים.

רמות הקורטיקוסטרון לאחר הטיפול הוערכו גם הן 15 דקות לאחר פגישת טיפול קצרה(איור 5). ANOVA מצאה השפעה משמעותית של טיפול במחקר #2 נקבות (F(2,33)= 4.44, p = 0.01), אך לא במחקר #1 זכרים (F(1,31)= 0.53, p = 0.59). במחקר #2 נקבות, ניתוחי פוסט הוק חשפו ירידה משמעותית ברמות הקורטיקוסטרון בעכברים מקבוצת הטיפול בתלת-ממד בהשוואה לקבוצת הטיפול בזנב (p = 0.02).

כדי לקבוע אם לטכניקות הטיפול הייתה השפעה משמעותית על השונות של נתונים שהושגו, יישמנו את מבחן ההומוגניות של ברטלט. התוצאות שלנו לא מצאו הבדל משמעותי בשונות במחקר #2 עכברות על פני מדידות (% זמן EPM B(2,33)= 4.95, p = 0.087; % ערכים EPM B(2, 33)= 3.68, p = 0.16; NSF B(2, 33)=0.20, p = 0.91; CORT B(2, 33)=1.69, p = 0.42). עם זאת, במחקר #1 עכברים זכרים, הייתה הטרוגניות משמעותית של שונות במבחן NSF (B(2,31)= 8.08, p = 0.0175) וברמות CORT נמדדות (B(B (2,32)= 11.63, p = 0.0029), אך לא באף אחד מהמדדים עבור EPM (% זמן EPM B(2,32)= 1.16, p = 0.56; % ערכים EPM B(2,32)= 2.79, p = 0.25). שימוש במבחן ה- F כדי להשוות בין שתי שונות הראה כי במבחן NSF השונות צומצמה באופן משמעותי עבור מחקר #1 זכרים הן על ידי 3D (F(1,21)= 4.22, p = 0.04) וטכניקות טיפול במנהרות (F(1,22)= 4.01;p = 0.03) בהשוואה לטיפול בזנב. לריכוז של CORT לאחר הטיפול, רק טיפול בתלת-ממד הפחית באופן משמעותי את השונות (F(1,20)=9.65, p= 0.0019) בהשוואה לטיפול בזנב.

Figure 1
איור 1. תמונות מייצגות של הליך הטיפול בתלת-ממד.  התמונות ממחישות את הליך הטיפול בתלת-ממד. א) יד בכלוב: ידו של הנסיין מונחת בכלוב ונשמרת ללא תזוזה, ומאפשרת לעכבר להרגיל לנוכחות היד בכלוב. ב) יד שטוחה: עם ההסרה הראשונה מהכלוב, העכבר ממוקם על כף היד השטוחה. העכבר יכול להסתובב בחופשיות סביב כף היד ולנוע בין ידיים שטוחות סמוכות. ג) רול: הרפה את כף היד כדי ליצור רופפת סביב העכבר. הטה בעדינות את הכוס ליד הנגדית העכבר צריך לנוע בחופשיות ליד זו, אם לא בעדינות להנחות אותו ליד השנייה. D) מקלט: למקם את העכבר בקצה היד ואז להביא את שתי הידיים יחד לאט מאוד טופס סביב העכבר. אין לרסן את העכבר ולהישאר פתח כדי שהעכבר יוכל לברוח. החזק ~ 5- 10s ולאחר מכן לפתוח לידיים שטוחות. E) ליטוף ראש/גב: בזמן שהעכבר בוחן את כף היד השטוחה, יש ללטף בעדינות את העכבר בראש ובגב. זה מרגיל את העכבר לגישתו של הנסיין מלמעלה. ו) חטט באף: כאשר העכבר נראה רגיל לטיפול, נסה לגעת בעדינות בעכבר ישירות על חוטם. אם העכבר אינו מזיז את ראשו משם הוא רגיל היטב לטיפול. ז) ניתן לבצע צביטת צוואר קצרה (2-3 s) ביום האחרון, כדי למדוד את ההרגל של בעלי החיים במקרה של התערבויות עתידיות הדורשות מחלוקת. כאשר הם רגילים לטפל, עכברים נשארים חסרי תנועה במהלך צביטת הצוואר, בעוד עכברים שאינם מורגלים ינסו לברוח על ידי סיבוב הזנב שלהם כדי להשתחרר מהתחרות. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2. עיצוב ניסיוני.  לאחר ההגעה למתקן, עכברים שטופלו בזנב לא קיבלו שום הרגלה. עכברים עם ידי מנהרות הורגלו למנהרות בכלוב הביתי שלהם במשך שבוע לפני תחילת הטיפול. עכברים שטופלו במנהרה טופלו בטכניקת הטיפול במנהרה במשך 10 ימים (היום הראשון לטיפול = יום 1), ואילו עכברים עם ידית תלת-ממד הורגלו במשך שלושה ימים (יום 8-10). עכברים היו נתונים אז למבוך פלוס מוגבה (EPM) (יום 16), מבחן אינטראקציה של הנסיין (יום 19), האכלה מודחקת חידוש (יום 21), ופגישת טיפול קצרה ואחריה איסוף סרום למדידה קורט (יום 24). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3. ההשפעה של שלוש טכניקות הטיפול על קלות הטיפול ונכונות לאינטראקציה עם הנסיין. A) מספר ממוצע של ניסיונות איסוף הנדרשים להסרת עכבר מהכלוב. מחקר #1 זכר (פאנל שמאלי, טיפול בזנב N = 12, טיפול במנהרות N = 12 ו 3D טיפול N = 11) ומחקר #2 נקבה (פאנל ימני, N = 12 לכל קבוצה) עכברים הן מנהרה ו 3D טיפול הראה ירידה משמעותית במספר הניסיונות הנדרשים כדי להסיר אותם מהכלוב לעומת עכברים מטופלים זנב. ב) כמות הזמן הממוצעת שהושקעה על ידי בעל חיים באותו רבע של הכלוב כמו ידו של הנסיין. מחקר #1 עכברים זכרים שטופלו בטכניקת תלת-ממד הראה עלייה משמעותית בזמן שהושקע באותו רביע כמו ידו של הנסיין. C-E) מפות חום ממוצעות של נקודת מרכז העכבר לפי זמן שניתנו ב- Ethovision XT 14, הדגימו חזותית את המחקר והאינטראקציה המוגברים עם הנסיין של המחקר #1 עכברים זכרים עם ידית תלת-ממדית. קווי שגיאה מציינים את SEM. *p<0.05, **p<0.01 בהשוואה לקבוצה 'טיפול זנב'. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה. 

Figure 4
איור 4. ההשפעה של שלוש טכניקות הטיפול על התנהגויות דמויי חרדה. A) השהיה להתקרב ולהאכיל את הכדור בתא האכלה מודחק החידוש במחקר #1 עכברים זכרים (טיפול בזנב N = 12, טיפול במנהרות N = 12 ו 3D טיפול N = 11) ובמחקר #2 עכברים נקבה (N = 12 / קבוצה). נתוני המחקר #1 עכברים זכרים בקבוצות הטיפול בתלת-ממד ובטיפול במנהרות הראו מגמה של ירידה משמעותית בהשהיה כדי להתקרב לכדור. ב) אמצעי של אחוז מהזמן שהוקדש לזרועות פתוחות של המבוך המוגבה פלוס. לא היו הבדלים משמעותיים בין קבוצות במחקר #1 זכרים, ומגמה לקראת זמן רב יותר בזרועות פתוחות על ידי מחקר #2 נקבות בקבוצת הטיפול במנהרות. ג) ערכים בזרועות פתוחות: לא היו הבדלים משמעותיים בין קבוצות במחקר #1 זכרים, וגם לא במחקר #2 נקבות. ד) Z-ציון המסכם את התנהגויות דמויי חרדה. באמצעות הנתונים המוצגים ב- A, B ו- C, ציון z חושב באמצעות העכברים עם ידי זנב כהפניה. ירידה בציון z מרמזת על ירידה בהתנהגויות דמויי חרדה הנמדדות על ידי בדיקות NSF ו- EPM. מחקר #1 עכברים זכרים שטופלו בטכניקת תלת-ממד או מנהרה הראה פנוטיפ דמוי חרדה מופחת בהשוואה לעכברים עם זנב. קווי שגיאה מציינים השוואה של SEM. *p<0.05 לקבוצה עם ידי זנב. t מתאר רמה מגמתית של משמעות (p<0.1) בהשוואה לקבוצה עם טיפול זנב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה. 

Figure 5
איור 5. רמות של קורטיקוסטרון לאחר הטיפול.  סרום נאסף 15 דקות לאחר פגישת טיפול קצרה ולאחר מכן רמות קורט נמדדו על ידי ELISA הן במחקר #1 זכר (טיפול בזנב N = 12, טיפול במנהרות N = 12 ו 3D טיפול N = 11) ובמחקר #2 עכברים נקבה (N = 12 / קבוצה). מחקר #2 עכברים נקבות מטופלים באמצעות טכניקת טיפול בתלת-ממד הראו רמות קורטיקוסטרון מופחתות בהשוואה לעכברים שטופלו בזנב. ANOVA במחקר #1 עכברים זכרים לא הגיעו למשמעות להבדלים בין קבוצות (p = 0.5). קווי שגיאה מציינים את SEM. *p<0.05 בהשוואה לקבוצה 'טיפול זנב'. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Table 1
טבלה 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מחקר זה ופיתוח השיטה מבוססים על התצפית כי טיפול בטכניקות בעכברים עדיין מתעלמים על ידי הקהילה המדעית, וכי מעבדות מסוימות עדיין מסרבות ליישם הרגלה או טיפול בטכניקות כדי להפחית את הלחץ והתגובה של בעלי החיים שלהם לפני ניסויים. בעוד המייצג מחויבות זמן, טיפול בבעלי חיים מספק השפעות מועילות לבעלי החיים שעשויים לתרום להצלחת הניסויים להתבצע ומונע ניסויים להתבצע מספר פעמים בשל שונות נתונים או תגובת יתר של בעלי חיים. השימוש בטכניקת הטיפול בתלת-ממד הפחית את ניסיונות הבריחה בעכברים. זה גם הגביר את האינטראקציה עם הנסיין וירידה פנוטיפים דמויי חרדה בעכברים הזכרים שלנו 6 חודשים. יתר על כן, טיפול בתלת-ממד הפחית את השתנות הנתונים והפחית את רמות הקורטיקוסטרון בעכברות בנות חודשיים וחצי לאחר 3 ימים ראשונים בלבד של טיפול. גישה זו מסתמכת על מניפולציות עדינות כדי להרגיל את העכבר לטיפול על ידי הנסיין המאפשר הובלה חלקה יותר והתערבות קלה יותר.

משהו ששווה להדגיש מטכניקת הטיפול בתלת-ממד הוא שהתקדמות שיטות הטיפול מתרחשת בתגובה לתגובה של העכבר, בהתאם להשגת אבני הדרך המתוארות לעיל ובטבלה 1. בעלי חיים היו צריכים להפחית את התגובה לשלב טיפול אחד לפני התקדמות לשלבים הבאים. ניסיון להתקדם מהר מדי לשלבי "מחסה" או "חטטנות באף" על בעלי חיים שאינם רגילים מספיק סביר להניח שיביא ללחץ מוגבר ואולי יפחית את האפקטיביות של ההליך. באופן דומה, יש לעקוב אחר תגובת החיה בכל יום של טיפול ויש לשקול בעת החלטה אם נדרשים ימי טיפול נוספים. אם בעלי חיים אינם מגיבים היטב לבדיקת המקלט ביום הראשון, ולא עומדים בקריטריונים להשגת אבן הדרך הראשונה, ניתן יהיה לחזור על יום הטיפול הראשון עד להשלמת אבן הדרך. באופן דומה, אם בעלי חיים אינם מגיבים לבדיקת דקירת האף ביום השני, היום השני עשוי לחזור גם הוא. אזהרה נוספת שיש לציין בגישה זו היא כי הסיכון של עכברים לקפוץ משם הוא גדול יותר ביום הראשון של הטיפול, במיוחד זנים קופצני כמו C57BL6. בעקבות ההנחיות שתוארו לעיל צריך להפחית את הסיכון לקפוץ, ולספק דרכים להגביל התנהגויות כאלה. משך הטיפול וההתקדמות בשלבים עשוי להשתנות בהתאם לזנים, במיוחד אם עובדים עם מודלים מהונדסים הידועים להפגין פנוטיפים חרדה.

מספר גורמים יכולים לתרום להפחתת האפקטיביות של טכניקת הטיפול בתלת-ממד המוצגת. גורם אחד כזה הוא הפחד הפוטנציאלי או ההססנות של הנסיין, במקרה של הנסיין לא מכיר את הטיפול בעכבר, או מפחד מעכברים. לכן, ההשפעה על המטפל היא גם משהו שיש לקחת בחשבון. עם זאת, העלייה ההדרגתית ברמת האינטראקציה עם העכברים מאפשרת לנסיינים מתחילים לפתח ביטחון וכישורים גדולים יותר בביצוע טכניקת הטיפול כשהם ממשיכים בשלבי הטיפול. הצעדים המוצעים / אבני דרך (בדיקות המקלט והדיקות דחיפה באף) יכולים לסייע בהתמודדות עם השונות האנושית הפוטנציאלית אצל מפעילים מתחילים, ולהבטיח שבעלי חיים יגיעו לרמות דומות של מגורים. דווח כי טיפוח אינטראקציות חיוביות בין בני אדם לבעלי חיים עם בעלי חיים הביא לאיכות חיים גבוהה יותר ולשביעות רצון חמלה בצוות הטיפול בבעלי חיים24. ככזה, העדינה מהטיפול מציגה יתרונות הן למפעיל והן לחיה במהלך כל אינטראקציה כללית או התערבות.

עם השפעתו על הפחתת מספר הניסיונות להרים את העכבר, הן אצל זכרים בני 6 חודשים והן אצל נקבות בנות חודשיים, הטיפול בתלת-ממד מספק חלופה לטיפול במנהרות או בטכניקות אחרות, מה שמקל על העברה קלה יותר של בעלי חיים מהכלוב שלהם למנגנון ניסיוני. טכניקת הטיפול בתלת-ממד גם הגבירה את האינטראקציה של עכברים זכרים בני 6 חודשים עם הנסיין. זה לא נצפה בעכברות בנות חודשיים וחצי, אבל עכברות נקבות נותרו קלות יותר לאיסוף, בהשוואה לעכברים עם זנב. זה מצביע על כך שטכניקת הטיפול בתלת-ממד עשויה להתאים יותר לניסויים הדורשים אינטראקציות ישירות בין החיה לנסיין, כגון מבוך המים מוריס (למרות גורמים פוטנציאליים לסקס / גיל מבלבלים שנדונו מאוחר יותר). אחרים פיתחו והשתמשו בטכניקות טיפול ידניות, המורכבות מאיסוף בעלי החיים בידיים מכוסות, ללא מניפולציה נוספת10. בעוד טכניקות אלה הראו השפעות מועילות, נתונים בספרות לעתים קרובות מציגים פרוטוקולי טיפול עם תקופות הרגלה העולות על 10 ימים9,16. בנוסף, טיפול בכוסות ללא האינטראקציה המעודנת המסופקת על ידי טיפול בתלת-ממד עשוי שלא להתאים לזנים קופצנים שממשיכים לקפוץ החוצה ולהרחיק מהידיים. אמנם לא עשינו השוואה ישירה במחקר זה לשיטת הכוס, אך הטיפול בתלת-ממד מטפל בכך ונשען על מהלכים מעודנים כדי לטפח אינטראקציה בין העכבר למפעיל. המחקר של Ghosal et al.16 השתמש בטכניקת טיפול בכוס בשילוב עיסוי במשך 5 ימים, והראה טכניקה זו מגבילה את ההשפעה של מתח על נקודות קצה מטבוליות, המדגישה את הצורך במהלכים מעודנים ואינטראקציה במהלך הטיפול ביעילות טובה יותר. בהתבסס על טכניקת עיסוי זו, הטיפול בתלת-ממד משתמש באינטראקציה נוספת כדי להרגיל עכברים. באמצעות הגישה לטיפול בתלת-ממד, המטפלים מבטיחים שכל העכברים יגיעו לרמה דומה של התרגלות על ידי ביצוע מהלכים סטנדרטיים ועל ידי התאמת משך ההליך לכל בעל חיים בהתאם לצורך שלו (במחקר הנוכחי, כל העכברים עברו את אבני הדרך וסיימו את פרוטוקול הטיפול בתלת-ממד תוך 3 ימים). גישה זו יכולה להיחשב "מותאמת אישית" לכל עכבר, כך שכל בעלי החיים מגיעים לרמת ההרגל הרצויה בכל יום של טיפול. כפי שהוזכר קודם לכן, אם בעלי חיים אינם מגיעים לאבני הדרך המתוארות בפרוטוקול, ניתן להתאים טכניקה זו על ידי הגדלת מספר הימים. טכניקה זו הראתה השפעות מועילות להפחתת השונות בין בעלי חיים במחקרים התנהגותיים ומדידות פיזיולוגיות (רמות קורט), דבר המצביע על כך שגישה זו עשויה לתרום להפחתת השונות התוך-מחקרית ולהפחית את ההשפעה של טעות ניסיונית שעלולה לגרום לתוצאות מוטות במחקרים פרה-קליניים.

תוצאות תומכות הראו כי עכברים נתונים 3D- ומנהרה טיפול התערוכה מופחת חרדה במבחן האכלה מדוכא חידוש, לעומת עכברים זנב-טיפל. בהתחשב בנתונים משולבים של NSF ו- EPM, שתי הגישות הראו השפעות משמעותיות בהפחתת חרדה בעכברים זכרים בני 6 חודשים. זה משכפל את הממצאים כי בעלי חיים רגילים לטיפול במנהרות שיפרו את הביצועים במבחנים לחרדה9,15 לאחר 10 + ימים של טיפול, ולהדגים עוד יותר את הפוטנציאל של טיפול בתלת-ממד להפגין אפקטים דומים. זה גם הראה שעכברים זכרים בני 6 חודשים עם ידית תלת-ממדית ניגשים לאינטראקציה מרצון יותר עם הנסיין שלהם מאשר עכברים זכרים בני 6 חודשים שעברו טיפול במנהרה וזנב. חשוב לציין, עכברות בנות 2.5 חודשים שעברו טיפול בתלת-ממד היו רמות מופחתות של CORT, אשר עולה בקנה אחד עם תוצאות שפורסמו בעבר9. שני המחקרים (מחקר #1 אצל גברים בני 6 חודשים ומחקר #2 אצל נקבות בנות חודשיים וחצי) אישרו, בשתי דרכים שונות כי הטיפול יש השפעה מועילה על פנוטיפים דמויי חרדה (או על תוצאות התנהגותיות במחקר #1, או על רמות ה- CORT במחקר #2).

גורם תורם אפשרי להשפעה הוא המין של הנסיין, במקרה זה זכר. הוכח על ידי Sorge ואח'25 כי נוכחותם של ניסויים זכרים יכול להוביל לעלייה קורט וחרדה כמו התנהגויות אצל עכברים זכר אבל לא נקבה. זאת בניגוד לתוצאות המחקר הנוכחי. ההבדל העיקרי בין מחקר זה לבין המחקר מ Sorge ואח'25 הוא כי הגישה המתוארת כאן מורכבת על הרגל העכברים לטיפול, על ידי טיפוח אינטראקציה חיובית (לא מחוזקת) עם הנסיין, בעוד Sorge ואח'25 השתמשו מכרסמים נאיביים שמעולם לא אינטראקציה עם בני אדם. אפשר לצפות שלעכברים תמימים יכולה להיות תגובה חזקה נגד ניסויים אנושיים אם הם לא ילמדו שהנסיין אינו מהווה איום. עם זאת, המחקר הנוכחי בוצע רק עם נסיין זכר, ומחקרים עתידיים צריכים לחקור אם השפעות כאלה ניתנות לשחזור עם נסיין נקבה. למרות בידוד גורמים אלה הוא מחוץ לטווח של מאמר זה, כדאי להדגיש את החשיבות של זיהוי מקורות כאלה של שונות בעת יישום הרגלה טיפול, או בעיצוב ניסיוני באופן כללי יותר.

המחקר הנוכחי גם אישר את היעילות של טכניקת הטיפול במנהרה בהפחתת התנהגויות דמויי חרדה ורמות קורט בעכברים9,10,11. יתרון נוסף של גישה זו הוא כי המנהרה ניתן להשאיר בכלוב כהעשרה26, אשר עשוי גם לתרום תגובה מתח מופחת / חרדה, בסך הכל לתרום רווחה משופרת10,11. במקרה זה, תפקידו של הנסיין הוא לתפעל את המנהרה בלבד, עם כל חיה, למשך דקה אחת. עם זאת, כפי שתואר על ידי Gouveia et al19, המנהרה לא בהכרח צריך להישאר בכלוב הבית ובמקום זאת ניתן להציג לבעלי החיים רק כאשר נדרש להעביר את החיה, מבלי לגרום ללחץ נוסף. שתי הגישות, המנהרה וטכניקות טיפול בתלת-ממד, מציעות יתרונות שיש להעריך על ידי המעבדה והנסיינים על מנת לקבוע איזו גישה מתאימה ביותר לצרכיהם. במחקר הנוכחי, המנהרה הושארה בכלוב, וההשפעות שראינו על התנהגויות דמויות חרדה עשויות להיות בגלל שילוב של טיפול במנהרה והעשרה.

בעוד ששניהם מספקים השפעות מועילות, טכניקות הטיפול בתלת-ממד ובמנהרה אינן נטולות מגבלות. מגבלה משותפת היא שזה יכול להיות זמן רב ופוטנציאל מייאש עבור מתקנים בעלי חיים ליישם נהלים כאלה. עם זאת, היתרונות הנוספים הם לא יסולא בפז, שיפור רווחת בעלי החיים על ידי הפחתת מתח ושיפור אינטראקציה עם ניסויים וספקי טיפול בבעלי חיים (כמתואר Spangenberg ו Kelling27), ואת אמינות המחקר ואת הרבייה. עדויות מהמתקן שלנו מצביעות על כך שטכניקה זו משפרת את האינטראקציות בין בעלי חיים לצוות הבעלות, מקלה על שינוי כלוב וניטור בריאות. ממשתמשים אחרים במתקן שלנו, מחלוקת ומניפולציה כללית מדווחים כקלים יותר באופן משמעותי עם עכברים מטופלים, עולה בקנה אחד עם הממצאים שלנו כי עכברים טיפלו עם טכניקת 3D נוטים פחות לברוח כאשר הרימו ובדוגמה שלנו, גברים בני 6 חודשים נוטים יותר לקיים אינטראקציה עם הנסיין שלהם. מחקרי מעקב יכולים לכמת השפעות כאלה כדי להדגים עוד יותר את התועלת של הטכניקה. בסך הכל, גישה זו לטיפול בתלת-ממד, כמו גם הגישה למנהרה, תורמת לכלל של 3Rs, במיוחד על ידי זיקוק אינטראקציות שגרתיות בין בעלי חיים כדי למזער את הלחץ בתגובה לטיפול. בהתחשב בירידה הנצפית בשוונות הנתונים, יש לכך גם פוטנציאל להפחית את מספר בעלי החיים הדרושים כדי להשיג תוצאות עקביות ולזקק את הגישה המשמשת להגבלת השונות.

נקודת דיון נוספת המבוססת על הנתונים שהוצגו היא כי מחקר זה בוצע עם בעלי חיים להיות חד-בית. דיור יחיד היה מועדף כפי שהוא מגביל את ההתנהגויות היוניסטיות הפוטנציאליות (במיוחד בעכברים זכרים), שיכולים לתרום לשונות בין אינדיבידואלית28,29. עבור עקביות בין קבוצות, כל בעלי החיים היו בודדים שוכנו. מעניין גם לציין כי אינטראקציות חיוביות בין ניסויים לבעלי חיים בחולדות בצורה של דגדוג עכברושים, הצליחו למתן חלק מההשפעות של בידוד חברתי בחולדות בודדות30,31. ייתכן כי טיפול בטכניקות הכרוכות במגע ישיר בין בעלי חיים לנסיין, כגון טכניקת הטיפול בתלת-ממד או טכניקת עיסוי הכוס המתוארת על ידי Ghosal et al.11 יכול להיות בעל השפעה דומה. מחקרים עתידיים יכולים לחקור שאלה זו על ידי השוואת ההשפעות של טיפול בטכניקות בבעלי חיים בודדים וקבוצתיים. מחקרים קודמים חקרו את ההשפעה של גישות טיפול בכוסות ובמנהרות עם עכברים בסביבה קבוצתית, והשיג תוצאותדומות 7,8. זה מאשר כי ניתן להשתמש בפרוטוקולי הטיפול המתוארים בזאת עם בעלי חיים המוחזקים בתנאי בית אחד או בית קבוצתי, תוך התחשבות באפשרות של התנהגות אגוניסטית בעת הוצאת חיה אחת מהכלוב והחזרתה (במיוחד בעכברים זכרים, או בקווי עכבר אגרסיביים). במקרים כאלה, מומלץ להשתמש בכלוב זמני לפני קיבוץ מחדש של כל בעלי החיים יחד.

לסיכום, הגישה המוצעת לטיפול בתלת-ממד תורמת להפחתת תגובתיות ומתח בעכברים. היא גם מגבירה את אמינות הנתונים על-ידי הפחתת השונות לאחר 3 ימי טיפול. תוצאות דומות ניתנות לצפייה בטיפול במנהרה, במקרה שלנו לאחר 10 ימים של טיפול במנהרות. בהשוואה לטכניקת הטיפול במנהרות, טכניקת הטיפול בתלת-ממד סיפקה את היתרון של הגברת האינטראקציה עם הנסיין בעכברים הזכרים שלנו בני 6 חודשים, אשר יכול להיות קריטי במקרים מסוימים. אם טכניקת הטיפול בתלת-ממד או במנהרה תיושם בכל מתקני בעלי החיים, שתייצג שיפור משמעותי ביצירת נתונים ותתרום רבות לצמצום השימוש בבעלי חיים במחקר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

Acknowledgments

המחברים מודים לוועדה לטיפול בבעלי חיים של CAMH על תמיכתם בעבודה זו, כמו גם למטפלים בבעלי חיים של CAMH שסיפקו משוב נרחב על התועלת של ההליך, המניעים את ביצוע הניסויים המתוארים והגשת הפרוטוקול המפורט למשתמשים אחרים. עבודה זו מומנה בחלקה על ידי CAMH BreakThrough Challenge, שהוענק ל- TP, ועל ידי כספים פנימיים מ- CAMH.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
23 G x 1 in. BD PrecisionGlide general use sterile hypodermic needle. Regular wall type and regular bevel. BD 2546-CABD305145 Needles for Blood collection
BD Vacutainer® Venous Blood Collection EDTA Tubes with Lavender BD Hemogard™ closure, 2.0ml (13x75mm), 100/pk BD 367841 EDTA Coated tubes for blood collection
Bed’o cobs ¼” Corn cob laboratory animal bedding Bed-O-Cobs BEDO1/4 Novel bedding for novelty suppressed feeding
Centrifuge Eppendorf Centrifuge 5424 R For centrifugation of blood.
Corticosterone ELISA Kit Arbor Assays K003-H1W
Digital Camera Panasonic HC-V770 Camera to record EPM/Experimenter interactions
Elevated Plus Maze Home Made n/a Custom Maze made of four black Plexiglas arms (two open arms (29cm long by 7 cm wide) and two enclosed arms (29 cm long x7 cm wide with 16 cm tall walls)) that form a cross shape with the two open arms opposite to each other held 55 cm above the floor
Ethanol Medstore House Brand 39753-P016-EA95 Dilute to 70% with Distilled water, for cleaning
Ethovision XT 15 Noldus n/a Automated animal tracking software
Laboratory Rodent Diet LabDiet Rodent Diet 5001 Standard Rodent diet
Memory Card Kingstone Technology SDA3/64GB For video recording and file transfer
Novelty Suppressed Feeding Chamber Home Made n/a Custom test plexiglass test chamber with clear floors and walls 62cm long, by 31cm wide by 40cm tall .
Parlycarbonate tubes Home Made n/a 13 cm in length and 5cm in diameter
Purina Yesterday’s news recycled newspaper bedding Purina n/a Standard Bedding
Spectrophotometer Biotek Epoch Microplate Reader

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936 (2006).
  2. Bryda, E. C. The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).
  3. Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data. EJNMMI Research. 2 (1), 26 (2012).
  4. Howard, B. R. Control of Variability. ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).
  5. Toth, L. A. The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research. Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).
  6. Golini, E., et al. A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS. Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).
  7. Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring. PLoS One. 14 (8), 0220751 (2019).
  8. Stewart, K., Schroeder, V. A. Rodent Handling and Restraint Techniques. Journal of Visualized Experiments. , (2021).
  9. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).
  10. Gouveia, K., Hurst, J. L. Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice. Scientific Reports. 9 (1), 20305 (2019).
  11. Gouveia, K., Hurst, J. L. Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling. Scientific Reports. 7, 44999 (2017).
  12. Ghosal, S., et al. Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints. Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).
  13. Wahlsten, D., et al. Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction. Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).
  14. Nature Neuroscience. Troublesome variability in mouse studies. Nature Neuroscience. 12 (9), 1075 (2009).
  15. Sensini, F., et al. The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific. Scientific Reports. 10 (1), 17281 (2020).
  16. Ghosal, S., et al. Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints. Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).
  17. Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour. PLoS One. 10 (7), 0130718 (2015).
  18. Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. Mouse Handling Tutorial. NC3Rs. , (2016).
  19. Gouveia, K., Hurst, J. L. Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels. PLoS One. 8 (6), 66401 (2013).
  20. Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey. PLoS One. 15 (4), 0231454 (2020).
  21. Percie Du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research. PLOS Biology. 18 (7), 3000410 (2020).
  22. Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet. Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).
  23. Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex. Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).
  24. LaFollette, M. R., et al. Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel. Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).
  25. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
  26. Bailoo, J. D., et al. Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).
  27. Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool. Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).
  28. Theil, J. H., et al. The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice. Scientific Reports. 10 (1), 16649 (2020).
  29. Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem. Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).
  30. Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats. Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).
  31. Panksepp, J., Burgdorf, J. 50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables. Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).

Tags

התנהגות גיליון 175
טכניקות טיפול להפחתת מתח בעכברים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Marcotte, M., Bernardo, A., Linga,… More

Marcotte, M., Bernardo, A., Linga, N., Pérez-Romero, C. A., Guillou, J. L., Sibille, E., Prevot, T. D. Handling Techniques to Reduce Stress in Mice. J. Vis. Exp. (175), e62593, doi:10.3791/62593 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter