Summary
यह पेपर चूहों में एक हैंडलिंग तकनीक का वर्णन करता है, 3डी-हैंडलिंग तकनीक, जो चिंता जैसे व्यवहार को कम करके नियमित हैंडलिंग की सुविधा प्रदान करती है और दो मौजूदा संबंधित तकनीकों (सुरंग और पूंछ हैंडलिंग) पर विवरण प्रस्तुत करती है।
Abstract
प्रयोगशाला जानवरों वैज्ञानिकों या पशु देखभाल प्रदाताओं द्वारा कई जोड़तोड़ के अधीन हैं । तनाव इस कारणों से पशु भलाई पर गहरा प्रभाव हो सकता है और यह भी इस तरह के चिंता उपायों के रूप में प्रयोगात्मक चर के लिए एक भ्रामक कारक हो सकता है । इन वर्षों में, हैंडलिंग से संबंधित तनाव को कम करने वाली तकनीकों को चूहों पर विशेष ध्यान देने और चूहों पर थोड़ा ध्यान देने के साथ विकसित किया गया है। हालांकि, यह दिखाया गया है कि चूहों को हैंडलिंग तकनीकों का उपयोग करके जोड़तोड़ के लिए आदी किया जा सकता है। चूहों को हैंडलिंग करने के लिए आदत तनाव कम करती है, नियमित हैंडलिंग की सुविधा प्रदान करती है, पशु भलाई में सुधार करती है, डेटा परिवर्तनशीलता को कम करती है, और प्रयोगात्मक विश्वसनीयता में सुधार करती है। हैंडलिंग के लाभकारी प्रभावों के बावजूद, पूंछ-पिक-अप दृष्टिकोण, जो विशेष रूप से तनावपूर्ण है, अभी भी व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह पत्र मानव संपर्क के दौरान जानवर द्वारा अनुभव किए गए तनाव को कम करने के उद्देश्य से एक नव विकसित माउस-हैंडलिंग तकनीक का विस्तृत विवरण और प्रदर्शन प्रदान करता है। यह मैनुअल तकनीक 3 दिनों (3 डी-हैंडलिंग तकनीक) पर की जाती है और प्रयोगकर्ता को आदत बनाने के लिए जानवर की क्षमता पर केंद्रित है। इस अध्ययन में पहले से स्थापित सुरंग हैंडलिंग तकनीकों (पॉलीकार्बोनेट सुरंग का उपयोग करके) और पूंछ-पिक-अप तकनीक का प्रभाव भी दिखाया गया है। विशेष रूप से अध्ययन किया चिंता की तरह व्यवहार पर उनके प्रभाव हैं, व्यवहार परीक्षणों का उपयोग कर (ऊंचा प्लस भूलभुलैया और नवीनता दबा खिला), प्रयोगकर्ताओं और शारीरिक माप (कोर्टिकोस्टेरोन स्तर) के साथ स्वैच्छिक बातचीत । 3डी हैंडलिंग तकनीक और टनल हैंडलिंग तकनीक ने चिंता जैसी फेनोटाइप को कम कर दिया । पहले प्रयोग में, 6 महीने पुराने पुरुष चूहों का उपयोग कर, 3 डी हैंडलिंग तकनीक में काफी सुधार प्रयोगकर्ता बातचीत । दूसरे प्रयोग में, 2.5 महीने की महिला का उपयोग करके, इसने कोर्टिकोस्टेरोन के स्तर को कम कर दिया। इस प्रकार, 3डी-हैंडलिंग उन परिदृश्यों में एक उपयोगी दृष्टिकोण है जहां प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत की आवश्यकता या पसंदीदा है, या जहां प्रयोग के दौरान सुरंग हैंडलिंग संभव नहीं हो सकती है।
Introduction
चूहे और चूहे कई उद्देश्यों के लिए प्रीक्लिनिकल अध्ययन1,2 के लिए आवश्यक संपत्ति हैं, जिनमें एंडोक्राइनल, शारीरिक, औषधीय या व्यवहार अध्ययन शामिल हैं2। जानवरों से जुड़े अध्ययनों की बढ़ती संख्या से, यह पैदा हुआ कि मानव संपर्क सहित अनियंत्रित पर्यावरणीय चर जैव चिकित्सा अनुसंधान3,4,5में विभिन्न परिणामों को प्रभावितकरतेहैं। यह प्रयोगों और अनुसंधान प्रयोगशालाओं में देखी गई महत्वपूर्ण परिवर्तनशीलता के लिए जिम्मेदारहै, जोपशु अनुसंधान में एक प्रमुख चेतावनी प्रस्तुत करता है।
विभिन्न दृष्टिकोणों को पर्यावरणीय तनावों के प्रभाव को सीमित करने और मानव संपर्क के प्रति प्रतिक्रियाशीलता को कम करने के लक्ष्य के साथ लागू किया गया है । उदाहरण के लिए, पर्यावरणीय तनावों के प्रभाव को सीमित करने के लिए, आवास की स्थिति का मानकीकरण और स्वचालित आवास प्रणाली6,7 प्रयोगशालाओं में लागू की गई है। मनुष्यों के साथ बातचीत के बारे में, आमतौर पर जानवरों से निपटने और परिवहन के लिए उपयोग किए जाने वाले दृष्टिकोणों में पशुओं की परेशानी और तनाव के लिए बहुत कम संबंध था। उदाहरण के लिए , जानवरों को उनकी पूंछ से उठाना या8 संदंश का उपयोग करना बेसलाइन चिंता को बढ़ाता है9,10,11, अन्वेषण9,12 को कम करता है और अध्ययन के भीतर और14के भीतर अंतर-व्यक्तिगत परिवर्तनशीलता में बहुत योगदानदेताहै। नतीजतन, अन्य दृष्टिकोण विकसित किए गए, जैसे कप हैंडलिंग तकनीक, जो चूहों और चूहों पर लागू होती है। इस दृष्टिकोण में, जानवरों को उनके पिंजरे से बाहर "cupped" किया जाता है, और प्रयोगकर्ताओं द्वारा अपने हाथों से एक कप9,10, 11बनाते हुए आयोजित कियाजाताहै। पूंछ से निपटने के एक अन्य उपयोगी विकल्प में चूहों को स्थानांतरित करने के लिए पॉली कार्बोनेट सुरंग का उपयोगशामिलहै 9 ,10,15. यह दृष्टिकोण माउस और प्रयोगकर्ता के बीच सीधी बातचीत को समाप्त करता है। कप और सुरंग दोनों दृष्टिकोणों ने चिंता जैसे व्यवहार और प्रयोगकर्ता के डर को कम करने में प्रभावकारिता दिखाई, जिसे एवरिव हैंडलिंग तकनीकों द्वारा बढ़ा-चढ़ाकर पेश किया जा सकता है, जैसे पूंछ उठाओ/पूंछ हैंडलिंग9,10।
इसलिए , साक्ष्य बढ़ाना9,11व्यक्तियों के बीच परिवर्तनशीलता को कम करने और पशु कल्याण में सुधार के लिए उचित माउस हैंडलिंग की उपयोगिता कोदर्शाताहै । हालांकि, ऊपर उल्लिखित तकनीकों को अभी भी सीमाओं का सामना करना पड़ रहा है। कप हैंडलिंग तकनीक को 10 दिनों (2 सप्ताह 16 से अधिक 10 सत्रों) से लेकर15सप्ताह17तक के कार्यक्रम के साथ लागू किया गया है, जो सुविधा कर्मचारियों और प्रयोगकर्ताओं के लिए काफी समय है। इसके अतिरिक्त, कप हैंडलिंग की प्रभावशीलतातनाव 9 और पारंपरिक कप हैंडलिंग द्वारा खुले हाथों में भिन्न होती है, जिससे भोले चूहे या विशेष रूप से उछले हुए उपभेदों को हाथ से कूदने के लिए9,18हो सकता है। सुरंग से निपटने के परिणामस्वरूप अधिक सुसंगत और आम तौर पर19में जल्दी परिणाम होता है । सुरंगों का उपयोग घर पिंजरे संवर्धन के रूप में भी किया जाता है। वे जानवरों को जल्दी से संभालने और संवर्धन के अतिरिक्त लाभ प्रदान करने में मदद करते हैं। हालांकि, सुरंग हैंडलिंग की सीमाएं होती हैं जब उपकरणों के बीच जानवरों को स्थानांतरित करते हैं। दिलचस्प बात यह है कि हर्स्ट और वेस्ट9,और हेंडरसन एट अल20 ने प्रदर्शन किया कि सुरंग से जानवरों को उपकरण में स्थानांतरित करने के लिए कोमल और संक्षिप्त मैनुअल हैंडलिंग का उपयोग करना उनके फेनोटाइप को प्रभावित नहीं करता है।
मौजूदा तरीकों के लिए एक विकल्प प्रदान करने के लिए, समय की एक छोटी अवधि में प्राप्त करने योग्य आदत के साथ, इस लेख में एक उपन्यास तकनीक का वर्णन किया गया है जो कप हैंडलिंग तकनीक पर फैलता है, इसलिए किसी विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं होती है। यह दृष्टिकोण हैंडलिंग प्रक्रिया के साथ आराम चूहों के स्तर को मापने के लिए मील के पत्थर का उपयोग करता है। यह माउस प्रतिक्रियाशीलता और तनाव (व्यवहार और हार्मोनल स्तर पर) को कम करने पर प्रभावकारिता दिखाता है, नियमित हैंडलिंग की सुविधा देता है और जानवरों के बीच परिवर्तनशीलता को कम करने में योगदान देता है। इस तकनीक का विवरण यहां प्रदान किया जाता है, और चिंता जैसे व्यवहार को कम करने, प्रयोगकर्ताओं के साथ बातचीत में सुधार करने और परिधीय तनाव-हार्मोन (कोर्टिकोस्टेरोन) रिलीज को सीमित करने पर इसकी प्रभावकारिता को सुरंग हैंडलिंग (सकारात्मक नियंत्रण) और पूंछ हैंडलिंग तकनीकों (नकारात्मक नियंत्रण) की तुलना में दो अलग-अलग अध्ययनों (पुरुष और महिला चूहों) में प्रदर्शित किया जाता है।
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Protocol
पशु विषयों से जुड़ी प्रक्रियाओं को CAMH पशु देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और पशु देखभाल दिशा निर्देशों पर कनाडा परिषद के अनुपालन में आयोजित किया ।
नोट: यहां वर्णित हैंडलिंग विधि का उपयोग विभिन्न माउस उपभेदों में किया जा सकता है, जिसमें गैर-ट्रांसजेनिक (C57/BL6, BalbC, CD1, SV129, आदि) और ट्रांसजेनिक लाइनें शामिल हैं। इसका उपयोग युवा या पुराने चूहों के साथ भी किया जा सकता है, यह देखते हुए कि युवा वयस्क (4-6 सप्ताह पुराने) चूहे वयस्क या पुराने चूहों की तुलना में थोड़ा अधिक सक्रिय होते हैं, विशेष रूप से 1 दिन पर।
1. प्रायोगिक तैयारी
- अध्ययन दीक्षा से पहले, आने वाले दिशानिर्देश21के अनुसार, प्रत्येक हैंडलिंग समूह (3 डी-हैंडलिंग, सुरंग हैंडलिंग या टेल हैंडलिंग) को बेतरतीब ढंग से चूहों को असाइन करें।
- हैंडलिंग करने के लिए कमरे की पहचान करें। यह आवास कक्ष में, या एक अलग कमरे में किया जा सकता है। यदि हैंडलिंग एक अलग कमरे में की जाती है, जिसके लिए जानवरों को चलती गाड़ी पर ले जाने की आवश्यकता होती है, तो जानवरों को हैंडलिंग प्रोटोकॉल की शुरुआत से पहले 20-30 मिनट के लिए नए कमरे में आदत ें बनने की अनुमति दें।
- समूह में रखे जानवरों के लिए, हैंडलिंग के बाद चूहों के घर के लिए एक अस्थाई पिंजरे का उपयोग करें, उन सब को अपने प्रारंभिक घर पिंजरे में फिर से समूहीकृत करने से पहले । यह हैंडलिंग (विशेष रूप से पुरुषों में) से पहले जानवरों के बीच संभावित झगड़े को कम कर देता है।
- एक काउंटर पर काम (अधिमानतः एक मंजूरी दे दी काउंटरटॉप) या एक जैव सुरक्षा कैबिनेट में, आवास पिंजरे के साथ जानवर से दूर संभाला जा रहा है । आवास पिंजरे के करीब निकटता से कूदने का खतरा बढ़ जाता है। यदि जानवरों को समूह में रखे हैं, माउस के कूद घर पिंजरे में संभाला जा रहा है पिंजरे के साथियों के लिए तनाव का कारण हो सकता है ।
नोट: एक जैवसेफ्टी कैबिनेट में काम करना चूहों के फर्श पर कूदने के जोखिम को सीमित करता है, और कुछ सुविधाओं में आवश्यक हो सकता है। इस तकनीक का उपयोग जैवसेफ्टी कैबिनेट में किया जा सकता है, जिससे हमेशा जैवसेफ्टी कैबिनेट के अंदर सभी कदम ों का प्रदर्शन करना सुनिश्चित किया जा सकता है, और हैंडलर अग्रभुजा पर चलने वाले चूहों से बचना सुनिश्चित करता है।
2. दिन 1: 5 मिनट प्रति माउस
- धीरे-धीरे पिंजरे को खोलें और ढक्कन को साइड में रखें, घोंसले की सामग्री को हटा दें, और अन्य संवर्धन जैसे चल रहे पहियों या आश्रयों को हटा दें।
- घर के पिंजरे के लिए एक दस्ताने खुले हाथ परिचय, धीरे से पिंजरे की दीवार के एक तरफ के साथ हाथ रखने (हैंडलर के निकटतम दीवार, चित्रा 1A)।
- तुरंत माउस लेने की कोशिश न करें।
- स्थिर रहें और जानवर को लगभग 30 एस के लिए पिंजरे में हाथ की उपस्थिति के लिए आदत की अनुमति दें।
- हाथ की हथेली में माउस लेने का प्रयास करें (यानी, जानवर को अपनी पूंछ से उठाने से बचें)।
- यदि माउस को 3 प्रयासों के बाद आसानी से नहीं उठाया जाता है, तो माउस को दोनों हाथों से एक कोने और कप में गाइड करें।
- धीरे से माउस की ओर cupped हाथ ले जाने के लिए इसे लेने की कोशिश करो ।
- यदि दोनों हाथों से अधिकतम 3 प्रयासों के बाद असफल होते हैं, तो माउस को धीरे-धीरे अपनी पूंछ के आधार से उठाएं, और इसे अपने बांह या सपाट हाथ में स्थानांतरित करें।
- हाथ में माउस के साथ हाथ को सपाट और यथासंभव खुला रखें।
नोट: यह माउस पर कदम रखने के लिए एक फ्लैट मंच प्रदान करता है, और काटने के जोखिम को सीमित करता है। - हथेली के साथ हाथ को खुला और सपाट रखें, दूसरे हाथ को माउस पकड़े हुए रखें और माउस को बिना किसी संयम(चित्रा 1B)के हाथ से स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने की अनुमति दें।
- माउस का पता लगाने और 1 मिनट के लिए हाथों के बीच चलते हैं।
- इस बिंदु पर चूहों दूर कूदने की कोशिश कर सकते हैं। हाथों को ऐसी स्थिति में रखें कि यदि माउस कूदता है, तो यह फर्श के बजाय काउंटरटॉप पर उतर जाएगा।
- यदि एक माउस ऐसा लगता है कि यह कूदने की तैयारी कर रहा है (हाथ के किनारे की ओर बढ़ रहा है और पिछले पैरों पर पालन कर रहा है), तो धीरे-धीरे दूसरे हाथ को इसके सामने रखें और इसे इस हाथ पर चलने में मार्गदर्शन करने की कोशिश करें। अचानक होने वाली हरकतों से बचें क्योंकि इससे उनके कूदने का खतरा बढ़ जाता है।
- यदि एक माउस कूद करता है, इसे लेने के लिए पूंछ हैंडलिंग से परहेज और हैंडलिंग सत्र फिर से शुरू करने का प्रयास करें । यदि माउस फर्श पर या हाथों से अधिक 10 एस के लिए रहता है, तो किसी भी समय माउस हाथों से बाहर निकलने के लिए हैंडलिंग सत्र में अतिरिक्त समय जोड़ें।
- कूद के नोट ले लो। जानवरों के बीच संभावित परिवर्तनशीलता का आकलन करने के लिए कूदता की कुल संख्या का उपयोग किया जा सकता है।
- फ्लैट हाथों से 1 मिनट की हैंडलिंग के बाद, हाथ की हथेली को आराम दें, और हाथ में माउस को थोड़ा कप करें, हाथों के बीच माउस को धीरे से रोलिंग करने से पहले(चित्रा 1C)।
- "रोल" करने के लिए, हाथ की हथेली में माउस को, एक सपाट हाथ पर, उंगलियों के लंबवत स्थिति में रखें।
- धीरे-धीरे हाथ बंद करें, माउस के पीछे उंगलियों को रख दें।
- माउस को पकड़े हुए हाथ के नीचे सीधे मुक्त हाथ रखें।
- धीरे-धीरे माउस के साथ हाथ को घुमाएं और धीरे-धीरे माउस को दूसरे हाथ (180° फ्लिप) में स्थानांतरित करें।
- इसे आगे-पीछे हाथों के बीच दोहराएं।
- हाथों के बीच कोमल रोलिंग से वैकल्पिक और 60 एस के लिए खुले हाथों पर मुफ्त अन्वेषण, हर 20 एस के बारे में तकनीकों के बीच बारी।
- एक "आश्रय परीक्षण"(चित्रा 1D)प्रदर्शन करें।
- माउस को हाथ के किनारे पर जाने दें फिर 2 हाथों को एक साथ लाएं।
- बहुत धीरे-धीरे, उन्हें कप करें ताकि माउस हाथों से गठित "आश्रय" के अंदर फिट बैठता है। एक खोलने छोड़ दें ताकि जरूरत पड़ने पर माउस बच सके।
- माउस को आश्रय में 5-10 एस के लिए रखने का लक्ष्य रखें, बिना किसी संयम के।
- आश्रय परीक्षण के बीच वैकल्पिक, हाथों के बीच रोल और एक और 60 एस के लिए खुले हाथों की मुफ्त खोज, आश्रय चरण 3 या उससे अधिक बार करने के लिए सुनिश्चित किया जा रहा है।
- 2.10 में वर्णित सभी प्रक्रियाओं में, प्रक्रिया को जल्दी न करें। यदि माउस पर बल दिया जाता है (यानी, बचने के लिए अस्थायी, हाथों से कूदता है, हाथों के अंदर सीमित होने से, हाथों के बीच रोलिंग और 20 एस के लिए मुफ्त अन्वेषण जारी रखें, और फिर फिर प्रयास करें।
- मील का पत्थर: 1 दिन के पूरा होने के लिए 10 एस के कम से 1 सफल आश्रय परीक्षण प्रदर्शन करते हैं ।
- जब माउस हाथों में रहता है तो आश्रय परीक्षण सफल पर विचार करें। यदि माउस अपने सिर को बाहर चबूतरे पर ले जाता है और आश्रय में लौटता है, तो यह अभी भी एक सफल परीक्षण है। यदि जानवर पूरी तरह से आश्रय से बाहर निकलता है, तो यह एक विफलता है।
- 30 एस के लिए हाथों में मुफ्त अन्वेषण की अनुमति दें।
- धीरे-धीरे अपने पिंजरे में माउस की जगह लें। यदि समूह रखे, अस्थाई पिंजरे में माउस जगह जब तक सभी पिंजरे साथियों को संभाला जाता है । चूहों को हाथ की हथेली में उठाकर उनके मूल पिंजरे में लौटाएं। टेल पिक अप का इस्तेमाल न करें।
- 70% इथेनॉल के साथ संभावित मल और मूत्र के शीर्ष बेंच को साफ करें।
- 70% इथेनॉल (या उचित सफाई समाधान) के साथ दस्ताने अच्छी तरह से कुल्ला या अगले माउस को संभालने से पहले दस्ताने बदलें (पिंजरे के साथियों के लिए एक ही दस्ताने रखना संभव है)।
नोट: हैंडलर से थकान से बचने के लिए उचित संख्या में जानवरों के साथ हैंडलिंग करने की सिफारिश की जाती है। हैंडलिंग 24 चूहों के आसपास 2 घंटे लेता है और यह हैंडलर प्रति 24 चूहों से अधिक नहीं करने की सिफारिश की है । यदि अधिक जानवरों को संभालने की आवश्यकता है, तो कई दिनों में या तो कई हैंडलर रखने की सिफारिश की जाती है, या हैंडलिंग प्रक्रियाओं को उपसमूहों में विभाजित करने की सिफारिश की जाती है।
3. दिन 2: 3 से 5 मिनट प्रति माउस
- हाथ की हथेली में माउस लेने का प्रयास करें। इस स्तर पर, यह पहले से ही संभव होना चाहिए और चूहों को हाथ से बाहर नहीं कूदना चाहिए।
- 1 दिन के रूप में हथेली खुला के साथ शुरू करो, माउस 20 s के लिए स्वतंत्र रूप से पता लगाने के लिए अनुमति देता है ।
- फिर, कई बार (4-5 बार) हाथों के बीच माउस को रोल करें।
- 5 एस के लिए "आश्रय परीक्षण" प्रदर्शन करें।
- 2 से 3 मिनट की अवधि में आश्रय परीक्षण को कई बार (~ 5-6) दोहराएं।
- एक ही 2 से 3 मिनट की अवधि के दौरान, हाथों के बीच रोल के साथ वैकल्पिक और आदत में सुधार करने के लिए 1 दिन से खुले हाथों के कदम की मुफ्त खोज।
- माउस को उसके सिर और पीठ पर स्पर्श करें(चित्रा 1E),5-6 बार। आदत का एक संकेत है जब माउस आपको भागने के प्रयास के बिना इसे छूने देता है।
- "नाक प्रहार" करें: माउस के थूथन को छूने की कोशिश करें, 2 से 3 बार(चित्रा 1F)।
- यदि माउस को काटने या छुआ जा रहा है पर तनाव के स्पष्ट संकेत दिखाता है, तुरंत नाक प्रहार फिर से प्रयास नहीं करते । इसके बजाय, फ्लैट हाथ की खोज और रोल के साथ वैकल्पिक। "आदत" जानवर से परिलक्षित होता है दूर नहीं चल रहा है या मानव संपर्क के मामलों में अपने सिर मोड़ ।
- 3.4-3.6 में वर्णित सभी प्रक्रियाओं में, प्रक्रिया को जल्दी न करें। यदि माउस हाथों के अंदर सीमित होने से तनावग्रस्त दिखाई देता है या छुआ नहीं जाना चाहता है, तो हाथों के बीच 20-30 एस के लिए रोलिंग जारी रखें और फिर फिर प्रयास करें।
- मील के पत्थर: 2 दिन के पूरा होने के लिए 2-3 एस के लिए कम से 1 सफल नाक प्रहार प्रदर्शन करते हैं ।
- यदि जानवर "आश्रय", "सिर पेटिंग", "नाक प्रहार" के लिए अच्छी तरह से प्रतिक्रिया करता है, और यदि माउस तनाव के संकेतों के बिना हाथों का पता लगाने के लिए तैयार प्रतीत होता है तो हैंडलिंग के बारे में 3 मिनट के बाद इस सत्र को रोकें।
- यदि माउस तनाव के लक्षण प्रदर्शित करने के लिए जारी है या "आश्रय परीक्षण" या "नाक प्रहार" परीक्षण के लिए अच्छी तरह से प्रतिक्रिया नहीं है, 1 दिन के रूप में 5 मिनट तक पहुंचने तक सत्र जारी है ।
- अपने पिंजरे में माउस की जगह, बेंच शीर्ष और दस्ताने के रूप में 1 दिन में साफ ।
4. दिन 3: लगभग 3 मिनट प्रति माउस
- तीसरे दिन, 2 से 3 मिनट के लिए, दिन में के रूप में एक ही कदम के माध्यम से आगे बढ़ें ।
- हाथ की हथेली में माउस उठाओ।
- हाथ के बीच माउस को स्थानांतरित और रोल करें
- आश्रय परीक्षण करें।
- पीठ और सिर पर माउस पालतू करने की कोशिश करो।
- लगभग 1 से 2 मिनट से अधिक इन चरणों के बीच वैकल्पिक।
- प्रक्रिया जारी रखें जब तक माउस भागने के प्रयास के बिना हाथ की हथेली में बैठने के लिए पर्याप्त आराम है।
- 3 दिन के अंत से पहले, आश्रय परीक्षण और नाक प्रहार परीक्षण को आदत के परीक्षण के रूप में दोहराएं।
- यदि दोनों परीक्षणों को उनके पहले प्रयास पर पूरा किया जा सकता है, तो आदत प्रक्रिया पूरी हो गई है। धीरे से 30 एस के लिए एक मिनट के लिए माउस को संभालने जारी रखें ।
- यदि माउस शुरू में या तो परीक्षण के लिए प्रतिरोधी है, तो नाक प्रहार और आश्रय परीक्षण को फिर से लागू करने से पहले 20-30 एस के लिए 4.1-4.3 कदम दोहराएं।
- यदि माउस 3 मिनट के बाद इन परीक्षणों के लिए प्रतिरोधी रहता है, तो तीसरे दिन दोहराया जा सकता है।
- मील के पत्थर: 10 एस प्रत्येक के कम से कम 2 सफल आश्रय परीक्षण प्रदर्शन, और 3 दिन के पूरा होने के लिए 2 सफल नाक प्रहार परीक्षण, और पूरे 3 डी हैंडलिंग प्रक्रिया के पूरा होने।
- माउस को उसके पिंजरे में लौटा दें, बेंच टॉप और दस्ताने साफ करें।
5. इंजेक्शन या gavage के लिए संयम के अधीन होने के लिए जानवरों के लिए वैकल्पिक दृष्टिकोण
नोट: 3 दिन पर, यदि जानवर को प्रायोगिक उद्देश्यों (मौखिक गैवेज, इंट्रा-पेरिटोनियल इंजेक्शन आदि) के लिए रोका जाएगा, तो चूहों को गर्दन चुटकी परीक्षण के अधीन किया जा सकता है।
- अंगूठे और तर्जनी(चित्रा 1G)के बीच गर्दन के नैप को पकड़ें।
- माउस को 2-3 एस के लिए हाथ से 3-5 सेमी ऊपर उठाएं।
नोट: यह आम तौर पर वयस्क चूहों के लिए एक गैर प्राकृतिक स्थिति है, और यदि चूहों स्थिर के पास रहते हैं, वे अच्छी तरह से संभालने के लिए आदी रहे है और प्रयोगात्मक प्रयोजनों के लिए नियंत्रित करने के लिए आसान हो जाएगा । - माउस को फ्लैट हाथ में वापस रखें, या यदि माउस गर्दन चुटकी के लिए प्रतिक्रियाशील है, तो इसे प्रयोगकर्ता की आस्तीन, पिंजरे के ढक्कन या काउंटरटॉप पर रखने पर विचार करें
नोट: यदि जैवसेफ्टी कैबिनेट में काम कर रहे हैं, तो माउस को आस्तीन पर न रखें या यह ऊपर चल सकता है और जैवसेफ्टी कैबिनेट से बाहर निकल सकता है। बायोसेफ्टी कैबिनेट के अंदर काउंटरटॉप पर माउस रखना पसंद करते हैं। - माउस को 1 मिनट के लिए प्रयोगकर्ता के हाथ को स्वतंत्र रूप से तलाशने के लिए छोड़ दें।
6. हैंडलिंग के अतिरिक्त दिनों के लिए वैकल्पिक दृष्टिकोण
- एक अत्यधिक तनावग्रस्त माउस लाइन की स्थिति में, 2/3 दिन में वर्णित तरीकों का उपयोग करके, जानवरों की प्रतिक्रियाशीलता और तनाव के स्तर को कम करने के लिए अतिरिक्त दिन जोड़ें।
नोट: कई कारक तनाव, ट्रांसजेनिक संशोधन की उपस्थिति, आयु, सेक्स और आवास की स्थिति सहित जानवरों के आधारभूत तनाव को प्रभावित कर सकते हैं। यदि ये कारक उन समूहों के बीच सुसंगत नहीं हैं जैसे कि वृद्ध पशुओं का परीक्षण युवा नियंत्रणों या ट्रांसजेनिक जानवरों के खिलाफ जंगली प्रकार के नियंत्रणों के खिलाफ परीक्षण किया जा रहा है, तो यह सिफारिश की जाती है कि प्रत्येक समूह के लिए आदत के दिनों की एक ही संख्या का उपयोग किया जाता है ।
7. सुरंग हैंडलिंग
नोट: यह तकनीक केवल सुरंग से लल हुए चूहों पर लागू होती है। सुरंगों पॉलीकार्बोनेट ट्यूब लगभग 13 सेमी लंबाई में और व्यास में 5 सेमी हैं।
- सुरंग को माउस के पिंजरे में रखें।
- सुरंग को संभालने से पहले 7 दिनों के लिए पिंजरे में छोड़ दें।
- पिंजरे को खोलें और ढक्कन को साइड में रखें।
- धीरे-धीरे माउस को पॉलीकार्बोनेट सुरंग (पहले से ही पिंजरे में) में गाइड करें।
- क्षैतिज रूप से, पिंजरे से सुरंग उठाएं। यदि आवश्यक शिथिल सुरंग के सिरों को कवर करने के लिए कूद से जानवर को रोकने/
- सुरंग में जानवर को घर के पिंजरे से दूर ले जाएं और इसे 30 एस के लिए किसी भी सतहों से दूर रखें।
- सुरंग को घर के पिंजरे में वापस रखें, जिससे माउस ट्यूब से बाहर निकल सके।
- 60 एस के लिए प्रतीक्षा करें और फिर एक बार चरण 7.4-7.7 दोहराएं।
- अगले माउस को आदत देने से पहले 70% इथेनॉल के साथ दस्ताने अच्छी तरह से कुल्ला करें या दस्ताने बदलें।
- इस प्रक्रिया को लगातार 10 दिनों तक दोहराएं।
8. टेल हैंडलिंग
नोट: यह तकनीक केवल पूंछ से संचालित चूहों पर लागू होती है। इसका उपयोग चूहों को उनके पिंजरे से एक उपकरण में स्थानांतरित करने के लिए किया जाता है, और इसके विपरीत।
- पिंजरे को खोलें और ढक्कन को साइड में रखें।
- अंगूठे और तर्जनी के बीच पूंछ के आधार से चूहों को पकड़ें।
- पिंजरे से माउस उठा।
- 2-3 एस में, माउस झूलने से बचने के लिए पूंछ पर पकड़ बनाए रखते हुए प्रयोगकर्ता के विपरीत बांह में माउस स्थानांतरित करें।
- जब इस प्रयोग के कार्यान्वयन में पूंछ हैंडलिंग की आवश्यकता होती है (उदाहरण के लिए, कोर्टिसोल परीक्षण के लिए रक्त ड्रॉ से पहले) जानवरों को पूंछ हैंडलिंग द्वारा प्रयोगकर्ता की बांह में स्थानांतरित कर दिया जाता है और उनके पिंजरे में लौटने से पहले 15 एस के लिए आयोजित किया जाता है।
9. एलिवेटेड प्लस भूलभुलैया
- कमरे की स्थापना
- एक मेमोरी कार्ड से लैस एक डिजिटल कैमरे के नीचे, कमरे के बीच में भूलभुलैया रखें।
- भूलभुलैया के पीछे रखे 2 खड़े लैंप का उपयोग करके ~ 60 लक्स पर कमरे की रोशनी सेट करें।
- भूलभुलैया पर प्रत्यक्ष प्रकाश से बचने के लिए किसी भी ओवरहेड प्रकाश को बंद करें जो प्रतिबिंब बनाता है और भूलभुलैया में जानवरों का पता लगाने को बाधित करता है।
- एक बार जब सभी उपकरण स्थापित हो जाते हैं, तो जानवरों को कमरे में स्थानांतरित करें और उन्हें 30 मिनट के लिए प्रकाश सेटिंग्स और नए वातावरण में अनुकूलित होने दें।
- परीक्षण
- धूल से या पहले परीक्षण किए गए जानवर से गंध को रोकने के लिए 70% इथेनॉल के साथ भूलभुलैया को साफ करें।
- कैमरा शुरू करें।
- जानवर आईडी के साथ कागज के एक टुकड़े का उपयोग करने के लिए वीडियो पर आईडी रिकॉर्ड करने से पहले, भूलभुलैया में जानवर रखने से पहले (यह उचित पहचान की सुविधा होगी जो माउस प्रत्येक वीडियो पर फिल्माया जा रहा है) ।
- भूलभुलैया में स्थानांतरित करने के लिए प्रत्येक जानवर के लिए उपयुक्त हैंडलिंग तकनीक का उपयोग करें।
- एक खुली बांह का सामना करते हुए माउस को केंद्रीय मंच पर रखें।
- माउस को 10 मिनट, अव्यवस्थित के लिए उपकरण का पता लगाने की अनुमति दें।
- 10 मिनट बाद कैमरा बंद कर दें।
- भूलभुलैया से माउस को पुनः प्राप्त करें और इसे वापस अपने पिंजरे में डाल दें।
- 70% इथेनॉल के साथ भूलभुलैया से मल और मूत्र को साफ करें।
- एक बार परीक्षण सभी चूहों के साथ पूरा हो गया है, वीडियो ट्रैकिंग के लिए एक कंप्यूटर के लिए मेमोरी कार्ड से वीडियो हस्तांतरण ।
- स्वचालित पशु ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करना, खुले और बंद हथियारों के लिए प्रविष्टियों की संख्या को ट्रैक करें, और खुले या बंद हथियारों में बिताए गए समय (यहां Ethovision XT 14)।
10. प्रयोगकर्ता इंटरैक्शन (हर्स्ट और वेस्ट9से व्युत्पन्न)
- कमरे की स्थापना
- मेमोरी कार्ड से लैस डिजिटल कैमरे के नीचे टेस्टिंग रूम के बीच में एक टेबल रखें।
- छत तक का सामना करना पड़ कमरे के कोने में रखा 4 प्रकाश बल्ब के साथ 50-70 लक्स पर प्रकाश की स्थापना की । प्रतिबिंब पैदा करता है और क्षेत्र में जानवरों का पता लगाने को बाधित करने कि भूलभुलैया पर सीधे प्रकाश से बचने के लिए ओवरहेड प्रकाश बंद करें।
- जानवरों को कमरे में लाएं।
- उन्हें 30 मिनट के लिए कमरे में अनुकूलित होने दें।
- प्रयोग
- घर के पिंजरे को डिजिटल कैमरे के नीचे रखें।
- ढक्कन हटा दें।
- घोंसले की सामग्री और अन्य संवर्धन को हटा दें जो जानवरों की ट्रैकिंग में हस्तक्षेप कर सकते हैं।
- कैमरा शुरू करें।
- वीडियो पर जानवर की पहचान करने के लिए पशु आईडी के साथ पिंजरे कार्ड का उपयोग करें।
- घर के पिंजरे में एक हाथ सामने दाईं ओर पिंजरे की दीवार के साथ रखें।
- सुनिश्चित करें कि हैंडलर का सिर माउस को फिल्माने के लिए कैमरे को अवरुद्ध नहीं कर रहा है।
- एक टाइमर शुरू करें।
- हाथ को 2 मिनट तक स्थिर रखें, और माउस को हाथ का पता लगाने दें।
- 15 एस के लिए पिंजरे से हाथ निकालें।
- माउस को पिक्ड हाथों का उपयोग करके लेने का प्रयास करें और रिकॉर्ड करें कि माउस भाग जाता है या नहीं।
- अंतिम चरण को पांच बार, हर 5 सेकंड तक दोहराएं, या जब तक माउस खुद को उठाया नहीं जा सकता है।
- माउस लेने के लिए आवश्यक प्रयासों की संख्या रिकॉर्ड करें।
- पिंजरे में घोंसले की सामग्री और संवर्धन वापस करें।
- 70% इथेनॉल के साथ दस्ताने साफ करें या अगले जानवर पर आगे बढ़ने से पहले दस्ताने बदलें।
- परीक्षण के बाद, मेमोरी कार्ड से कंप्यूटर में वीडियो स्थानांतरित करें।
- स्वचालित वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करके, पिंजरे को चार समान क्वाड्रंट में विभाजित करें और प्रत्येक क्वाड्रेंट (यहां, एथोविजन एक्सटी 14) में माउस द्वारा बिताए गए समय को रिकॉर्ड करें।
11. नवीनता दबा खिला
- खाद्य अभाव
- परीक्षण से 3 दिन पहले, एक पूर्ण पिंजरे परिवर्तन करें, और एकल घर जानवरों (एकल आवास घर पिंजरे परीक्षण करने के लिए बेहतर है)।
नोट: ताजा बिस्तर प्रदान करने के संभावित धूल या पिछले पिंजरे परिवर्तन के बाद से बिस्तर में जमते भोजन के छोटे टुकड़े निकालता है । - परीक्षण से पहले दिन, शाम 6 बजे के आसपास सभी जानवरों का वजन करें।
- भोजन हॉपर से सभी भोजन निकालें, और सुनिश्चित करें कि पिंजरे में या बिस्तर में भोजन के टुकड़े नहीं हैं।
- परीक्षण से 3 दिन पहले, एक पूर्ण पिंजरे परिवर्तन करें, और एकल घर जानवरों (एकल आवास घर पिंजरे परीक्षण करने के लिए बेहतर है)।
- कमरे की स्थापना
- एनएसएफ चैंबर को एक टेबल पर रखें।
- मकई बिस्तर की एक पतली परत के साथ कक्ष भरें (या अन्य बिस्तर जो जानवरों के घर पिंजरे में उपयोग किए जाने वाले बिस्तर से अलग है)।
- 4 प्रकाश बल्ब मेज के कोने में रखा जहां चैंबर खड़ा है, छत तक का सामना करना पड़ के साथ ७० लक्स पर प्रकाश की स्थापना की । कम कमरे में प्रकाश बनाए रखने के लिए ओवरहेड लाइट बंद करें।
- प्रयोगकर्ता ≈ (दीवार से 10 सेमी) का सामना कर रहे कक्ष के किनारे, सुविधा में उपयोग किए जाने वाले मानक चाउ का एक गोली रखें।
- परीक्षण
- भोजन के अभाव के बाद सुबह में, जानवरों को परीक्षण से 30 मिनट पहले कमरे में लाएं ताकि उन्हें प्रकाश सेटिंग्स और नए वातावरण को अनुकूलित किया जा सके।
- पिछले दिन मापा वजन के आधार पर अपने वजन घटाने को मापने के लिए सभी जानवरों का वजन करें। जानवरों को काम को ठीक से करने में सक्षम होने के लिए रातोंरात 8-12% खोना चाहिए।
- वजन घटाने के प्रति जानवरों को सॉर्ट करें, और उन्हें माउस से शुरू करें जो माउस से सबसे अधिक खो देता है जो कम से कम वजन खो देता है।
- सुनिश्चित करें कि चैंबर बिस्तर से भरा हुआ है और एक ही गोली के साथ।
- जानवर को भोजन की गोली से दूर, कक्ष के विपरीत दिशा में रखें।
- टाइमर तुरंत शुरू करें।
- माउस को 12 मिनट तक कक्ष का पता लगाने दें।
- भोजन के गोली पर दृष्टिकोण और फ़ीड (जानवर को काटना और खाना चाहिए) के लिए विलंबता को मापें।
- इसे एक दृष्टिकोण मानते हैं जब जानवर गोली के करीब आता है, उसे बदबू आ रही है और काटता नहीं है।
- एक काटने को परिभाषित करें क्योंकि जब जानवर गोली का उपभोग करना शुरू कर देता है।
- सेकंड में गोली पर संपर्क करने और खिलाने के लिए विलंबता रिकॉर्ड करें।
- एक बार माउस ने भोजन की गोली पर खिलाया है, तो कक्ष से माउस निकाल दें।
- बिस्तर त्यागें लेकिन माउस होम पिंजरे में भूख ड्राइव परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जाएगा कि गोली को बचाने के लिए।
- अगले जानवर के लिए कक्ष रीसेट करें और अगले जानवर के साथ आगे बढ़ें।
- कक्ष में परीक्षण पूरा होने के 15 मिनट बाद, परीक्षण के दौरान इस्तेमाल किए गए गोली को माउस के घर के पिंजरे के अंदर, पिंजरे के सामने की दीवार के खिलाफ छोड़ दें।
- जब गोली घर के पिंजरे में हो तो गोली पर खिलाने के लिए विलंबता को मापें। यह भूख ड्राइव के लिए एक उपाय है।
- यह सुनिश्चित करने के लिए घोंसले की सामग्री को हटाना बेहतर है कि माउस अपने पिंजरे में गोली गिरा हुआ देखता है।
12. सीरम संग्रह और कोर्टिकोस्टेरोन माप
- सौंपा तकनीक का उपयोग कर 1 मिनट के लिए जानवरों को संभालें, रक्त संग्रह से पहले 15 मिनट (यह समूह रखे या एकल रखे जानवरों के साथ किया जा सकता है, चूहों को फिर से समूहीकृत करते समय झगड़े के जोखिम को ध्यान में रखते हुए)।
- सुरंग के लिए चूहों को संभाला, उन्हें सुरंग के लिए मार्गदर्शन, 1 मिनट के लिए पिंजरे से सुरंग लिफ्ट, और अपने पिंजरे में माउस की जगह ।
- पूंछ संभाला चूहों के लिए, माउस की पूंछ आधार हड़पने और अपने पिंजरे से माउस को हटा दें। माउस को 1 मिनट के लिए प्रयोगकर्ताओं आस्तीन में स्थानांतरित करें, और माउस को पूंछ से निपटने के द्वारा अपने पिंजरे में वापस करें।
- 3 डी-हैंडल किए गए चूहों के लिए, माउस को अपने पिंजरे से हटाने के लिए क्यूप्ड हाथों का उपयोग करें। माउस को 1 मिनट के लिए हाथ में पकड़ें, और इसे अपने पिंजरे में वापस करें।
- हैंडलिंग के बाद 15 मिनट, उपमंडीबुलर नस22से रक्त संग्रह के साथ आगे बढ़ें ।
- माउस को मजबूती से स्क्रफ करें ताकि माउस का सिर सुरक्षित रूप से स्थिर हो।
- पंचर की साइट का पता लगाएं।
- चेहरे के मंडीबल के साथ एक छोटा सा गंजा डिंपल है जिसे पंचर साइट का पता लगाने के लिए एक मील का पत्थर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। जबड़े के आधार और इस डिंपल के बीच एक रेखा ड्राइंग पंचर साइट कान की ओर इस डिंपल के पीछे लगभग 5 मिमी तक स्थित है, बस जबड़े के काज के पीछे।
- पंचर साइट के लिए एक साफ 23 जी सुई लंबवत पकड़ो और एक त्वरित फर्म लांसिंग गति का उपयोग करें । सुई की नोक 1-2 मिमी के बीच गहराई में प्रवेश करना चाहिए, नस पंचर होते ही रक्त तुरंत प्रवाहित हो जाएगा।
- EDTA लेपित संग्रह ट्यूबों में रक्त के ~ 150 μL ले लीजिए और बर्फ पर स्टोर करें।
- रक्त को थक्का बनाने की अनुमति देने के लिए पंचर साइट पर बाँझ धुंध पैड के साथ मामूली दबाव लागू करें।
- एक बार खून का थक्का जमने के बाद माउस को उसके घर के पिंजरे में लौटा दें।
- 10 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस 3,500 x ग्राम पर सेंट्रलाइज रक्त।
- सुपरनैंट को डिकेंट करें।
- डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए सुपरनेट को -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- निर्माता के प्रोटोकॉल के बाद कोर्टिकोस्टेरोन एलिसा किट का उपयोग करके कोर्टिकोस्टेरोन के स्तर को मापें।
- एलिसा परिणामों को पढ़ने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करें।
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Representative Results
C57BL/6 चूहों के साथ दो अलग अध्ययन किए गए । अध्ययन #1 6 महीने के पुरुषों और अध्ययन #2 शामिल २.५ महीने की महिलाओं (N = 36/अध्ययन) जैक्सन प्रयोगशालाओं (कैट #000664) से शामिल थे । चूहे 2 महीने की उम्र में इस सुविधा में पहुंचे । जबकि अध्ययन #2 महिलाओं को संभाला और आगमन के दो सप्ताह बाद परीक्षण किया गया, अध्ययन #1 पुरुषों को केवल 6 महीने की उम्र में संभाला और परीक्षण किया गया (वैश्विक महामारी शटडाउन के कारण देरी)। इस समय के दौरान, अध्ययन #2 से एक माउस की मृत्यु हो गई, प्रयोगों को संभालने से पहले। अध्ययन #1 पुरुष चूहों पशु सुविधा कर्मचारियों द्वारा देखभाल की गई । सभी चूहों को 12 घंटे की रोशनी/डार्क साइकिल (7:00 पर, 19:00 बंद) पर बनाए रखा गया था, भोजन और पानी विज्ञापन libitumके लिए उपयोग दिया । उनके घर पिंजरे बिस्तर सामग्री के रूप में पुनर्नवीनीकरण अखबार से भर गया था, साथ ही घोंसले की सामग्री । चूहों को व्यक्तिगत रूप से रखे गए थे, ताकि हैंडलिंग सत्र के दौरान या रक्त संग्रह या व्यवहार परीक्षण जैसी प्रक्रियाओं के बाद समूह-रखे गए पुरुषों में संभावित पीड़ावादी व्यवहार को सीमित किया जा सके। चूहों को तीन समूहों में यादृच्छिक किया गया था: पूंछ हैंडलिंग, सुरंग हैंडलिंग और 3 डी-हैंडलिंग,और उनके संबंधित समूह(चित्रा 2)के डिजाइन के अनुसार खुले कमरे में संभाला गया था। सुरंग से संभाला समूह सत्र से पहले 1 सप्ताह के लिए एक संवर्धन के रूप में सुरंग प्राप्त किया । वे तो दस (10) लगातार दिनों के लिए संभाला गया, व्यवहार परीक्षण से पहले । विभिन्न हैंडलिंग सत्रों के पूरा होने के एक सप्ताह बाद, व्यवहार परीक्षण शुरू हुआ। 16 दिन, चूहों का परीक्षण ईपीएम में किया गया था, और फिर प्रयोगकर्ता इंटरैक्शन टेस्ट में। दो दिन बाद एनएसएफ में चूहों का परीक्षण किया गया। अंत में, 24 दिन पर, रक्त प्रारंभिक हैंडलिंग के रूप में एक ही प्रकार के एक मिनट के हैंडलिंग सत्र के बाद 15 मिनट खींचा गया था ।
व्यवहार परीक्षण के लिए, सुरंग से संभाले गए जानवरों को उनके पिंजरे से जितना संभव हो सुरंग का उपयोग करके उपकरण में स्थानांतरित कर दिया गया था। हालांकि, एलिवेटेड-प्लस भूलभुलैया प्रयोग के लिए, भूलभुलैया के आयामों ने सुरंग का उपयोग करके जानवरों को भूलभुलैया में हटाना या जगह देना मुश्किल बना दिया। इस मामले में, जानवरों को सुरंगों से हाथ में स्थानांतरित कर दिया गया था, और भूलभुलैया में ले जाया गया था । 3 डी-हैंडल चूहों को तीन दिनों में संभाला गया था, सुरंग हैंडलिंग(चित्रा 2)के 8-10 दिनों के साथ समवर्ती। पूंछ संभाला चूहों को संभालने की आदत नहीं थी, लेकिन प्रयोगकर्ताओं के साथ बातचीत के दौरान पूंछ को संभाला गया था। अध्ययन के समय के दौरान, प्रत्येक समूह के लिए उपयोग की जाने वाली उपयुक्त हैंडलिंग तकनीक का उपयोग सुनिश्चित करने के लिए प्रयोगकर्ता द्वारा पिंजरे में परिवर्तन किया गया था।
प्रयोगकर्ता इंटरैक्शन टेस्ट में, जानवरों को स्वेच्छा से प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत करने की इच्छा और एक प्रयोगात्मक संदर्भ(चित्र 3)में हैंडलिंग में आसानी के लिए परीक्षण किया गया था। ANOVA पिंजरे से माउस लेने के प्रयास की संख्या पर प्रदर्शन किया अध्ययन #1 पुरुषों (एफ(२,३१) = 6.36,पी = 0.004) में हैंडलिंग दृष्टिकोण का एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया, और अध्ययन में #2 महिलाओं (एफ(2,33)= 12.21, पी = 0.001) । शेफे के पोस्ट हॉक विश्लेषणों से पता चला है कि चूहों को लेने के लिए आवश्यक प्रयासों की संख्या 3 डी (पुरुषों #1 के अध्ययन में पी = 0.0061) दोनों द्वारा काफी कम हो गई थी, और पी = 0.0002 अध्ययन #2 महिलाओं) और सुरंग हैंडलिंग (पुरुषों #1 के अध्ययन में पी = 0.04, और महिलाओं के अध्ययन #2 में पी = 0.003), पूंछ संभाला समूह(चित्रा 3A) कीतुलना में। ANOVA एक ही चतुर्भुज में बिताए समय पर प्रदर्शन के रूप में हाथ अध्ययन #1 पुरुषों (एफ(२,३१)= 5.38, पी = 0.009) में हैंडलिंग का महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया, और अध्ययन में #2 महिलाओं (एफ(2,33)= 3.5, पी = 0.04; चित्रा 3B)। Scheffe के पोस्ट हॉक विश्लेषणों से पता चला है कि अध्ययन #1 पुरुष चूहों 3 डी हैंडलिंग तकनीक के साथ संभाला प्रयोगकर्ता के हाथ की तुलना में एक ही चतुर्भुज में काफी अधिक समय बिताया, पूंछ से संभाला चूहों (पी = 0.012) की तुलना में । अध्ययन #2, २.५ महीने की महिलाओं में हैंडलिंग समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे । प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत की डिग्री आगे चूहों के केंद्र बिंदुओं(चित्रा 3C-ई)के संयुक्त गर्मी-नक्शे द्वारा प्रदर्शित की जाती है। ये वर्णन कैसे अध्ययन से 3 डी संभाला पुरुष चूहों #1 हाथ के पास क्षेत्रों सहित हाथ के लिए अधिक समय समीपस्थ बिताया है, जबकि पूंछ संभाला चूहों हाथ के साथ सबसे कम समग्र बातचीत की थी ।
3 डी और सुरंग हैंडलिंग के प्रभाव चिंता की तरह व्यवहार के दो परीक्षणों में पूंछ हैंडलिंग की तुलना में थे, नवीनता दबा खिला (NSF) परीक्षण और ऊंचा प्लस भूलभुलैया (EPM) । एनएसएफ परीक्षण में, एनोवा ने दृष्टिकोण के लिए विलंबता पर प्रदर्शन किया, अध्ययन #1 पुरुषों (एफ(2,31) = 3.5,पी = 0.04) में उपयोग की जाने वाली तकनीक को संभालने का प्रभाव दिखाया। अध्ययन में शेफे के पोस्ट हॉक विश्लेषण #1 पुरुषों ने 3 डी-हैंडल किए गए चूहों (पी = 0.08) और सुरंग से संचालित चूहों (पी = 0.08) से रुझान दिखाए, जिसमें पूंछ से संभाले गए चूहों(चित्रा 4A)की तुलना में दृष्टिकोण के लिए कम विलंबता के साथ। अध्ययन #2 में कोई प्रभाव नहीं देखा गया। ANOVA विलंबता पर प्रदर्शन के लिए माउस घर पिंजरे में दृष्टिकोण (डेटा नहीं दिखाया) हैंडलिंग का कोई प्रभाव नहीं दिखाया (पी = 0.88 अध्ययन #1 पुरुषों में, और पी = 0.16 अध्ययन #2 महिलाओं में) । ANOVA EPM में खुली बाहों में प्रतिशत समय पर प्रदर्शन किया अध्ययन #2 महिलाओं (एफ(२,३३) = ३.५,पी = 0.04) में हैंडलिंग का एक महत्वपूर्ण प्रभाव का पता चला । अध्ययन #1 पुरुषों (एफ(2,31)= 2.1, पी = 0.1 में कोई प्रभाव नहीं देखा गया; चित्रा 4B)। है Scheffe पोस्ट हॉक विश्लेषण केवल वृद्धि हुई सुरंग में खुले हाथों में बिताए समय की ओर एक प्रवृत्ति का पता चला अध्ययन #2 से चूहों को संभाला, पूंछ संभाला चूहों (पी = 0.07) की तुलना में । खुली बाहों(चित्रा 4C)में प्रतिशत प्रविष्टियों के बारे में, ANOVA हैंडलिंग का कोई प्रभाव नहीं पता चला, न तो अध्ययन #1 पुरुषों में और न ही अध्ययन में #2 महिलाओं (एफ(२,३१)= १.१२, पी = ०.३३; और एफ(२,३३)= १.३, पी = 0.26, क्रमशः) । व्यवहार स्कोर एक जेड स्कोर में संक्षेप में थे, के रूप में Guilloux एट अलमें 23,पूंछ संभाला चूहों(चित्रा 4D)की तुलना में चिंता की तरह व्यवहार की संभावित कमी पर सूचित । जेड स्कोर पर ANOVA अध्ययन #1 पुरुषों (एफ(२,३१)= 5.6, पी = 0.008) में हैंडलिंग का एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया, लेकिन महिलाओं के अध्ययन #2 में नहीं (एफ(2,33)= 1.07, पी = 0.35) । Scheffe के पोस्ट हॉक विश्लेषणों से पता चला है कि 3 डी हैंडलिंग और सुरंग हैंडलिंग काफी जेड स्कोर (पी = 0.04 और 0.01, क्रमशः) में कमी आई है, पूंछ हैंडलिंग की तुलना में, सुझाव है कि दोनों दृष्टिकोण पुरुषों #1 के अध्ययन में चिंता की तरह व्यवहार कम कर देता है ।
हैंडलिंग के बाद कोर्टिकोस्टेरोन के स्तर का भी संक्षिप्त हैंडलिंग सत्र(चित्रा 5)के 15 मिनट बाद मूल्यांकन किया गया । ANOVA #2 महिलाओं के अध्ययन में हैंडलिंग का एक महत्वपूर्ण प्रभाव पाया (एफ(२,३३)= ४.४४, पी = 0.01), लेकिन अध्ययन #1 पुरुषों में नहीं (एफ(१,३१)= 0.53, पी = 0.59) । महिलाओं #2 अध्ययन में, पोस्ट हॉक विश्लेषणों से पूंछ हैंडलिंग समूह (पी = 0.02) की तुलना में 3 डी-हैंडलिंग समूह से चूहों में कोर्टिकोस्टेरोन के स्तर में उल्लेखनीय कमी का पता चला।
यह निर्धारित करने के लिए कि क्या हैंडलिंग तकनीकों का प्राप्त डेटा की परिवर्तनशीलता पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ा है, हमने बार्टलेट के विचरण की एकरूपता का परीक्षण लागू किया। हमारे परिणामों के अध्ययन में परिवर्तनशीलता में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं मिला #2 माप में महिला चूहों (% समय EPM B(२,३३)= ४.९५, पी = 0.087; % प्रविष्टियां EPM B(2, ३३)= ३.६८, पी = 0.16; एनएसएफ बी(2, 33)= 0.20, पी = 0.91; कॉर्ट बी(2, 33)= 1.69, पी = 0.42)। हालांकि, पुरुष चूहों #1 अध्ययन में, एनएसएफ परीक्षण (बी(2,31)= 8.08, पी = 0.0175) और मापा कॉर्ट स्तरों (बी(2,32)= 11.63, में विचरण की एक महत्वपूर्ण विषमता थी p=0.0029), लेकिन ईपीएम (% समय ईपीएम बी(2,32)= 1.16, पी = 0.56; % प्रविष्टियां ईपीएम बी(2,32)= 2.79, पी = 0.25) के लिए उपायों में से किसी में नहीं। एफ परीक्षण का उपयोग करने के लिए दो विचरण की तुलना से पता चला है कि एनएसएफ परीक्षण विचरण में काफी दोनों 3 डी (एफ(१,२१) = 4.22,पी = 0.04) और सुरंग हैंडलिंग तकनीकों (एफ(1,22)= 4.01; पी = 0.03) पूंछ से निपटने की तुलना में पुरुषों के #1 अध्ययन के लिए कम हो गया था । हैंडलिंग के बाद कॉर्ट की एकाग्रता के लिए, पूंछ से निपटने की तुलना में केवल 3डी-हैंडलिंग ने परिवर्तनशीलता(एफ (1,20)= 9.65, पी = 0.0019) को काफी कम कर दिया।
चित्रा 1। 3डी-हैंडलिंग प्रक्रिया की प्रतिनिधि छवियां। छवियां 3डी-हैंडलिंग प्रक्रिया को दर्शाती हैं। एक) पिंजरे में हाथ: प्रयोगकर्ता के हाथ पिंजरे में रखा जाता है और अभी भी रखा जाता है, जिससे माउस पिंजरे में हाथ की उपस्थिति के लिए आदत डालता है। ख) फ्लैट हाथ: पिंजरे से पहले हटाने पर, माउस हाथ की सपाट हथेली पर रखा जाता है। माउस स्वतंत्र रूप से हथेली के चारों ओर चल सकता है और आसन्न फ्लैट हाथों के बीच जा सकता है। ग) रोल: माउस के चारों ओर एक ढीला "कप" बनाने के लिए हाथ की हथेली को आराम दें। धीरे से कप को विपरीत हाथ में झुकाएं माउस को स्वतंत्र रूप से इस हाथ में ले जाना चाहिए, यदि धीरे से इसे दूसरे हाथ में मार्गदर्शन न करें। घ) आश्रय: हाथ के किनारे पर माउस की स्थिति तो दोनों हाथों को एक साथ लाने के लिए और बहुत धीरे माउस के आसपास कप फार्म । माउस को रोका नहीं जाना चाहिए और एक खोलने को छोड़ दिया जाना चाहिए ताकि माउस बच सके। ~ 5-10 एस के लिए पकड़ो और फिर फ्लैट हाथों के लिए खुला। ई) सिर/बैक पेटिंग: जबकि माउस हाथ की सपाट हथेली की खोज कर रहा है, धीरे से सिर और पीठ पर माउस पालतू । यह ऊपर से प्रयोगकर्ता के दृष्टिकोण के लिए माउस को आदी करता है। एफ) नाक प्रहार: जब माउस को संभालने की आदत प्रतीत होती है, तो माउस को सीधे थूथन पर छूने का प्रयास करें। यदि माउस अपने सिर को दूर नहीं ले जाता है तो इसे संभालने के लिए अच्छी तरह से आदी है। जी) यह अंतिम दिन पर एक छोटी (2-3 एस) गर्दन चुटकी प्रदर्शन करने के लिए संभव है, भविष्य में विवाद की आवश्यकता के हस्तक्षेप की स्थिति में जानवरों की आदत को मापने के लिए । जब हैंडलिंग की आदत होती है, तो चूहे गर्दन चुटकी के दौरान स्थिर रहते हैं, जबकि गैर-आदी चूहे विवाद से मुक्त होने के लिए अपनी पूंछ घुमाकर भागने की कोशिश करेंगे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2। प्रायोगिक डिजाइन। सुविधा में आने के बाद, पूंछ संभाला चूहों कोई आदत नहीं मिली । सुरंग से संभाले चूहों को हैंडलिंग शुरू होने से पहले एक सप्ताह के लिए अपने घर पिंजरे में सुरंगों की आदत थी । सुरंग संभाला चूहों 10 दिनों के लिए सुरंग हैंडलिंग तकनीक के साथ संभाला गया (हैंडलिंग के पहले दिन = दिन 1), जबकि 3 डी संभाला चूहों तीन दिनों के लिए आदत थी (दिन 8-10) । चूहों तो ऊंचा प्लस भूलभुलैया (EPM) (16 दिन), प्रयोगकर्ता बातचीत परीक्षण (19 दिन), नवीनता दबा खिला (दिन 21) के अधीन थे, और एक संक्षिप्त हैंडलिंग सत्र CORT माप (दिन 24) के लिए सीरम संग्रह के बाद । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3। हैंडलिंग में आसानी और प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत करने की इच्छा पर तीन हैंडलिंग तकनीकों का प्रभाव। ए) पिंजरे से माउस को हटाने के लिए आवश्यक प्रयासों की औसत संख्या। पुरुष #1 अध्ययन (बाएं पैनल, पूंछ हैंडलिंग एन = 12, सुरंग हैंडलिंग एन = 12 और 3डी हैंडलिंग एन = 11) और अध्ययन #2 महिला (दाएं पैनल, एन = 12 प्रति समूह) चूहों दोनों सुरंग और 3 डी-हैंडल समूहों से चूहों ने पूंछ से संभाले चूहों की तुलना में उन्हें पिंजरे से हटाने के लिए आवश्यक प्रयासों की संख्या में उल्लेखनीय कमी प्रदर्शित की। ख) प्रयोगकर्ता के हाथ के रूप में पिंजरे के एक ही चतुर्भुज में एक जानवर द्वारा बिताए गए समय की औसत राशि । अध्ययन #1 पुरुष चूहों 3 डी तकनीक के साथ संभाला प्रयोगकर्ता के हाथ के रूप में एक ही चतुर्भुज में बिताए समय में एक महत्वपूर्ण वृद्धि दिखाई । सी-ई) एथोविजन एक्सटी 14 में प्रदान किए गए समय तक माउस सेंटर-पॉइंट के औसत हीट-मैप्स ने अध्ययन #1 3 डी-हैंडल किए गए पुरुष चूहों के प्रयोगकर्ता के साथ बढ़ी हुई खोज और बातचीत का प्रदर्शन किया। त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM. * पी<0.05, **p<0.01 पूंछ संभाला समूह की तुलना में । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 4। चिंता जैसे व्यवहार पर तीन हैंडलिंग तकनीकों का प्रभाव। ए) पुरुष चूहों (पूंछ हैंडलिंग एन = 12 #1, सुरंग हैंडलिंग एन = 12 और 3 डी हैंडलिंग एन = 11) और अध्ययन #2 महिला चूहों (एन = 12/समूह) में नवीनता दबा फीडिंग चैंबर में गोली पर दृष्टिकोण और फ़ीड करने के लिए विलंबता। अध्ययन से डेटा 3 डी हैंडलिंग और सुरंग से निपटने समूहों में पुरुष चूहों #1 है कि गोली दृष्टिकोण विलंबता की महत्वपूर्ण कमी की दिशा में एक प्रवृत्ति दिखाई । ख) ऊंचा प्लस भूलभुलैया की खुली बाहों में बिताए गए समय के% का मतलब है । अध्ययन #1 पुरुषों में समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे, और सुरंग से निपटने समूह में महिलाओं के अध्ययन #2 द्वारा खुली बाहों में अधिक समय की ओर एक प्रवृत्ति । ग) खुली बाहों में प्रविष्टियां: अध्ययन #1 पुरुषों में समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे, न ही अध्ययन #2 महिलाओं में । घ) जेड स्कोर चिंता की तरह व्यवहार सारांश । ए, बी और सी में प्रस्तुत डेटा का उपयोग करते हुए, एक जेड-स्कोर की गणना संदर्भ के रूप में पूंछ से संभाले गए चूहों का उपयोग करके की गई थी। जेड-स्कोर में कमी से पता चलता है कि एनएसएफ और ईपीएम परीक्षणों द्वारा मापा जाने वाले चिंता जैसे व्यवहार में कमी आती है । अध्ययन #1 पुरुष चूहों 3 डी या सुरंग तकनीक का उपयोग कर संभाला पूंछ से संभाला चूहों की तुलना में एक कम चिंता की तरह फेनोटाइप दिखाया । त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM. * पी<0.05 पूंछ से संभाला समूह की तुलना । टी पूंछ संभाला समूह की तुलना में महत्व के रुझान स्तर (पी<0.1) दर्शाया गया है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 5। हैंडलिंग के बाद कोर्टिकोस्टेरोन का स्तर। सीरम एक संक्षिप्त हैंडलिंग सत्र के बाद 15 मिनट एकत्र किया गया था और फिर CORT स्तर दोनों अध्ययन #1 पुरुष (पूंछ हैंडलिंग एन = 12, सुरंग हैंडलिंग एन = 12 और 3 डी हैंडलिंग एन = 11) और अध्ययन #2 महिला चूहों (एन = 12/समूह) में एलिसा द्वारा मापा गया । अध्ययन #2 महिला चूहों 3 डी हैंडलिंग तकनीक के माध्यम से संभाला पूंछ द्वारा संभाला चूहों की तुलना में कम कोर्टिकोस्टेरोन स्तर दिखाया । अध्ययन में ANOVA #1 पुरुष चूहों समूहों (पी = 0.5) के बीच मतभेदों के लिए महत्व तक नहीं पहुंचा। त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM. * पी<0.05 पूंछ संभाला समूह की तुलना में । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
तालिका 1।
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Discussion
यह अध्ययन और विधि विकास अवलोकन पर आधारित है कि चूहों में हैंडलिंग तकनीकों को अभी भी वैज्ञानिक समुदाय द्वारा अनदेखा किया जाता है, और कुछ प्रयोगशालाएं प्रयोगों से पहले अपने जानवरों के तनाव और प्रतिक्रियाशीलता को कम करने के लिए आदत या हैंडलिंग तकनीकों को लागू करने में अनिच्छुक हैं। एक समय प्रतिबद्धता का प्रतिनिधित्व करते हुए, पशु हैंडलिंग उन जानवरों को लाभकारी प्रभाव प्रदान करती है जो किए जाने वाले प्रयोगों की सफलता में योगदान दे सकते हैं और डेटा परिवर्तनशीलता या पशु ओवर-रिएक्टिविटी के कारण प्रयोगों को कई बार करने से रोकते हैं। 3 डी हैंडलिंग तकनीक के उपयोग चूहों में भागने के प्रयास में कमी आई । यह भी प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत में वृद्धि हुई है और हमारे 6 महीने पुराने पुरुष चूहों में चिंता की तरह फेनोटाइप में कमी आई । इसके अलावा, 3डी-हैंडलिंग ने डेटा परिवर्तनशीलता में कमी की और हैंडलिंग के केवल 3 शुरुआती दिनों के बाद २.५ महीने पुरानी मादा चूहों में कोर्टिकोस्टेरोन के स्तर में कमी आई । यह दृष्टिकोण चिकनी परिवहन और आसान हस्तक्षेप को सुविधाजनक बनाने वाले प्रयोगकर्ता द्वारा माउस को संभालने के लिए कोमल जोड़तोड़ पर निर्भर करता है।
3 डी-हैंडलिंग तकनीक से जोर देने लायक कुछ यह है कि माउस की प्रतिक्रियाशीलता के जवाब में हैंडलिंग विधियों की प्रगति होती है, जो ऊपर और तालिका 1में वर्णित मील के पत्थर की उपलब्धि पर निर्भर करती है। पशुओं को अगले चरणों में प्रगति करने से पहले एक हैंडलिंग चरण के प्रति प्रतिक्रियाशीलता कम होनी चाहिए थी । जानवरों पर "आश्रय" या "नाक-प्रहार" कदमों के लिए बहुत जल्दी प्रगति करने का प्रयास करना, जो पर्याप्त रूप से आदी नहीं हैं, तनाव में वृद्धि और संभावित रूप से प्रक्रिया की प्रभावशीलता को कम करने की संभावना होगी। इसी तरह, हैंडलिंग के प्रत्येक दिन जानवर की प्रतिक्रिया पर नजर रखी जानी चाहिए और यह तय करते समय विचार किया जाना चाहिए कि अतिरिक्त हैंडलिंग दिनों की आवश्यकता है या नहीं। यदि जानवर पहले दिन आश्रय परीक्षण के लिए अच्छी तरह से जवाब नहीं देते हैं, पहले मील का पत्थर प्राप्त करने के लिए मानदंडों को पूरा नहीं करते हैं, तो हैंडलिंग का पहला दिन मील का पत्थर पूरा होने तक दोहराया जा सकता है । इसी तरह अगर दूसरे दिन जानवर नाक प्रहार टेस्ट का जवाब देने में नाकाम रहते हैं तो दूसरे दिन भी दोहराया जा सकता है। इस दृष्टिकोण के साथ ध्यान दें करने के लिए एक और चेतावनी यह है कि चूहों के दूर कूदने का खतरा हैंडलिंग के पहले दिन अधिक है, विशेष रूप से C57BL6 जैसे उछल उपभेदों में। ऊपर वर्णित दिशा निर्देशों का पालन कूद के जोखिम को कम करना चाहिए, और इस तरह के व्यवहार को सीमित करने के तरीके प्रदान करते हैं । चरणों के माध्यम से हैंडलिंग और प्रगति की अवधि उपभेदों के आधार पर भिन्न हो सकती है, खासकर यदि ट्रांसजेनिक मॉडल के साथ काम करना उत्सुक फेनोटाइप प्रदर्शित करने के लिए जाना जाता है।
कई कारक प्रस्तुत 3 डी हैंडलिंग तकनीक की प्रभावशीलता को कम करने में योगदान कर सकते हैं। ऐसा ही एक कारक प्रयोगकर्ता से संभावित भय या हिचकिचाहट है, प्रयोगकर्ता के माउस हैंडलिंग से परिचित नहीं होने की स्थिति में, या चूहों से डरता है। इसलिए, हैंडलर पर प्रभाव भी विचार करने के लिए कुछ है। हालांकि, चूहों के साथ बातचीत के स्तर में क्रमिक वृद्धि नौसिखिए प्रयोगकर्ताओं को हैंडलिंग तकनीक के प्रदर्शन में आत्मविश्वास और अधिक कौशल विकसित करने की अनुमति देती है क्योंकि वे हैंडलिंग चरणों के माध्यम से आगे बढ़ते हैं। प्रस्तावित कदम/मील के पत्थर (आश्रय और नाक प्रहार परीक्षण) नौसिखिए संचालकों में संभावित मानव परिवर्तनशीलता का मुकाबला करने में मदद कर सकते हैं, यह सुनिश्चित करना है कि जानवरों की आदत के समान स्तर तक पहुंचने । यह सूचित किया गया है कि पशुओं के साथ सकारात्मक मानव-पशु बातचीत को बढ़ावा देने के परिणामस्वरूप पशु देखभाल कर्मचारियों में जीवन की अधिक गुणवत्ता और करुणा संतुष्टिहुईथी । जैसे, हैंडलिंग से जेंटलिंग किसी भी सामान्य बातचीत या हस्तक्षेप के दौरान हैंडलर और जानवर दोनों को लाभ देता है।
माउस को लेने के प्रयासों की संख्या को कम करने पर इसके प्रभाव के साथ, दोनों 6 महीने पुराने पुरुषों और २.५ महीने की महिलाओं में, 3 डी हैंडलिंग सुरंग हैंडलिंग या अंय तकनीकों के लिए एक विकल्प प्रदान करता है, उनके पिंजरे से प्रयोगात्मक उपकरण के लिए जानवरों के आसान हस्तांतरण की सुविधा । 3डी हैंडलिंग तकनीक ने प्रयोगकर्ता के साथ 6 महीने के पुरुष चूहों की बातचीत भी बढ़ाई । यह २.५ महीने पुरानी मादा चूहों में नहीं देखा गया था, लेकिन पूंछ से संभाले चूहों की तुलना में मादा चूहों को उठाना आसान बना रहा । इससे पता चलता है कि 3डी-हैंडलिंग तकनीक पशु और प्रयोगकर्ता के बीच सीधी बातचीत की आवश्यकता वाले प्रयोगों के लिए अधिक उपयुक्त हो सकती है, जैसे मॉरिस पानी की भूलभुलैया (संभावित सेक्स/आयु भ्रमित करने वाले कारकों के बावजूद बाद में चर्चा की) । दूसरों को विकसित किया है और मैनुअल हैंडलिंग तकनीकों का इस्तेमाल किया, अतिरिक्त हेरफेर10के बिना, cupped हाथों के साथ जानवरों को उठा से मिलकर । जबकि इन तकनीकों ने लाभकारी प्रभाव दिखाया, साहित्य में डेटा अक्सर 10 दिनों9,16से अधिक आदत अवधि के साथ हैंडलिंग प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। इसके अतिरिक्त, 3डी-हैंडलिंग द्वारा प्रदान की गई परिष्कृत बातचीत के बिना क्यूप्ड-हैंडलिंग उछल उपभेदों के लिए उपयुक्त नहीं हो सकती है जो हाथों से बाहर और दूर कूदते रहते हैं। जब तक हम कप विधि के लिए इस अध्ययन में एक सीधी तुलना नहीं किया था, 3 डी हैंडलिंग इस पते और परिष्कृत चालों पर निर्भर करता है माउस और हैंडलर के बीच बातचीत को बढ़ावा । घोसल एट अल द्वारा किए गए अध्ययन में5 दिनों के लिए मालिश के साथ संयुक्त कप-हैंडलिंग तकनीक का उपयोग किया गया, और इस तकनीक से पता चला कि मेटाबोलिक एंडपॉइंट्स पर तनाव का प्रभाव सीमित है, बेहतर प्रभावकारिता के लिए हैंडलिंग के दौरान परिष्कृत चालों और बातचीत की आवश्यकता को रेखांकित करता है। इस कप-मालिश तकनीक के आधार पर, 3 डी-हैंडलिंग चूहों को आदत बनाने के लिए अतिरिक्त बातचीत का उपयोग करता है। 3 डी-हैंडलिंग दृष्टिकोण का उपयोग करके, हैंडलर्स यह सुनिश्चित करते हैं कि सभी चूहे मानकीकृत चालें चलाकर और प्रक्रिया की अवधि को प्रत्येक जानवर के लिए अनुकूल बनाकर अपनी आवश्यकता के आधार पर (वर्तमान अध्ययन में, सभी चूहों ने मील के पत्थर पारित किए और 3 दिनों में 3 डी-हैंडलिंग प्रोटोकॉल समाप्त किया)। इस दृष्टिकोण को प्रत्येक माउस के लिए "व्यक्तिगत" माना जा सकता है, इसलिए सभी जानवर हैंडलिंग के प्रत्येक दिन आदत के वांछित स्तर तक पहुंचते हैं। जैसा कि पहले बताया गया है, यदि जानवर प्रोटोकॉल में वर्णित मील के पत्थर तक नहीं पहुंचते हैं, तो दिनों की संख्या बढ़ाकर इस तकनीक को समायोजित किया जा सकता है। इस तकनीक ने व्यवहार अध्ययन और शारीरिक माप (कॉर्ट स्तर) में जानवरों के बीच परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए लाभकारी प्रभाव दिखाया, यह सुझाव देते हुए कि यह दृष्टिकोण अंतर-अध्ययन परिवर्तनशीलता को कम करने में योगदान दे सकता है और प्रयोगात्मक त्रुटि के प्रभाव को कम कर सकता है संभावित रूप से प्रीक्लिनिकल अध्ययनों में पक्षपातपूर्ण परिणाम चलाना।
समर्थन परिणामों का सुझाव दिया है कि चूहों 3 डी के अधीन-और सुरंग हैंडलिंग प्रदर्शनी नवीनता दबा खिला परीक्षण में चिंता कम, पूंछ से संभाला चूहों की तुलना में । एनएसएफ और ईपीएम से संयुक्त आंकड़ों को ध्यान में रखते हुए, दोनों दृष्टिकोणों ने 6 महीने पुराने पुरुष चूहों में चिंता को कम करने में महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया । यह उन निष्कर्षों को दोहराता है कि सुरंग हैंडलिंग के आदी जानवरों ने हैंडलिंग के 10 + दिनों के बाद चिंता9,15 के लिए परीक्षणों में सुधार किया था, और इसी तरह के प्रभावों को प्रदर्शित करने के लिए 3डी-हैंडलिंग की क्षमता को और प्रदर्शित करता है। यह भी पता चला है कि 3 डी संभाला 6 महीने पुराने पुरुष चूहों दृष्टिकोण और स्वेच्छा से 6 महीने पुराने पुरुष चूहों सुरंग और पूंछ हैंडलिंग के अधीन से अपने प्रयोगकर्ता के साथ अधिक बातचीत । महत्वपूर्ण बात, २.५ महीने पुरानी महिला चूहों 3 डी हैंडलिंग के अधीन CORT के स्तर को कम कर दिया था, जो पहले प्रकाशित परिणाम9के साथ समझौते में है । दो अध्ययनों (6 महीने पुराने पुरुषों में अध्ययन #1 और २.५ महीने पुरानी महिलाओं में अध्ययन #2) की पुष्टि की, दो अलग तरीकों से है कि हैंडलिंग चिंता पर लाभकारी प्रभाव पड़ता है फेनोटाइप की तरह (या तो अध्ययन #1 में व्यवहार परिणामों पर, या अध्ययन #2 में CORT स्तर पर) ।
प्रभाव के लिए एक संभावित योगदान कारक प्रयोगकर्ता का लिंग है, इस मामले में पुरुष। यह Sorge एट अल द्वारा दिखाया गया है कि पुरुष प्रयोगकर्ताओं की उपस्थिति कॉर्ट और पुरुष में व्यवहार कीतरह चिंता में वृद्धि करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, लेकिन महिला चूहों नहीं । यह वर्तमान अध्ययन के परिणामों के विपरीत है । इस अध्ययन और Sorge एट अल से अध्ययन के बीच प्रमुख अंतरयह है कि यहां वर्णित दृष्टिकोण चूहों को संभालने के लिए आदत पर होते हैं, प्रयोगकर्ता के साथ सकारात्मक (गैर प्रबलित) बातचीत को बढ़ावा देने के द्वारा, जबकि Sorge एट अल25 भोली कृंतक है कि मनुष्यों के साथ बातचीत कभी नहीं इस्तेमाल किया । कोई उम्मीद कर सकता है कि भोले चूहों को मानव प्रयोगकर्ताओं के खिलाफ एक मजबूत प्रतिक्रिया हो सकती है यदि वे यह नहीं सीखते हैं कि प्रयोगकर्ता खतरे का प्रतिनिधित्व नहीं करता है। हालांकि, वर्तमान अध्ययन केवल एक पुरुष प्रयोगकर्ता के साथ किया गया था, और भविष्य के अध्ययनों की जांच करनी चाहिए कि क्या इस तरह के प्रभाव एक महिला प्रयोगकर्ता के साथ प्रजनन योग्य हैं। हालांकि इन कारकों को अलग करना इस कागज के दायरे से बाहर है, यह हैंडलिंग आदत को लागू करते समय परिवर्तनशीलता के ऐसे स्रोतों की पहचान करने के महत्व को उजागर करने लायक है, या प्रयोगात्मक डिजाइन में अधिक आम तौर पर ।
वर्तमान अध्ययनमें चूहों9,10, 11में चिंता जैसे व्यवहार और कॉर्ट के स्तर को कम करने में सुरंग से निपटने की तकनीक की प्रभावकारिता की भी पुष्टि कीगई। इस दृष्टिकोण का एक अतिरिक्त लाभ यह है कि सुरंग को संवर्धन26के रूप में पिंजरे में छोड़ा जा सकता है, जो कम तनाव/चिंता प्रतिक्रिया में भी योगदान दे सकता है, जो पूरी तरह से बेहतर कल्याण10,11में योगदान दे सकता है । इस मामले में, प्रयोगकर्ता की भूमिका केवल सुरंग में हेरफेर करने के लिए है, प्रत्येक जानवर के साथ, एक मिनट के लिए। हालांकि, जैसा कि गौवेया एट अल19द्वारा वर्णित है, सुरंग को घर के पिंजरे में रहने की आवश्यकता नहीं है और इसके बजाय जानवरों को केवल तभी प्रस्तुत किया जा सकता है जब अतिरिक्त तनाव पैदा किए बिना जानवरों को स्थानांतरित करने की आवश्यकता होती है। दोनों दृष्टिकोण, सुरंग और 3 डी हैंडलिंग तकनीक, लाभ है कि प्रयोगशाला और प्रयोगकर्ताओं द्वारा मूल्यांकन किया जाना चाहिए ताकि निर्धारित करने के लिए जो दृष्टिकोण उनकी जरूरतों के लिए सबसे उपयुक्त है प्रदान करते हैं । वर्तमान अध्ययन में, सुरंग पिंजरे में छोड़ दिया गया था, और प्रभाव हम चिंता की तरह व्यवहार पर मनाया सुरंग हैंडलिंग और संवर्धन के संयोजन के कारण हो सकता है ।
जबकि दोनों लाभकारी प्रभाव प्रदान करते हैं, 3 डी और सुरंग से निपटने की तकनीक सीमाओं के बिना नहीं हैं । एक साझा सीमा यह है कि यह समय लेने वाली और संभावित रूप से पशु सुविधाओं के लिए हतोत्साहित करने के लिए ऐसी प्रक्रियाओं को लागू किया जा सकता है । हालांकि, जोड़ा लाभ अमूल्य हैं, तनाव को कम करने और प्रयोगकर्ता और पशु देखभाल प्रदाताओं के साथ बातचीत में सुधार (जैसा कि स्पैनजेनबर्ग और केलिंग27में वर्णित है), और अनुसंधान विश्वसनीयता और प्रजनन क्षमता के द्वारा पशु कल्याण में सुधार । हमारी सुविधा से सबूत पता चलता है कि इस तकनीक जानवरों और पशुपालन कर्मचारियों के बीच बातचीत में सुधार, पिंजरे परिवर्तन और स्वास्थ्य की निगरानी की सुविधा । हमारी सुविधा में अन्य उपयोगकर्ताओं से, विवाद और समग्र हेरफेर को हैंडल किए गए चूहों के साथ काफी आसान होने के रूप में सूचित किया जाता है, हमारे निष्कर्षों के अनुरूप है कि चूहों को 3 डी-तकनीक के साथ संभाला जाता है, जब उठाया जा रहा है और हमारे उदाहरण में, 6 महीने के पुरुषों को अपने प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत करने के लिए अधिक प्रवण होते हैं। अनुवर्ती अध्ययन तकनीक की उपयोगिता को और प्रदर्शित करने के लिए ऐसे प्रभावों की मात्रा निर्धारित कर सकते हैं। कुल मिलाकर, यह 3 डी-हैंडलिंग दृष्टिकोण, साथ ही सुरंग-दृष्टिकोण, 3Rs के शासन में योगदान देता है, विशेष रूप से हैंडलिंग के जवाब में तनाव को कम करने के लिए नियमित पशु बातचीत को परिष्कृत करके। डेटा की परिवर्तनशीलता में देखी गई कमी को देखते हुए, इसमें लगातार परिणाम प्राप्त करने और परिवर्तनशीलता को सीमित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले दृष्टिकोण को परिष्कृत करने के लिए आवश्यक पशुओं की संख्या को कम करने की क्षमता भी है ।
प्रस्तुत आंकड़ों के आधार पर चर्चा का एक और बिंदु यह है कि यह अध्ययन जानवरों के साथ किया गया था एक घर जा रहा है । एकल आवास को प्राथमिकता दी गई क्योंकि यह संभावित पीड़ावादी व्यवहार (विशेष रूप से पुरुष चूहों में) को सीमित करता है, जो अंतर-व्यक्तिगत परिवर्तनशीलता28, 29में योगदान दे सकता है। समूहों के बीच निरंतरता के लिए, सभी जानवर एकल रखे गए थे। यह भी ध्यान रखना दिलचस्प है कि चूहे गुदगुदी के रूप में चूहों में सकारात्मक प्रयोगकर्ता-पशु बातचीत, एकल रखे गए चूहों में सामाजिक अलगाव के कुछ प्रभावों को कम करने में सक्षम था30,31। यह संभव है कि पशु और प्रयोगकर्ता के बीच सीधे संपर्क से जुड़ी हैंडलिंग तकनीक, जैसे 3डी-हैंडलिंग तकनीक या घोसल एट अल द्वारा वर्णित कप-मसाज तकनीक।11 का समान प्रभाव हो सकता है। भविष्य के अध्ययन एकल और समूह में रखे जानवरों में हैंडलिंग तकनीकों के प्रभावों की तुलना करके इस सवाल का पता लगा सकते हैं । पिछले अध्ययनों ने समूह-स्थित सेटिंग में चूहों के साथ कप और सुरंग हैंडलिंग दृष्टिकोणों के प्रभाव की जांच की, और इसी तरह के परिणामप्राप्त किए 7,8। यह पुष्टि करता है कि एकल-घर या समूह-घर की स्थितियों में रखे गए जानवरों के साथ यहां वर्णित हैंडलिंग प्रोटोकॉल का उपयोग करना संभव है, एक जानवर को पिंजरे से बाहर ले जाने और इसे वापस रखने (विशेष रूप से पुरुष चूहों में, या आक्रामक माउस लाइनों में) को ध्यान में रखते हुए। ऐसे मामलों में, सभी जानवरों को एक साथ फिर से समूहीकृत करने से पहले एक अस्थायी पिंजरे का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।
समाप्त करने के लिए, प्रस्तावित 3 डी-हैंडलिंग दृष्टिकोण चूहों में प्रतिक्रियाशीलता और तनाव को कम करने में योगदान देता है। यह हैंडलिंग के 3 दिनों के बाद परिवर्तनशीलता को कम करके डेटा विश्वसनीयता को भी बढ़ाता है। इसी तरह के परिणाम सुरंग हैंडलिंग के साथ नमूदार हैं, सुरंग हैंडलिंग के 10 दिनों के बाद हमारे मामले में । सुरंग हैंडलिंग तकनीक की तुलना में, 3डी-हैंडलिंग तकनीक ने हमारे 6 महीने पुराने पुरुष चूहों में एक प्रयोगकर्ता के साथ बातचीत बढ़ाने का लाभ प्रदान किया, जो कुछ मामलों में महत्वपूर्ण हो सकता है। यदि 3 डी या सुरंग हैंडलिंग तकनीक को सभी पशु सुविधाओं में लागू किया जाना था जो डेटा उत्पादन के लिए एक बड़े सुधार का प्रतिनिधित्व करेंगे और अनुसंधान में पशु उपयोग को कम करने में बहुत योगदान देंगे ।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है ।
Acknowledgments
लेखक इस काम का समर्थन करने के लिए CAMH की पशु देखभाल समिति का शुक्रिया अदा करते हैं, साथ ही साथ CAMH के पशु देखभाल करने वालों को जो प्रक्रिया की उपयोगिता पर व्यापक प्रतिक्रिया प्रदान करते हैं, वर्णित प्रयोगों के निष्पादन और अन्य उपयोगकर्ताओं के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने के लिए प्रेरित करते हैं। यह काम CAMH BreakThrough चैलेंज द्वारा वित्त पोषित भाग में था, टीपी को संमानित किया, और CAMH से आंतरिक धन द्वारा ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 23 G x 1 in. BD PrecisionGlide general use sterile hypodermic needle. Regular wall type and regular bevel. | BD | 2546-CABD305145 | Needles for Blood collection |
| BD Vacutainer® Venous Blood Collection EDTA Tubes with Lavender BD Hemogard™ closure, 2.0ml (13x75mm), 100/pk | BD | 367841 | EDTA Coated tubes for blood collection |
| Bed’o cobs ¼” Corn cob laboratory animal bedding | Bed-O-Cobs | BEDO1/4 | Novel bedding for novelty suppressed feeding |
| Centrifuge | Eppendorf | Centrifuge 5424 R | For centrifugation of blood. |
| Corticosterone ELISA Kit | Arbor Assays | K003-H1W | |
| Digital Camera | Panasonic | HC-V770 | Camera to record EPM/Experimenter interactions |
| Elevated Plus Maze | Home Made | n/a | Custom Maze made of four black Plexiglas arms (two open arms (29cm long by 7 cm wide) and two enclosed arms (29 cm long x7 cm wide with 16 cm tall walls)) that form a cross shape with the two open arms opposite to each other held 55 cm above the floor |
| Ethanol | Medstore House Brand | 39753-P016-EA95 | Dilute to 70% with Distilled water, for cleaning |
| Ethovision XT 15 | Noldus | n/a | Automated animal tracking software |
| Laboratory Rodent Diet | LabDiet | Rodent Diet 5001 | Standard Rodent diet |
| Memory Card | Kingstone Technology | SDA3/64GB | For video recording and file transfer |
| Novelty Suppressed Feeding Chamber | Home Made | n/a | Custom test plexiglass test chamber with clear floors and walls 62cm long, by 31cm wide by 40cm tall . |
| Parlycarbonate tubes | Home Made | n/a | 13 cm in length and 5cm in diameter |
| Purina Yesterday’s news recycled newspaper bedding | Purina | n/a | Standard Bedding |
| Spectrophotometer | Biotek | Epoch Microplate Reader |
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