Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

Farelerde Stresi Azaltmak için Elleçleme Teknikleri

Published: September 25, 2021 doi: 10.3791/62593
Automatic Translation
1, 1,2, 3, 4, 5, 1,2,3, 1,2
1Campbell Family Mental Health Research Institute of CAMH, 2Department of Psychiatry, University of Toronto, 3Department of Pharmacology and Toxicology, University of Toronto, 4Departamento de Investigación, Universidad Central de Queretaro, 5Centre National de la Recherche Scientifique, UMR 5287, Institut de Neurosciences Cognitives et Intégratives d'Aquitaine, Université de Bordeaux

Summary

Bu makalede, farelerde anksiyete benzeri davranışları azaltarak rutin elleçlemeyi kolaylaştıran ve mevcut iki ilgili teknikle (tünel ve kuyruk elleçleme) ayrıntıları sunan 3D işleme tekniği açıklanmaktadır.

Abstract

Laboratuvar hayvanları bilim adamları veya hayvan bakım sağlayıcıları tarafından birden fazla manipülasyona maruz kalır. Bunun neden olduğu stres hayvan refahı üzerinde derin etkilere sahip olabilir ve ayrıca anksiyete önlemleri gibi deneysel değişkenler için şaşırtıcı bir faktör olabilir. Yıllar geçtikten sonra, elleçleme ile ilgili stresi en aza indiren elleçleme teknikleri, farelere özel bir odaklanma ve farelere çok az dikkat ile geliştirilmiştir. Bununla birlikte, farelerin işleme teknikleri kullanılarak manipülasyonlara alışabileceği gösterilmiştir. Fareleri elleçlemeyi alışkanlık haline getirmek stresi azaltır, rutin kullanımı kolaylaştırır, hayvan refahını artırır, veri değişkenliğini azaltır ve deneysel güvenilirliği artırır. Kullanımın yararlı etkilerine rağmen, özellikle stresli olan kuyruk toplama yaklaşımı hala yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu makale, insan etkileşimi sırasında hayvanın yaşadığı stresi en aza indirmeyi amaçlayan yeni geliştirilen bir fare işleme tekniğinin ayrıntılı bir açıklamasını ve gösterimini sunmaktadır. Bu manuel teknik 3 gün boyunca gerçekleştirilir (3D işleme tekniği) ve hayvanın deneyciye alışkanlık yapma kapasitesine odaklanır. Bu çalışma ayrıca daha önce kurulmuş tünel işleme tekniklerinin (polikarbonat tünel kullanarak) ve kuyruk toplama tekniğinin etkisini göstermektedir. Özellikle incelenenler, davranışsal testler (Elevated-Plus Maze ve Novelty Suppressed Feeding), deneycilerle gönüllü etkileşim ve fizyolojik ölçüm (kortikosteron seviyeleri) kullanarak anksiyete benzeri davranışlar üzerindeki etkileridir. 3D işleme tekniği ve tünel işleme tekniği anksiyete benzeri fenotipleri azalttı. İlk deneyde, 6 aylık erkek fareler kullanılarak, 3D işleme tekniği deneyci etkileşimini önemli ölçüde geliştirdi. İkinci deneyde, 2,5 aylık dişi kullanarak kortikosteron seviyelerini azalttı. Bu nedenle, 3D işleme, deneyciyle etkileşimin gerekli olduğu veya tercih edildiği veya deneme sırasında tünel işlemenin mümkün olmayabileceği senaryolarda yararlı bir yaklaşımdır.

Introduction

Fareler ve sıçanlar preklinik çalışmalar için temel varlıklardır1,2 endokrinal, fizyolojik, farmakolojik veya davranışsal çalışmalar dahil olmak üzere birden fazla amaç için2. Hayvanlarla ilgili artan sayıda çalışmadan, insan etkileşimi de dahil olmak üzere kontrolsüz çevresel değişkenlerin biyomedikal araştırma3, 4,5'teçeşitli sonuçları etkilediği ortaya çıktı. Bu, deneyler ve araştırma laboratuvarları4,5, hayvan araştırmalarında büyük bir uyarı oluşturan önemli değişkenliklerden sorumludur.

Çevresel stresörlerin etkisini sınırlamak ve reaktiviteyi insan etkileşimine indirgemek amacıyla çeşitli yaklaşımlar uygulanmıştır. Örneğin, çevresel stresörlerin etkisini sınırlamak için laboratuvarlarda konut koşullarının standardizasyonu ve otomatik konut sistemleri6,7 uygulanmıştır. İnsanlarla etkileşimle ilgili olarak, hayvanları işlemek ve taşımak için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar, hayvan rahatsızlığı ve stresine çok az saygı duyardı. Örneğin, hayvanları kuyruklarından almak veya forseps8 kullanmak temel kaygıyı arttırır9,10,11, keşif 9,12'yi azaltır ve çalışmalar içinde ve genelinde bireyler arası değişkenliğe büyük katkıda bulunur13,14. Sonuç olarak, fareler ve sıçanlar için geçerli olan bardak elleçleme tekniği gibi başka yaklaşımlar geliştirilmiştir. Bu yaklaşımda, hayvanlar kafeslerinden "fincanlanır" ve deneyciler tarafından elleri bir fincan oluşturan9, 10,11. Kuyruk işlemeye bir başka yararlı alternatif, fareleri aktarmak için bir polikarbonat tünelin kullanılmasını içerir9,10,15. Bu yaklaşım, fare ve deneyci arasındaki doğrudan etkileşimi ortadan kaldırır. Hem fincan hem de tünel yaklaşımları, kuyruk alma / kuyruk taşıma9,10gibi aversive elleçleme teknikleri ile abartılabilecek anksiyete benzeri davranışları ve deneycinin korkusunu azaltmada etkinlik gösterdi.

Bu nedenle, artan kanıtlar, bireyler arasındaki değişkenliği azaltmak için uygun fare kullanımı9,11ve hayvan refahını artırmak için yararlı olduğunu göstermektedir10. Bununla birlikte, yukarıda belirtilen teknikler hala sınırlamalarla karşı karşıyadır. Fincan elleçleme tekniği, tesis personeli ve deneyciler için önemli bir zaman dilimi olan 10 gün (2 hafta16'da10 seans)ile 15 hafta 17arasında değişen programlarla uygulanmıştır. Ek olarak, fincan elleçlemenin etkinliği, açık ellerde zorlanma9 ve geleneksel fincan kullanımına göre değişir, naif farelere veya özellikle gergin suşların elden atlasına neden olabilir9,18. Tünel işleme, daha tutarlı ve genellikle daha hızlı sonuçlarla sonuçlanır ve19'uhafife alıp verdirür. Tüneller ev kafesi zenginleştirme olarak da kullanılır. Hayvanların hızlı bir şekilde idare etmelerine yardımcı olmak ve zenginleştirmenin ek faydalarını sağlamak. Bununla birlikte, tünel işleme, hayvanları aparatlar arasında aktarırken sınırlamalara sahiptir. İlginçtir ki, Hurst ve West9ve Henderson ve ark.20, hayvanları tünelden aparatlara aktarmak için nazik ve kısa manuel elle elleçleme kullanmanın fenotiplerini etkilemediğini gösterdi.

Mevcut yöntemlere bir alternatif sağlamak için, kısa bir süre içinde ulaşılabilir alışkanlıkla, bu makalede fincan işleme tekniğini genişleten ve bu nedenle belirli bir ekipman gerektirmeyen yeni bir teknik açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, farelerin elleçleme işlemiyle sahip olduğu konfor seviyesini ölçmek için kilometre taşlarını kullanır. Fare reaktivitesini ve stresini azaltmada (davranışsal ve hormonal seviyelerde) etkinliği gösterir, rutin kullanımı kolaylaştırır ve hayvanlar arasındaki değişkenliği azaltmaya katkıda bulunur. Bu tekniğin ayrıntıları burada verilmiştir ve anksiyete benzeri davranışları azaltma, deneycilerle etkileşimi geliştirme ve periferik stres hormonu (kortikosteron) salınımını sınırlamadaki etkinliği, tünel işleme (pozitif kontrol) ve kuyruk elleçleme teknikleri (negatif kontrol) ile karşılaştırıldığında iki ayrı çalışmada gösterilmiştir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Hayvan denekleri ile ilgili prosedürler CAMH hayvan bakım komitesi tarafından onaylandı ve Kanada Hayvan Bakımı Konseyi yönergelerine uygun olarak yürütüldü.

NOT: Burada açıklanan işleme yöntemi, transgenik olmayan (C57/BL6, BalbC, CD1, SV129, vb.) ve transgenik çizgiler dahil olmak üzere çeşitli fare suşlarında kullanılabilir. Genç veya yaşlı farelerle de kullanılabilir, genç yetişkin (4-6 haftalık) farelerin özellikle 1. günde yetişkin veya yaşlı farelerden biraz daha aktif olma eğiliminde olduğunu belirterek.

1. Deneysel hazırlık

  1. Çalışma başlatmadan önce, ARRIVE yönergeleri21uyarınca, her işleme grubuna (3D-Handling, Tunnel Handling veya Tail Handling) rastgele fare atayın.
  2. İşlemeyi gerçekleştirmek için odayı tanımlayın. Konut odasında veya ayrı bir odada gerçekleştirilebilir. Elleçleme, hayvanların hareketli bir sepette taşınmasını gerektiren ayrı bir odada yapılırsa, hayvanların elleçleme protokolünün başlatılmasından önce 20-30 dakika boyunca yeni odaya alışmasına izin verin.
  3. Grup ev hayvanları için, fareleri ilk ev kafeslerinde yeniden toplanmadan önce, taşımadan sonra barındırmak için geçici bir kafes kullanın. Bu, elleçlemeden önce hayvanlar arasındaki potansiyel kavgaları azaltır (özellikle erkeklerde).
  4. Bir tezgahta (tercihen temizlenmiş bir tezgah) veya bir biyogüvenlik kabininde, konut kafesi hayvandan uzakta ele alınarak çalışın. Konut kafesine yakınlık atlama riskini artırır. Hayvanlar grup tarafından barındırılırsa, farenin ev kafesine atlaması kafes eşlerine strese neden olabilir.
    NOT: Biyogüvenlik kabininde çalışmak farelerin yere atlama riskini sınırlar ve belirli tesislerde gerekli olabilir. Bu teknik, biyogüvenlik kabininin içindeki tüm adımları her zaman gerçekleştirdiğinden emin olarak ve işleyici ön ellerde yürüyen farelerden kaçınarak bir biyogüvenlik kabininde kullanılabilir.

2. GÜN 1: Fare başına 5 dk

  1. Kafesi yavaşça açın ve kapağı yana yerleştirin, yuva malzemelerini çıkarın ve tekerlekler veya barınaklar gibi diğer zenginleştirmeleri çıkarın.
  2. Eldivenli bir açık eli ev kafesine tanıtın, eli yavaşça kafes duvarının bir tarafına yerleştirin (işleyiciye en yakın duvar, Şekil 1A).
    1. Hemen fareyi almaya çalışmayın.
  3. Hareketsiz kalın ve hayvanın kafesteki elin varlığına yaklaşık 30 sn alışmasına izin verin.
  4. Fareyi avucunun içinde almaya çalış (yani, hayvanı kuyruğundan almaktan kaçının).
    1. Fare 3 denemeden sonra kolayca alınmazsa, fareyi iki elinizle bir köşeye ve fincana yönlendirin.
    2. Bardaklı elleri yavaşça fareye doğru hareket ettirin ve almaya çalışın.
    3. Her iki elinizle en fazla 3 denemeden sonra başarısız olursa, fareyi kuyruğunun tabanından hafifçe alın ve kolunuza veya düz elinize aktarın.
  5. Fare elinizdeyken, eli mümkün olduğunca düz ve açık tutun.
    NOT: Bu, farenin üzerine basması için düz bir platform sağlar ve ısırık riskini sınırlar.
  6. Eli avuç içi yukarı bakacak şekilde açık ve düz tutarak, diğer elinizin fareyi tutan elin yanına yerleştirin ve farenin herhangi bir kısıtlama olmadan elden ele serbestçe hareket etmesine izin verin (Şekil 1B).
  7. Farenin keşfetmesine ve 1 dakika boyunca eller arasında hareket etmesine izin verin.
    1. Bu noktada fareler atlamaya çalışabilir. Elleri, fare atlarsa, zeminden ziyade bir tezgaha inecek şekilde konumlandırın.
    2. Bir fare zıplamaya hazırlanıyor gibi görünüyorsa (elin kenarına doğru hareket ediyor ve arka ayaklarda yetiştiriyor), diğer elini yavaşça önüne yerleştirin ve bu ele yürümeye yönlendirmeye çalışın. Atlama risklerini artırdığı için ani hareketlerden kaçının.
    3. Bir fare atlarsa, kuyruk işlemeden kaçınarak onu almaya ve işleme oturumuna devam etmeye çalış. Fare 10 s'den fazla yerde veya ellerden uzak kalırsa, farenin ellerden çıktığı herhangi bir zamanı telafi etmek için taşıma oturumuna ek süre ekleyin.
    4. Atlayışın notlarını al. Toplam atlama sayısı, hayvanlar arasındaki potansiyel değişkenliği değerlendirmek için kullanılabilir.
  8. Düz ellerle 1 dakika el ele tutuştuktan sonra, fareyi eller arasında hafifçe yuvarlamadan önce, elin avuç içini gevşetin ve fareyi hafifçe elin içine koyun (Şekil 1C).
    1. "Yuvarlamak" için, fareyi elin avucunun içine, düz bir ele, parmaklara dik olarak yerleştirin.
    2. Parmakları farenin arkasına yerleştirerek eli yavaşça kapatın.
    3. Serbest eli doğrudan fareyi tutan elin altına yerleştirin.
    4. Fareyi yavaşça diğer ele aktarmak için fareyle birlikte eli yavaşça çevirin /döndürün (180° çevirin).
    5. Bunu ellerin arasında ileri geri tekrarlayın.
  9. Eller arasında hafifçe yuvarlanmaktan ve 60 s boyunca açık ellerde serbest keşiften, her 20 s'de bir teknikler arasında geçiş yaparak değiştirin.
  10. Bir "barınak testi" gerçekleştirin (Şekil 1D).
    1. Farenin elin kenarına hareket etmesine izin verin ve ardından 2 eli bir araya getirin.
    2. Çok yavaşça, farenin eller tarafından oluşturulan bir "sığınağın" içine sığması için onları fincanlayın. Gerekirse farenin kaçabilmesi için bir açıklık bırakın.
    3. Fareyi herhangi bir kısıtlama olmadan 5-10 sn boyunca barınakta tutmayı hedefleyin.
    4. Barınak testi arasında geçiş yaparak, barınak adımını 3 veya daha fazla kez gerçekleştirdönde emin olarak, eller arasında yuvarlanın ve açık ellerin 60 s daha serbest keşfi.
  11. 2.10'da açıklanan tüm prosedürlerde, işlemi acele etmeyin. Fare stresli görünüyorsa (yani, kaçmak için belirsiz, ellerden atlar, ellerle temastan kaçınır vb.) ellerin içine hapsedilerek, eller arasında yuvarlanmaya ve 20 s boyunca serbest keşif yapmaya devam edin ve sonra yeniden deneyin.
  12. Kilometre Taşı: 1. Günün tamamlanması için 10 sn'lik en az 1 başarılı barınak testi gerçekleştirin.
    1. Fare ellerde kaldığında bir barınak testinin başarılı olduğunu düşünün. Fare başını dışarı çıkarır ve sığınağa dönerse, yine de başarılı bir testtir. Hayvan barınaktan tamamen çıkarsa, bu bir başarısızlıktır.
  13. 30 sn boyunca ellerde ücretsiz keşiflere izin verin.
  14. Fareyi kafesinde yavaşça değiştirin. Grup barındırılırsa, fareyi tüm kafes montaj ilişkileri ele alınana kadar geçici kafese yerleştirin. Fareleri avuç içinde toplayarak orijinal kafeslerine geri koyun. Kuyruk açma kullanmayın.
  15. Tezgah üst potansiyel dışkı ve idrar% 70 etanol ile temizleyin.
  16. Eldivenleri% 70 etanol (veya uygun temizleme çözeltisi) ile iyice durulayın veya bir sonraki fareyi kullanmadan önce eldivenleri değiştirin (kafes arkadaşları için aynı eldivenleri tutmak mümkündür).
    NOT: İşleyiciden yorgun düşmemek için taşımanın makul sayıda hayvanla yapılması önerilir. 24 farenin elleçlemesi yaklaşık 2 saat sürer ve işleyici başına 24 fareyi geçmemeniz önerilir. Daha fazla hayvanın işlenmesi gerekiyorsa, birden çok işleyiciye sahip olmanız veya işleme yordamlarını birden çok gün içinde alt gruplara bölmeniz önerilir.

3. GÜN 2: Fare başına 3 ila 5 dakika

  1. Fareyi avucunun içinde almaya çalış. Bu aşamada, zaten mümkün olmalı ve fareler elden atlamamalıdır.
  2. 1. Günde olduğu gibi avuç içi açık olarak başlayın, farenin 20 s boyunca serbestçe keşfetmesini sağlar.
  3. Ardından, fareyi birkaç kez (4-5 kez) eller arasında yuvarlayın.
  4. 5 s için "barınak testi" gerçekleştirin.
  5. Barınak testini 2 ila 3 dakikalık bir süre boyunca birkaç kez (~5-6) tekrarlayın.
  6. Aynı 2 ila 3 dakikalık süre boyunca, eller arasındaki rulo ve açık ellerin serbest keşfi ile değiştirin, alışkanlığı geliştirmek için 1.
    1. Fareye kafasına ve sırtına dokunun (Şekil 1E), 5-6 kez. Alışkanlık belirtisi, farenin kaçmaya çalışmadan dokunmanıza izin vermesidir.
    2. Bir "Burun dürtme" gerçekleştirin: Farenin burnuna dokunmaya çalışın, 2 ila 3 kez (Şekil 1F).
      1. Fare ısırmaya çalışırsa veya dokunulma anında belirgin stres belirtileri gösterirse, hemen burun dürtmeye çalışmayın. Bunun yerine, düz el keşif ve rulo ile değiştirin. "Alışkanlık", hayvanın insan teması durumlarında kaçmaması veya başını çevirmemesi ile yansır.
  7. 3.4-3.6'da açıklanan tüm prosedürlerde, süreci acele etmeyin. Fare ellerin içinde hapsedilerek stresli görünüyorsa veya dokunulmak istemiyorsa, 20-30 s boyunca eller arasında yuvarlanmaya devam edin ve sonra yeniden deneyin.
  8. Kilometre Taşları: 2. Günün tamamlanması için 2-3 sn boyunca en az 1 başarılı burun dürtme gerçekleştirin.
  9. Hayvan "barınak", "baş okşama", "burun dürtme" ve fare stres belirtisi göstermeden elleri keşfetmeye istekli görünüyorsa, yaklaşık 3 dakikalık kullanımdan sonra bu oturumu durdurun.
  10. Fare stres belirtileri göstermeye devam ederse veya "barınak testi" veya "burun dürtme" testine iyi tepki vermiyorsa, 1.
  11. Fareyi kafesinde değiştirin, tezgah üstünü ve eldivenleri 1.

4. GÜN 3: Fare başına yaklaşık 3 dakika

  1. Üçüncü gün, 2 ila 3 dakika boyunca 2.
    1. Fareyi avucunun içinden al.
    2. Fareyi eller arasında aktarma ve yuvarlama
    3. Barınak testi yap.
    4. Fareyi arkada ve kafada sevmeye çalışın.
  2. Bu adımlar arasında yaklaşık 1 ila 2 dakika arasında geçiş yapma.
  3. Fare kaçmaya çalışmadan avucunun içine oturacak kadar rahatlayana kadar prosedüre devam edin.
  4. 3. günün bitiminden önce, barınak testini ve burun dürtme testini alışkanlık testi olarak tekrarlayın.
    1. Her iki test de ilk denemelerinde tamamlanabilirse, alışkanlık işlemi tamamlanır. Fareyi 30 sn ile bir dakika arasında nazikçe işlemeye devam edin.
    2. Fare başlangıçta her iki teste de dayanıklıysa, burun dürtme ve barınak testini yeniden başlatmadan önce 20-30 s için 4.1-4.3 adımlarını tekrarlayın.
    3. Fare 3 dakika sonra bu testlere karşı dirençli kalırsa, üçüncü gün tekrarlanabilir.
  5. Kilometre Taşları: Her biri 10 sn'lik en az 2 başarılı barınak testi ve 3.
  6. Fareyi kafesine geri koyun, tezgah üstünü ve eldivenleri temizleyin.

5. Enjeksiyon veya gavage için kısıtlamaya tabi tutulacak hayvanlar için isteğe bağlı yaklaşım

NOT: 3. günde, hayvan deneysel amaçlarla (oral gavage, periton içi enjeksiyon vb.) kısıtlanacaksa, fareler boyun sıkışma testine tabi tutulabilir.

  1. Başparmağı ve işaret parmağı arasındaki boynun ensesini kavrayın (Şekil 1G).
  2. Fareyi 2-3 sn boyunca elin 3-5 cm yukarısına kaldırın.
    NOT: Bu normalde yetişkin fareler için doğal olmayan bir pozisyondur ve fareler hareketsiz kalırsa, elleçlemeye iyi alışırlar ve deneysel amaçlar için dizginlenmesi kolay olacaktır.
  3. Fareyi düz ele geri yerleştirin veya fare boyun kıskacına tepkiliyse, deneycinin koluna, kafes kapağına veya tezgahına yerleştirmeyi düşünün
    NOT: Biyogüvenlik kabininde çalışıyorsanız, fareyi manşonun üzerine yerleştirmeyin, aksi takdirde yukarı çıkıp biyogüvenlik kabinine çıkabilir. Fareyi biyogüvenlik kabininin içindeki tezgahın üzerine yerleştirmeyi tercih edin.
  4. Deneycinin elini 1 dakika boyunca serbestçe keşfetmek için fareyi bırakın.

6. Ek kullanım günleri için isteğe bağlı yaklaşım

  1. Son derece stresli bir fare hattının durumunda, 2/3 Gün'de açıklanan yöntemleri kullanarak hayvanların reaktivitesini ve stres seviyesini azaltmak için ek günler ekleyin.
    NOT: Gerinim, transgenik modifikasyon varlığı, yaş, cinsiyet ve barınma koşulları dahil olmak üzere hayvanların temel stresini birçok faktör etkileyebilir. Bu faktörler, yaşlı hayvanların genç kontrollere karşı test edilmesi veya transgenik hayvanların vahşi tip kontrollere karşı test edilmesi gibi gruplar arasında tutarlı değilse, her grup için aynı sayıda alışkanlık gün kullanılması önerilir.

7. Tünel taşıma

NOT: Bu teknik yalnızca Tünel saplı fareler için geçerlidir. Tüneller yaklaşık 13 cm uzunluğunda ve 5 cm çapında polikarbonat borulardır.

  1. Tüneli farenin kafesine yerleştirin.
  2. Tünelden ayrılmadan önce 7 gün boyunca kafeste bırakın.
  3. Kafesi açın ve kapağı yan tarafa yerleştirin.
  4. Fareyi polikarbonat tünele (zaten kafeste) hafifçe yönlendirin.
  5. Tüneli kafesten yatay olarak kaldırın. Gerekirse, hayvanın tünelden atlamasını / düşmesini, potansiyel olarak kafesine veya zemine geri düşmesini önlemek için tünelin uçlarını gevşek bir şekilde örtün.
  6. Tüneldeki hayvanı ev kafesinden uzaklaştırın ve 30 s boyunca herhangi bir yüzeyden uzak tutun.
  7. Tüneli ev kafesine geri yerleştirin ve farenin tüpe çıkmasına izin verin.
  8. 60 s bekleyin ve 7.4-7.7 adımlarını bir kez yineleyin.
  9. Eldivenleri% 70 etanol ile iyice durulayın veya bir sonraki fareyi alışkanlık haline getirmek için eldivenleri değiştirin.
  10. Bu işlemi art arda 10 gün boyunca tekrarlayın.

8. Kuyruk taşıma

NOT: Bu teknik yalnızca Kuyruk saplı fareler için geçerlidir. Fareleri kafeslerinden bir aparatlara aktarmak için kullanılır ve bunun tersi de vardır.

  1. Kafesi açın ve kapağı yan tarafa yerleştirin.
  2. Fareleri başparmak ve işaret parmağı arasındaki kuyruğun tabanından kavrayın.
  3. Fareyi kafesten kaldırın.
  4. 2-3 s'de, farenin sarkmasını önlemek için kuyrukta bir kavrama korurken fareyi deneycinin karşı ön bıçağa aktarın.
  5. Bu deneyin uygulanmasında kuyruk elleçleme gerektiğinde (örneğin, kortizol testi için kan çekilmeden önce) hayvanlar kuyruk elleçleme ile deneycinin önü kısmına aktarılır ve kafeslerine geri gönderilmeden önce 15 sn tutulur.

9. Yükseltilmiş Artı Labirent

  1. Oda kurulumu
    1. Labirenti odanın ortasına, hafıza kartıyla donatılmış bir dijital kameranın altına yerleştirin.
    2. Labirentin arkasına yerleştirilmiş 2 duran lamba kullanarak odanın ışığını ~60 Lux'ta ayarlayın.
    3. Yansıma yaratan ve labirentteki hayvanların algılanmasını bozan labirentte doğrudan ışığı önlemek için herhangi bir tepe lambasını kapatın.
    4. Tüm ekipman kurulduktan sonra, hayvanları odaya aktarın ve 30 dakika boyunca ışık ayarlarına ve yeni ortama alışmalarını bekleyin.
  2. Test etme
    1. Tozdan veya daha önce test edilen hayvandan gelen kokuları önlemek için labirenti% 70 etanol ile temizleyin.
    2. Kamerayı çalıştırın.
    3. Hayvanı labirente yerleştirmeden önce kimliği videoya kaydetmek için hayvan kimliğiyle birlikte bir kağıt parçası kullanın (bu, her videoda hangi farenin çekildiğinin doğru tanımlanmasını kolaylaştıracaktır).
    4. Labirente aktarmak için her hayvana uygun elleçleme tekniğini kullanın.
    5. Fareyi açık bir kola bakacak şekilde merkezi platforma yerleştirin.
    6. Farenin cihazı rahatsız edilmeden 10 dakika boyunca keşfetmesine izin verin.
    7. 10 dakika sonra kamerayı durdurun.
    8. Fareyi labirentten alın ve kafesine geri koyun.
    9. Labirentten% 70 etanol ile dışkı ve idrar temizleyin.
    10. Test tüm farelerle tamamlandıktan sonra, videoları video izleme için bellek kartından bir bilgisayara aktarın.
    11. Otomatik hayvan izleme yazılımı kullanarak, açık ve kapalı kollara giriş sayısını ve açık veya kapalı kollarda harcanan zamanı izleyin (burada Ethovision XT 14).

10. Deneyci Etkileşimi (Hurst ve Batı9'dantüretilmiştir)

  1. Oda kurulumu
    1. Test odasının ortasına hafıza kartıyla donatılmış bir dijital kameranın altına bir tablo yerleştirin.
    2. 50-70 Lux'taki ışığı, odanın tavana bakan köşesine yerleştirilmiş 4 ampulle ayarlayın. Yansıma yaratan labirentte doğrudan ışığı önlemek ve arenadaki hayvanların algılanmasını bozmak için tepe lambasını kapatın.
    3. Hayvanları odaya getirin.
    4. 30 dakika boyunca odaya alışmalarına izin verin.
  2. Deney
    1. Ev kafesini dijital kameranın altına yerleştirin.
    2. Kapağı çıkarın.
    3. Hayvanların izlenmesini engelleyebilecek yuvalama malzemesini ve diğer zenginleştirmeyi kaldırın.
    4. Kamerayı çalıştırın.
    5. Videodaki hayvanı tanımlamak için hayvan kimliği ile kafes kartını kullanın.
    6. Ön sağ taraftaki kafesin duvarı boyunca ev kafesine bir el koyun.
      1. İşleyicinin kafasının fareyi çekmek için kamerayı engellemediğine emin olun.
    7. Bir zamanlayıcı başlatın.
    8. Eli 2 dakika hareketsiz tutun ve farenin eli keşfetmesine izin verin.
    9. Eli 15 s boyunca kafesten çıkarın.
    10. Bardaklı elleri kullanarak fareyi almaya ve farenin kaçıp kaçmadığını kaydetmeye çalış.
    11. Son adımı her 5 saniyede bir veya farenin alınmasına izin verene kadar beş kez tekrarlayın.
    12. Fareyi almak için gereken deneme sayısını kaydedin.
    13. Yuvalama malzemesini ve zenginleştirmeyi kafese geri verin.
    14. Eldivenleri% 70 etanol ile temizleyin veya bir sonraki hayvana geçmeden önce eldivenleri değiştirin.
    15. Test ettikten sonra, videoları bellek kartından bilgisayara aktarın.
    16. Otomatik video izleme yazılımı kullanarak kafesi dört eşit çeyreğe bölün ve farenin her çeyrekte harcadığı zamanı kaydedin (burada, Ethovision XT 14).

11. Yenilik Bastırılmış Beslenme

  1. Gıda yoksunluğu
    1. Testden 3 gün önce, tam bir kafes değişimi ve hayvanları tek bir ev gerçekleştirin (ev kafesi testini yapmak için tek muhafaza tercih edilir).
      NOT: Taze yatak takımı sağlamak, son kafes değişiminden bu yana yataklarda biriken potansiyel tozu veya az miktarda yiyeceği temizler.
    2. Testlerden bir gün önce, tüm hayvanları saat 18:00 civarında tartın.
    3. Tüm yiyecekleri yemek haznesinden çıkarın ve kafeste veya yataklarda yiyecek parçası olmadığından emin olun.
  2. Oda kurulumu
    1. NSF haznesini bir masaya yerleştirin.
    2. Odayı ince bir mısır yatağı tabakası (veya hayvanların ev kafesinde kullanılan yataklardan farklı olan diğer yataklar) ile doldurun.
    3. 70 Lux'taki ışığı, odanın durduğu masanın tavana bakan köşesine yerleştirilmiş 4 ampulle ayarlayın. Düşük oda aydınlatmasını korumak için tepe lambalarını kapatın.
    4. Tesiste kullanılan standart bir çorba peletini, odanın deneyciye bakan tarafına (duvardan ≈10 cm) yerleştirin.
  3. Test etme
    1. Yiyecek yoksunluğundan sonraki sabah, hayvanları hafif ayarlara ve yeni ortama alışmalarını sağlamak için testten 30 dakika önce odaya getirin.
    2. Önceki gün ölçülen kiloya göre kilo vermelerini ölçmek için tüm hayvanları tartın. Hayvanlar görevi düzgün bir şekilde yerine getirebilmek için bir gecede% 8-12 kaybetmelidir.
    3. Hayvanları kilo kaybı başına sıralayın ve en az kilo veren fareye en çok kaybeden fareden başlayarak onları tarayın.
    4. Odanın yatak takımı ve tek bir peletle doldurulmasını sağlayın.
    5. Hayvanı mama peletinden uzak, odanın karşı tarafına yerleştirin.
    6. Zamanlayıcıyı hemen başlatın.
    7. Farenin odayı 12 dakikaya kadar keşfetmesine izin verin.
    8. Yiyecek peletinde yaklaşma ve beslenme gecikmesini ölçün (hayvan ısırmalı ve yemelidir).
      1. Hayvan peletin yakın geldiğinde, kokladığında ve ısırmadığında bir yaklaşım olduğunu düşünün.
      2. Bir ısırığı, hayvanın peletiği tüketmeye başladığı zaman olarak tanımlayın.
    9. Pelle'ye yaklaşma ve besleme gecikmesini saniyeler içinde kaydedin.
    10. Fare yiyecek peletinden beslendikten sonra, fareyi odadan çıkarın.
    11. Yatakları atın, ancak iştah sürücüsünü test etmek için kullanılacak peleti fare ev kafesinde sakla.
    12. Bir sonraki hayvan için odayı sıfırlayın ve bir sonraki hayvanla devam edin.
    13. Odadaki testin tamamlanmasından 15 dakika sonra, test sırasında kullanılan peleti farenin ev kafesinin içine, kafesin önündeki duvara bırakın.
    14. Pelet ev kafesindeyken peletle beslenmek için gecikmeyi ölçün. Bu iştah tahriki için bir ölçüdür.
      1. Farenin peletin kafesine bırakıldığını görmesini sağlamak için yuva malzemesinin çıkarılması tercih edilir.

12. Serum Toplama ve Kortikosteron Ölçümü

  1. Hayvanları atanan tekniği kullanarak 1 dakika, kan toplamadan 15 dakika önce ele alın (bu, fareleri yeniden toplarken kavga riskini göz önünde bulundurarak grup evli veya tek kişilik hayvanlarla yapılabilir).
    1. Tünelle ilgilenen fareler için, onları tünele yönlendirin, tüneli kafesten 1 dakika kaldırın ve fareyi kafesinde değiştirin.
    2. Kuyruk saplı fareler için, farenin kuyruk tabanını tutun ve fareyi kafesinden çıkarın. Fareyi 1 dakika boyunca deneycilerin koluna aktarın ve kuyruk elleçleme ile fareyi kafesine geri döndürün.
    3. 3D saplı fareler için, fareyi kafesinden çıkarmak için bardaklı eller kullanın. Fareyi 1 dakika boyunca fincanlı ellerde tutun ve kafesine geri verin.
  2. İşlemeden 15 dakika sonra, submandibuler damardan kan toplanmasına devam edin22.
  3. Fareyi, farenin başı güvenli bir şekilde hareketsiz olacak şekilde sıkıca sür.
  4. Delinme yerini bulun.
    1. Yüzün mandibulası boyunca, delinme bölgesini bulmak için bir dönüm noktası olarak kullanılabilecek küçük tüysüz bir gamze vardır. Çene tabanı ile bu gamze arasında bir çizgi çizen delinme bölgesi, bu gamzenin arkasında, çenenin menteşesinin hemen arkasında, yaklaşık 5 mm kulağa doğru uzanır.
  5. Delinme bölgesine dik temiz bir 23 G iğne tutun ve hızlı bir sert gecikme hareketi kullanın. İğnenin ucu 1-2 mm arasında bir derinliğe nüfuz etmelidir, damar delinmez kan hemen akacaktır.
  6. EDTA kaplı toplama tüplerinde ~150 μL kan toplayın ve buz üzerinde saklayın.
  7. Kanın pıhtılaşmasını sağlamak için delinme bölgesine steril bir gazlı bezle hafif basınç uygulayın.
  8. Kan pıhtılaştığında, fareyi ev kafesine geri koyun.
  9. 10 dakika boyunca 4 °C 3.500 x g'da santrifüj kanı.
  10. Üsttanan decant.
  11. Aşağı akış analizleri için süpernatant 'ı -20 °C'de saklayın.
  12. Üreticinin protokolünü takiben kortikosteron ELISA kiti kullanarak kortikosteron seviyelerini ölçün.
  13. ELISA sonuçlarını okumak için bir spektrofotometre kullanın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

C57BL/6 fareler ile iki ayrı çalışma yapıldı. Çalışma #1 6 aylık erkekleri ve Çalışma #2 Jackson Laboratuvarları'ndan (Cat #000664) 2,5 aylık dişileri (N=36 /study) içeriyordu. Fareler tesise 2 aylıkken geldi. Study #2 dişiler varıştan iki hafta sonra ele alınıp test edilirken, Study #1 erkekler sadece 6 aylıkken (küresel pandemi kapanması nedeniyle gecikme) ele alındı ve test edildi. Bu süre zarfında, Study #2'dan bir fare, deneyleri işlemeye başlamadan önce öldü. Çalışma, erkek farelerin hayvan tesisi personeli tarafından bakıldığını #1. Tüm fareler, yiyecek ve su reklam libitumerişimi verilen 12 saatlik bir ışık / karanlık döngüde (7:00 ON, 19:00 KAPASI) muhafaza edildi. Ev kafesleri yatak malzemesi olarak geri dönüştürülmüş gazete ve yuva malzemesi ile doluydu. Fareler, grup içi erkeklerde potansiyel agonistik davranışları sınırlamak için, elleçleme seansı sırasında veya kan alma veya davranış testi gibi işlemlerden sonra ayrı ayrı barındırıldı. Fareler üç gruba randomize edildi: kuyruk taşıma, tünel taşıma ve 3D işlemeve kendi gruplarının tasarımına göre açık odada ele alındı ( Şekil2). Tünelle ilgilenen grup, tüneli işleme oturumundan önce 1 hafta boyunca zenginleştirme olarak aldı. Daha sonra davranış testlerine katılmadan önce art arda on (10) gün boyunca ele alındılar. Farklı kullanım seanslarının tamamlanmasından bir hafta sonra davranışsal testlere başlandı. 16. günde, fareler EPM'de ve daha sonra deneyci etkileşim testinde test edildi. İki gün sonra, fareler NSF'de test edildi. Son olarak, 24.

Davranışsal testler için tünel saplı hayvanlar mümkün olduğunca tünel kullanılarak kafeslerinden aparatlara aktarıldı. Bununla birlikte, Elevated-Plus Labirent deneyi için labirentin boyutları, tünel kullanarak hayvanların labirente çıkarılmasını veya yerleştirilmesini zorlaştırdı. Bu durumda, hayvanlar tünellerden bardaklanmış ellere aktarıldı ve labirente taşındı. 3D saplı fareler üç gün boyunca, tünel elleçleme günlerinin 8-10 günleriyle eş zamanlı olarak ele alındı (Şekil 2). Kuyruk saplı fareler elleçleme için alışkanlık haline getirildi, ancak deneycilerle etkileşimler sırasında kuyruk ele alındı. Çalışma sırasında, her grup için kullanılan uygun elleçleme tekniğinin kullanılmasını sağlamak için deneyci tarafından kafes değişimi yapıldı.

Deneyci etkileşim testinde, hayvanlar deneyci ile gönüllü olarak etkileşime girme istekleri ve deneysel bağlamda kullanım kolaylığı açısından test edilmiştir (Şekil 3). ANOVA, fareyi kafesten alma girişimlerinin sayısı üzerinde gerçekleştirdiği çalışmada #1 erkeklerde (F(2,31) =6,36,p=0,004) ve çalışmada #2 dişilerde (F(2,33) =12,21,p=0,0001) yol tutuş yaklaşımının önemli bir etkisini göstermiştir. Scheffe'nin post hoc analizleri, fareleri almak için gereken girişimlerin sayısının her iki 3D ile önemli ölçüde azaldığını ortaya koydu (p=0.0061 Çalışmada #1 erkekler, ve p=0.0002 Çalışma #2 dişi) ve tünel elleçleme (çalışmada p=0.04 #1 erkekler ve p=0.003 Çalışmada #2 dişiler), kuyruk saplı gruba kıyasla (Şekil 3A). ANOVA, çalışma #1 erkeklerde (F(2,31) =5,38, p=0,009)ve Çalışmada #2 kadınlarda (F(2,33) =3,5, p=0,04; Şekil 3B). Scheffe'nin post hoc analizleri, 3D işleme tekniğiyle ele #1 erkek farelerin, kuyruk saplı farelere kıyasla aynı çeyrekte deneycinin elinden önemli ölçüde daha fazla zaman harcadığını göstermiştir (p=0.012). Çalışma #2, 2,5 aylık kadınlarda yol tutuş grupları arasında anlamlı bir fark yoktu. Deneyci ile etkileşim derecesi, farelerin merkez noktalarının birleşik ısı haritaları ile daha da gösterilmiştir (Şekil 3C-E). Bunlar, Study #1'daki 3D saplı erkek farelerin, ele yakın alanlar da dahil olmak üzere ele daha fazla zaman harcadığını, kuyruk saplı farelerin ise el ile en az genel etkileşime sahip olduğunu göstermektedir.

Anksiyete benzeri davranışların iki testinde, yeni baskılanmış beslenme (NSF) testinde ve yükseltilmiş artı labirentte (EPM) 3D ve tünel elleçlemenin etkileri kuyruk elleçleme ile karşılaştırıldı. NSF testinde, yaklaşma gecikmesi üzerine yapılan ANOVA, Çalışmada kullanılan elleçleme tekniğinin erkekler #1 etkisini göstermiştir (F(2,31)=3,5, p=0,04). Scheffe'nin Çalışma #1 erkeklerinde yaptığı post hoc analizleri, 3D saplı farelerden (p=0.08) ve tünel saplı farelerden (p=0.08) eğilimleri gösterdi ve kuyruk saplı farelere kıyasla yaklaşma süresi azaldı (Şekil 4A). Çalışma #2 herhangi bir etki gözlenmedi. ANOVA, fare ev kafesinde yaklaşma gecikmesi üzerine performans gösterdi (veriler gösterilmedi) elleçlemenin hiçbir etkisini göstermedi (Çalışma #1 erkeklerde p=0.88 ve çalışmada p=0.16 #2 kadın). EPM'de açık kollarda yüzde zaman üzerinde gerçekleştirilen ANOVA, Çalışmada kadınlarda (F(#2 2,33) =3,5, p=0,04)önemli bir yol tutuş etkisi olduğunu ortaya koydu. Çalışmada #1 erkek (F(2,31) =2,1,p=0,1; Şekil 4B). Scheffe'nin post hoc analizleri, sadece Study #2'dan tünel saplı farelerde açık kollarda geçirilen zamanın kuyruk saplı farelere kıyasla arttığı bir eğilimi ortaya koydu (p=0.07). Açık kollardaki yüzdelik girişlerle ilgili olarak (Şekil 4C), ANOVA, ne çalışma #1 erkeklerde ne de Çalışmada #2 kadınlarda (sırasıyla F(2,31) =1,12,p=0,33; ve F(2,33)=1,3, p=0,26) elleçlemenin bir etkisini ortaya koydu. Davranışsal skorlar, Guilloux ve ark.23'teolduğu gibi, kuyruk saplı farelere kıyasla anksiyete benzeri davranışların potansiyel olarak azaltılması hakkında bilgi veren bir z-skorunda özetlenmiştir (Şekil 4D). ANOVA z-skorları üzerinde çalışma #1 erkeklerde (F(2,31) =5,6,p=0,008) önemli bir etki göstermiş, ancak çalışmada #2 kadınlarda (F(2,33)=1,07, p=0,35) değildir. Scheffe'nin post hoc analizleri, 3D elleçleme ve tünel elleçlemenin kuyruk kullanımına kıyasla z-puanını (sırasıyla p=0.04 ve 0.01) önemli ölçüde azalttığını gösterdi ve her iki yaklaşımın da Çalışma #1 erkeklerde anksiyete benzeri davranışları azalttığını düşündürmektedir.

İşleme sonrası kortikosteron seviyeleri de kısa bir işlem seansından 15 dakika sonra değerlendirildi (Şekil 5). ANOVA, Çalışmada #2 kadınlarda (F(2,33) =4,44,p=0,01) önemli bir yol tutuşu buldu, ancak çalışma #1 erkeklerde (F(1,31)=0,53, p=0,59) bulunmadı. Çalışma #2 dişilerde, post hoc analizleri, 3D taşıma grubundan farelerde kortikosteron seviyelerinde kuyruk taşıma grubuna kıyasla önemli bir azalma olduğunu ortaya koydu (p=0.02).

İşleme tekniklerinin elde edilen verilerin değişkenliği üzerinde önemli bir etkisi olup olmadığını belirlemek için Bartlett'in varyansın homojenliği testini uyguladık. Sonuçlarımız, çalışmadaki değişkenlikte anlamlı bir fark bulamadı #2 dişi fareler ölçümler arasında (% zaman EPM B(2,33)=4,95, p=0,087; % Girişler EPM B(2, 33)=3,68, p=0,16; NSF B(2, 33)=0,20, p=0,91; CORT B(2, 33)=1,69, p=0,42). Bununla birlikte, Çalışma #1 erkek farelerde, NSF testinde (B(2,31) =8,08,p=0,0175) ve ölçülen CORT seviyelerinde (B(2,32) =11,63,p=0.0029), ancak EPM önlemlerinin hiçbirinde değil (% zaman EPM B(2,32)=1,16, p=0,56; % Girişler EPM B(2,32)=2,79, p=0,25). İki varyansı karşılaştırmak için F testinin kullanılması, NSF testinde varyans çalışması #1 erkekler için hem 3D (F(1,21) =4.22,p=0.04) ve tünel işleme teknikleri (F(1,22)=4,01;p=0,03) kuyruk işlemeye kıyasla. Kullanımdan sonra CORT konsantrasyonu için, kuyruk kullanımına kıyasla yalnızca 3D işleme değişkenliği (F(1,20)=9,65, p=0,0019) önemli ölçüde azalttı.

Figure 1
Şekil 1. 3D İşleme Prosedürü'nün temsili görüntüleri.  Görüntüler 3D işleme prosedürünü göstermektedir. A) Kafese el: Deneycinin eli kafese yerleştirilir ve hareketsiz tutulur, böylece fare kafesteki elin varlığını alışkanlık haline getirir. B) Düz el: kafesten ilk çıkarıldıktan sonra, fare elin düz avuç içine yerleştirilir. Fare avuç içinde serbestçe dolaşabilir ve bitişik düz eller arasında hareket edebilir. C) Rulo: Farenin etrafında gevşek bir "bardak" oluşturmak için avucunuzun içini gevşetin. Bardağı yavaşça karşı ele doğru eğin, fare diğer ele hafifçe yönlendirilmezse, bu ele serbestçe hareket etmelidir. D) Barınak: fareyi elin kenarına yerleştirin, ardından iki elinizi bir araya getirin ve farenin etrafında çok yavaşça bardak oluşturur. Fare kısıtlanmamalı ve farenin kaçabilmesi için bir açıklık bırakılmalıdır. ~5-10 s için tutun ve sonra düz ellere açın. E) Baş/Sırt Evcilleştirme: Fare elin düz avuç içini keşfederken, fareyi yavaşça baş ve sırtta evcilleştirin. Bu, fareyi deneycinin yaklaşımına yukarıdan alışkanlık haline getirmektedir. F) Burun Dürtme: Fare elleçlemeye alışmış gibi göründüğünde, fareye doğrudan burnun üzerine hafifçe dokunmaya çalış. Fare başını uzağa çekmezse, elleçleme için iyi bir alışkanlıktır. G) Çekişme gerektiren gelecekteki müdahaleler durumunda hayvanların alışkanlıklarını ölçmek için son gün kısa (2-3 s) boyun sıkışması yapmak mümkündür. Elleçlemeye alışıldığında, fareler boyun sıkışması sırasında hareketsiz kalırken, alışılmamış fareler çekişmeden kurtulmak için kuyruklarını döndürerek kaçmaya çalışacaktır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 2
Şekil 2. Deneysel Tasarım.  Tesise geldikten sonra, kuyruk saplı fareler alışkanlık almadı. Tünel saplı fareler, elleçleme başlamadan önce bir hafta boyunca ev kafeslerindeki tünellere yerleştirildi. Tünel saplı fareler 10 gün boyunca tünel elleçleme tekniği ile ele alındı (taşımanın ilk günü = Gün 1), 3D saplı fareler ise üç gün boyunca alışkanlık haline getirildi (Gün 8-10). Fareler daha sonra yükseltilmiş artı labirente (EPM) (Gün 16), deneyci etkileşim testine (Gün 19), yenilik baskılanmış beslenmeye (21. gün) ve cort ölçümü için serum toplanmasına (24. gün) tabi tutuldu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 3
Şekil 3. Üç işleme tekniğinin kullanım kolaylığı ve deneyci ile etkileşime girme isteği üzerindeki etkisi. A) Bir fareyi kafesten çıkarmak için gereken ortalama toplama denemesi sayısı. Çalışma #1 Erkek (sol panel, Kuyruk Taşıma N= 12, Tünel Elleçleme N = 12 ve 3D işleme N = 11) ve Çalışma #2 dişi (sağ panel, grup başına N = 12) hem tünel hem de 3D saplı gruplardan fareler, kuyruk saplı farelere kıyasla kafesten çıkarmak için gereken girişimlerin sayısında önemli bir azalma gösterdi. B) Bir hayvanın, deneycinin eliyle aynı kafeste geçirdiği ortalama süre. 3D tekniği ile ele #1 erkek fareler üzerinde yapılan çalışma, deneycinin eliyle aynı çeyrekte harcanan sürede önemli bir artış olduğunu gösterdi. C-E) Ethovision XT 14'te işlenen zamana göre fare merkezi noktasının ortalama ısı haritaları, 3D eleli erkek fareler #1 Çalışmanın deneycisiyle artan keşif ve etkileşimi görsel olarak gösterdi. Hata çubukları, Kuyruk İşlenen grubuna kıyasla SEM. *p<0<05, **p<0,01 gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. 

Figure 4
Şekil 4. Üç elleçleme tekniğinin anksiyete benzeri davranışlar üzerindeki etkisi. A) Çalışma #1 erkek farelerde (Kuyruk Taşıma N= 12, Tünel Taşıma N= 12 ve 3D elleçleme N=11) ve Çalışma #2 dişi farelerde (N=12/grup) yeni bastırılmış beslenme odasında pelete yaklaşma ve beslenme gecikmesi. Çalışmadan elde edilen veriler, 3D işleme ve tünel işleme gruplarındaki erkek fareler #1, pelete yaklaşma gecikmesinde önemli bir azalma eğilimi olduğunu gösterdi. B) Yükseltilmiş artı labirentin açık kollarında harcanan zamanın % 'si anlamına gelir. Study #1 erkeklerde gruplar arasında anlamlı bir fark yoktu ve Study #2 tünel işleme grubundaki kadınlar tarafından açık kollarda daha fazla zamana doğru bir eğilim vardı. C) Açık kollara girişler: Çalışmada #1 erkeklerde veya Çalışmada #2 kadınlarda gruplar arasında anlamlı bir fark yoktu. D) Anksiyete benzeri davranışları özetleyen Z-skoru. A, B ve C'de sunulan veriler kullanılarak, kuyruk saplı fareler referans olarak kullanılarak bir z skoru hesaplandı. Z-skorundaki azalma, NSF ve EPM testleri tarafından ölçülen anksiyete benzeri davranışlarda bir azalma olduğunu göstermektedir. 3D veya tünel tekniği kullanılarak ele #1 erkek farelerin, Kuyruk saplı farelere kıyasla anksiyete benzeri bir fenotip gösterdiğine çalışıldı. Hata çubukları SEM. *p<0.05'in kuyruk işlenmiş grupla karşılaştırılmasını gösterir. t, kuyruk saplı gruba kıyasla eğilim düzeyini (p<0.1) tasvir eder. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. 

Figure 5
Şekil 5. Kullanımdan sonra kortikosteron seviyeleri.  Serum kısa bir elleçleme seansından 15 dakika sonra toplandı ve daha sonra CORT düzeyleri ELISA tarafından hem Çalışma #1 erkekte (Kuyruk Taşıma N= 12, Tünel Taşıma N = 12 ve 3D elleçleme N = 11) hem de Çalışma #2 dişi farelerde (N = 12 / grup) ölçüldü. 3D işleme tekniği ile ele #2 dişi fareler, kuyruk tarafından ele alan farelere kıyasla kortikosteron seviyelerinin azaldığını gösterdi. Çalışmada ANOVA #1 erkek fareler gruplar arasındaki farklılıklar için öneme ulaşmamıştır (p=0.5). Hata çubukları SEM. *p<0.05'i Tail Handled grubuna kıyasla gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Table 1
Tablo 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu çalışma ve yöntem geliştirme, farelerde elleçleme tekniklerinin bilim topluluğu tarafından hala göz ardı edildiği ve bazı laboratuvarların deneylerden önce hayvanlarının stresini ve reaktivitesini azaltmak için alışkanlık veya kullanım tekniklerini uygulamakta hala isteksiz olduğu gözlemine dayanmaktadır. Bir zaman taahhüdünü temsil ederken, hayvan kullanımı hayvanlara yapılacak deneylerin başarısına katkıda bulunabilecek faydalı etkiler sağlar ve veri değişkenliği veya hayvan aşırı reaktivitesi nedeniyle deneylerin birden fazla kez yapılmasına engel olur. 3D işleme tekniğinin kullanımı farelerde kaçış girişimlerini azalttı. Ayrıca deneyci ile etkileşimi artırdı ve 6 aylık erkek farelerimizde anksiyete benzeri fenotipleri azalttı. Ayrıca, 3D işleme, sadece 3 ilk işlem gününden sonra 2,5 aylık dişi farelerde veri değişkenliğini ve kortikosteron seviyelerini azalttı. Bu yaklaşım, fareyi daha yumuşak taşımayı ve daha kolay müdahaleyi kolaylaştıran deneyci tarafından elleçlemeyi alışkanlık haline getirmek için nazik manipülasyonlara dayanır.

3D işleme tekniğinden vurgulanması gereken bir şey, işleme yöntemlerinin ilerlemesinin, yukarıda ve Tablo 1'deaçıklanan kilometre taşlarının başarısına bağlı olarak farenin reaktivitesine yanıt olarak gerçekleştiğidir. Hayvanlar, bir sonraki adımlara geçmeden önce reaktiviteyi tek bir işleme adımına indirgemiş olmalıdır. Yeterince alışkanlık haline edilmemiş hayvanlar üzerinde "barınak" veya "burun dürtme" adımlarına çok hızlı ilerlemeye çalışmak büyük olasılıkla stresin artmasına ve prosedürün etkinliğinin azaltılmasına neden olacaktır. Benzer şekilde, hayvanın her taşıma gününde reaktivitesi izlenmeli ve ek taşıma günlerinin gerekli olup olmadığına karar verirken göz önünde bulundurulmalıdır. Hayvanlar barınak testine ilk gün iyi yanıt vermezse, ilk kilometre taşına ulaşmak için kriterleri karşılamazsa, taşımanın ilk günü kilometre taşı tamamlanana kadar tekrarlanabilir. Benzer şekilde, hayvanlar ikinci gün burun dürtme testine yanıt vermezse, ikinci gün de tekrarlanabilir. Bu yaklaşımla dikkat etmesi gereken bir başka uyarı, farelerin ilk kullanım gününde, özellikle C57BL6 gibi gergin suşlarda atlama riskinin daha fazla olduğudur. Yukarıda açıklanan yönergeleri takip etmek atlama riskini azaltmalı ve bu tür davranışları sınırlamanın yollarını sağlamalıdır. Özellikle endişeli fenotipler sergilediği bilinen transgenik modellerle çalışıyorsanız, adımlarla kullanımın ve ilerlemenin süresi suşlara bağlı olarak değişebilir.

Sunulan 3D işleme tekniğinin etkinliğini azaltmaya çeşitli faktörler katkıda bulunabilir. Bu faktörlerden biri, deneycinin fare kullanımına aşina olmaması veya farelerden korkması durumunda deneyciden gelen potansiyel korku veya tereddütdür. Bu nedenle, işleyici üzerindeki etkisi de dikkate alınması gereken bir şeydir. Bununla birlikte, farelerle etkileşim seviyesindeki kademeli artış, acemi deneycilerin işleme adımlarında ilerlerken elleçleme tekniğini gerçekleştirmede güven ve daha fazla beceri geliştirmelerini sağlar. Önerilen adımlar / kilometre taşları (barınak ve burun dürtme testleri), acemi işleyicilerde potansiyel insan değişkenliğine karşı koymaya yardımcı olabilir ve hayvanların benzer alışkanlık seviyelerine ulaşmasını sağlayabilir. Hayvanlarla olumlu insan-hayvan etkileşimlerinin teşvik etmenin, hayvan bakım personelinde daha fazla yaşam kalitesi ve şefkat memnuniyeti ile sonuçlandığını bildirilmiştir24. Bu nedenle, elleçlemeden gelen gentling, herhangi bir genel etkileşim veya müdahale sırasında hem işleyiciye hem de hayvana faydalar sağlar.

Hem 6 aylık erkeklerde hem de 2,5 aylık kadınlarda fareyi alma girişimlerinin sayısını azaltma üzerindeki etkisiyle, 3D taşıma tünel işleme veya diğer tekniklere bir alternatif sağlayarak hayvanların kafeslerinden deneysel cihazlara daha kolay aktarılmasını kolaylaştırır. 3D işleme tekniği, 6 aylık erkek farelerin deneyciyle etkileşimini de artırdı. Bu, 2,5 aylık dişi farelerde gözlenmedi, ancak dişi farelerin kuyruk saplı farelere kıyasla daha kolay alınması kaldı. Bu, 3D işleme tekniğinin, Morris su labirenti gibi hayvan ve deneyci arasında doğrudan etkileşim gerektiren deneyler için daha uygun olabileceğini göstermektedir (daha sonra tartışılan potansiyel cinsiyet / yaş şaşırtıcı faktörlere rağmen). Diğerleri, ek manipülasyon yapmadan hayvanları fincanlı ellerle toplamaktan oluşan manuel elleçleme teknikleri geliştirmiş ve kullanmıştır10. Bu teknikler yararlı etkiler gösterirken, literatürdeki veriler genellikle 10 günü aşan alışkanlık süreleri ile işleme protokolleri sunar9,16. Ek olarak, 3D işleme tarafından sağlanan rafine etkileşim olmadan cupped-handling, ellerden atlamaya ve uzaklaşmaya devam eden gergin suşlar için uygun olmayabilir. Bu çalışmada fincan yöntemiyle doğrudan bir karşılaştırma yapmasak da, 3D işleme bunu ele alıyor ve fare ile işleyici arasındaki etkileşimi teşvik etmek için rafine hamlelere dayanıyor. Ghosal ve ark.16 tarafından yapılan çalışmada, 5 gün boyunca masajla birlikte bir fincan taşıma tekniği kullanıldı ve bu tekniğin stresin metabolik uç noktalar üzerindeki etkisini sınırladığını ve daha iyi etkinlik için elleçleme sırasında rafine hamlelere ve etkileşime olan ihtiyacı vurguladığını gösterdi. Bu fincan masajı tekniğine dayanarak, 3D işleme fareleri alışkanlık haline getirmek için ek etkileşim kullanır. 3D işleme yaklaşımını kullanarak, işleyiciler, standartlaştırılmış hareketler yaparak ve prosedürün süresini ihtiyacına bağlı olarak her hayvana uyarlayarak tüm farelerin benzer bir alışkanlık seviyesine ulaşmasını sağlar (mevcut çalışmada, tüm fareler kilometre taşlarını geçti ve 3D işleme protokolünü 3 günde tamamladı). Bu yaklaşım her fare için "kişiselleştirilmiş" olarak kabul edilebilir, böylece tüm hayvanlar her taşıma gününde istenen alışkanlık seviyesine ulaşır. Daha önce de belirtildiği gibi, hayvanlar protokolde açıklanan kilometre taşlarına ulaşmazsa, bu teknik gün sayısını artırarak ayarlanabilir. Bu teknik, davranışsal çalışmalarda ve fizyolojik ölçümlerde (CORT seviyeleri) hayvanlar arasındaki değişkenliği azaltmak için yararlı etkiler göstermiş, bu yaklaşımın çalışma içi değişkenliğin azaltılmasına katkıda bulunabileceğini ve klinik öncesi çalışmalarda önyargılı sonuçlar doğurabilecek deneysel hatanın etkisini azaltabileceğini düşündürmektedir.

Destekleyici sonuçlar, 3D ve tünel işlemeye maruz kalan farelerin, kuyruk saplı farelere kıyasla, yenilik bastırılmış beslenme testinde kaygıyı azalttığını öne sürdü. NSF ve EPM'den elde edilen birleşik veriler göz önüne alındığında, her iki yaklaşım da 6 aylık erkek farelerde kaygıyı azaltmada önemli etkiler gösterdi. Bu, tünel işlemeye alışmış hayvanlarınanksiyete 9, 15 için yapılan testlerde10+ günlük kullanımdan sonra performansı artırdığını ve 3D işlemenin benzer etkiler gösterme potansiyelini daha da gösterdiğini göstermektedir. Bu aynı zamanda 3D saplı 6 aylık erkek farelerin tünel ve kuyruk kullanımına maruz kalan 6 aylık erkek farelerden daha fazla deneycilerine yaklaştığını ve gönüllü olarak etkileşime girdiğini gösterdi. Daha da önemlisi, 3D işlemeye maruz kalan 2,5 aylık dişi fareler, daha önce yayınlanan sonuçlarla aynı fikirde olan CORT seviyelerini azalttı9. İki çalışma (6 aylık erkeklerde çalışma #1 ve 2,5 aylık kadınlarda Çalışma #2), kullanımın anksiyete benzeri fenotipler üzerinde (Çalışma #1 davranışsal sonuçlar veya Çalışma #2'deki CORT seviyeleri üzerinde) yararlı bir etkisi olduğunu iki farklı şekilde doğruladı.

Etkiye katkıda bulunan olası bir faktör, bu durumda erkek olan deneycinin cinsiyetidir. Sorge ve ark.25 tarafından, erkek deneycilerin varlığının, erkek farelerdeki davranışlar gibi CORT ve anksiyetede bir artışa yol açabileceği gösterilmiştir. Bu, mevcut çalışmanın sonuçlarıyla karşıttır. Bu çalışma ile Sorge ve ark.25'teki çalışma arasındaki en büyük fark, burada açıklanan yaklaşımın, deneyci ile olumlu (güçlendirilmemiş) etkileşimi teşvik ederek fareleri elleçleme alışkanlığından ibaret olmasıdır, Sorge ve ark.25 ise insanla asla etkileşime girmeyen naif kemirgenler kullanmıştır. Naif farelerin, deneycinin bir tehdit oluşturmadığını öğrenmemeleri durumunda insan deneycilerine karşı güçlü bir reaksiyona sahip olabilecekleri beklenebilir. Bununla birlikte, bu çalışma sadece bir erkek deneyci ile gerçekleştirildi ve gelecekteki çalışmalar bu tür etkilerin bir kadın deneyci ile tekrarlanıp tekrarlanamayanları araştırmalıdır. Bu faktörleri izole etmek bu makalenin kapsamı dışında olsa da, işleme alışkanlığını uygularken veya daha genel olarak deneysel tasarımda bu tür değişkenlik kaynaklarını tanımlamanın önemini vurgulamakta fayda vardır.

Bu çalışma ayrıca farelerde anksiyete benzeri davranışları ve CORT seviyelerini azaltmada tünel işleme tekniğinin etkinliğini doğruladı9,10,11. Bu yaklaşımın ek bir yararı, tünelin kafeste zenginleştirme olarak bırakılabilmesidir26, bu da azaltılmış bir stres / anksiyete yanıtına katkıda bulunabilir, tamamen refahın artmasına katkıda bulunabilir10,11. Bu durumda, deneycinin rolü tüneli sadece her hayvanla bir dakika boyunca manipüle etmektir. Bununla birlikte, Gouveia veark. Her iki yaklaşım, tünel ve 3D işleme teknikleri, hangi yaklaşımın ihtiyaçlarına en uygun olduğunu belirlemek için laboratuvar ve deneyciler tarafından değerlendirilmesi gereken faydalar sunar. Bu çalışmada tünel kafeste bırakılmış, anksiyete benzeri davranışlar üzerinde gözlemlediğimiz etkiler tünel elleçleme ve zenginleştirme kombinasyonundan kaynaklanabilir.

Her ikisi de yararlı etkiler sağlarken, 3D ve tünel işleme teknikleri sınırlamasız değildir. Paylaşılan bir sınırlama, hayvan tesislerinin bu tür prosedürleri uygulaması için zaman alıcı ve potansiyel olarak cesaret kırıcı olabileceğidir. Bununla birlikte, eklenen faydalar paha biçilmezdir, stresi azaltarak ve deneyci ve hayvan bakım sağlayıcılarıyla etkileşimi geliştirerek hayvan refahını artırır (Spangenberg ve Kelling27'deaçıklandığı gibi) ve araştırma güvenilirliği ve tekrarlanabilirliği. Tesisimizden elde edilen kanıtlar, bu tekniğin hayvanlar ve hayvancılık personeli arasındaki etkileşimleri geliştirdiğini, kafes değişimini ve sağlık takibini kolaylaştırdığını göstermektedir. Tesisimizdeki diğer kullanıcılardan, çekişme ve genel manipülasyonun ele alınan farelerle önemli ölçüde daha kolay olduğu bildirilmektedir, 3D tekniğiyle ele alınan farelerin alındığında kaçma olasılığının daha düşük olduğu ve örneğimizde, 6 aylık erkeklerin deneycileriyle etkileşime girme olasılıklarının daha düşük olduğu bulgularımızla tutarlıdır. Takip çalışmaları, tekniğin yararlılığını daha da göstermek için bu tür etkileri ölçebilir. Tamamen, bu 3D işleme yaklaşımı ve tünel yaklaşımı, özellikle elleçleme yanıt olarak stresi en aza indirmek için rutin hayvan etkileşimlerini iyileştirerek 3R'lerin kuralına katkıda bulunur. Verilerin değişkenliğinde gözlenen azalma göz önüne alındığında, bu aynı zamanda tutarlı sonuçlar elde etmek için gereken hayvan sayısını azaltma ve değişkenliği sınırlamak için kullanılan yaklaşımı iyileştirme potansiyeline sahiptir.

Sunulan verilere dayanan bir diğer tartışma noktası, bu çalışmanın hayvanların tek kişilik olmasıyla gerçekleştirilmiş olmasıdır. Tek gövde, bireyler arası değişkenliğe katkıda bulunabilecek potansiyel agonistik davranışları (özellikle erkek farelerde) sınırladığı için tercih edildi28,29. Gruplar arasında tutarlılık için, tüm hayvanlar tek bir evdeydi. Sıçan gıdıklama şeklinde sıçanlarda olumlu deneyci-hayvan etkileşimlerinin, tek kişilik sıçanlarda sosyal izolasyonun bazı etkilerini azaltabildiğini belirtmek de ilginçtir30,31. 3D işleme tekniği veya Ghosal ve ark.11 tarafından tanımlanan fincan masajı tekniği gibi hayvan ve deneyci arasında doğrudan temas içeren elleçleme tekniklerinin de benzer bir etkiye sahip olması mümkündür. Gelecekteki çalışmalar, tek ve grup ev hayvanlarındaki elleçleme tekniklerinin etkilerini karşılaştırarak bu soruyu araştırabilir. Geçmiş çalışmalar, grup tarafından barındırılan bir ortamda farelerle fincan ve tünel işleme yaklaşımlarının etkisini araştırdı ve benzer sonuçlar elde etti7,8. Bu, burada açıklanan elleçleme protokollerini tek ev veya grup evi koşullarında tutulan hayvanlarla kullanmanın mümkün olduğunu doğrular, bir hayvanı kafesten çıkarırken ve geri yerleştirirken (özellikle erkek farelerde veya agresif fare çizgilerinde) agonistik davranış olasılığını göz önünde bulundurarak. Bu gibi durumlarda, tüm hayvanları bir araya toplamadan önce geçici bir kafes kullanılması önerilir.

Sonuç olarak, önerilen 3D işleme yaklaşımı farelerde reaktivite ve stresi azaltmaya katkıda bulunur. Ayrıca, 3 günlük işlemden sonra değişkenliği azaltarak veri güvenilirliğini artırır. Benzer sonuçlar, 10 günlük tünel elleçleme sonrasında bizim durumumuzda tünel elleçleme ile gözlenebilir. Tünel işleme tekniği ile karşılaştırıldığında, 3D işleme tekniği, bazı durumlarda kritik olabilen 6 aylık erkek farelerimizde bir deneyci ile etkileşimi artırmanın faydasını sağladı. 3D veya tünel işleme tekniği, veri üretimi için büyük bir gelişmeyi temsil edecek ve araştırmalarda hayvan kullanımının azaltılmasına büyük katkıda bulunacak tüm hayvan tesislerinde uygulanacaksa.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarların açıklayacak bir çıkar çatışması yoktur.

Acknowledgments

Yazarlar, camh hayvan bakım komitesine bu çalışmayı desteklenerek teşekkür ederek, prosedürün yararlılığı hakkında kapsamlı geri bildirimde bulunan CAMH hayvan bakıcılarına, açıklanan deneylerin yürütülmesini motive eden ve diğer kullanıcılar için ayrıntılı protokolün sunulmasını sağlayan camh hayvan bakıcılarına teşekkür ediyor. Bu çalışma kısmen CAMH BreakThrough Challenge tarafından finanse edildi, TP'ye verildi ve CAMH'ın iç fonları tarafından finanse edildi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
23 G x 1 in. BD PrecisionGlide general use sterile hypodermic needle. Regular wall type and regular bevel. BD 2546-CABD305145 Needles for Blood collection
BD Vacutainer® Venous Blood Collection EDTA Tubes with Lavender BD Hemogard™ closure, 2.0ml (13x75mm), 100/pk BD 367841 EDTA Coated tubes for blood collection
Bed’o cobs ¼” Corn cob laboratory animal bedding Bed-O-Cobs BEDO1/4 Novel bedding for novelty suppressed feeding
Centrifuge Eppendorf Centrifuge 5424 R For centrifugation of blood.
Corticosterone ELISA Kit Arbor Assays K003-H1W
Digital Camera Panasonic HC-V770 Camera to record EPM/Experimenter interactions
Elevated Plus Maze Home Made n/a Custom Maze made of four black Plexiglas arms (two open arms (29cm long by 7 cm wide) and two enclosed arms (29 cm long x7 cm wide with 16 cm tall walls)) that form a cross shape with the two open arms opposite to each other held 55 cm above the floor
Ethanol Medstore House Brand 39753-P016-EA95 Dilute to 70% with Distilled water, for cleaning
Ethovision XT 15 Noldus n/a Automated animal tracking software
Laboratory Rodent Diet LabDiet Rodent Diet 5001 Standard Rodent diet
Memory Card Kingstone Technology SDA3/64GB For video recording and file transfer
Novelty Suppressed Feeding Chamber Home Made n/a Custom test plexiglass test chamber with clear floors and walls 62cm long, by 31cm wide by 40cm tall .
Parlycarbonate tubes Home Made n/a 13 cm in length and 5cm in diameter
Purina Yesterday’s news recycled newspaper bedding Purina n/a Standard Bedding
Spectrophotometer Biotek Epoch Microplate Reader

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936 (2006).
  2. Bryda, E. C. The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).
  3. Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data. EJNMMI Research. 2 (1), 26 (2012).
  4. Howard, B. R. Control of Variability. ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).
  5. Toth, L. A. The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research. Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).
  6. Golini, E., et al. A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS. Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).
  7. Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring. PLoS One. 14 (8), 0220751 (2019).
  8. Stewart, K., Schroeder, V. A. Rodent Handling and Restraint Techniques. Journal of Visualized Experiments. , (2021).
  9. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).
  10. Gouveia, K., Hurst, J. L. Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice. Scientific Reports. 9 (1), 20305 (2019).
  11. Gouveia, K., Hurst, J. L. Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling. Scientific Reports. 7, 44999 (2017).
  12. Ghosal, S., et al. Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints. Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).
  13. Wahlsten, D., et al. Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction. Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).
  14. Nature Neuroscience. Troublesome variability in mouse studies. Nature Neuroscience. 12 (9), 1075 (2009).
  15. Sensini, F., et al. The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific. Scientific Reports. 10 (1), 17281 (2020).
  16. Ghosal, S., et al. Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints. Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).
  17. Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour. PLoS One. 10 (7), 0130718 (2015).
  18. Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. Mouse Handling Tutorial. NC3Rs. , (2016).
  19. Gouveia, K., Hurst, J. L. Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels. PLoS One. 8 (6), 66401 (2013).
  20. Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey. PLoS One. 15 (4), 0231454 (2020).
  21. Percie Du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research. PLOS Biology. 18 (7), 3000410 (2020).
  22. Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet. Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).
  23. Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex. Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).
  24. LaFollette, M. R., et al. Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel. Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).
  25. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
  26. Bailoo, J. D., et al. Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).
  27. Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool. Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).
  28. Theil, J. H., et al. The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice. Scientific Reports. 10 (1), 16649 (2020).
  29. Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem. Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).
  30. Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats. Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).
  31. Panksepp, J., Burgdorf, J. 50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables. Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).

Tags

Davranış Sayı 175
Farelerde Stresi Azaltmak için Elleçleme Teknikleri
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Marcotte, M., Bernardo, A., Linga,… More

Marcotte, M., Bernardo, A., Linga, N., Pérez-Romero, C. A., Guillou, J. L., Sibille, E., Prevot, T. D. Handling Techniques to Reduce Stress in Mice. J. Vis. Exp. (175), e62593, doi:10.3791/62593 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter