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Medicine

अपक्षयी रेटिना रोगों के लिए एक गैर-मानव प्राइमेट मॉडल में रेटिना वर्णक उपकला प्रत्यारोपण

Published: June 14, 2021 doi: 10.3791/62638
Automatic Translation
*1,2, *1,3,4, 1, 2, 1,2,5, 1,4,6, 1,2,4, 1,2,3,4, 1,7,8
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 4Singapore Eye Research Institute (SERI), 5UCL Institute of Ophthalmology, 6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 8Department of Ophthalmology, University of Bonn
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

गैर-मानव प्राइमेट (एनएचपी) शारीरिक और आनुवंशिक समानताओं के कारण मानव रेटिना सेलुलर चिकित्सीय का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल है। यह पांडुलिपि एनएचपी आंखों में रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं के उप-दस्तावेजीय प्रत्यारोपण के लिए एक विधि का वर्णन करती है और मैकुलर हेरफेर से जुड़ी इंट्राऑपरेटिव जटिलताओं को रोकने के लिए रणनीतियों का वर्णन करती है।

Abstract

रेटिना वर्णक उपकला (आरपीई) प्रत्यारोपण विरासत में मिली और अधिग्रहित रेटिना अपक्षयी बीमारियों के उपचार के लिए महान वादा रखता है। इन स्थितियों में रेटिनाइटिस पिगमेंटोसा (आरपी) और उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी) के उन्नत रूप शामिल हैं, जैसे कि भौगोलिक शोष (जीए)। साथ में, ये विकार विश्व स्तर पर वर्तमान में इलाज योग्य अंधापन के एक महत्वपूर्ण अनुपात का प्रतिनिधित्व करते हैं। इन अपूर्ण चिकित्सा आवश्यकताओं ने आरपीई प्रतिस्थापन के तरीकों को विकसित करने में बढ़ी हुई अकादमिक रुचि उत्पन्न की है। आमतौर पर चिकित्सीय के प्रीक्लिनिकल परीक्षण के लिए उपयोग किए जाने वाले पशु मॉडलों में से, गैर-मानव प्राइमेट (एनएचपी) एकमात्र पशु मॉडल है जिसमें मैक्यूला होता है। जैसा कि यह मानव आंख के साथ इस शारीरिक समानता को साझा करता है, एनएचपी आंख उन्नत चिकित्सा औषधीय उत्पादों (एटीएमपी) जैसे आरपीई सेल थेरेपी के विकास के लिए एक महत्वपूर्ण और उपयुक्त प्रीक्लिनिकल पशु मॉडल है।

यह पांडुलिपि एक आरपीई मोनोलेयर के उप-मैकुलर प्रत्यारोपण के लिए एक विधि का वर्णन करती है, जो पॉलीइथिलीन टेरेफ्थालेट (पीईटी) सेल वाहक पर सुसंस्कृत होती है, मैक्यूला के नीचे एक सर्जिकल रूप से बनाए गए आरपीई घाव पर इम्यूनोस्प्रेस्ड एनएचपी में। फोवा-मैक्यूला का केंद्रीय एवैस्कुलर हिस्सा-प्रत्यारोपण के दौरान सबसे बड़ी यांत्रिक कमजोरी की साइट है। फोवल आघात तब होगा जब प्रारंभिक सबरेटिनल द्रव इंजेक्शन रेटिना पर अत्यधिक बल उत्पन्न करता है। इसलिए, perfluorocarbon तरल (PFCL) vitreous टैम्पोनेड के तहत धीमी गति से इंजेक्शन एक रेटिना ब्लेब बनाने के लिए कम इंट्राओकुलर दबाव (आईओपी) सेटिंग्स पर एक दोहरे बोर subretinal इंजेक्शन cannula के साथ सिफारिश की है।

एक intravitreal plasminogen इंजेक्शन के साथ pretreatment parafoveal RPE-photoreceptor आसंजन जारी करने के लिए भी सलाह दी जाती है। ये संयुक्त रणनीतियां पारंपरिक तकनीकों की तुलना में फोवल आँसू की संभावना को कम कर सकती हैं। एनएचपी आरपीई सेल थेरेपी विकास के प्रीक्लिनिकल चरण में एक प्रमुख पशु मॉडल है। यह प्रोटोकॉल एनएचपी आंखों में आरपीई सेलुलर थेरेपी के वितरण से जुड़ी तकनीकी चुनौतियों को संबोधित करता है।

Introduction

आरपीई प्रत्यारोपण विरासत में मिली और अधिग्रहित रेटिना अपक्षयी बीमारियों के उपचार के लिए महान वादा करता है। इन स्थितियों में रेटिनाइटिस पिगमेंटोसा (आरपी, रॉड-कोन डिस्ट्रॉफी) और एएमडी के उन्नत रूप जैसे जीए शामिल हैं। सामूहिक रूप से, ये विकार विश्व स्तर पर वर्तमान में इलाज योग्य अंधापन के एक महत्वपूर्ण अनुपात का प्रतिनिधित्व करते हैं1,2। एएमडी के उन्नत चरणों को नियोवैस्कुलर एएमडी (एनएएमडी) और जीए में वर्गीकृत किया गया है। जबकि एनएएमडी के लिए प्रभावी उपचार विकल्प हैं, जैसे कि एंटी-वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (एंटी-वीईजीएफ) इंजेक्शन, जीए वाले रोगियों के पास सीमित उपचार विकल्प हैं। आरपी विरासत में मिले रेटिना विकारों का एक अत्यधिक विषम समूह है जो प्रगतिशील रेटिना फोटोरिसेप्टर अध: पतन की विशेषता है। कुछ रोगियों में, प्रेरक आनुवंशिक दोष फोटोरिसेप्टर के बजाय आरपीई के भीतर स्थित होता है; इसलिए, आरपीई रिप्लेसमेंट थेरेपी एक वैकल्पिक रणनीति हो सकती है यदि जीन थेरेपी संभव नहीं है।

इन स्थितियों के लिए प्रभावी उपचार विकसित करने में महत्वपूर्ण रुचि है। विशेष रूप से, आरपीई प्रत्यारोपण एक संभावित चिकित्सीय दृष्टिकोण 3,4,5,6,7,8 के रूप में कर्षण प्राप्त कर रहा है। चूंकि आरपीई प्रत्यारोपण पर पहली रिपोर्ट 1980 के दशक में दिखाई दी थी, इसलिए इस क्षेत्र में विभिन्न आरपीई सेल स्रोतों, वितरण रणनीतियों और रोग और प्रत्यारोपण के प्रयोगात्मक मॉडल 10,11,12,13,14 को शामिल करने के लिए विस्तार किया गया है। विभिन्न पशु मॉडलों में, केवल एनएचपी में 'फोवा सेंट्रलिस' के साथ एक 'मैकुला ल्यूटिया' है, जो मनुष्यों के साथ साझा रेटिना के पीछे के ध्रुव पर एक शारीरिक विशेषज्ञता है। fovea शंकु photoreceptors का एक बहुत ही उच्च घनत्व उच्च संकल्प केंद्रीय vision15 सक्षम होता है. एनएचपी में मनुष्यों की तुलना में एक समान जीनोमिक और प्रोटिओमिक मेकअप 16 भी है। ये समानताएं इसे ओकुलर रोगों के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण और उपयुक्त पशु मॉडल बनाती हैं जो मानव रेटिना 17,18 को प्रभावित करती हैं।

यह पांडुलिपि एक आरपीई के उप-धब्बेदार प्रत्यारोपण के लिए एक विधि का वर्णन करती है, जो एक पीईटी सेल वाहक द्वारा समर्थित है, इम्यूनोसप्रेस्ड एनएचपी में। खरगोशों में सबरेटिनल आरपीई प्रत्यारोपण के लिए एक ट्रांसविट्रल तकनीक को पिछले पांडुलिपि 19 में वर्णित किया गया है। हालांकि, एनएचपी में, फोवा की उपस्थिति को इंट्राऑपरेटिव हेरफेर 20 के दौरान विशेष देखभाल की आवश्यकता होती है। विशेष रूप से, एक फोवल आंसू का एक उच्च जोखिम है यदि सबरेटिनल द्रव इंजेक्शन विधियां रेटिना 20 पर अत्यधिक बल उत्पन्न करती हैं। इस पांडुलिपि का ध्यान, इसलिए, एनएचपी में अनजाने में फोवल आघात के जोखिम को कम करने के लिए रणनीतियों पर है।

इनमें पैराफोवल आसंजनों की रिहाई के लिए प्रीऑपरेटिव इंट्राविट्रियल प्लास्मिनोजेन इंजेक्शन का उपयोग शामिल है और सर्जिकल माइक्रोस्कोप-एकीकृत ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी (miOCT) फोवल एनाटॉमी के वास्तविक समय के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए इंट्राऑपरेटिव रूप से। कम आईओपी सेटिंग्स के तहत इंट्राओकुलर पीएफसीएल टैम्पोनेड के साथ एक कस्टम-मेड 25/41 जी डुअल-बोर सबरेटिनल कैनुला को फोवल डिटेचमेंट की अधिक नियंत्रित प्रक्रिया की अनुमति देने के लिए प्रस्तावित किया गया है। इसके अलावा, देशी आरपीई के सर्जिकल हटाने की सिफारिश आरोपण से पहले की जाती है ताकि प्रत्यारोपित आरपीई कोशिकाओं और मेजबान फोटोरिसेप्टर के बीच बेहतर एकीकरण की अनुमति मिल सके। अंत में, एनएचपी मॉडल के लिए एक पेरी- और पोस्टऑपरेटिव सिस्टमिक इम्यूनोसप्रेशन प्रोटोकॉल को आरपीई के अस्तित्व में सुधार करने के लिए वर्णित किया गया है, जो प्रत्यारोपण के बाद 11,21 है।

Protocol

नोट: सभी पशु प्रयोगों को नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में जानवरों के उपयोग के लिए दृष्टि और नेत्र विज्ञान (एआरवीओ) में अनुसंधान के एसोसिएशन के अनुसार आयोजित किया गया था। नैतिकता अनुमोदन संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति, सिंगहेल्थ, सिंगापुर से प्राप्त किया गया था। जानवरों को SingHealth Experimental Medicine Centre में रखा गया था, जिसे एसोसिएशन फॉर असेसमेंट एंड एक्रिडिटेशन ऑफ लेबोरेटरी एनिमल केयर (AAALAC) द्वारा अनुमोदित किया गया था। यह अनुमोदन इस बात पर प्रकाश डालता है कि सभी पशु प्रयोग सिंगापुर के कृषि खाद्य और पशु चिकित्सा प्राधिकरण द्वारा निर्धारित प्रयोगशाला पशु अनुसंधान दिशानिर्देशों के लिए राष्ट्रीय सलाहकार समिति के मानकों का पालन करते हैं। निम्नलिखित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल 6 Macaca fascicularis (4 पुरुष और 2 महिला, 4 से 6 वर्ष की उम्र, 2.8 से 4.0 किलोग्राम) की 6 आंखों में किए गए प्रयोगों के आधार पर स्थापित किया गया था ।

1. एनएचपी मॉडल में इम्यूनोसप्रेशन प्राप्त करना

  1. सर्जरी से 7 दिन पहले इम्यूनोसप्रेशन शुरू करें और अनुवर्ती अवधि के दौरान इम्यूनोसप्रेशन जारी रखें।
  2. सटीक दवा की खुराक सुनिश्चित करने के लिए प्रणालीगत इम्यूनोसप्रेशन के प्रशासन से पहले एनएचपी का वजन करें। जानवर को बेसलाइन और उसके बाद साप्ताहिक रूप से तौला जाता है।
  3. प्रणालीगत इम्यूनोसप्रेशन प्राप्त करने के लिए मौखिक सिरोलिमस, डॉक्सीसाइक्लिन और मिनोसाइक्लिन का उपयोग करें।
    1. मौखिक सिरोलिमस के 2 मिलीग्राम की लोडिंग खुराक का प्रशासन करें, इसके बाद 1 मिलीग्राम की दैनिक रखरखाव खुराक। प्रशासन से पहले बेसलाइन रक्त सिरोलिमस स्तर प्राप्त करें और अनुवर्ती अवधि के दौरान इसकी निगरानी करें। पर्याप्त इम्यूनोसप्रेशन के लिए कम से कम 5 μg / L की एकाग्रता सुनिश्चित करें।
      नोट: सिरोलिमस खुराक वजन-अनुकूलित नहीं है।
    2. प्रति दिन मौखिक डॉक्सीसाइक्लिन की 7.5 मिलीग्राम / किलोग्राम की खुराक का प्रशासन करें, प्रति दिन दो बार।
    3. प्रति दिन मौखिक minocycline के 7.5 मिलीग्राम / किग्रा की एक खुराक प्रशासित करें, प्रति दिन दो बार।
  4. इम्यूनोसप्रेशन के दौरान, प्रतिकूल प्रणालीगत प्रभावों के लिए सभी एनएचपी की निगरानी करें। महत्वपूर्ण शरीर के वजन घटाने (>10%), भूख और पानी की खपत में कमी, बालों के झड़ने, और आक्रामकता और सुस्ती जैसे असामान्य व्यवहार की तलाश करें। मूल्यांकन दिन 3, 14 और 1 महीने पर किया जाएगा, इसके बाद मासिक आकलन किया जाएगा।

2. साधन नसबंदी

  1. आसुत पानी का उपयोग करके सर्जिकल उपकरणों को कुल्ला।
  2. आसुत पानी के 500 मिलीलीटर और उपकरण कीटाणुनाशक के 2 एमएल के साथ भरा एक अल्ट्रासोनिक स्नान में उपकरणों जगह। 15 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक स्नान के स्वीप समारोह का उपयोग कर उपकरणों को साफ करें।
  3. अल्ट्रासोनिक स्नान से उपकरणों को निकालें। प्रत्येक कुल्ला 5 मिनट के लिए आसुत पानी के साथ दो बार अच्छी तरह से कुल्ला। कुल्ला करने के बाद उपकरणों को हवा से सुखाएं।
  4. उपकरणों को एक उपकरण बॉक्स में रखें। यूनिवर्सल प्रोग्राम सेटिंग का उपयोग करके बॉक्स को आटोक्लेव करें (50 मिनट के लिए 134 डिग्री सेल्सियस पर उपकरणों की नसबंदी: ऑटोक्लेविंग के लिए 30 मिनट, सुखाने के लिए 20 मिनट)।

3. परिरक्षक मुक्त triamcinolone की तैयारी (40 मिलीग्राम /

  1. 1 एमएल सिरिंज का उपयोग करके, 1 एमएल ट्रायमसिनोलोन समाधान (10 मिलीग्राम / एमएल) को वापस लें। इसे 15 मिली शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें और इसे बाँझ संतुलित नमक समाधान (बीएसएस) के 4 मिलीलीटर के साथ मिलाएं।
  2. 5 मिनट के लिए 120 × जी पर समाधान को सेंट्रीफ्यूज करें। सुनिश्चित करें कि सभी triamcinolone कण शंक्वाकार ट्यूब के नीचे हैं। शंक्वाकार ट्यूब से supernatant (BSS) को छोड़ दें।
  3. शंक्वाकार ट्यूब में बाँझ बीएसएस के 5 मिलीलीटर के साथ ट्रायमसिनोलोन कणों को फिर से निलंबित करें। 5 मिनट के लिए 120 × g पर समाधान को सेंट्रीफ्यूज करें। supernatant फिर से छोड़ दें।
  4. बीएसएस (3x) के साथ triamcinolone कणों की धुलाई को पूरा करने के लिए चरण 3.3 को दोहराएं।
  5. 40 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता प्राप्त करने के लिए बाँझ बीएसएस के 0.25 मिलीलीटर के साथ ट्रायमसिनोलोन कणों को फिर से निलंबित करें।
  6. एक नए 1 एमएल सिरिंज के साथ फिर से निलंबित triamcinolone (40 मिलीग्राम / एमएल) aspirate। एक 25 जी कुंद-टिप बांसुरी सुई संलग्न करें, और ट्राइएमसिनोलोन समाधान के साथ सिरिंज को इंट्राऑपरेटिव उपयोग के लिए तैयार रखें।

4. intravitreal plasminogen के साथ NHP आंखों के Pretreatment (0.25 μg /

  1. सर्जरी से एक सप्ताह पहले, बंदर प्लास्मिनोजेन (0.25 μg / μL) के एक इंट्राविट्रियल इंजेक्शन (20 μL) का प्रशासन करें।
  2. केटामाइन (10-20 मिलीग्राम / किग्रा बीडब्ल्यू) के इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन और एट्रोपिन (0.05 मिलीग्राम / किग्रा बीडब्ल्यू) के चमड़े के नीचे इंजेक्शन के साथ प्रक्रिया से पहले एनएचपी को बेहोश करें। स्थानीय संज्ञाहरण के लिए टेट्राकेन आईड्रॉप्स का प्रशासन करें।
  3. इंट्राविट्रल इंजेक्शन से पहले, 10% पोविडोन-आयोडीन के साथ पेरिऑर्बिटल क्षेत्र को कीटाणुरहित करें। एनएचपी के कंजाक्टिवल फॉर्निस को 5% पोविडोन-आयोडीन का प्रशासन करके आंख को कीटाणुरहित करें। सुनिश्चित करें कि समाधान बाँझ बीएसएस के साथ अच्छी तरह से धोने से पहले कम से कम 1 मिनट के लिए fornices में रहता है।
  4. शीशी से पूर्व-पतला बंदर प्लास्मिनोजेन (0.25 μg / μL) को एस्पिरेट करने के लिए 250 μL सिरिंज का उपयोग करें। सिरिंज के लिए एक 30 जी सुई संलग्न करें, और बंदर plasminogen intravitreal प्रशासन के लिए तैयार रखें।
  5. आंख पर इंजेक्शन साइट की पहचान करने के लिए कैलिपर की एक जोड़ी का उपयोग करें। इंट्राविट्रियल इंजेक्शन को लिम्बस से 3 मिमी दूर प्रशासित करें।
  6. दुनिया के केंद्र की ओर निर्देशित सुई के साथ इंजेक्शन के साथ आगे बढ़ें। दुनिया से सुई को हटाने पर, इंजेक्शन साइट को टैम्पोनेड करने के लिए एक कपास applicator छड़ी का उपयोग करें और इंट्राओकुलर सामग्री के भाटा को रोकने के लिए।
  7. तत्काल पश्चात ओकुलर सतह की जलन को कम करने के लिए एक स्नेहक जेल या मरहम का प्रशासन करें।

5. सर्जिकल टेबल और उपकरण सेटअप

  1. एक बाँझ क्षेत्र स्थापित करें। बाँझ क्षेत्र में होने पर, हर समय सर्जिकल स्क्रब, मास्क और हेयर कवर पहनें।
  2. Vitreous के intraoperative विज़ुअलाइज़ेशन के लिए परिरक्षक-मुक्त triamcinolone (40 mg / mL) तैयार करें (अनुभाग 3 देखें)। एक 5 एमएल सिरिंज में एक 10 मिलीलीटर सिरिंज और स्नेहक में बाँझ बीएसएस तैयार करें। उन्हें एक ड्रेप पर रखें।
  3. 3-0 रेशम, 7-0 विक्रिल टांके, कपास applicator छड़ें, घाव बंद स्ट्रिप्स, और झूमर endoillumination फाइबर तार सहित एक ड्रेप पर अन्य उपकरणों को तैयार रखें।
  4. उच्च गति vitrector, Venturi कैसेट, और 25 जी झूमर endoilluminator बाँझ तकनीक का उपयोग कर vitrectomy मशीन के लिए सहित vitrectomy सेट, कनेक्ट करें।
  5. एक 500 एमएल नेत्र ग्रेड बीएसएस बोतल खोलें और निर्माता के निर्देशों के अनुसार इसे वेंचुरी कैसेट से कनेक्ट करें। सिस्टम को भड़काने के साथ आगे बढ़ें।
  6. MIOCT/Surgical माइक्रोस्कोप पर स्विच करें। पश्चवर्ती खंड सर्जरी और रोशनी के लिए सर्जिकल माइक्रोस्कोप के पूर्व निर्धारित विन्यास का चयन करें। आईडी, लिंग, पशु आंख की पार्श्वता, और प्रक्रिया का नाम सहित प्रक्रिया का विवरण दर्ज करें।
  7. एक गैर-संपर्क, चौड़े कोण, 128 डिग्री फंडस लेंस माउंट करें।
  8. सर्जिकल माइक्रोस्कोप / miOCT पर बाँझ डिस्पोजेबल हाथ टुकड़ा कवर संलग्न करें। माइक्रोस्कोप की स्थिति को समायोजित करें और पैर पेडल का उपयोग करके फ़ोकस करें। सर्जरी के साथ आगे बढ़ें।

6. संज्ञाहरण की तैयारी और जानवर की स्थिति (अधिमानतः पशु चिकित्सक टीम द्वारा प्रदर्शन)

  1. सुनिश्चित करें कि एनएचपी को संज्ञाहरण के प्रेरण से पहले कम से कम 8 घंटे के लिए उपवास किया जाता है ताकि पुनरावृत्ति और उल्टी को रोका जा सके। संज्ञाहरण के प्रेरण से पहले एनएचपी को बेहोश करें (बेहोश करने की क्रिया निर्देशों के लिए चरण 4.2 देखें)।
  2. पुतली फैलाव प्राप्त करने के लिए 5 मिनट के अंतराल के साथ कम से कम 3x पर 1% ट्रॉपिकमाइड और 2.5% फेनिलेफ्रिन आईड्रॉप्स लागू करें।
  3. एनाल्जेसिया प्राप्त करने के लिए सर्जरी से 30 मिनट पहले बुप्रेनोर्फिन (0.005-0.03 मिलीग्राम / किग्रा बीडब्ल्यू) के एक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन का प्रशासन करें।
  4. एक एंडोट्रेचियल ट्यूब के साथ एनएचपी को इंटुबेट करें, आमतौर पर आकार में 3-5 मिमी। इंटुबैषेण का प्रयास करते समय, सुनिश्चित करें कि कई आकार उपलब्ध हैं। आघात पैदा किए बिना स्वरयंत्र के माध्यम से पारित किया जा सकता है कि सबसे बड़े आकार का उपयोग करें। एंडोट्रेचियल ट्यूब के उपयुक्त प्लेसमेंट को सुनिश्चित करने के लिए अंत ज्वारीय CO2 को मापें।
  5. सामान्य संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए एंडोट्रेचियल ट्यूब के माध्यम से 2% आइसोफ्लोरेन गैस वितरित करें। ध्वनियों और स्पर्श सहित आसपास की उत्तेजनाओं के लिए एनएचपी की प्रतिक्रिया का आकलन करके सामान्य संज्ञाहरण (स्पर्श करने के लिए प्रतिक्रिया की कमी) की स्थिति की पुष्टि करें। सामान्य संज्ञाहरण की स्थिति को बनाए रखने के लिए 0.5-2% आइसोफ्लोरेन गैस का उपयोग करें।
  6. पूरी सर्जरी के दौरान एनएचपी इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम, श्वसन दर, रक्तचाप और ऑक्सीजन संतृप्ति की लगातार निगरानी करें।
  7. सर्जिकल टेबल पर एनएचपी को इस तरह से रखें कि आंख सर्जिकल माइक्रोस्कोप के लंबवत हो। आंखों को एक स्नेहक जेल या मरहम दें, जिसे संज्ञाहरण के दौरान ओकुलर सतह की जलन को कम करने के लिए संचालित नहीं किया जा रहा है।
  8. संक्रमण की संभावना को कम करने के लिए कैंची का उपयोग करके eyelashes काटें।
  9. 10% पोविडोन-आयोडीन के साथ पेरिऑर्बिटल क्षेत्र को कीटाणुरहित करें। एनएचपी के कंजाक्टिवल फॉर्निस को 5% पोविडोन-आयोडीन का प्रशासन करके आंख को कीटाणुरहित करें। सुनिश्चित करें कि समाधान बाँझ बीएसएस के साथ अच्छी तरह से धोने से पहले कम से कम 1 मिनट के लिए fornices में रहता है।
  10. एक बाँझ ड्रेप की स्थिति इस तरह से रखें कि प्री-कट ओपनिंग सर्जरी से गुजरने के लिए आंखों पर केंद्रित हो। एक चिपकने वाला सर्जिकल चीरा ड्रेप के साथ आंख को कवर करें।
  11. सर्जरी से गुजरने के लिए आंख पर एक पार्श्व कैनथोटॉमी करें।
  12. आंख के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए पलकों के पर्याप्त उद्घाटन को सुनिश्चित करने के लिए लिबरमैन स्पेकुलम डालें।

7. विट्रेक्टोमी

नोट: पीईटी-पाड़ आरपीई ग्राफ्ट के वितरण के लिए सबरेटिनल स्पेस तक पहुंचने के लिए, यह प्रोटोकॉल एक मानक विट्रियोरेटिनल सर्जिकल सेटअप और एक गैर-संपर्क, वाइड-एंगल, 128 डिग्री फंडस लेंस का उपयोग करके किए जाने वाले 4-पोर्ट (वाल्व्ड) 25 जी विट्रेक्टोमी की सिफारिश करता है। प्रोटोकॉल कई महत्वपूर्ण सर्जिकल चरणों का मार्गदर्शन करने के लिए miOCT से लैस एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप के उपयोग की भी सिफारिश करता है, जिसमें फोवल डिटेचमेंट का प्रेरण, आरपीई ग्राफ्ट का आरोपण और सबरेटिनल द्रव जल निकासी शामिल है।

  1. vannas कैंची की एक जोड़ी का उपयोग कर limbus के पास conjunctiva incising द्वारा एक 360 ° नेत्रश्लेष्मला peritomy प्रदर्शन. एक कुंद विच्छेदन करके पेरिटॉमी को बड़ा करें।
  2. 25 जी माइक्रोविट्रिओरेटिनल ब्लेड का उपयोग करके, दाईं आंख के लिए 8 बजे या बाईं आंख के लिए 4 बजे एक स्क्लेरोटॉमी करें। आंख के लिम्बस से 3 मिमी स्क्लेरोटॉमी करें।
  3. सम्मिलित करें और 7-0 vicryl टांका का उपयोग कर एक 25 जी कस्टम पक्ष बंदरगाह-जलसेक cannula सीवन सीवन. इंट्राविट्रियल स्थान की पुष्टि करने के बाद, बीएसएस जलसेक शुरू करें और 20 mmHg के आईओपी को बनाए रखने के लिए सिस्टम सेट करें।
  4. एक 25 जी फ्लैट सिर trochar का उपयोग करते हुए, सही आंख के लिए 2 बजे या बाईं आंख के लिए 10 बजे एक स्क्लेरोटॉमी करें, जैसा कि चरण 7.2 में है।
  5. flathead trochar में 25 जी झूमर प्रकाश डालें और चिपचिपा टेप के साथ इसे सुरक्षित करें। प्रकाश स्रोत को लगभग 60% तक समायोजित करें।
  6. एक और स्क्लेरोटॉमी करें, चरण 7.2 के समान, दाईं आंख के लिए 10 बजे या बाईं आंख के लिए 2 बजे। समुद्री मील बांधने के बिना स्क्लेरोटॉमी के चारों ओर यू-आकार के विक्रिल 7-0 टांके रखें। इस स्क्लेरोटॉमी के माध्यम से विट्रेक्टॉमी कटर टिप डालें।
  7. प्रविष्टि बंदरगाहों के चारों ओर विट्रेक्टॉमी शुरू करें, इसके बाद निम्नलिखित सेटिंग्स के साथ एक छोटा कोर विट्रेक्टॉमी: प्रति मिनट अधिकतम 5000 कटौती, 400 एमएमएचजी पर अधिकतम आकांक्षा।
  8. बेहतर vitreous विज़ुअलाइज़ेशन के लिए triamcinolone (40 मिलीग्राम / एमएल) के 20-50 μL इंजेक्ट करें।
  9. रेटिना से विट्रियस शरीर को अलग करके एक पश्चवर्ती विट्रियस टुकड़ी (पीवीडी) को प्रेरित करें।
    1. PVD के कोमल प्रेरण की अनुमति देने के लिए ऑप्टिक डिस्क के ऊपर vitrector की स्थिति। Vitrector केवल किसी भी काटने शामिल बिना 400 mmHg की अधिकतम सेटिंग पर आकांक्षा पर रखें।
    2. यदि आवश्यक हो, तो टुकड़ी की सुविधा के लिए विट्रियस कॉर्टेक्स में एक आंसू बनाने के लिए डिस्क मार्जिन पर विट्रियस में हेरफेर करने के लिए 25 जी इंट्राओकुलर संदंश का उपयोग करें।
      नोट: PVD सफल माना जाता है यदि triamcinolone क्रिस्टल रेटिना सतह पर निर्बाध ग्लाइड.
  10. कटर के साथ पीछे hyaloid झिल्ली खोलें, और विट्रियस आधार (रेटिना भूमध्य रेखा पर) तक अलग vitreous स्कर्ट को हटा दें। रेटिना सतह पर किसी भी शेष triamcinolone aspirate.

8. miOCT-निर्देशित foveal टुकड़ी

  1. पूर्वकाल, मध्य-परिधीय रेटिना तक पीछे के ध्रुव को कवर करने के लिए PFCL के 1-2 मिलीलीटर इंजेक्ट करें।
  2. एक subretinal इंजेक्शन प्रवेशनी के साथ आंख दर्ज करें. विट्रेक्टोमी मशीन पर आईओपी को 0-4 एमएमएचजी पर सेट करें (पूरी तरह से वाटरटाइट सिस्टम सुनिश्चित करें; यदि आवश्यक हो, तो बंदरगाहों के चारों ओर टांके बांधें)।
  3. या तो 25/41 जी अनुकूलित दोहरी-बोर सबरेटिनल इंजेक्शन कैनुला या 25/38 जी सबरेटिनल इंजेक्शन कैनुला का उपयोग करके 250 μL सिरिंज से जुड़ा हुआ है, धीरे से एक स्थानीयकृत रेटिना टुकड़ी को प्रेरित करने के लिए बीएसएस का एक सबरेटिनल इंजेक्शन निष्पादित करें। एक बार जब ब्लेब सिर्फ फोवा को पार कर जाता है, तो इंजेक्शन बंद कर दें। एक अलग दिशा से एक दूसरा bleb बनाएँ। fovea को पूरी तरह से अलग करने के लिए दोनों blebs मर्ज करें।
  4. bleb गठन visualize करने के लिए miOCT फ़ंक्शन को सक्षम करें। सुनिश्चित करें कि लाइन और क्यूब स्कैन सेटिंग्स (512 x 128 पिक्सेल, स्कैन चौड़ाई 4 मिमी) के साथ HD मोड में हैं ताकि fovea पर एक छवि प्राप्त की जा सके। fovea पर RPE परत से तंत्रिका रेटिना की एक पूरी टुकड़ी के लिए miOCT छवि का निरीक्षण करें।
  5. retinotomy को ऊर्ध्वाधर 25 G vitreoretinal कैंची की एक जोड़ी के साथ 1.5 मिमी तक बढ़ाएं ताकि प्रत्यारोपण के लिए सबरेटिनल स्पेस तक पहुंच की अनुमति मिल सके।

9. देशी आरपीई को हटाना

  1. विट्रेक्टॉमी मशीन पर आईओपी को 50 एमएमएचजी पर सेट करें।
  2. एक ब्रश सिलिकॉन टिप प्रवेशनी का उपयोग कर सक्रिय बाहर निकालना के माध्यम से PFCL निकालें.
  3. एक 20 जी उपकरण के प्रवेश की अनुमति देने के लिए एक 1.4 मिमी चीरा चाकू के साथ स्क्लेरोटॉमी का विस्तार करें।
  4. एक कस्टम 20 जी एक्सटेंसिबल लूप उपकरण का उपयोग करते हुए, हटाने के लिए सबमैक्युलर होस्ट आरपीई को स्क्रैप करें। कम से कम 2 x 3 मिमी मापने वाले क्षेत्र को स्क्रैप करें।

10. आरपीई सेल मोनोलेयर प्रत्यारोपण के वितरण के लिए शूटर की लोडिंग

  1. पीईटी सेल वाहक पर आरपीई संस्कृतियों से एक बुलेट के आकार के ग्राफ्ट कट के लोडिंग पर सामान्य निर्देशों के लिए, पिछले प्रकाशन 22 को देखें।

11. miOCT-निर्देशित ग्राफ्ट आरोपण और स्थिति समायोजन

  1. 20 mmHg के एक IOP पर sclerotomy के माध्यम से शूटर डिवाइस की नोक डालें। रेटिना सतह से बनाए गए रेटिनोटॉमी किनारे के माध्यम से सबरेटिनल स्पेस की ओर इम्प्लांट इंजेक्ट करें।
  2. ब्रुच की झिल्ली का सामना करने वाले सेल वाहक पक्ष के साथ प्रत्यारोपण को इंजेक्ट करें और फोटोरिसेप्टर का सामना करने वाले आरपीई पक्ष का सामना करें।
  3. इम्प्लांट स्थान को विज़ुअलाइज़ करने के लिए miOCT फ़ंक्शन को सक्षम करें। सुनिश्चित करें कि प्रत्यारोपण एक बरकरार overlying रेटिना के साथ subretinal अंतरिक्ष में Bruch झिल्ली पर फ्लैट आराम कर रहा है। सुनिश्चित करें कि यह बनाए गए रेटिनोटॉमी से एक उचित दूरी पर स्थित है और रेटिनोटॉमी साइट पर प्रभावित नहीं है।
  4. सबरेटिनल इंजेक्शन कैनुला या 25 जी घुमावदार इंट्राओकुलर कैंची के साथ प्रत्यारोपण की स्थिति को समायोजित करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि यह मैक्यूला के नीचे अच्छी तरह से स्थित है।

12. miOCT-subretinal द्रव के निर्देशित जल निकासी

  1. ब्रश किए गए सिलिकॉन टिप कैनुला का उपयोग करके, एक तरल पदार्थ-हवा विनिमय और सावधान सबरेटिनल द्रव जल निकासी करें। bleb रेटिना टुकड़ी और retinotomy किनारे apposition से कोमल subretinal द्रव आकांक्षा का प्रयास करें।
  2. पर्याप्त subretinal द्रव जल निकासी के वास्तविक समय विज़ुअलाइज़ेशन के लिए miOCT समारोह को सक्षम करें जब तक रेटिना प्रत्यारोपण पर reattached है.

13. आपरेशन समाप्त

  1. 7-0 vicryl टांके प्रतिस्थापित पी का उपयोग कर काम पोर्ट sclerotomy बंद करें. 25 जी झूमर और 25 जी जलसेक प्रवेशनी को हटा दें। 7-0 vicryl टांके के साथ इन sclerotomies बंद करो.
  2. 0.05 मिलीलीटर इंट्राविट्रियल परिरक्षक मुक्त ट्रायमसिनोलोन (40 मिलीग्राम / एमएल) में 2 मिलीग्राम का प्रशासन 8 बजे स्क्लेरोटोमी में 8 बजे टांका लगाने से पहले।
  3. यह सुनिश्चित करने के लिए आंख को palpate करें कि आईओपी स्वीकार्य सीमा के भीतर है। यदि आवश्यक हो तो 30 जी सुई के माध्यम से फ़िल्टर की गई हवा (या बीएसएस) इंजेक्ट करें।
  4. 5-0 प्रोलीन के साथ 7-0 विक्रिल टांके और कैनथोटॉमी के साथ कंजंक्टिवा को सीवन करें (10-14 दिनों के बाद निकालें)।

14. पश्चात पशु देखभाल

  1. एनएचपी चेहरे को सर्जरी के बाद 1 घंटे के लिए नीचे की स्थिति में रखें। जब तक चेतना वापस नहीं आ जाती है तब तक जानवर को अनदेखा न छोड़ें। सुनिश्चित करें कि एक पशु चिकित्सक और पशु देखभाल तकनीशियन पश्चात की प्रक्रिया के दौरान अवलोकन और समर्थन के लिए उपलब्ध हैं।
  2. सामयिक एंटीबायोटिक (टोब्रामाइसिन), स्टेरॉयड (डेक्सामेथासोन) मरहम, और होमाट्रोपिन आंखों की बूंदों को 5 दिनों के लिए दिन में दो बार लागू करें।
  3. पर्याप्त दर्द नियंत्रण के लिए सर्जरी के बाद एक और चमड़े के नीचे buprenorphine (0.005-0.03 मिलीग्राम / किग्रा बीडब्ल्यू) इंजेक्शन 6 घंटे का प्रशासन करें।
  4. एनएचपी को अन्य जानवरों की कंपनी में तभी वापस करें जब यह पूरी तरह से होश में आ गया हो।
  5. प्रक्रिया के बाद दिन 3, 14 और महीने 1 पर मल्टीमॉडल इमेजिंग फॉलो-अप का संचालन करें, जिसके बाद मासिक चेकअप किया जाता है। प्रक्रिया के बाद हर महीने ERGs निष्पादित करें। मल्टीमॉडल इमेजिंग के लिए उपयोग की जाने वाली बेहोश करने की क्रिया अवधि के साथ समवर्ती रूप से दिन 14 पर कैनथोटॉमी के लिए 5-0 प्रोलीन टांके निकालें। शेष टांके रिसॉर्ब करने योग्य, 7-0 विक्रिल टांके हैं, जिन्हें हटाने की आवश्यकता नहीं है।

15. मल्टीमॉडल इमेजिंग के लिए पश्चात की निगरानी विधियों

  1. रात भर NHP फास्ट. इमेजिंग से ठीक पहले एनएचपी को बेहोश करें (बेहोश करने की क्रिया के लिए दवा और एकाग्रता के लिए चरण 4.2 देखें)। यदि बेहोश करने की क्रिया आंखों के आंदोलन को रोकने के लिए अपर्याप्त है, तो सामान्य संज्ञाहरण के उपयोग पर विचार करें।
  2. इमेजिंग से पहले पुतली फैलाव प्राप्त करने के लिए 1% ट्रॉपिकमाइड और 2.5% फेनिलेफ्रिन आईड्रॉप्स लागू करें (चरण 6.2 देखें)।
  3. Autofluorescence (AF), fundus fluorescein एंजियोग्राफी (FFA), और ऑप्टिकल सुसंगतता टोमोग्राफी (OCT) एक 55 ° क्षेत्र लेंस और 30 ° क्षेत्र लेंस के साथ एक उच्च संकल्प OCT मशीन का उपयोग कर प्रदर्शन करें।
    1. एफएफए के लिए अंतःशिरा 10% फ्लोरोसीन (0.1 एमएल / किग्रा बीडब्ल्यू) का प्रशासन करें। एक प्रारंभिक चरण छवि प्राप्त करने के लिए, इंजेक्शन के 30 एस के भीतर एक छवि पर कब्जा करें। देर से चरण की छवि के लिए, इंजेक्शन के 5-10 मिनट बाद एक छवि पर कब्जा करें।
  4. एफएफए के शुरुआती और देर से चरणों के बीच एक फंडस कैमरे का उपयोग करके फंडस फोटोग्राफी करें।

16. पूर्ण क्षेत्र electroretinogram (ERG) अध्ययन के लिए पश्चात निगरानी विधियों

  1. रात भर NHPs फास्ट. ERG अध्ययन से पहले NHP को बेहोश करें (बेहोश करने की क्रिया के लिए दवा और एकाग्रता के लिए चरण 4.2 देखें)। ERG रिकॉर्डिंग के दौरान, फिर से प्रशासन बेहोश करने की क्रिया जब उपयुक्त.
  2. कम से कम 2-3 दिनों के अंतराल के साथ अलग मल्टीमॉडल इमेजिंग और ERG रिकॉर्डिंग।
  3. एक बार बेहोश होने के बाद, सुनिश्चित करें कि एनएचपी ईआरजी रिकॉर्डिंग से पहले 30 मिनट के लिए अंधेरे-अनुकूलित है।
  4. स्टेनलेस स्टील सबडर्मल सुई इलेक्ट्रोड को बाएं और दाएं पार्श्व कैंथी (संदर्भ इलेक्ट्रोड) और एनएचपी बॉडी (ग्राउंड इलेक्ट्रोड) के पीछे की स्थिति दें। संपर्क और आसंजन सहायता करने के लिए vidisic जेल का उपयोग कर NHP कॉर्निया पर ERG संपर्क लेंस इलेक्ट्रोड रखें।
  5. इंटरनेशनल सोसाइटी फॉर क्लिनिकल इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी ऑफ विजन (ISCEV) 14 द्वारा अनुशंसित मानव प्रोटोकॉल पर सभी ERG परीक्षणों का आधार। Scotopic शर्तों के तहत ERG रिकॉर्डिंग शुरू करें और dimmer चमक के साथ शुरू करते हैं। अनुशंसित इंटरस्टिमुलस अंतराल के लिए ISCEV अनुशंसाओं का पालन करें।
  6. सुनिश्चित करें कि एनएचपी फोटोपिक परीक्षण से पहले 10 मिनट के लिए हल्का-अनुकूलित है, फिर से पृष्ठभूमि की ताकत के लिए मानक आईएससीईवी सिफारिशों का उपयोग करके।

17. NHP की इच्छामृत्यु

  1. न्यूक्लिएशन के लिए एनएचपी को euthanize करने के लिए, अंतःशिरा सोडियम पेंटोबार्बिटल (75 मिलीग्राम / किग्रा) का प्रशासन करें, जैसा कि अमेरिकन वेटरनरी मेडिकल एसोसिएशन के इच्छामृत्यु पर पैनल द्वारा अनुशंसित है।

Representative Results

मल्टीमॉडल इमेजिंग तौर-तरीकों (फंडस फोटोग्राफी, फंडस ऑटोफ्लोरेसेंस इमेजिंग (एफएएफ), फंडस फ्लोरोसीन एंजियोग्राफी (एफएफए) - प्रारंभिक चरण और देर से चरण, और ऑप्टिकल सुसंगतता टोमोग्राफी (ओसीटी)) एक सफल सबमैकुलर आरपीई ग्राफ्ट ट्रांसप्लांट (चित्रा 1) की विशेषताओं को उजागर करते हैं। Fundus फोटोग्राफी समय के साथ प्रवास के बिना fovea पर आरपीई ग्राफ्ट प्रत्यारोपण की स्थिति से पता चलता है। एफएएफ इमेजिंग आरपीई ग्राफ्ट को ओवरलैप करने वाले हाइपर-ऑटोफ्लोरेसेंस (सफेद, उच्च तीव्रता वाले क्षेत्रों द्वारा प्रदर्शित) में न्यूनतम परिवर्तन दिखाता है। प्रारंभिक और देर से चरण एफएफए आरपीई ग्राफ्ट के आसपास किसी भी स्पष्ट रिसाव (सफेद, उच्च तीव्रता वाले क्षेत्रों द्वारा प्रदर्शित) नहीं दिखाते हैं जो समय के साथ बढ़ते हैं। दिन 3 में प्रारंभिक छवियां ग्राफ्ट आरोपण से पहले देशी आरपीई को हटाने के कारण खिड़की दोष दिखाती हैं। मैकुलर OCT छवियां समय की प्रगति के रूप में आरपीई ग्राफ्ट पर बाहरी रेटिना परतों (विशेष रूप से, फोटोरिसेप्टर परत) के संरक्षण को दिखाती हैं। Hematoxylin और eosin धुंधला माइक्रोटियर्स के कोई सबूत के साथ बरकरार रेटिना परतों से पता चलता है। ग्राफ्ट की परिधि के ऊपर बाहरी परमाणु परत के संरक्षण से पता चलता है कि आरपीई कोशिकाएं फोटोरिसेप्टर स्वास्थ्य को बनाए रखने के अपने शारीरिक कार्यों का प्रदर्शन कर रही हैं।

25/41 जी दोहरी बोर कैनुला के इंट्राओकुलर और बाहरी दृश्य उस तंत्र को उजागर करते हैं जिसके द्वारा आईओपी को सबरेटिनल इंजेक्शन (चित्रा 2) के दौरान नियंत्रित किया जाता है। बीएसएस केंद्रीय लंबे कैनुला के माध्यम से सबरेटिनल द्रव इंजेक्शन के दौरान सबरेटिनल स्पेस में प्रवेश करता है। इंट्राओकुलर दबाव में महत्वपूर्ण वृद्धि के कारण विट्रियस गुहा के भीतर बीएसएस कैनुला के बड़े धातु बोर के माध्यम से आंख से बाहर निकलता है। बीएसएस तब कैनुला के साथ यात्रा करता है और अंततः कैनुला हब के पास एग्रेस पोर्ट से बाहर निकाल दिया जाता है। यह आकलन करने के लिए कि क्या कैनुला अपेक्षा के अनुसार काम कर रहा है, यह सुनिश्चित करें कि तरल पदार्थ कैनुला हब के पास निकास बंदरगाह से बहता है।

miOCT bleb आयामों के विज़ुअलाइज़ेशन और foveal टुकड़ी (चित्रा 3) के दौरान एक संभावित foveal आंसू intraoperatively की अनुमति देता है। चित्रा 3A1-A3 एक foveal आंसू के साथ bleb के एक मामले पर प्रकाश डाला. चित्रा 3A1 में, जबकि अवर ब्लेब सर्जिकल माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देता है, आंसू का विज़ुअलाइज़ेशन मुश्किल है। चित्रा 3A2 किसी भी आँसू के बिना एक bleb के अनुदैर्ध्य अनुभाग से पता चलता है. चित्रा 3A3 bleb के ऊर्ध्वाधर अनुभाग का आकलन करते समय एक foveal आंसू से पता चलता है। चित्रा 3B1-B3 किसी भी आँसू की उपस्थिति के बिना एक सफलतापूर्वक बनाया bleb दिखाने के लिए।

ERG waveforms में महत्वपूर्ण गिरावट की अनुपस्थिति से पता चलता है कि रॉड और शंकु फोटोरिसेप्टर दोनों के वैश्विक कार्य को subretinal RPE (चित्रा 4) के साथ बनाए रखा जाता है। ERG waveforms रेटिना के समग्र कार्य को दिखाते हैं। विशेष रूप से, फोटोरिसेप्टर फ़ंक्शन के किसी भी नुकसान को निर्धारित करने के लिए ए-तरंगों पर ध्यान दिया जाना चाहिए।

Figure 1
चित्रा 1: मल्टीमॉडल इमेजिंग के साथ विवो विश्लेषण में पश्चात। (ए) बाएं आंख के सबमैक्युलर आरपीई ग्राफ्ट ट्रांसप्लांट (फंडस फोटोग्राफी पर पीला) के विवो इमेजिंग में विभिन्न इमेजिंग तौर-तरीकों (बाएं से दाएं कॉलम: फंडस फोटोग्राफी, ऑटोफ्लोरेसेंस, फंडस फ्लोरोसीन एंजियोग्राफी-प्रारंभिक चरण, फंडस फ्लोरोसीन एंजियोग्राफी-लेट फेज, ऑप्टिकल सुसंगतता टोमोग्राफी) के लिए 3 महीने तक के समय के लिए (ऊपर से नीचे की पंक्तियों तक: दिन 3, 14); महीने 1, 3)। फंडस फोटोग्राफ पर तारांकन रेटिनोटॉमी की साइट को इंगित करता है; सफेद धराशायी तीर लाइन स्कैन की दिशा को इंगित करता है। फंडस ऑटोफ्लोरेसेंस इमेजिंग पर पीले रंग का खींचा गया आकार प्रत्यारोपण के स्थान पर प्रकाश डालता है। OCT छवियों पर सफेद त्रिकोण ग्राफ्ट के संबंधित पार्श्व किनारों को इंगित करते हैं (रंग फंडस छवि पर लाइन स्कैन के अनुसार)। (बी) हेमेटोक्सिलिन और एट्रोफिक फोवा (इंट्राऑपरेटिव आंसू के कारण) के तहत प्रत्यारोपण का ईोसिन लेबल की गई परतों के साथ धुंधला हो जाता है। स्केल बार = ए में 1 मिमी (ऑटोफ्लोरेसेंस और एफए छवियां), ए (ओसीटी छवियों) में 200 μm, और बी में 100 μm। संक्षेप: FA = fundus एंजियोग्राफी; OCT = ऑप्टिकल सुसंगतता टोमोग्राफी; RGC = रेटिना गैंग्लियन सेल परत; INL = आंतरिक परमाणु परत; ONL = बाहरी परमाणु परत; RPE = रेटिना वर्णक उपकला। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: 25/41 G दोहरी-बोर कैनुला के इंट्राओकुलर और बाहरी दृश्य(A) subretinal bleb निर्माण के दौरान 25/41 G दोहरी बोर कैनुला का इंट्राओकुलर दृश्य। सफेद तीर सबरेटिनल इंजेक्शन के लिए लंबे समय तक केंद्रीय कैनुला को इंगित करता है। धराशायी तीर एग्रेस कैनुला के उद्घाटन की ओर इशारा करता है जिसके माध्यम से बीएसएस आंख से बाहर निकलने के लिए गुजरता है। (बी) 25/41 जी दोहरी बोर कैनुला का बाहरी दृश्य। तारांकन चिह्न प्रवेशनी हब के पास एग्रेस पोर्ट को चिह्नित करता है जिसमें से इंट्राओकुलर बीएसएस को सूखा जाता है। संक्षिप्त नाम: BSS = संतुलित नमक समाधान। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3: इंट्राऑपरेटिव माइक्रोस्कोप छवियां और एक फोवेल आंसू द्वारा जटिल सबरेटिनल ब्लेब की miOCT छवियां। (A1) एक इंट्राऑपरेटिव माइक्रोस्कोप छवि जो अनुदैर्ध्य (नीले) और अनुप्रस्थ (लाल) की स्थिति को दर्शाती है, एक फोवल आंसू के साथ एक ब्लेब में स्कैन करती है। (A2) अनुदैर्ध्य miOCT स्कैन foveal क्षेत्र (पीला तीर) पर एक subretinal bleb दिखा रहा है। (A3) अनुप्रस्थ miOCT स्कैन एक foveal आंसू (सफेद एरोहेड) पर कब्जा, एक retinotomy (तारांकन चिह्न और एक subretinal bleb (पीला तीर) के साथ. (B1) एक इंट्राऑपरेटिव माइक्रोस्कोपिक छवि जो अनुदैर्ध्य (नीले) और अनुप्रस्थ (लाल) की स्थिति को दर्शाती है, एक सफलतापूर्वक गठित ब्लेब में स्कैन करती है। (B2) अनुदैर्ध्य miOCT स्कैन foveal क्षेत्र (पीला तीर) पर एक subretinal bleb दिखा रहा है। (B3) अनुप्रस्थ miOCT स्कैन एक बरकरार fovea बेहतर (सफेद हीरे) के साथ एक सफलतापूर्वक बनाया subretinal bleb दिखा रहा है. संक्षिप्त नाम: miOCT = माइक्रोस्कोप-एकीकृत ऑप्टिकल सुसंगतता टोमोग्राफी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: आरपीई के ERG-प्रत्यारोपित आंख. रेटिना के कार्यात्मक मूल्यांकन के लिए, बेसलाइन (शीर्ष पंक्ति) और 3 महीने के बाद प्रत्यारोपण (नीचे की पंक्ति) पर किए गए आरपीई-15 आंख के पूर्ण-क्षेत्र ईआरजी आकलन किसी भी प्रतिक्रिया आयाम, समय, या या तो अंधेरे-अनुकूलित या प्रकाश-अनुकूलित परिस्थितियों के तहत तरंग पर आरपीई प्रत्यारोपण का कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं दिखाते हैं। संक्षेप: आरपीई = रेटिना वर्णक उपकला; ERG = electroretinogram; डीए = अंधेरे अनुकूलित; ला = प्रकाश अनुकूलित. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Discussion

सबमैक्युलर आरपीई प्रत्यारोपण के लिए दो मुख्य दृष्टिकोणों का मूल्यांकन किया जा रहा है- एक आरपीई निलंबन का इंजेक्शन और मोनोलेयर आरपीई ग्राफ्ट का प्रत्यारोपण। दो विधियों के बीच एक विस्तृत तुलना इस पांडुलिपि के दायरे से परे है। हालांकि, एक मोनोलेयर आरपीई ग्राफ्ट का प्रत्यारोपण फायदेमंद हो सकता है क्योंकि आरपीई कोशिकाएं निलंबन की तुलना में मोनोलेयर में अधिक व्यवस्थित होती हैं। ग्राफ्ट में आरपीई कोशिकाओं को एक confluent monolayer में व्यवस्थित किया जाता है, जो शारीरिक आरपीई सेल परत के संगठन जैसा दिखता है और प्रत्यारोपित आरपीई कोशिकाओं को अपने शारीरिक कार्यों को करने में सक्षम बनाता है। यह सेल निलंबन की तुलना में अधिक सटीक खुराक मापदंडों को सक्षम बनाता है, जो नियामक कार्य और औद्योगिक स्केल-अप के लिए अत्यधिक प्रासंगिक है।

Subretinal अंतरिक्ष में आरपीई पैच ग्राफ्ट के वितरण के लिए मैक्यूला के सावधानीपूर्वक हेरफेर और subretinal अंतरिक्ष में ग्राफ्ट के सटीक सम्मिलन की आवश्यकता होती है। माइक्रोसर्जरी में तकनीकी प्रगति, जैसे कि miOCT, और इंट्राऑपरेटिव रेटिना ऊतक गतिशीलता की बेहतर समझ ने इस प्रक्रिया के सीखने की अवस्था को कम कर दिया है। इस चर्चा में, निम्नलिखित पहलुओं के तर्कों को समझाया जाएगा: i) पूर्व-ऑपरेटिव प्लास्मिनोजेन इंजेक्शन; ii) इंट्राऑपरेटिव miOCT का उपयोग; iii) एक कस्टम 41 जी दोहरी बोर प्रवेशनी, कम आईओपी सेटिंग्स, और SUBRETINAL bleb निर्माण के लिए PFCL का उपयोग; iv) प्रत्यारोपण से पहले देशी आरपीई सेल परत का स्क्रैपिंग; v) इम्युनोजेनिक ग्राफ्ट अस्वीकृति को कम करने के लिए सिरोलिमस, ट्रायमसिनोलोन, डॉक्सीसाइक्लिन और मिनोसाइक्लिन का उपयोग।

प्रीऑपरेटिव प्लास्मिनोजेन इंजेक्शन पैराफोवल रेटिना आसंजन जारी करते हैं
प्रारंभिक प्रयोगों में, एक एकल तरल तरंग के साथ फोवा को अलग करना चुनौतीपूर्ण था। MIOCT के साथ मूल्यांकन पर, छवियों ने इंट्रारेटिनल आघात 20 के सबूत के साथ देशी आरपीई के लिए पैराफोवल बाहरी रेटिना आसंजन की उपस्थिति का खुलासा किया। इन आसंजनों ने रेटिना समोच्च में फैलने वाली सबरेटिनल द्रव तरंग के बजाय ब्लेब के ऊर्ध्वाधर विस्तार का नेतृत्व किया हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप फोवल आघात होता है। प्लास्मिनोजेन प्लास्मिन का निष्क्रिय अग्रदूत है, जो फाइब्रोनेक्टिन और लैमिनिन को लक्षित करने वाला एक प्रोटीज है। Ocriplasmin मानव प्लास्मिन का एक bioengineered संस्करण है, खाद्य और औषधि प्रशासन (एफडीए) और यूरोपीय मेडिसिन एजेंसी (EMA) द्वारा अनुमोदित रोगसूचक vitreomacular कर्षण के उपचार के लिए एक सहवर्ती धब्बेदार छेद के साथ या बिना रोगसूचक vitreomacular कर्षण के उपचार के लिए अनुमोदित है। हालांकि, ओक्रिप्लाज्मिन इंजेक्शन के बाद सिस्टोइड मैक्यूला एडिमा विकास की पोस्टएप्रोवल रिपोर्टों ने रेटिना 23 पर एंजाइम के अधिक व्यापक प्रभाव का सुझाव दिया है।

हालांकि सटीक तंत्र की पहचान नहीं की गई है, यह सुझाव दिया गया था कि प्लास्मिन फोटोरिसेप्टर-आरपीई आसंजन 24 के लिए जिम्मेदार इंटरफोटोरिसेप्टर मैट्रिक्स तत्वों के क्षरण के माध्यम से रेटिना आसंजन को कमजोर कर सकता है। इस प्रोटोकॉल में, एनएचपी आंखों को पैराफोवल बाहरी रेटिना आसंजन को जारी करने के लिए सर्जरी से 1 सप्ताह पहले इंट्राविट्रियल प्लास्मिनोजेन के साथ इलाज किया गया था। इस धारणा के तहत कि फोटोरिसेप्टर-आरपीई आसंजन कमजोर हो गया है, न्यूरोसेंसरी रेटिना को अलग करने के लिए एक कम बल की आवश्यकता होती है, जिसमें डिस्टल पैराफोवल रिंग भी शामिल है, जो आमतौर पर सबरेटिनल द्रव तरंग 20 का विरोध करता है। इस प्रकार, रेटिना ब्लेब टुकड़ी के दौरान प्रशासित बल रेटिना को स्पर्शरेखा से खींचने के बजाय रेटिना समोच्च में ब्लेब के विस्तार के परिणामस्वरूप होता है। इससे फौलादी आंसू का खतरा कम हो जाता है। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इस प्रोटोकॉल में दीर्घकालिक ग्राफ्ट अस्तित्व पर प्लास्मिनोजेन के प्रभाव का अध्ययन नहीं किया गया था। भविष्य के अध्ययनों को इस प्रभाव को निर्धारित करने का प्रयास करना चाहिए।

miOCT subretinal bleb निर्माण, ग्राफ्ट आरोपण, और subretinal द्रव जल निकासी मार्गदर्शन करने के लिए शारीरिक प्रतिक्रिया प्रदान करता है
मैक्यूला के इंट्राऑपरेटिव, एट्रॉमैटिक हेरफेर अच्छे प्रत्यारोपण परिणामों को प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है। हालांकि, हेरफेर से संबंधित मैक्यूला के माइक्रोस्ट्रक्चरल परिवर्तन हमेशा ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप पर स्पष्ट नहीं हो सकते हैं। ऐसी प्रक्रियाओं में, miOCT एक महत्वपूर्ण उपकरण है जो मैकुलर संरचना के वास्तविक समय, तीन आयामी, इंट्राऑपरेटिव प्रतिक्रिया प्रदान करता है। miOCT विशेष रूप से foveal टुकड़ी, ग्राफ्ट आरोपण, और एक तरल पदार्थ-हवा विनिमय का उपयोग कर subretinal तरल पदार्थ की जल निकासी के चरणों के दौरान उपयोगी है। फोवल टुकड़ी के दौरान, miOCT bleb के ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज आयामों को निर्धारित कर सकता है। फोवल माइक्रोटियर्स, जिन्हें सर्जिकल माइक्रोस्कोप पर स्पष्ट रूप से कल्पना नहीं की जा सकती है, की पुष्टि miOCT (चित्रा 3) द्वारा की जा सकती है। ग्राफ्ट आरोपण के दौरान, miOCT छवियां ग्राफ्ट के स्थान या fovea की निकटता को अक्सर कम पारदर्शी, अलग रेटिना के माध्यम से दिखाकर मार्गदर्शन करती हैं। miOCT भी एक कठिन प्रत्यारोपण प्रक्रिया 25 के दौरान रेटिना आसंजन के संभावित क्षेत्रों को उजागर कर सकते हैं। अंत में, subretinal द्रव जल निकासी प्रक्रिया में, miOCT मज़बूती से subretinal द्रव जल निकासी मार्गदर्शन कर सकते हैं जब तक कि पूर्ण रेटिना-आरपीई ग्राफ्ट संपर्क प्राप्त नहीं किया जाता है।

एक दोहरी बोर प्रवेशनी, कम आईओपी सेटिंग्स, और PFCL vitreous टैम्पोनेड का संयोजन synergistically subretinal bleb निर्माण के दौरान धब्बेदार आघात को कम करता है
स्पर्शरेखा रेटिना स्ट्रेचिंग और द्रव अशांति फोवल डिटेचमेंट के लिए सबरेटिनल बीएसएस इंजेक्शन के दौरान हो सकती है जिससे अवांछित फोवल आँसू हो सकते हैं। इन घटनाओं का मुकाबला करने के लिए, कारक, जैसे कि सापेक्ष स्थिति और फोवल केंद्र से दूरी जहां इंजेक्शन शुरू किया जाता है, इंजेक्शन की मात्रा और वेग, विट्रियस टैम्पोनेड, सबरेटिनल इंस्ट्रूमेंटेशन की पसंद, और आईओपी सभी को प्रासंगिक 20,26,27 दिखाया गया है। foveal टुकड़ी के लिए subretinal bleb fovea से पर्याप्त रूप से दूर एक स्थान पर स्थित होना चाहिए, क्योंकि रेटिना स्ट्रेचिंग bleb दीक्षा साइट 27 पर उच्चतम हो सकता है। आईओपी को भी सबरेटिनल ब्लेब के निर्माण के दौरान कम रखा जाना चाहिए। जब आंख का आईओपी अधिक होता है, तो रेटिना के समोच्च के साथ विस्तार के बजाय ब्लेब आकार में एक उच्च ऊर्ध्वाधर वृद्धि देखी जाती है, जबकि ब्लेब्स कम दबाव 20 पर उथले होते हैं। इसके अलावा, हालांकि 50 μL का एक इंट्राविट्रल इंजेक्शन प्रभावी रूप से मनुष्यों में आईओपी को दोगुना कर देगा28, एनएचपी में कम आंखों की लंबाई को देखते हुए, सबरेटिनल इंजेक्शन के दौरान आईओपी वृद्धि शायद मनुष्यों की तुलना में अधिक और अधिक तेजी से होगी। जबकि अधिकांश विट्रेक्टोमी मशीनें आईओपी उतार-चढ़ाव के लिए समायोजित होती हैं, समायोजन एक साथ नहीं है, बल्कि एक प्रतिक्रियाशील प्रक्रिया है जो सबरेटिनल इंजेक्शन के आगे बढ़ने के रूप में होती है। इसलिए, आईओपी जितना अधिक होगा, रेटिना ओवरस्ट्रेचिंग और परिणामी फोवल आघात का खतरा उतना ही अधिक होगा। इस प्रकार, सबरेटिनल इंजेक्शन के दौरान एक स्थिर कम आईओपी बनाए रखना आवश्यक है।

एक वाणिज्यिक 20/41 जी (डीओआरसी) या एक कस्टम-निर्मित 25/41 जी दोहरी-बोर सबरेटिनल कैनुला को सबरेटिनल इंजेक्शन के लिए अनुशंसित किया जाता है। कैनुला द्रव को बीएसएस के बदले में विट्रियस गुहा से बाहर निकलने की अनुमति देता है जो सबरेटिनल स्पेस में इंजेक्ट किया जाता है। यह subretinal इंजेक्शन के दौरान आईओपी के 'एक साथ' विनियमन सुनिश्चित करता है। दोहरी-बोर कैनुला की एक योजनाबद्ध आकृति 2 में देखी गई है। अंत में, PFCL का उपयोग foveal आँसू 20,26,27 के जोखिम को कम करने के लिए किया जाता है। चूंकि पीएफसीएल, जैसे कि ऑक्टालाइन, में उच्च विशिष्ट गुरुत्वाकर्षण होता है, वे फोवल डिटेचमेंट 29 के दौरान रेटिना पर नीचे की ओर बल लगाते हैं। यह आगे foveal टुकड़ी bleb निर्माण प्रक्रिया को स्थिर करता है और रेटिना समोच्च के साथ bleb के विस्तार को बढ़ाता है। इस तकनीक को सफलतापूर्वक nAMD30 के कारण बड़े पैमाने पर submacular रक्तस्राव की स्थापना में rtPA के subretinal इंजेक्शन के लिए इस्तेमाल किया गया है।

मूल आरपीई के प्रीट्रांसप्लांटेशन हटाने से आरपीई-फोटोरिसेप्टर कॉम्प्लेक्स की बहाली की अनुमति मिलती है
ग्राफ्ट प्रत्यारोपण से पहले होस्ट आरपीई को हटा दिया जाना चाहिए। ऐसा इसलिए है क्योंकि आरपीई-फोटोरिसेप्टर कॉम्प्लेक्स की बहाली को आरपीई ट्रांसप्लांट को फोटोरिसेप्टर 21 का समर्थन करने के अपने शारीरिक कार्यों को करने में सक्षम करने के लिए आवश्यक है। मेजबान आरपीई, यदि नहीं हटाया जाता है, तो एक यांत्रिक बाधा के रूप में पेश हो सकता है, जो इस परिसर की बहाली को रोकता है। इसे या तो आरपीई-विषाक्त रसायनों के प्रशासन के माध्यम से या हटाने के भौतिक साधनों का उपयोग करके हटाया जा सकता है। रासायनिक हटाने के तरीकों में सोडियम आयोडेट 31,32 के प्रणालीगत या उप-स्तर प्रशासन शामिल हैं। जैसा कि सोडियम आयोडेट फोटोरिसेप्टर, आरपीई कोशिकाओं और कोरियोकैपिलारिस के व्यापक अपघटन का कारण बनता है, जब प्रशासित किया जाता है, तो इसकी रेटिना और प्रणालीगत विषाक्तता मानव परीक्षणों के लिए इसके उपयोग को रोकती है32,33। इसलिए, भौतिक इंट्राऑपरेटिव तकनीकों को प्राथमिकता दी जाती है। विभिन्न भौतिक विधियों की अवधारणा की गई है। जब भौतिक विधियों का उपयोग किया जाता है, तो यह महत्वपूर्ण है कि ब्रुच की झिल्ली बिना किसी नुकसान के बनी रहे। कई इन विट्रो अध्ययनों ने एक बरकरार ब्रूच की झिल्ली 34,35,36 पर आरपीई ग्राफ्ट अस्तित्व की निर्भरता का प्रदर्शन किया है।

हाइड्रोलिक डिब्रिडमेंट के प्रयास ब्रुच की झिल्ली में ब्रेक के साथ जुड़े हुए थे, एपिरेटिनल झिल्ली विकास की बढ़ी हुई दर, और प्रोलिफेरेटिव विट्रियोरेटिनोपैथी, जिसके परिणामस्वरूप कर्षण रेटिना टुकड़ी 37 होती है। आरपीई डिब्रिडमेंट के लिए प्रस्तावित एक हीरे-धूल वाले स्पैटुला ने ब्रूच की झिल्ली में भी ब्रेक का नेतृत्व किया, जिसके परिणामस्वरूप कोरॉइड से सबरेटिनल स्पेस 38 में सेलुलर प्रसार हुआ। दिलचस्प बात यह है कि एक कस्टम-निर्मित विस्तार योग्य लूप उपकरण खरगोशों और सूअरों की आंखों में ब्रुच की झिल्ली के संरक्षण के साथ अतिरंजित आरपीई को हटा सकता है11,39। अंतर्निहित आरपीई को हटाना आरपीई और बाहरी रेटिना शोष के साथ पशु मॉडल स्थापित करने के लिए भी उपयोगी है, जो एएमडी के उन्नत एट्रोफिक रूप के समान है। जब आरपीई का एक फोकल क्षेत्र मैक्यूला से हटा दिया जाता है, तो आरपीई घाव शेष आरपीई कोशिकाओं की हाइपरट्रॉफी के माध्यम से बंद हो जाता है। हालांकि, यह घाव भरने की प्रतिक्रिया बाहरी परमाणु परत 40 के शोष से जुड़ी हुई है। जबकि एक पशु मॉडल का निर्माण इस पांडुलिपि के दायरे से परे है, एक समान प्रक्रिया आरपीई-व्युत्पन्न सेल चिकित्सीय के परीक्षण के लिए एक उन्नत एट्रोफिक एएमडी फेनोटाइप का एक पशु मॉडल बना सकती है।

इम्युनोजेनिक ग्राफ्ट अस्वीकृति को कम करने के लिए सिरोलिमस, ट्रायमसिनोलोन, डॉक्सीसाइक्लिन और मिनोसाइक्लिन का उपयोग
Subretinal अंतरिक्ष को एक प्रतिरक्षा-विशेषाधिकार प्राप्त साइट माना जाता है, जो एक बरकरार रक्त-रेटिना बाधा और अन्य कारकों द्वारा बनाए रखा जाता है। एक बरकरार रक्त-रेटिना बाधा के साथ स्टेम-सेल डेरिवेटिव के सबरेटिनल प्रत्यारोपण से जुड़े कई अध्ययनों में, इम्यूनोसप्रेसिव ड्रग्स ग्राफ्ट अस्तित्व में नगण्य भूमिका निभाते हैं42। बाहरी रक्त-रेटिना बाधा को देशी आरपीई परत और आरपीई कोशिकाओं के बीच तंग जंक्शनों द्वारा गठित माना जाता है। जबकि देशी आरपीई हटाने से प्रत्यारोपित आरपीई और मेजबान फोटोरिसेप्टर के बेहतर एकीकरण की अनुमति मिलती है, रक्त-रेटिना बाधा प्रक्रिया में बाधित होती है, जिससे प्रतिरक्षा अस्वीकृति की संभावना बढ़ जाती है। शास्त्रीय रूप से, टी-कोशिकाएं गुर्दे और यकृत जैसे अन्य अंगों के प्रत्यारोपण की अस्वीकृति की प्रक्रिया के लिए केंद्रीय हैं। इसलिए, रेटिना ऊतक प्रत्यारोपण के लिए प्रारंभिक immunosuppressive regimens इन अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को कम करने की दिशा में लक्षित किया गया था।

सिरोलिमस, रैपामाइसिन अवरोधक का एक यांत्रिक लक्ष्य, और टैक्रोलिमस, एक कैल्सिन्यूरिन अवरोधक, अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को लक्षित करने वाली इम्यूनोसप्रेसिव दवाओं के उदाहरण हैं। हालांकि, पर्याप्त टी-सेल दमन के बावजूद, ग्राफ्ट जीवित रहने की दर कम बनी हुई है। इसके अलावा, आरपीई कोशिकाओं को निरोधात्मक कारकों की रिहाई के माध्यम से टी-सेल सक्रियण को दबाने और नियामक टी-सेल 44 की पीढ़ी को बढ़ावा देने के लिए जाना जाता है। इसलिए, यह तेजी से स्पष्ट हो गया है कि अनुकूली प्रतिरक्षा ग्राफ्ट अस्वीकृति 42 के लिए एकमात्र योगदानकर्ता नहीं हो सकती है। सेलुलर उत्पादों के subretinal प्रत्यारोपण संचय और microglia45 के सक्रियण में परिणाम कर सकते हैं.

माइक्रोग्लिया रेटिना के मैक्रोफेज हैं। वे दो मुख्य आबादी से मिलकर बनता है: 1) आंतरिक रेटिना वास्कुलचर के पेरिवैस्कुलर माइक्रोग्लिया और 2) रेटिना ऊतक पैरेन्काइमा के भीतर माइक्रोग्लिया। जैसा कि माइक्रोग्लिया जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का हिस्सा हैं, इंट्राविट्रियल ग्लूकोकोर्टिकोइड्स, जैसे कि ट्रायमसिनोलोन, साइटोकाइन-मध्यस्थता प्रसार को दबा सकते हैं46। Doxycycline और minocycline भी microglial सक्रियण को दबा सकते हैं और इसे 47,48 माना जाना चाहिए। अंत में, आरपीई एलोग्राफ्ट्स बनाम की प्रतिरक्षा अस्वीकृति में अंतर अपूर्ण रूप से समझा जाता है49। उदाहरण के लिए, प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल-व्युत्पन्न आरपीई कोशिकाओं के खिलाफ एलोएंटीबॉडी को विवो प्रतिरक्षा अस्वीकृति मॉडल के सीरम में रिपोर्ट किया गया है। हालांकि, इन एंटीबॉडी की भूमिका और ग्राफ्ट अस्तित्व में एंटीबॉडी-मध्यस्थता अस्वीकृति का महत्व अज्ञात है50। इसलिए, अनुकूली प्रतिरक्षा के दमन के लिए सिरोलिमस का उपयोग करने वाला एक मल्टीड्रग आहार और जन्मजात प्रतिरक्षा दमन के लिए ट्रायमसिनोलोन, डॉक्सीसाइक्लिन और मिनोसाइक्लिन का संयोजन प्रस्तावित है। इस आहार को अच्छे ग्राफ्ट उत्तरजीविता परिणामों और न्यूनतम प्रणालीगत प्रभावों के साथ खरगोशों में सफलतापूर्वक उपयोग किया गया है11।

इस सर्जिकल तकनीक की सीमाएं
यह पेपर एनएचपी के सबरेटिनल स्पेस में एक आरपीई ग्राफ्ट शीट देने के लिए एक संभावित सर्जिकल विधि का वर्णन करता है; हालांकि, इसका मतलब यह नहीं है कि यह एकमात्र अनुकूलित तरीका है। विभिन्न विट्रियो-रेटिना सर्जनों में इंस्ट्रूमेंटेशन और तकनीक के लिए अन्य प्राथमिकताएं हो सकती हैं। उदाहरण के लिए, यह आरोपण उपकरण डिजाइन केवल एक stiffer सेल वाहक के साथ समर्थित फ्लैट प्रत्यारोपण वितरित कर सकता है और इसलिए अपेक्षाकृत लचीले (या लुढ़का हुआ) प्रत्यारोपण के लिए उपयुक्त नहीं हो सकता है। आरपीई निलंबन प्रत्यारोपण इस तकनीक के अधिकांश को छोड़ सकते हैं। तदनुसार, सर्जिकल विवरण प्रत्येक वितरण रणनीति के आधार पर संशोधन की आवश्यकता होगी।

अपक्षयी रेटिना रोगों के उपचार के लिए सेलुलर चिकित्सीय में रुचि बढ़ने के लिए जारी है, एनएचपी पशु मॉडल आरपीई ग्राफ्ट अस्तित्व को प्रभावित करने वाले कारकों का अध्ययन करने के लिए प्रीक्लिनिकल अध्ययन में आवश्यक होगा। इस पांडुलिपि में, एनएचपी आंख में एक सबमैकुलर मोनोलेयर आरपीई ग्राफ्ट के चिकनी वितरण को सक्षम करने के लिए रणनीतियों का प्रस्ताव किया गया है। इंट्राऑपरेटिव जटिलताओं के बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन के लिए तरीकों की भी सिफारिश की जाती है। यह अनुमान लगाया जाता है कि इन तरीकों में सुधार जारी रहेगा क्योंकि सेलुलर चिकित्सीय के उपयोग का विस्तार होता है। भविष्य के विधि पत्रों को भ्रष्टाचार के विभिन्न संरचनात्मक और कार्यात्मक पहलुओं का आकलन करने के लिए जांच की एक व्यापक सूची का प्रस्ताव करने पर भी विचार करना चाहिए।

Disclosures

बोरिस Stanzel इस अध्ययन में इस्तेमाल किया एक उपकरण (आरपीई स्क्रैपर) पर एक अमेरिकी पेटेंट 9980851 रखती है। स्पीकर मानद सी Zeiss Meditec और Geuder से बोरिस Stanzel करने के लिए. अन्य लेखकों के पास घोषित करने के लिए हितों का कोई संघर्ष नहीं है।

Acknowledgments

इस अध्ययन को IAF-PP (HMBS Domain) (OrBID): OculaR BIomaterials and Device, A*STAR, Singapore (H17/01/a0/013), NUS Start-up grant NUHSRO/2016/100/SU/01, NUHS Clinical Scientist Program (NCSP) अनुदान और नेशनल रिसर्च फाउंडेशन Competitive Research Programme, Singapore (NRF-CRP21-2018-0008) द्वारा समर्थित किया गया था। हम एनएचपी सर्जरी की तैयारी और पशु अनुवर्ती में सहायता प्रदान करने के लिए ट्रांसलेशनल प्री-क्लिनिकल मॉडल प्लेटफॉर्म (सिंगापुर आई रिसर्च इंस्टीट्यूट, सिंगापुर) में पशु चिकित्सा टीम को स्वीकार करना चाहते हैं। हम एकीकृत इंट्राऑपरेटिव OCT डिवाइस के साथ OPMI-Lumera 700 के लिए तकनीकी सहायता के लिए C. Zeiss Meditec सिंगापुर से जिल Teo और सहयोगियों के लिए हमारी सराहना का विस्तार करना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation Alcon SIN 4715P Surgical procedure
10% Neutral buffered formalin Leica 3800598 Histology procedure
2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution Alcon No. 01785 Surgical procedure
25 G AWH Vivid Chandelier Synergetics 56.54.25P Surgical procedure
25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack Bausch & Lomb SE5525WVB Surgical procedure
AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation Abbott Medical Optics 15020 Surgical procedure
Apo-minocycline Apotex Inc 2084104 Immunosuppression
AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v Aurolab TN 00002387 Surgical procedure
Autoclave MELAG, Vacuklav MELAG 1131-B2300 Surgical procedure
Autostainer XL (ST5010) Leica 2433 Histology procedure
Balanced Saline Solution Beaver Visitec 581732 Surgical procedure
Cotton Bud WINNER MEDICAL 1NA6-100 Surgical procedure
Diagnosys Espion E3 Console Diagnosys 272 Ophthamic imaging
Doxycycline Yung Shin MAL 19950403AEZ Immunosuppression
Eosin Y Merck Millipore 1.15935.0100 Histology procedure
ERG-Jet contact lens electrodes Fabrinal F-06 Ophthamic imaging
Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G MedOne 3247 Surgical procedure
FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm MedOne 3222 Surgical procedure
Fluoresceine 10% Faure Curatis AG 5030376 Ophthamic imaging
Gauze Swab WINNER MEDICAL 1NP3275 Surgical procedure
Hamilton gas tight syringe 250 µL Hamilton 81101 Surgical procedure
Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System Heidelberg Engineering N.A. Ophthamic imaging
Hematoxylin Gill II Merck Millipore 3801520 Histology procedure
Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V) Nikon 33131 Histology procedure
Ketamin injection Ceva 37711/58317 Surgical procedure
Lithium carbonate Merck Millipore 1.05680.0250 Histology procedure
Monkey plasminogen Molecular Innovations SKU-CYPLG Surgical procedure
Non-contact wide angled 128 degree fundus lens C. Zeiss Medtech Resight 700 Surgical procedure
Non-woven Ophthalmic Drape Alcon 8065103120 Surgical procedure
Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G Alcon 8065912001 Surgical procedure
Paraffin Embedding Station Leica EG1150 H Histology procedure
Paraplast High Melt Paraffin Leica 39601095 Histology procedure
Phloxin B Merck Millipore 1.15935.0025 Histology procedure
Prepowdered Surgical Gloves MAXITEX 85-173-2/85-173-3/85-173-4 Surgical procedure
PRODINE Povidone-Iodine Solution BP ICM PHARMA PMLBLP20-01 Surgical procedure
Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB) Righton-Oph 5200162 Ophthamic imaging
Rotary microtome Leica RM2255 Histology procedure
Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0 B.Braun G1048711 Surgical procedure
SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL Yung Shin SHI40 SGP-2610015-001 Surgical procedure
Single-Use Hypodermic Needle 21 G B.Braun 4657527 Surgical procedure
Single-Use Hypodermic Needle 23 G B.Braun 4657667 Surgical procedure
Sirolimus Pfizer SIN12034P Immunosuppression
Stainless steel subdermal needle electrode OcuScience F-E2 Ophthamic imaging
Stellaris Elite vision enhancement system Bausch & Lomb BL15455 Surgical procedure
Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm B.Braun 4665406 Surgical procedure
Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm B.Braun 4656300 Surgical procedure
Surgical gown + 2 Hand Towels STERIL APP10 00 01 Surgical procedure
Tegaderm Film 3M 1626W Surgical procedure
TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G Teruma SS-01S Surgical procedure
TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip Teruma SS-03L Surgical procedure
TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip Teruma SS-05L Surgical procedure
TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment Alcon No. 01577 Surgical procedure
Topcon Retinal Camera TRC-50DX Topcon 948605 Ophthamic imaging
Vidisic Gel Bausch & Lomb GB41789155517 Surgical procedure
Xylazil-20 Ilium 38653/50276 Surgical procedure
Zeiss Opmi Rescan 700 Carl Zeiss Meditec AG 7210 Surgical procedure

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References

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चिकित्सा अंक 172

Erratum

Formal Correction: Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases
Posted by JoVE Editors on 12/29/2021. Citeable Link.

An erratum was issued for: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases. The Authors section was updated.

The Authors section was updated from:

Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore,
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR),
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore,
4Singapore Eye Research Institute (SERI),
5UCL Institute of Ophthalmology,
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School,
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar,
8Department of Ophthalmology, University of Bonn
* These authors contributed equally

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Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore,
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR)
4Singapore Eye Research Institute (SERI),
5UCL Institute of Ophthalmology,
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School,
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar,
8Department of Ophthalmology, University of Bonn
* These authors contributed equally

अपक्षयी रेटिना रोगों के लिए एक गैर-मानव प्राइमेट मॉडल में रेटिना वर्णक उपकला प्रत्यारोपण
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Seah, I., Liu, Z., Soo Lin Wong, D., … More

Seah, I., Liu, Z., Soo Lin Wong, D., Wong, W., Holder, G. E., Amutha Barathi, V., Lingam, G., Su, X., Stanzel, B. V. Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases. J. Vis. Exp. (172), e62638, doi:10.3791/62638 (2021).

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