Summary
本实验方案描述了如何在单个颗粒到达抓取任务中使用无线光遗传学与高速摄像相结合，以表征参与自由移动小鼠中熟练运动行为表现的神经回路。
Abstract
精细运动技能在日常生活中是必不可少的，在几种神经系统疾病中可能会受到损害。这些任务的获取和执行需要感觉 - 运动整合，并涉及对双侧脑回路的精确控制。在动物模型中实施单手动行为范式将提高对大脑结构（如纹状体）对复杂运动行为的贡献的理解，因为它允许在任务执行期间在控制条件和疾病中操纵和记录特定细胞核的神经活动。
自创建以来，光遗传学一直是通过对神经元群体进行选择性和靶向激活或抑制来询问大脑的主要工具。光遗传学与行为测定的结合揭示了特定大脑功能的潜在机制。带有小型发光二极管（LED）的无线头戴式系统允许在完全自由移动的动物中进行远程光遗传学控制。这避免了有线系统对动物行为限制较少的限制，而不会影响发光效率。目前的协议将无线光遗传学方法与高速摄像相结合，用于单手动灵巧性任务，以剖析特定神经元群体对精细运动行为的贡献。
Introduction
在我们执行的大多数运动中都存在运动技能行为，并且已知在几种脑部疾病中受到影响1，2，3，4，5，6。实施允许研究熟练运动的发展，学习和表现的任务对于理解运动功能的神经生物学基础至关重要，特别是在脑损伤，神经退行性和神经发育障碍的模型中2，7，8，9，10，11，12，13.在日常生活行动中，伸手和取回物体是常规的，这是在早期发育过程中获得的首批运动技能之一，然后在5，6年中得到完善。它包括一种复杂的行为，需要感觉运动过程，例如对物体特征的感知，运动计划，动作选择，运动执行，身体协调和速度调制7，14，15，16。因此，单手动高灵活性任务需要两个半球的许多大脑结构的参与16，17，18，19，20，21，22。在小鼠中，单个颗粒伸手抓取任务的特征是可以单独控制和分析的几个阶段7，13，23。该特征允许研究特定神经元亚群在不同阶段的习得和行为表现的贡献，并为运动系统的详细研究13，23，24提供平台。运动发生在几秒钟内;因此，高速摄像应用于熟练运动轨迹7，25的不同阶段的运动学分析。可以从视频中提取几个参数，包括身体姿势，轨迹，速度和错误类型25。运动学分析可用于检测无线光遗传学操作过程中的细微变化7，23。
使用小型化发光二极管（LED）通过无线头戴式系统传递光，可以在动物执行任务时进行远程光遗传学控制。无线光遗传学控制器接受来自刺激器的单脉冲或连续触发命令，并将红外（IR）信号发送到连接到微型LED23，26的接收器。目前的方案将这种无线光遗传学方法与灵巧性任务的高速摄像相结合，以剖析特定神经元群体在精细运动行为执行期间的作用23。由于这是一项单项任务，因此可以评估两个半球结构的参与情况。传统上，大脑以高度不对称的方式控制身体运动;然而，高灵巧性任务需要许多大脑结构的仔细协调和控制，包括同侧核和细胞核10，20，21，22，23内神经元亚群的差异贡献。该协议表明，来自两个半球的皮质下结构控制前肢23的轨迹。这种范式可以适用于研究脑部疾病的其他大脑区域和模型。
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Protocol
涉及动物使用的程序按照当地和国家指南进行，并得到相应的机构动物护理和使用委员会（细胞生理学研究所IACUC协议VLH151-19）的批准。Drd1-Cre转基因雄性小鼠27，产后35-40天，C57BL / 6背景在当前方案中使用。小鼠在以下条件下保存：温度22±1°C;湿度 55%;光照计划12/12小时，晚上7点熄灯，并在产后第21天断奶。断奶的幼崽被安置在2-5的同性组中。动物被安置在带有微屏障顶部的静态外壳中。床上用品由无菌白杨刨花组成。除非另有说明，否则 应随意提供啮齿动物颗粒和RO净化水。
1. 外科手术
- 根据目标结构的背腹坐标（理想情况下长0.5毫米以考虑颅骨的厚度，对于背外侧纹状体3.5毫米）准备所需长度的LED套管（图1）。
- 将玻璃纤维切割成比最终所需尺寸更长的长度，用粗糙的砂纸将纤维尖端研磨到目标长度，最后用细砂纸抛光纤维尖端。
注：LED套管是一种直径为250μm的玻璃光纤，连接到红外接收器上（参见 材料表）。
- 将玻璃纤维切割成比最终所需尺寸更长的长度，用粗糙的砂纸将纤维尖端研磨到目标长度，最后用细砂纸抛光纤维尖端。
- 用水平拉拔器拉动纳米注射器的玻璃移液器（外径1.14 mm，内径0.53 mm，长度3.5英寸）（参见 材料表）并存储它们以备后用。在一个回路中对拉拔器进行编程，以获得15-20μm的尖端直径和长渐变斜率锥度（4-5 mm）。
- 通过用70%乙醇彻底消毒立体定位器，罩，微注射器（见 材料表）和周围表面来准备手术区域。
注意：小鼠立体定位设备对于精确注射腺相关病毒（AAV）并将LED套管放置在感兴趣区域至关重要。 - 为手术穿戴适当的个人防护装备，包括干净的实验室外套或一次性手术服、无菌手套、口罩和一次性头盖。
- 将必要的设备放置在靠近手术区域的位置，例如无菌手术工具，棉吸头，溶液，微量移液器，移液器吸头，毛细血管，矿物油微填充和标记物。
- 用矿物油填充移液器进行显微注射，并将其放入微量注射器中。通过喷射一些矿物油来确保微型注射器正常工作。
注意：手术期间使用的所有器械都应经过高压灭菌和无菌处理。应使用无菌技术。 - 在整个手术过程中，用气态异氟醚4-5%麻醉动物以诱导麻醉，在整个手术过程中用0.5-1 L / min纯氧麻醉1.2%。手术仅在动物达到深度麻醉点后开始，通过轻微捏合后没有爪子退出来评估。
- 持续监测动物的呼吸频率和温度。通过设置为34°C的加热垫保持体温。
- 涂抹眼药膏。用三角体和脱毛膏从头皮上去除毛发。用含有8%聚维酮碘（见 材料表）和70%乙醇的棉签擦拭头皮，各交替三次。
- 将鼠标放在立体定位装置中并固定头部，确保颅骨在中外侧和前后轴上水平。
- 用手术刀沿着矢状轴在眼睛水平处的头皮上做一个1厘米的切口。缩回皮肤以暴露颅骨，并用棉签清洁骨膜。
- 用盐水溶液和无菌棉签清洁颅骨表面。使用无菌吸收性眼矛（见 材料表）或类似的无菌吸收材料解决表面的任何出血。
- 用棉签滴下2.5%的过氧化氢，让它作用几秒钟，使颅骨缝合线可见，并有更好的参考。几秒钟后，用干净的棉签彻底清洁。
- 使用玻璃移液器（最终吸头直径15μm），定位前凸和λ，以检查颅骨是否在前后轴上水平。
注意：建议使用立体显微镜或USB显微镜来观察玻璃移液器的尖端。如果需要，调整嘴架的高度以调平头骨。 - 将毛细血管向选定的前后 （AP） 和内侧 （ML） 坐标移动（背外侧纹状体 AP 1.2 mm，ML 2.28 mm）。在头皮上绘制一个参考点，上面有一个无菌标记。
- 在参考点，使用无菌旋转工具或用小型圆形牙钻头以低到中速对颅骨进行约1 mm的开颅手术，对颅骨施加轻柔的压力（参见 材料表）。
- 在毛细管中加载300-400 nL Cre依赖性腺相关病毒（AAV），例如AAV1-dflox-hChR-2-mCherry以表达Channelrhodopsin，或AAV仅表达报告蛋白（例如mCherry）作为感兴趣区域的对照（参见 材料表）。检查尖端是否不堵塞，然后在所需的背腹（DV）坐标（背外侧纹状体DV -3.35 mm）处将玻璃移液器引入大脑。
- 使用自动进样器以 23 nL/s 的速率注入 200 nL。完成注射后等待10分钟，缓慢取出玻璃移液器以避免溢出。
注意：可以使用30 G针头注射适当的微型注射器。
- 使用自动进样器以 23 nL/s 的速率注入 200 nL。完成注射后等待10分钟，缓慢取出玻璃移液器以避免溢出。
- 用棉签清洁并干燥任何残留物。
- 将无菌玻璃LED套管连接到立体定位臂上，并使用bregma作为参考校准坐标。非常缓慢地插入套管（300μm / min）以避免组织损伤，并将其放置在注射部位上方100μm处。
- 一旦LED套管就位，在开颅手术边缘加入一滴（100μL）组织粘合剂。
- 按照制造商的说明准备牙科水泥混合物（参见 材料表），将纤维固定在颅骨上。
注意：简而言之，使用冷却的瓷盘，以便在水泥凝固之前有更多的工作时间。将2勺树脂透明粉末加入瓷盘中，加入4滴快速基底和1滴催化剂，然后充分混合。如果需要更薄或更厚的粘度，可以调整粉末/液体比例。 - 使用无菌刷，将牙科水泥混合物一点一点地涂抹在套管连接器周围，建立层，直到颅骨被覆盖并且连接器牢固地连接到颅骨上，使针脚完全自由。避免在小鼠的皮肤上沾上牙齿水泥。
- 让其完全干燥。
- 使用组织粘合剂关闭植入物周围的皮肤（参见 材料表）。
- 将鼠标放在33°C加热垫上的恢复笼中，监测是否存在以下一种或多种疼痛/不适迹象：1）驼背，缺乏或运动活动减少，2）未能梳理反映在未清洁的脏衣中，3）过度舔舐或抓挠，切口部位发红， 4）攻击性行为，5）厌食或脱水，6）缺乏巢形成。
注意：在所有程序中将鼠标单独关在笼子里，以避免植入物脱落。在套管脱离的情况下，通过注射150mg / kg戊巴比妥钠进行安乐死，然后在达到深度麻醉后斩首。 - 皮下注射（SC）美洛昔康1mg / kg，每日一次，术后三天，以提供镇痛。
- 在进一步操作之前，至少等待 7 天以完全恢复，等待 14 天进行视蛋白表达。
注意：每12小时进行一次术后随访，持续三天，然后每天检查动物，直到实验结束时安乐死之日。
2.“触及即抓”培训
- 在手术后第7天，开始食物剥夺方案28。连续三天称量小鼠体重以确定其平均体重。然后，安排食物限制，以便动物获得足够的营养，以保持大约90%和不低于85%的体重。
注意：这是通过每天提供2.5-3克食物来实现的。每天监测动物的体重，并评分整体幸福感，观察动物的行为和外观，例如，皮毛和眼睛外观。使用参考文献29 中的身体状况评分系统。 - 在训练前，训练和测试期间，除了标准食品颗粒外，每天为每只小鼠提供20个颗粒（20毫克无尘巧克力味颗粒）（参见 材料表）（在任务期间或之后食用）。
- 在习惯化前三天，将0.4克/动物/天20毫克无尘巧克力味颗粒散落在家用笼子里，这样老鼠就可以熟悉这些颗粒，这些颗粒在伸手可及的抓取任务中作为奖励。
- 通过在预训练前一天将它们放在测试室中10分钟来习惯化小鼠，并将散布在室地板上的沉淀（图1A）。
- 训练和测试后，每天允许进食。每天保持类似的时间表。
- 在预训练的第一天，将小鼠放在伸手抓取室中，并从前面观察。将颗粒放在靠近开口的腔室前面，以便它们开始消耗颗粒。在这个阶段，允许小鼠以任何形式抓住颗粒。
- 在训练前的第二天，将颗粒放置在离开口越来越远的地方，直到将它们放到压痕处（距离开口1厘米），以便小鼠可以塑造它们的伸手到抓握的运动（图1C）。
- 训练小鼠跑到笼子的后部，然后回到笼子开口接受下一个食物颗粒，作为个性化试验的策略。
注意：这可以通过等到鼠标在笼子的后部，然后再在每次试验的压痕中放置颗粒来实现。 - 放置颗粒，用右爪或左爪抓住。
注意：小鼠开始优先使用一只爪子来抓握，这将在接下来的几天的训练和测试中使用。 - 每天训练动物6天，持续20次试验，或直到最多10分钟过去。从训练的第2天开始，放入模拟接收器（尺寸为12 x 18 x 7 mm，1 g，参见 材料表），这样小鼠在执行任务时就会习惯于体重（图1B）。每天对命中和错过的试验次数进行评分。
- 使用常规相机记录行为，并从腔室前部捕获30-60帧/秒。此外，可以在训练室下方以45°角放置一面镜子，以监测动物的姿势（图1D，E）。
- 对于 事后 运动学分析（图2），以45°的角度安装高速相机（参见 材料表），以从保持架侧面进行记录。如果需要3D分析，请放置第二个高速相机，从腔室前部以35°角进行记录;根据动物的侧面，两个摄像头都应放置在笼子的右侧或左侧，并应以相同的帧速率捕获并同步7 （图3D，E）。
- 如果可能，将高速相机设置为 100 帧/秒，分辨率为 376 x 252 像素或更高。将白色聚苯乙烯泡沫塑料壁放在腔室的侧面和背面，以减少背景并增加对比度（图1E）。
- 在测试当天，用红外接收器替换模拟单元以进行无线光遗传学刺激（图1B，C）。
- 当小鼠开始伸展时，用遥控器手动转动LED套管，以便在执行行为时进行连续刺激，并且不超过2秒。对自动刺激范式进行编程是优选的。刺激装置触发470nm（蓝光）的LED，尖端的强度为1.0 mW / mm2。
- 收集视频以进行进一步检查，包括评分和运动学分析。
3. 事后组织学确认
- 实验完成后，确认病毒表达和LED套管放置。用氯胺酮100毫克/千克和甲苯噻嗪10毫克/千克的混合物麻醉动物。一旦小鼠出现深度麻醉的迹象（步骤1.7），用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）灌注，然后注射4%PFA。
- 用镊子牢牢抓住接头并轻轻拉起，小心地取下植入的套管。
- 提取并在4%PFA 23中将大脑固定24小时。
- 用PBS进行3-10分钟的洗涤。
- 使用切片机将大脑切成50μm切片（参见 材料表）。
- 使用带有DAPI的硬定安装介质将切片安装在载玻片中，以染色细胞核和盖玻片。
- 干燥后，在共聚焦显微镜下观察切片，并验证植入的套管位置和与任何荧光蛋白融合的Ch2R的表达。
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Representative Results
伸手可及的任务是一种范式，广泛用于研究不同实验操作下精细技能运动的塑造，学习，表现和运动学。小鼠在几天内学会执行任务，并在训练5天后达到平台，准确率超过55%（图2A，B）。与之前报道的类似，一定比例的动物没有适当地执行任务（29.62%），这些动物应从进一步分析中排除30。这些包括非学习小鼠的子集（6/54只小鼠，11.1%），从训练开始时就错过了目标，距离颗粒太远，或者在它们在颗粒上处于正确位置之前执行抓取运动。在第一个训练日，另一组以高精度执行任务，但由于在第3-4天将目标对准距离颗粒太远而开始表现不佳（10/54只小鼠，18.51%）。在这一组中，一些小鼠开始使用首选爪子进行训练，但在几天后改变其偏好;这在Chen等人之前已经讨论过，201430。
从试验到试验以及在动物体内，伸手到抓取的运动是高度刻板的（图2）。高速摄像的使用可以跟踪运动轨迹，从而可以分析控制条件下不同阶段和光遗传学刺激期间的运动学（图1E和图2C）。这种近似值可以对行进距离、速度、加速度、终点和轨迹等参数进行量化评估（图2 C-E）。可以分析多到达试验，其中小鼠在检索颗粒之前多次到达，以及单次试验事件，其中小鼠在单个到达运动中检索颗粒。当动物将颗粒推开或通过进入笼子的后部重新开始试验时，试验就结束了。通过主成分分析（PCA）和k均值聚类（图3J-K）23，25，实现了不同实验条件下轨迹的定量比较。
在大多数训练过程中，小鼠有时无法抓住颗粒（错过试验）。一些操作会改变错过的试验次数，从而改变任务的准确性。然后，分析命中试验和错过试验之间的差异至关重要。在我们手中，错过的试验是由运动的三个不同阶段的变化引起的：（1）爪子在穿过腔室开口之前修改其轨迹（初始误差），（2）爪子在爪子穿过开口后修改其轨迹（最终错误），以及（3）未能收集颗粒（抓握错误）（图2 I，J）13.与命中试验相比，错过试验的一般特征是小鼠开始远离颗粒（终点）的抓取运动（图2G）。此外，与小鼠姿势相关的未命中被测量为命中和未命中试验之间身体角度的显着差异（图2H）。
根据光遗传学靶向的结构或神经元群体，人们可以预期行为7，19，23，31，32，33的差异效应。目前的方案描述了在对侧或同侧半球的纹状体中激活棘突神经元（SPN）对小鼠在到达运动期间使用的首选爪子的影响（图3）。D1多巴胺表达SPN的对侧活化，其起源于基底神经节直接途径，与对照条件相比，抓取成功率降低至64.9±8.8%（图3B）。运动学分析表明，在光遗传学刺激期间，爪子轨迹描述了振荡模式，表现为行进距离增加到对照的218.4±19.2%，导致无法靶向颗粒和初始误差I型增加（图3F）。PCA分析表明，所有试验在对侧D1 SPN激活期间的轨迹在一个簇中分离，与对照组几乎没有重叠，表明相似性较低（图3J-K）。
另一方面，同侧dSPN的激活导致PCA分析显示的轨迹色散增加（图3K），而不影响达到成功（120.7±23.6%，n = 4），总行进距离（136.3±35.5%）或达到阶段的最大速度（117.3±10.3%）（图3C），表明同侧D1 SPN激活在一定程度上改变了到达轨迹而不改变行为结果（图3G-I).运动学分析表明，通过同侧操作，运动控制发生了细微变化。最后，身体姿势分析显示，在对侧D1SPN激活期间，身体角度发生了变化（图3L）。需要强调的是，即使是这个简单的任务也有许多组件，可以允许正确的运动执行来实现目标。
图1：实验设置。 （A）行为室的示意图。用丙烯酸板制成的腔室，具有以下尺寸（厘米）：18.5（高）x 8.5（宽）x 20（深），前窗1（宽）x 5（高）和小架子8.5（宽）x 4（深）。（B）LED套管（左）和无线接收器（右）的照片。（C）在执行“伸手可及抓取”任务时，植入的LED套管连接到接收器的小鼠的侧视图（白色箭头显示接收器，星号显示支撑套管的牙科水泥，空箭头显示颗粒）。（D）实验设置草图。两个高速摄像机以两个维度记录范围，而第三个摄像机收集任务的全景视图，包括鼠标从腔室下方的镜子中的位置。动物可以自由选择自己喜欢的爪子，刺激侧总是指的是首选爪子的一侧。（E） 试验期间相机的确切位置和每个相机的代表图像。这一数字改编自参考文献23。 请点击此处查看此图的大图。
图2：到达行为的运动学分析。 （A）实验时间线从第0天（d0）到第25天（d25）。（B） 在伸手可及的范围内，按回收颗粒准确度（成功抓取总数/试验总数 x 100）衡量的一段时间内的抓取任务期间的表现。（C） 从高速视频进行轨迹跟踪的示例。（D）爪子在击中和错过试验期间的个体轨迹。（E）在击中和错过的试验期间爪子行进的总距离。（F）爪子通过弹道的加速度，在命中和错过的试验中绘制为距离 与距离。速度。（G）命中的终点距离摘要= 3.16毫米，错过6.08毫米（曼恩 - 惠特尼 - 威尔科克森测试错过与击中 U = 4184，p<0.0001，n = 28只小鼠）。（H）两种试验中体角的差异，未命中=8.4±5.3°，命中率为6.7±4°（曼-惠特尼-威尔科克森试验U=6437，P=0.0243，n=28只小鼠）。（一）三类误差的示意图。（J）对照条件下小鼠所犯的三种误差的比例。这一数字改编自参考文献23。 请点击此处查看此图的大图。
图3：在伸手抓取行为期间对侧和同侧D1 SPN的光遗传学激活。（B）与非刺激试验相比的成功率。（C） 与控制条件相比，行驶距离的变化。（D），（G）爪子在有和没有光遗传学刺激的情况下形成的路径的二维图。（六），（H） 爪子在伸展运动期间行进的总距离。（六），（I）不同类型错误的分布摘要。D1对侧：初始误差或I型（对照= 18.2±11.6%，刺激= 79.9±8.2%费舍尔精确试验，p<0.0001）。（J）对照条件下轨迹与D1SPN对侧活化相比的PCA分析示例。阴影区域表示每个条件的聚类，星形是聚类质心。（K）总结不同实验条件的簇之间的重叠。（L）体角的变化。此图已从参考文献23 修改而来。请点击此处查看此图的大图。
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Discussion
在明确定义的行为范式中使用神经元群体的光遗传学操作正在推进我们对运动控制机制的知识7，23。无线方法特别适用于需要对多种动物进行测试或自由移动的任务34，35。然而，随着技术和设备的改进，它应该是任何行为任务与光遗传学相结合的首选34，36。
目前的方法具有许多优点，因为小型化LED提供了高强度的可靠光源，并且植入物可用于需要几天内刺激的研究。然而，插入用于视蛋白刺激的光纤可能会机械地损害脑组织，引起感染，偶尔在导管37的位置发炎。持久的高频光遗传学刺激已被证明会产生热量并可能导致光毒性37。通过使用用红光甚至近红外光激活的红移效应子视蛋白来降低光毒性，从而减少热量的产生38。
此外，由于连接接收器的针脚保持在颅骨外，如果牙科骨水泥应用不正确，有时小鼠会导致套管移位或脱落;这通常会导致脑组织的损伤，并减少需要考虑进一步分析的受试者数量。最近的发展引入了无纤维光遗传学，其使用可以通过上转换发光来响应穿透脑组织36深处的近红外光的粒子来发射可见光。无纤维装置带来了在更长的时间范围内在具有不明显植入物的自由行为动物中激发光遗传学的机会35。这允许在水迷宫中无节制的运动，将多个动物安置在一起（以避免社会孤立的影响），并在更自然的环境中研究动物35，36。
即使具有无纤维光遗传学提供的所有优势，它仍然面临着生物相容性和发热性挑战。光子转换的效率也限制了它。最后，需要进一步改进高排放效率34，36。
这种范式与高速摄像的结合允许在不同的实验条件下进行运动学分析。这样可以灵敏地检测行为和电机控制的不同组成部分的微小影响。随着更多分析工具的发展，有可能进行在线运动学分析和对不同环境中的运动行为进行深入表征。Becker等人最近发表了小鼠运动学的彻底定量。
使用微创技术选择性地操纵自由移动动物中的神经元群体的可能性使人们能够剖析特定神经元类型在精确行为任务中的贡献23。伸手可及的抓取任务是运动行为的可翻译范式13，19。已知保守的大脑结构参与任务7，12，23的获取，学习和执行的不同阶段。揭示这种行为背后的神经回路将增加对运动控制的理解。几项研究强调了双半球控制单项任务的重要性，特别是当需要高灵活性时20，21，22。运动学分析与光遗传学操作相结合，可以研究这种复杂行为的不同机制。它可以帮助分析感觉运动反馈在正常条件和疾病模型中的贡献。
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Disclosures
作者声明不予披露。
Acknowledgments
这项工作得到了UNAM-PAPIIT项目 IA203520的支持。我们感谢IFC动物设施在小鼠菌落维护方面的帮助和IT支持的计算单元，特别是Francisco Perez-Eugenio。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anaesthesia machine | RWD | R583S | Isoflurane vaporizer |
| Anesket | PiSA | Ketamine | |
| Breadboard | Thorlabs | MB3090/M | Solid aluminum optical breadboard |
| Camera lense | Canon | 50mmf/ 1.4 manual focus lenses (c-mount) | |
| Camera system | BrainVision | MiCAM02 | Camera controller and synchronizer |
| Cotton swabs | |||
| CS solution | PiSA | Sodium chloride solution 9% | |
| Customized training chamber | In house | ||
| Drill bit #105 | Dremel | 2 615 010 5AE | Engraving cutter |
| Dustless precission chocolate pellets | Bio-Serv | F05301 | |
| Ethyl Alcohol | J.T. Baker | 9000-02 | Ethanol |
| Eyespears | Ultracell | 40400-8 | Eyespears of absorbent PVA material |
| Fluriso | VetOne | V1 502017-250 | Isoflurane |
| Glass capillaries | Drumond Scientific | 3-000-203-G/X | Pipettes for NanoJect II |
| Hidrogen peroxide | Farmacom | Antiseptic | |
| High-speed camera | BrainVision | MiCAM02-CMOS | Monochrome high-speed cameras |
| Infrared emmiter | Teleopto | ||
| Insulin syringe | |||
| LED cannula | Teleopto | TelC-c-l-d | LED cannula 250um 487nm light |
| Micropipette 10 uL | Eppendorf | Z740436 | |
| Micro-pipette puller | Sutter | P-87 | Horizontal puller |
| Microscope LSM780 | Zeiss | Confocal microscope | |
| Microtome | |||
| Mock receiver | Teleopto | ||
| NanoJect II | Drumond Scientific | 3-000-204 | Micro injector |
| Oxygen tank | Infra | na | |
| pAAV-EF1a-double.floxed-hChR2(H134R)-mCherry-WPRE- HGHpA | Addgene | 20297 | Viral vector for ChR-2 expression |
| Parafilm | |||
| Paraformaldehyde | Sigma | P-6148 | |
| Phosphate saline buffer | Sigma | P-4417 | Phosphate saline buffer tablets |
| Pipette tips 10 uL | ThermoFisher | AM12635 | 0.5-10 uL volume |
| Pisabental | PiSA | Sodium pentobarbital | |
| Plexiglass | commercial | Acrylic sheet | |
| Povidone iodine | Farmacom | Antiseptic | |
| Procin | PiSA | Xylacine | |
| Puralube | Perrigo pharma | 1228112 | Eye lubricant 15% mineral oil/85% petrolatum |
| Rotary tool | Kmoon | Mini grinder | Standard |
| Scalpel | |||
| Scalpel blade | |||
| Stereotaxic apparatus | Stoelting | 51730D | Digital apparatus |
| Super-Bond C&B | Sun Medical | Dental cement | |
| Surgical dispossable cap | |||
| Teleopto remote controller | Teleopto | ||
| Tg Drd1-Cre mouse line | Gensat | 036916-UCD | Transgene insertion FK150Gsat |
| Tissue adhesive | 3M Vetbond | 1469SB | |
| TPI Vibratome 1000 plus | Peico | Microtome | |
| Vectashield mounting media with DAPI | Vector laboratories | H-1200 | Mounting media |
| Wireless receiver | Teleopto | TELER-1-P |
References
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