Summary
De tandheelkundige follikel bevat een epitheliale populatie en mesenchymale cellen. De epitheliale populatie werd geselecteerd uit de heterogene tandheelkundige follikelcelpopulatie door een afzonderlijk kweekmedium te bieden. Epitheelcellen overleefden en vormden kolonies in een serumvrij medium.
Abstract
De tandheelkundige follikel (DF) werd geoogst tijdens het verwijderen van een aangetaste derde kies door een orale maxillofaciale chirurg. Epitheelcelisolatie werd uitgevoerd op de dag van de DF-oogst. De DF werd drie keer gewassen met DPBS en vervolgens ontleed met een weefselschaar totdat het weefsel een pulpachtige of squishy consistentie had. Eencellige populaties werden gepelletiseerd door centrifugering en gewassen met keratinocyten serumvrij medium. Heterogene celpopulaties werden verdeeld in een kweekschaal. Keratinocyten serumvrij medium werd gebruikt om de epitheelcellen te selecteren. Het kweekmedium werd dagelijks verwisseld totdat er geen drijvend puin of dode cellen werden waargenomen. Epitheelcellen verschenen binnen 7-10 dagen na de verdeling van de celpopulatie. Epitheelcellen overleefden in serumvrij medium, terwijl α-modificatie minimaal essentieel medium aangevuld met 10% foetaal runderserum de proliferatie van mesenchymale cellen mogelijk maakte. De DF is een weefselbron voor de isolatie van tandheelkundige epitheelcellen.
Het doel van deze studie was om een methode vast te stellen voor de isolatie van epitheelcellen van menselijke DF. Parodontaal ligament (PDL) werd gebruikt voor de isolatie van menselijke tandheelkundige epitheelcellen. Het verkrijgen van epitheelcellen van menselijke PDL is niet altijd succesvol vanwege het kleine weefselvolume, wat leidt tot lage aantallen epitheelcellen. DF heeft een groter volume dan PDL en bevat meer cellen. DF kan een weefselbron zijn voor de primaire kweek van menselijke tandheelkundige epitheelcellen. Dit protocol is eenvoudiger en efficiënter dan de isolatiemethode met PDL. Het verkrijgen van menselijke tandheelkundige epitheelcellen kan verdere studies van tandheelkundige epitheliale-mesenchymale interacties vergemakkelijken.
Introduction
Tandvorming begint met de invaginatie van het orale epitheel1. Volgens het tandontwikkelingsstadium heeft het orale epitheel verschillende namen, waaronder het binnenste en buitenste glazuurepitheel, cervicale lus en hertwig's epitheliale wortelschede (HERS). De epitheelcompartimenten communiceren met de omliggende mesenchymale cellen. Epitheliale-mesenchymale interacties reguleren tandvorming en weefselregeneratie. Het verkrijgen van tandheelkundige epitheelcellen, zoals orale keratinocyten en Hertwig's epitheliale wortelschedecellen (HERSC's), is cruciaal voor de studie van tandheelkundige epitheliale-mesenchymale interacties2.
Van knaagdieren afgeleide tandheelkundige epitheelcellen worden geïsoleerd uit de epitheelstructuur, zoals de HERS. Li en collega's isoleerden en vereeuwigden ratkiezen-afgeleide HERSC's na het oogsten van het apicale deel van de zich ontwikkelende tandkiemen van 8 dagen oude ratten3. Het HERS werd onder vergroting gescheiden van apicale weefsel. Gezien het ontwikkelingsstadium en de leeftijd van de tand, is het oogsten van de HERS van mensen bijna onmogelijk vanwege ethische kwesties: een zich ontwikkelende tandkiem moet van een jong kind worden verwijderd om de menselijke HERS te oogsten. Onrijpe tandkiemen worden zelden geëxtraheerd. Menselijke tandheelkundige epitheelcellen kunnen worden geïsoleerd uit het tandvlees en het parodontale ligament (PDL). Epitheliale structuur-afgeleide cellen nemen deel aan tandvorming samen met mesenchymale componenten en kunnen meer geschikt zijn voor de studie van tandheelkundige epitheliale-mesenchymale interacties dan orale keratinocyten. Epitheelcelresten van Malassez (ERM) zijn hers-afgeleide epitheliale restanten en verblijven in kleine aantallen in de PDL4. Studies melden de isolatie van menselijke HERSC's van PDL5. Het oogsten van menselijke HERSC's uit PDL-weefsel is echter niet altijd succesvol vanwege de schaarste van de epitheliale populatie op deze locatie5,6.
Hoewel van knaagdieren afgeleide HERSC's worden gehandhaafd in serumbevattende media3,7, worden menselijke DF-afgeleide epitheelcellen gekweekt met serumvrije media die vergelijkbaar zijn met andere menselijke epitheelcellen, zoals normale menselijke epidermale keratinocyten en normale menselijke orale keratinocyten8,9. Dit impliceert fysiologische of functionele verschillen tussen tandheelkundige epitheelcellen van knaagdieren en menselijke tandheelkundige epitheelcellen. Inzicht in het mechanisme met betrekking tot tandheelkundige epitheliaal-mesenchymale interacties kan bijdragen aan de ontwikkeling van klinische toepassingen, waaronder parodontale herbevestiging tijdens herplanting, parodontale regeneratie bij parodontitis, pulp-dentine complex regeneratie en bio-tandgeneratie. Gezien de kenmerken van translationeel onderzoek, kunnen menselijke tandheelkundige epitheelcellen geschikter zijn dan knaagdier tandheelkundige epitheelcellen voor de studie van epitheel-mesenchymale interacties.
De menselijke DF is een los bindweefsel en bevindt zich vaak in een aangetaste tand. De DF bevat mesenchymale voorlopers10. Voor zover wij weten, heeft echter geen enkele studie de isolatie van epitheelcellen uit tandzakjes vóór 2021 gemeld. Oh en Yi meldden de isolatie van epitheelcellen van menselijke DF in 20218. Het epitheliale fenotype werd bevestigd door western blotting en morfologische analyse. Analyse van de oorsprong van DF-afgeleide epitheelcellen toonde vergelijkbare resultaten met andere studies. DF-afgeleide epitheelcellen waren noch endotheel noch hematopoietisch5,11, en Oh en Yi stelden voor om deze cellen als DF-HERSC's te benoemen. De DF heeft een groter volume dan de PDL en er kunnen meer epitheelcellen uit de DF worden geïsoleerd. Dit verbetert de opkomst van epitheliale kolonies en resulteert in een hoog slagingspercentage bij het oogsten van epitheelcellen uit DF. Deze studie suggereert het gebruik van de DF als een weefselbron voor de isolatie van tandheelkundige epitheelcellen.
In de huidige studie werden afzonderlijke cellen geïsoleerd uit de DF volgens eerder beschreven procedures10,12. De DF bevat heterogene celpopulaties en verschillende celtypen kunnen in een vroeg stadium van de procedure aanwezig zijn. Morsczek en collega's isoleerden DF-afgeleide mesenchymale stamcellen10. We veronderstelden dat de DF epitheelcellen bevat en dat alleen epitheelcellen kunnen overleven onder serumvrije omstandigheden. Deze studie verschilt van die van Morsczek et al. in termen van de selectie van de epitheliale populatie en de remming van mesenchymale cellen. De selectie werd uitgevoerd met behulp van keratinocyten serumvrije media (SFM), die epitheelcelproliferatie mogelijk maken en mesenchymale celproliferatie remmen. Deze studie is voortgekomen uit een rapport van Oh en Yi8. Het doel van deze studie was om details te beschrijven van de methode die in dat rapport wordt gebruikt voor de isolatie van epitheelcellen van menselijke DF.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Deze studie werd goedgekeurd door de Institutional Review Board van het Kyung Hee University Hospital in Gangdong (IRB-goedkeuringsnummer. KHNMC 2017-06-009).
1. Verzamel DF
OPMERKING: Patiënten gaven vóór de operatie geïnformeerde toestemming voor het verwijderen van een volwassen of onrijpe aangetaste derde kies. Patiënten met de volgende ziekte werden uitgesloten: diabetes, hypertensie, tuberculose, hepatitis, verworven immunodeficiëntiesyndroom. Ook zwangere vrouwen werden uitgesloten.
- Oogst DF tijdens de chirurgische extractie van aangetaste derde kiezen (figuur 1A).
OPMERKING: De operatie werd uitgevoerd door een kaakchirurg. Samenwerking met een tandarts is vereist voor weefselverzameling. - Store DF in Dulbecco's fosfaat-gebufferde zoutoplossing (DPBS) met 3% penicilline-streptomycine bij 4 °C voor gebruik. Voer isolatieprocedures uit op de dag van de DF-oogst (figuur 1B).
2. Isoleer eencellige populaties van DF
- Bereid stamoplossingen van collagenase type I en protease in DPBS, zodat de uiteindelijke concentraties collagenase type I en protease respectievelijk 1 mg / ml en 2,4 mg / ml zijn.
- Bereid drie wasbuizen van 50 ml voor met 20 ml DPBS per buis. Label de buizen als 1, 2 en 3.
- Was de DF achtereenvolgens in de wasbuizen. Houd de DF vast met een pincet en plaats de DF in buis 1. Haal de DF uit buis 1 en plaats deze in buis 2. Haal de DF uit buis 2 en plaats deze in buis 3. Schud DF voorzichtig 10-15 keer in elke buis. Plaats de DF na drie keer wassen in een kweekschaal van 60 mm (figuur 2A).
- Hak de DF fijn met een weefselschaar (figuur 2B). Breng slechts een klein deel over naar de kweekschaal om weefselverlies te minimaliseren. Herhaal het snijden totdat de DF een pulpig of squishy uiterlijk heeft (figuur 2C).
- Meng 1 ml collagenase type I en 1 ml protease-oplossing in een conische buis van 15 ml om definitieve concentraties van respectievelijk 1 mg / ml en 2, 4 mg / ml te verkrijgen.
- Breng de gehakte DF over in de conische buis van 15 ml uit stap 2.5. Schud en incubeer de buis voorzichtig gedurende 1 uur bij 37 °C.
- Voeg 5 ml 0,05% trypsine-EDTA toe aan de buis, schud en incubeer de buis gedurende 15 minuten bij 37 °C.
- Bereid keratinocytenmedium met keratinocyt SFM 10% foetaal runderserum (FBS). Voeg 3 ml keratinocytenmedium toe aan een nieuwe conische buis van 50 ml. Plaats een zeef van 40 μm bovenop deze buis en gebruik een serologische pipet van 10 ml om het supernatant uit stap 2.6 op te zuigen en door de zeef te laten gaan.
OPMERKING: Minimaliseer de opname van verteerde weefselresten tijdens het gebruik van het supernatant. Verwijder de weefselresten met een zeef van 40 μm om falen te minimaliseren. Weefselresten kunnen door 70 μm strainers gaan en de vorming van kolonies belemmeren. FBS in het keratinocytenmedium zal de enzymen inactiveren. - Herhaal stap 2.7 en 2.8.
- Breng de verzamelde suspensie over in een conische buis van 15 ml.
- Centrifugeer de conische buis van 15 ml bij 288 × g gedurende 3 minuten bij 4 °C. Verwijder het supernatant.
OPMERKING: Wees voorzichtig om te voorkomen dat per ongeluk pelletcellen worden verwijderd, die meestal onzichtbaar zijn. - Voeg 3 ml keratinocyt SFM toe en was de cellen tweemaal met een pipet van 1 ml met centrifugatie zoals in stap 2.11.
- Plaats de eencellige populatie in een kweekschaal van 60 mm met behulp van keratinocyt SFM. Houd de kweekschaal met een eindvolume van 5 ml in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 bij 37 °C. Verander het kweekmedium dagelijks totdat er geen weefsel- of celresten worden waargenomen.
OPMERKING: Verwijder drijvend vuil in het kweekmedium door het medium te veranderen. Vertraagde verwijdering van weefselresten of dode cellen heeft een ongunstig effect op de primaire kweek. - Onderzoek de plaat vanaf stap 2.13 om de groei van epitheelcellen te controleren (figuur 3A).
OPMERKING: Epitheelcellen groeien binnen 7-10 dagen na het platen van eencellige populaties. - Breid de epitheelkolonies uit en subcultuur de cellen.
- Zuig het medium op en was de bodem van de kweekplaat eenmaal met 3 ml keratinocyt SFM.
- Voeg 2 ml celdissociatieprotease toe en incubeer gedurende 3 minuten in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 bij 37 °C.
OPMERKING: Herhaal stap 2.15.2 als het loskoppelen van cellen niet effectief is. - Voeg 2 ml keratinocytenmedium toe aan de kweekplaat en breng de inhoud over in een conische buis van 15 ml.
OPMERKING: Het toevoegen van meer keratinocytenmedium is niet nodig als stap 2.15.2 wordt herhaald. - Centrifugeer de conische buis van 15 ml bij 288 × g gedurende 3 minuten bij 4 °C.
- Verwijder het supernatant en was de celkorrel twee keer met 3 ml keratinocyt SFM.
- Verdeel de cellen in een kweekschaal van 100 mm met keratinocyt SFM (eindvolume van 10 ml per schaal van 100 mm).
- Bereid en bewaar celvoorraden in een tank met vloeibare stikstof.
- Oogst cellen zoals beschreven in stap 2.15.1-2.15.5.
- Verdeel de cellen in cryovialen in 1 ml vriesmedium (80% keratinocyt SFM, 10% dimethylsulfoxide, 10% FBS).
- Plaats de injectieflacons in een vriescontainer en bewaar ze gedurende 24 uur bij -80 °C.
- Breng de injectieflacons over van de diepvriezer naar een tank met vloeibare stikstof.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
DF oogsten
De operatie werd uitgevoerd door een kaakchirurg. Van de mens afgeleide materialen, waaronder het tandfragment, gingivaal weefsel en DF, werden verzameld door een chirurg (figuur 1A). De DF kan aan het tandfragment worden bevestigd. Een orale maxillofaciale chirurg zal in staat zijn om de DF te identificeren. Samenwerking en communicatie met de chirurg zijn vereist voor weefselverzameling. De DF is een onregelmatig gevormd membraanachtig weefsel. Gingivaal weefsel heeft een verhoornd oppervlak en is te onderscheiden van de DF. Pulpweefsel bevindt zich in de pulpakamer en wordt zelden gescheiden van tanden tijdens de operatie. De DF werd vóór gebruik opgeslagen in DPBS met 3% penicilline-streptomycine bij 4 °C (figuur 1B).
Mechanische behandeling van DF
Weefselresten en bloed werden verwijderd door de DF te wassen met DPBS. Drie conische buizen werden bereid met wasoplossing. Na het wassen werd de DF overgebracht op een kweekschaal van 60 mm of 100 mm (figuur 2A). De DF moet met een schaar worden fijngehakt totdat het weefsel een pulpachtig of papperig uiterlijk heeft (figuur 2B, C).
Opkomst van epitheliale populatie
Na het plateren van heterogene celpopulaties dreven veel cellen en klein puin in het kweekmedium. Het aantal zwevende cellen nam geleidelijk af met opeenvolgende mediumveranderingen. Vertraagde mediumverandering kan een troebele cultuuromgeving veroorzaken. In het beginstadium verschijnen verschillende celtypen aan de onderkant van de kweekschaal, maar verdwijnen wanneer ze in keratinocyt SFM worden gehouden. Cellen met epitheliale morfologie verschijnen binnen 7-10 dagen na plating van eencellige populaties (figuur 3A). Het aantal geplaveide cellen varieert van 1 tot 10 op het moment van het ontstaan van epitheelcellen, die zich in de loop van de tijd uitbreiden tot kolonies (figuur 3B).
De gehaktprocedure werd herhaald om het DF-contactoppervlak te vergroten met 0,05% trypsine-EDTA om celdissociatie te bevorderen. Meer afzonderlijke cellen werden geoogst uit DF-pulp dan intacte DF. De kleverigheid van de DF-pulp duidde op de kans op succes van de isolatie van epitheelcellen. Dagelijkse mediumveranderingen voorkwamen dat de keratinocyt SFM troebel werd, wat belangrijk is voor de overleving van epitheelcellen.
Figuur 1: Van de mens afgeleide materialen. (A) Van de mens afgeleide materialen werden verzameld door een orale maxillofaciale chirurg. De gele pijl geeft de DF aan. Zwarte pijlen geven het tandfragment en tandgebonden zacht weefsel aan. (B) De DF werd opgeslagen in PBS aangevuld met 3% penicilline-streptomycine bij 4 °C. Isolatieprocedures werden uitgevoerd binnen 24 uur na afhaling. Afkortingen: DF = dental follikel; PBS = fosfaat-gebufferde zoutoplossing. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Behandeling van tandzakjes. (A) De DF werd na driemaal wassen met DPBS overgebracht naar een kweekschaal van 60 mm. (B) De DF werd gehakt met een weefselschaar. (C) De gehakte DF had een pulpachtig of papperig uiterlijk. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Opkomst van epitheelcellen. (A) Cellen met epitheliale morfologie verschijnen binnen 7-10 dagen na het plateren van eencellige populaties. (B) Ex vivo expansie van van DF afgeleide epitheelcellen door subcultuur. Schaalbalken = 100 μm. Afkorting: DF = dental follikel. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dit protocol bevat kritieke stappen. Het oogsten van eencellige populaties is essentieel voor de succesvolle isolatie van epitheelcellen van DF. We probeerden epitheelcellen te isoleren van de DF op basis van onze hypothese dat er meer epitheelcellen in de DF zijn. De gehaktprocedure verbetert de loslating en afgifte van cellen uit de DF. De gehaktprocedure werd verbeterd en het hakken werd herhaald totdat de DF pulpy leek om de afgifte van afzonderlijke cellen te vergemakkelijken. Het verkrijgen van het maximale aantal afzonderlijke cellen verhoogt de kans op het ontstaan van de epitheliale populatie. Besmetting treedt vaak op tijdens de isolatie van epitheelcellen uit de DF. Het gebruik van 40 μm strainers minimaliseert de opname van weefselresten in eencellige populaties, omdat weefselresten door 70 μm strainers kunnen gaan en epitheelcelkolonisatie kunnen remmen.
Epitheelcellen lijken kwetsbaarder te zijn voor bepaalde omgevingen dan mesenchymale cellen, en de dagelijkse verandering van het kweekmedium zorgde ook voor een schone omgeving voor het ontstaan van de epitheelpopulatie. Het verliezen van cellen als gevolg van frequente mediumverandering kan een beperking van dit protocol zijn. Echter, dagelijkse verandering van het medium werd uitgevoerd na het oplossen van problemen voor dit protocol, en bijgevolg verschenen epitheelcellen en breidden zich uit. Het uitstellen van de mediumverandering kan de culturen beïnvloeden. Omdat de celkorrel na centrifugatie bijna onzichtbaar is, verhoogt de smalle punt van een conische buis van 15 ml het gemak van supernatantverwijdering zonder de celkorrel te verliezen. Daarom stelt dit protocol voor om de inhoud van de conische buis van 50 ml over te brengen naar een conische buis van 15 ml.
De DF zorgt voor een groter volume weefsel en meer losse cellen dan de PDL. Daarom kan de DF worden gebruikt in plaats van de PDL als weefselbron voor de isolatie van menselijke tandheelkundige epitheelcellen. Selectie en remming van celtypen in de DF kan eenvoudig worden gedaan via een selectief kweekmedium. SFM induceert epitheliale groei, terwijl serumbevattend medium selecteert voor mesenchymale cellen. Deze methodologie maakt gemakkelijke toegang tot menselijke tandheelkundige epitheelcellen mogelijk. Morsczek en collega's isoleerden eerder DF-afgeleide mesenchymale voorlopers. Deze studie verschilt van die van hen door de selectie van epitheliale populaties en de remming van mesenchymale cellen.
De regulerende rol van tandheelkundige epitheelcellen tijdens tandvorming is van groot belang bij tandheelkundig onderzoek. Het bestuderen van epitheliale-mesenchymale interacties tijdens de ontwikkeling van tanden kan aanwijzingen suggereren voor de oplossing van klinische problemen13. Weefselregeneratie door epitheliale en mesenchymale componenten te combineren is geprobeerd14. Tandheelkundige epitheelcel-afgeleide factoren, zoals een glazuurmatrixderivaat, zijn geëvalueerd als therapeutische doelen gericht op parodontale regeneratie, pulp-dentinecomplexregeneratie en parodontale herbevestiging2,15. De combinatie van regeneratiefactoren, waaronder stamcellen, epitheel-mesenchymale celvellen, cel-afgeleide factoren en biomaterialen, kan biotanden genereren in geval van tandverlies of agenesie16. Tand-agenesie-geassocieerde genen, zoals PAX9, MSX1, AXIN2, EDA, EDAR en WNT10A genen, zijn potentiële kandidaat sleutel regulerende genen voor epitheliale-mesenchymale interacties17. Verder kunnen de volgende generatie sequencingmethode-afgeleide gegevens van tand-agenesie-geassocieerde studies op dezelfde manier vermeende nieuwe doelgenen voorstellen die moleculaire controle reguleren tijdens tandheelkundige epitheliale-mesenchymale interacties.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflicten hebben.
Acknowledgments
Deze studie werd ondersteund door subsidies van de National Research Foundation of Korea (NRF) gefinancierd door de Koreaanse overheid (NRF-2017R1C1B2008406 en NRF-2021R1F1A1064350). Dr. Hee-Yeon Bae was zo vriendelijk om de DF te leveren voor primaire cultuur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur 2-Propanol | EMD millipore Co., MA, USA | 1096341011 | 1 L |
| 0.05% trypsin-EDTA | Gibco, Grand island, NY, USA | 25300054 | 100 mL |
| 40 μm cell strainer | Falcon, NC, USA | 352340 | |
| Cell culture dish (100 x 20 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 172958 | Discontinued |
| Cell culture dish (60 x 15 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 150326 | |
| Collagenase type 1 | Gibco, Grand island, NY, USA | 17100017 | 1 g |
| Combi-514R / Refrigerated large capacity centrifuge | Hanil science industrial Co., LTD., Daejeon, South Korea | CB-514R | |
| Conical tube | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 50015 50050 |
15 mL 50 mL |
| Cryogenic vial | Corning Inc., NY, US | 430488 | 2 mL |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich, Missouri, US | D2650-100ml | 100 mL |
| Dispase | Gibco, Grand island, NY, USA | 17105041 | 1 g |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Welgene Inc., Gyengsangbuk-do, South Korea | LB 001-02 | 500 mL |
| Fetal bovine serum | Gibco, Grand island, NY, USA | 16000044 | 500 mL |
| Heraeus BB 15 / CO2 incubator | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 51023121 | |
| Keratinocyte serum-free medium | Gibco, Grand island, NY, USA | 10724-011 | 500 mL |
| MVE CryoSystem 2000 | MVE Biological Solutions Co., GA, USA | CryoSystem 2000 | |
| Nalgene Mr. Frosty Freezing Container | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 5100-0001 | for 1.2-2 mL CryoVials |
| Olympus CKX41 / Inverted cell culture microscope | Olympus Life Science, Waltham, Massachusetts |
22-00723-01 | Discontinued |
| Penicillin-Streptomycin Strep | Gibco, Grand island, NY, USA | 15140122 | 100 mL (10,000 U/mL) |
| Pipet aid XP | Drummond scientific Co., PA, USA | HDR-4-000-201 | |
| Pipetman Classic P1000 | Gilson, Villiers le Bel, France | F123602 | 100-1000 µL |
| Refrigerant | Nihon freezer Co. Ltd., Tokyo, Japan | CLN 540U | ~-80 °C / Discontinued |
| Serological pipet | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 91010 | 10ml |
| TrypLE Express Enzyme (1x), phenol red | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 12605010 | cell dissociation protease |
References
- Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; How the embryo makes teeth. Nature Reviews Genetics. 5 (7), 499-508 (2004).
- Choung, H. W., et al. The effect of CPNE7 on periodontal regeneration. Connective Tissue Research. 60 (5), 419-430 (2019).
- Li, X., et al. Development of immortalized Hertwig's epithelial root sheath cell lines for cementum and dentin regeneration. Stem Cell Research and Therapy. 10 (1), 3 (2019).
- Huang, X. F., Bringas, P., Slavkin, H. C., Chai, Y. Fate of HERS during tooth root development. Developmental Biology. 334 (1), 22-30 (2009).
- Farea, M., et al. Isolation and enhancement of a homogenous in vitro human Hertwig's epithelial root sheath cell population. International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11157-11170 (2013).
- Jung, H. S., et al. Directing the differentiation of human dental follicle cells into cementoblasts and/or osteoblasts by a combination of HERS and pulp cells. Journal of Molecular Histology. 42 (3), 227-235 (2011).
- Fang, J., Tang, L., Liu, X. H., Wen, L. Y., Jin, Y. Changes of the unique odontogenic properties of rat apical bud cells under the developing apical complex microenvironment. International Journal of Oral Science. 1 (1), 26-33 (2009).
- Oh, J. E., Yi, J. K. Isolation and characterization of dental follicle-derived Hertwig's epithelial root sheath cells. Clinical Oral Investigations. 25 (4), 1787-1796 (2021).
- Oh, J. E., Kim, R. H., Shin, K. H., Park, N. H., Kang, M. K. Delta Np63 alpha protein triggers epithelial-mesenchymal transition and confers stem cell properties in normal human keratinocytes. Journal of Biological Chemistry. 286 (44), 38757-38767 (2011).
- Morsczeck, C., et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).
- Nam, H., et al. Expression profile of the stem cell markers in human Hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells. Molecular and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).
- Lee, J. H., et al. Dental follicle cells and cementoblasts induce apoptosis of ameloblast-lineage and Hertwig's epithelial root sheath/epithelial rests of Malassez cells through the Fas-Fas ligand pathway. European Journal of Oral Sciences. 120 (1), 29-37 (2012).
- Wan, A. C. A. Recapitulating cell-cell Interactions for organoid construction - are biomaterials dispensable. Trends in Biotechnology. 34 (9), 711-721 (2016).
- Guo, Y., et al. Are Hertwig's epithelial root sheath cells necessary for periodontal formation by dental follicle cells. Archives of Oral Biology. 94, 1-9 (2018).
- Sugaya, T., Tomita, M., Motoki, Y., Miyaji, H., Kawamami, M. Influence of enamel matrix derivative on healing of root surfaces after bonding treatment and intentional replantation of vertically fractured roots. Dental Traumatology. 32 (5), 397-401 (2016).
- Fong, H. K., Foster, B. L., Popowics, T. E., Somerman, M. J. The crowning achievement: getting to the root of the problem. Journal of Dental Education. 69 (5), 555-570 (2005).
- Bonczek, O., et al. Tooth agenesis: What do we know and is there a connection to cancer. Clinical Genetics. 99 (4), 493-502 (2021).
