Summary
Tannsekken inneholder en epitelpopulasjon og mesenchymale celler. Epitelpopulasjonen ble valgt ut fra den heterogene tannsekkcellepopulasjonen ved å gi et tydelig kulturmedium. Epitelceller overlevde og dannet kolonier i et serumfritt medium.
Abstract
Tannsekken (DF) ble høstet under fjerning av en påvirket tredje molar av en oral maxillofacial kirurg. Epitelial celleisolasjon ble utført på dagen for DF-høsting. DF ble vasket tre ganger med DPBS og deretter dissekert med vev saks til vevet hadde en pulpy eller squishy konsistens. Encellede populasjoner ble pelletert av sentrifugering og vasket med keratinocytt serumfritt medium. Heterogene cellepopulasjoner ble distribuert i en kulturrett. Keratinocytt serumfritt medium ble brukt til å velge epitelceller. Kulturmediet ble endret daglig til ingen flytende rusk eller døde celler ble observert. Epitelceller dukket opp innen 7-10 dager etter cellepopulasjonsfordeling. Epitelceller overlevde i serumfritt medium, mens α modifikasjon minimalt viktig medium supplert med 10% foster bovint serum tillot spredning av mesenchymale celler. DF er en vevskilde for isolering av tannepitelceller.
Hensikten med denne studien var å etablere en metode for isolering av epitelceller fra human DF. Periodontal ligament (PDL) ble brukt til isolering av humane tannepitelceller. Å anskaffe epitelceller fra human PDL er ikke alltid vellykket på grunn av det lille vevsvolumet, noe som fører til lavt antall epitelceller. DF har et større volum enn PDL og inneholder flere celler. DF kan være en vevskilde for primærkulturen til humane tannepitelceller. Denne protokollen er enklere og mer effektiv enn isolasjonsmetoden ved hjelp av PDL. Anskaffelse av humane tannepiteringsceller kan legge til rette for videre studier av dental epitel-mesenchymale interaksjoner.
Introduction
Tanndannelse begynner med invaginering av det orale epitelet1. Ifølge tannutviklingsstadiet har det orale epitelet forskjellige navn, inkludert indre og ytre emalje epitel, cervical loop og Hertwigs epiteliale rothylse (HERS). Epitelrommene kommuniserer med de omkringliggende mesenchymale cellene. Epitelial-mesenchymale interaksjoner regulerer tanndannelse og vevregenerering. Anskaffelse av tannepitelceller, som orale keratinocytter og Hertwigs epiteliale rothylseceller (HERSCer), er avgjørende for studiet av dental epitelial-mesenchymale interaksjoner2.
Gnageravledede tannepitelceller er isolert fra epitelstrukturen, som HERS. Li og kollegene isolerte og udødeliggjorte rottemolar-avledede HERSC-er etter høsting av den apikale delen av de utviklende tannbakteriene fra 8-dagers gamle rotter3. HERS ble skilt fra apikalt vev under forstørrelse. Tatt i betraktning tannutviklingsstadiet og alderen, er høsting av HERS fra mennesker nesten umulig på grunn av etiske problemer: En utviklende tannkim må fjernes fra et lite barn for å høste det menneskelige HERS. Umodne tannbakterier blir sjelden ekstrahert. Humane dental epitelceller kan isoleres fra gingiva og periodontal ligament (PDL). Epiteliale struktur-avledede celler deltar i tanndannelse sammen med mesenchymale komponenter og kan være mer egnet for studiet av dental epitelial-mesenchymal interaksjoner enn orale keratinocytter. Epitelcellestøtter av Malassez (ERM) er HERS-avledede epitelrester og ligger i små mengder i PDL4. Studier rapporterer om isolering av menneskelige HERSC-er fra PDL5. Imidlertid er høsting av menneskelige HERSC-er fra PDL-vev ikke alltid vellykket på grunn av knappheten på epitelpopulasjonen på dette stedet5,6.
Selv om gnager-avledede HERSC-er opprettholdes i serumholdige medier3,7, dyrkes humane DF-avledede epitelceller med serumfrie medier som ligner på andre humane epitelceller, for eksempel normale humane epidermale keratinocytter og normale humane orale keratinocytter8,9. Dette innebærer fysiologiske eller funksjonelle forskjeller mellom gnager dental epitelceller og humane dental epitelceller. Forståelse av mekanismen for dental epitelial-mesenchymal interaksjoner kan bidra til utvikling av kliniske applikasjoner, inkludert periodontal reattachment under replantering, periodontal regenerering i periodontal sykdom, pulp-dentin kompleks regenerering, og bio-tann generasjon. Tatt i betraktning egenskapene til translasjonell forskning, kan humane tannepiteleceller være mer hensiktsmessige enn gnager dental epitelceller for studiet av epitel-mesenchymale interaksjoner.
Den menneskelige DF er et løs bindevev og ligger ofte i en påvirket tann. DF inneholder mesenchymale forløpere10. Men så vidt vi vet, har ingen studier rapportert om isolering av epitelceller fra tannsekkene før 2021. Oh og Yi rapporterte isolering av epitelceller fra human DF i 20218. Den epiteliale fenotypen ble bekreftet av vestlig blotting og morfologiske analyser. Analyse av opprinnelsen til DF-avledede epitelceller viste lignende resultater med andre studier. DF-avledede epitelceller var verken endotel- eller hematopoietiske5,11, og Oh og Yi foreslo å navngi disse cellene som DF-HERSCer. DF har et større volum enn PDL, og flere epitelceller kan isoleres fra DF. Dette forbedrer fremveksten av epitelkolonier og resulterer i en høy suksessrate i høsting av epitelceller fra DF. Denne studien antyder bruk av DF som vevskilde for isolering av tannepitelceller.
I den nåværende studien ble enkeltceller isolert fra DF i henhold til tidligere beskrevne prosedyrer10,12. DF inneholder heterogene cellepopulasjoner, og flere celletyper kan være til stede på det tidlige stadiet av prosedyren. Morsczek og kolleger isolerte DF-avledede mesenchymale stamceller10. Vi antok at DF inneholder epitelceller og at bare epitelceller kan overleve under serumfrie forhold. Denne studien skiller seg fra morsczek et al. når det gjelder valg av epitelpopulasjon og hemming av mesenchymale celler. Utvalget ble utført ved hjelp av keratinocytt serumfrie medier (SFM), som tillater epitelcelleproliferasjon og hemmer mesenchymal celleproliferasjon. Denne studien stammer fra en rapport fra Oh og Yi8. Målet med denne studien var å beskrive detaljer om metoden som ble brukt i denne rapporten for isolering av epitelceller fra human DF.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne studien ble godkjent av Institutional Review Board ved Kyung Hee University Hospital i Gangdong (IRB-godkjenningsnr. KHNMC 2017-06-009).
1. Samle DF
MERK: Pasientene ga informert samtykke før operasjonen for fjerning av en moden eller umoden påvirket tredje molar. Pasienter med følgende sykdom ble utelukket: diabetes, hypertensjon, tuberkulose, hepatitt, ervervet immunsviktsyndrom. Gravide kvinner ble også ekskludert.
- Høst DF under kirurgisk utvinning av berørte tredje molarer (figur 1A).
MERK: Kirurgi ble utført av en oral maxillofacial kirurg. Samarbeid er nødvendig med en tannlege for vevsinnsamling. - Oppbevar DF i Dulbeccos fosfatbufrede saltvann (DPBS) med 3 % penicillin-streptomycin ved 4 °C før bruk. Utfør isolasjonsprosedyrer på dagen for DF-innhøsting (figur 1B).
2. Isoler encellede populasjoner fra DF
- Forbered lagerløsninger av kollagenase type I og protease i DPBS slik at endelige konsentrasjoner av kollagenase type I og protease er henholdsvis 1 mg / ml og 2,4 mg / ml.
- Forbered tre 50 ml vaskerør med 20 ml DPBS per rør. Merk rørene som 1, 2 og 3.
- Vask DF i vaskerørene sekvensielt. Hold DF med pinsett og plasser DF i rør 1. Ta DF ut av rør 1 og legg den i rør 2. Ta DF ut av rør 2 og plasser den i rør 3. Rist DF forsiktig 10-15 ganger i hvert rør. Etter vask tre ganger, plasser DF i en 60 mm kulturrett (figur 2A).
- Hakk DF med vevssaks (figur 2B). Overfør bare en liten del til kulturretten for å minimere vevstap. Gjenta kuttet til DF har et fruktkjøtt eller squishy utseende (figur 2C).
- Bland 1 ml kollagenase type I og 1 ml proteaseoppløsning i et konisk rør på 15 ml for å oppnå endelige konsentrasjoner på henholdsvis 1 mg/ml og 2,4 mg/ml.
- Overfør hakket DF til det koniske røret på 15 ml fra trinn 2.5. Rist forsiktig og inkuber røret i 1 time ved 37 °C.
- Tilsett 5 ml 0,05% trypsin-EDTA i røret, rist og inkuber røret i 15 min ved 37 °C.
- Forbered keratinocyttmedium som inneholder keratinocytt SFM 10% foster bovint serum (FBS). Tilsett 3 ml keratinocyttmedium i et nytt konisk rør på 50 ml. Plasser en 40 μm sil på toppen av dette røret og bruk en 10 ml serologisk pipette for å aspirere supernatanten fra trinn 2.6 og passere den gjennom silen.
MERK: Minimer inkorporeringen av fordøyde vevsrester mens du tar supernatanten. Fjern vevsrester med en 40 μm sil for å minimere svikt. Vevrester kan passere gjennom 70 μm siler og hindre kolonidannelse. FBS i keratinocyttmediet vil inaktivere enzymene. - Gjenta trinn 2.7 og 2.8.
- Overfør den oppsamlede suspensjonen til et konisk rør på 15 ml.
- Sentrifuger det koniske røret på 15 ml ved 288 × g i 3 minutter ved 4 °C. Fjern supernatanten.
MERK: Vær forsiktig så du unngår utilsiktet fjerning av pelleterte celler, som for det meste er usynlige. - Tilsett 3 ml keratinocytt SFM og vask cellene to ganger med en 1 ml pipette med sentrifugering som i trinn 2.11.
- Plate encellet populasjon i en 60 mm kulturrett ved hjelp av keratinocytt SFM. Oppretthold kulturretten med et endelig volum på 5 ml i en fuktig atmosfære på 5% CO2 ved 37 °C. Endre kulturmediet daglig til det ikke observeres vev eller cellerester.
MERK: Fjern flytende rusk i kulturmediet ved å endre mediet. Forsinket fjerning av vevsrester eller døde celler har en ugunstig effekt på primærkulturen. - Undersøk platen fra trinn 2.13 for å kontrollere veksten av epitelceller (figur 3A).
MERK: Epitelceller vokser innen 7-10 dager etter plating encellede populasjoner. - Utvid epitelkoloniene og subkulturer cellene.
- Aspirer mediet og vask bunnen av kulturplaten en gang med 3 ml keratinocytt SFM.
- Tilsett 2 ml celledissosiasjonsprotease og inkuber i en fuktet atmosfære på 5% CO2 ved 37 °C i 3 minutter.
MERK: Gjenta trinn 2.15.2 hvis celleavløsning ikke er effektiv. - Tilsett 2 ml keratinocyttmedium til kulturplaten og overfør innholdet i et 15 ml konisk rør.
MERK: Det er ikke nødvendig å legge til mer keratinocyttmedium hvis trinn 2.15.2 gjentas. - Sentrifuger det koniske røret på 15 ml ved 288 × g i 3 minutter ved 4 °C.
- Fjern supernatanten og vask cellepellet to ganger med 3 ml keratinocytt SFM.
- Tallerken cellene i en 100 mm kulturrett ved hjelp av keratinocytt SFM (sluttvolum på 10 ml per 100 mm tallerken).
- Forbered og lagre cellelagre i en flytende nitrogentank.
- Høst celler som beskrevet i trinn 2.15.1-2.15.5.
- Fordel cellene i kryolegemer i 1 ml frysemedium (80% keratinocytt SFM, 10% dimetylsulfoksid, 10% FBS).
- Legg hetteglassene i en frysebeholder og oppbevar dem ved -80 °C i 24 timer.
- Overfør hetteglassene fra dypfryseren til en flytende nitrogentank.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
DF-høsting
Kirurgi ble utført av en oral maxillofacial kirurg. Menneskeavledede materialer, inkludert tannfragment, gingivalvev og DF, ble samlet inn av en kirurg (figur 1A). DF kan være festet til tannfragmentet. En oral maxillofacial kirurg vil kunne identifisere DF. Samarbeid og kommunikasjon med kirurgen er nødvendig for vevsinnsamling. DF er et uregelmessig formet membranlignende vev. Gingival vev har en keratinisert overflate og kan skilles fra DF. Massevev ligger i massekammeret og er sjelden skilt fra tennene under operasjonen. DF ble lagret i DPBS med 3 % penicillin-streptomycin ved 4 °C før bruk (figur 1B).
Mekanisk behandling av DF
Vevsrester og blod ble fjernet ved å vaske DF med DPBS. Tre koniske rør ble tilberedt med vaskeløsning. Etter vask ble DF overført til en 60 mm eller 100 mm kulturrett (figur 2A). DF skal hakkes med saks til vevet har et pulpy eller grøtaktig utseende (figur 2B, C).
Fremveksten av epitelpopulasjon
Etter å ha plating heterogene cellepopulasjoner, fløt mange celler og små rusk i kulturmediet. Antall flytende celler ble gradvis redusert med etterfølgende middels endringer. Forsinket middels endring kan føre til et uklart kulturmiljø. I begynnelsen vises forskjellige celletyper nederst på kulturretten, men forsvinner når de opprettholdes i keratinocytt SFM. Celler med epitelmorfologi vises innen 7-10 dager etter plating encellede populasjoner (figur 3A). Antallet brosteinformede celler varierer fra 1 til 10 på tidspunktet for fremveksten av epitelceller, som ekspanderer til kolonier over tid (figur 3B).
Mincing-prosedyren ble gjentatt for å øke DF-kontaktområdet med 0,05% trypsin-EDTA for å fremme celledissosiasjon. Flere enkeltceller ble høstet fra DF-masse enn intakt DF. Fastheten til DF-massen indikerte sannsynligheten for suksess for isolering av epitelceller. Daglige middels endringer forhindret keratinocytten SFM fra å bli uklar, noe som er viktig for epitelcelleoverlevelse.
Figur 1: Menneskeavledede materialer. (A) Human-avledede materialer ble samlet inn av en oral maxillofacial kirurg. Den gule pilen angir DF. Svarte piler indikerer tannfragmentet og tannmontert bløtvev. (B) DF ble lagret i PBS supplert med 3% penicillin-streptomycin ved 4 °C. Isolasjonsprosedyrer ble utført innen 24 timer etter innsamling. Forkortelser: DF = tannsekk; PBS = fosfatbufret saltvann. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Behandling av tannsekkene. (A) DF ble overført til en 60 mm kulturrett etter vask med DPBS tre ganger. (B) DF ble hakket med vev saks. (C) Den hakkede DF hadde et pulpy eller grøtaktig utseende. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Fremveksten av epitelceller. (A) Celler med epitelmorfologi vises innen 7-10 dager etter plating encellede populasjoner. (B) Ex vivo-utvidelse av DF-avledede epitelceller ved subkultur. Skalastenger = 100 μm. Forkortelse: DF = tannsekk. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokollen inneholder kritiske trinn. Høsting av encellede populasjoner er avgjørende for vellykket isolasjon av epitelceller fra DF. Vi søkte å isolere epitelceller fra DF basert på vår hypotese om at det er flere epitelceller i DF. Mincing prosedyren forbedrer løsrivelse og frigjøring av celler fra DF. Mincing prosedyren ble forbedret, og mincing gjentatt til DF dukket opp pulpy for å lette utgivelsen av enkeltceller. Å oppnå maksimalt antall enkeltceller øker sannsynligheten for fremveksten av epitelpopulasjonen. Forurensning oppstår ofte under isolering av epitelceller fra DF. Bruken av 40 μm siler minimerer inkludering av vevsrester i encellede populasjoner, da vevsrester kan passere gjennom 70 μm siler og hemme epitelcellekolonisering.
Epitelceller ser ut til å være mer sårbare for visse miljøer enn mesenchymale celler, og den daglige endringen av kulturmediet ga også et rent miljø for fremveksten av epitelpopulasjonen. Å miste celler på grunn av hyppig middels endring kan være en begrensning i denne protokollen. Imidlertid ble daglig endring av mediet utført etter feilsøking for denne protokollen, og følgelig oppstod epitelceller og utvidet. Forsinkelse av medieendringen kan påvirke kulturene. Siden cellepellet etter sentrifugering er nesten usynlig, øker den smale spissen av et 15 ml konisk rør den enkle supernatante fjerningen uten å miste cellepellet. Derfor foreslår denne protokollen å overføre innholdet i det koniske røret på 50 ml til et 15 ml konisk rør.
DF gir et større volum vev og flere enkeltceller enn PDL. Derfor kan DF brukes i stedet for PDL som vevskilde for isolering av humane tannepitelceller. Utvelgelse og hemming av celletyper i DF kan gjøres ganske enkelt gjennom et selektivt kulturmedium. SFM induserer epitelvekst, mens serumholdig medium velger for mesenchymale celler. Denne metodikken gir enkel tilgjengelighet til humane tannepitelceller. Morsczek og kolleger har tidligere isolert DF-avledede mesenchymale forløpere. Denne studien adskiller seg fra deres ved valg av epitelpopulasjoner og hemming av mesenchymale celler.
Den regulatoriske rollen til tannepiteleceller under tanndannelse er av stor interesse for tannforskning. Å studere epitel-mesenchymale interaksjoner under tannutvikling kan foreslå ledetråder for oppløsning av kliniske problemer13. Vevregenerering ved å kombinere epitel- og mesenchymale komponenter har blitt forsøkt14. Dental epitelcelle-avledede faktorer, for eksempel en emalje matrise derivat, har blitt evaluert som terapeutiske mål med sikte på periodontal regenerering, pulp-dentin kompleks regenerering, og periodontal reattachment2,15. Kombinasjonen av regenereringsfaktorer, inkludert stamceller, epitel-mesenchymale celleplater, celleavledede faktorer og biomaterialer, kan generere biotenner i tilfelle tanntap eller agenese16. Tannagenese-assosierte gener, som PAX9, MSX1, AXIN2, EDA, EDAR og WNT10A gener, er potensielle kandidat viktige regulatoriske gener for epitelial-mesenchymal interaksjoner17. Videre kan neste generasjons sekvenseringsmetode-avledede data fra tannagenese-assosierte studier på samme måte foreslå putative nye målgener som regulerer molekylær kontroll under dental epitel-mesenchymale interaksjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer at de ikke har noen interessekonflikter.
Acknowledgments
Denne studien ble støttet av tilskudd fra National Research Foundation of Korea (NRF) finansiert av den koreanske regjeringen (NRF-2017R1C1B2008406 og NRF-2021R1F1A1064350). Dr. Hee-Yeon Bae sørget for DF for primærkultur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur 2-Propanol | EMD millipore Co., MA, USA | 1096341011 | 1 L |
| 0.05% trypsin-EDTA | Gibco, Grand island, NY, USA | 25300054 | 100 mL |
| 40 μm cell strainer | Falcon, NC, USA | 352340 | |
| Cell culture dish (100 x 20 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 172958 | Discontinued |
| Cell culture dish (60 x 15 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 150326 | |
| Collagenase type 1 | Gibco, Grand island, NY, USA | 17100017 | 1 g |
| Combi-514R / Refrigerated large capacity centrifuge | Hanil science industrial Co., LTD., Daejeon, South Korea | CB-514R | |
| Conical tube | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 50015 50050 |
15 mL 50 mL |
| Cryogenic vial | Corning Inc., NY, US | 430488 | 2 mL |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich, Missouri, US | D2650-100ml | 100 mL |
| Dispase | Gibco, Grand island, NY, USA | 17105041 | 1 g |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Welgene Inc., Gyengsangbuk-do, South Korea | LB 001-02 | 500 mL |
| Fetal bovine serum | Gibco, Grand island, NY, USA | 16000044 | 500 mL |
| Heraeus BB 15 / CO2 incubator | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 51023121 | |
| Keratinocyte serum-free medium | Gibco, Grand island, NY, USA | 10724-011 | 500 mL |
| MVE CryoSystem 2000 | MVE Biological Solutions Co., GA, USA | CryoSystem 2000 | |
| Nalgene Mr. Frosty Freezing Container | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 5100-0001 | for 1.2-2 mL CryoVials |
| Olympus CKX41 / Inverted cell culture microscope | Olympus Life Science, Waltham, Massachusetts |
22-00723-01 | Discontinued |
| Penicillin-Streptomycin Strep | Gibco, Grand island, NY, USA | 15140122 | 100 mL (10,000 U/mL) |
| Pipet aid XP | Drummond scientific Co., PA, USA | HDR-4-000-201 | |
| Pipetman Classic P1000 | Gilson, Villiers le Bel, France | F123602 | 100-1000 µL |
| Refrigerant | Nihon freezer Co. Ltd., Tokyo, Japan | CLN 540U | ~-80 °C / Discontinued |
| Serological pipet | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 91010 | 10ml |
| TrypLE Express Enzyme (1x), phenol red | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 12605010 | cell dissociation protease |
References
- Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; How the embryo makes teeth. Nature Reviews Genetics. 5 (7), 499-508 (2004).
- Choung, H. W., et al. The effect of CPNE7 on periodontal regeneration. Connective Tissue Research. 60 (5), 419-430 (2019).
- Li, X., et al. Development of immortalized Hertwig's epithelial root sheath cell lines for cementum and dentin regeneration. Stem Cell Research and Therapy. 10 (1), 3 (2019).
- Huang, X. F., Bringas, P., Slavkin, H. C., Chai, Y. Fate of HERS during tooth root development. Developmental Biology. 334 (1), 22-30 (2009).
- Farea, M., et al. Isolation and enhancement of a homogenous in vitro human Hertwig's epithelial root sheath cell population. International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11157-11170 (2013).
- Jung, H. S., et al. Directing the differentiation of human dental follicle cells into cementoblasts and/or osteoblasts by a combination of HERS and pulp cells. Journal of Molecular Histology. 42 (3), 227-235 (2011).
- Fang, J., Tang, L., Liu, X. H., Wen, L. Y., Jin, Y. Changes of the unique odontogenic properties of rat apical bud cells under the developing apical complex microenvironment. International Journal of Oral Science. 1 (1), 26-33 (2009).
- Oh, J. E., Yi, J. K. Isolation and characterization of dental follicle-derived Hertwig's epithelial root sheath cells. Clinical Oral Investigations. 25 (4), 1787-1796 (2021).
- Oh, J. E., Kim, R. H., Shin, K. H., Park, N. H., Kang, M. K. Delta Np63 alpha protein triggers epithelial-mesenchymal transition and confers stem cell properties in normal human keratinocytes. Journal of Biological Chemistry. 286 (44), 38757-38767 (2011).
- Morsczeck, C., et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).
- Nam, H., et al. Expression profile of the stem cell markers in human Hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells. Molecular and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).
- Lee, J. H., et al. Dental follicle cells and cementoblasts induce apoptosis of ameloblast-lineage and Hertwig's epithelial root sheath/epithelial rests of Malassez cells through the Fas-Fas ligand pathway. European Journal of Oral Sciences. 120 (1), 29-37 (2012).
- Wan, A. C. A. Recapitulating cell-cell Interactions for organoid construction - are biomaterials dispensable. Trends in Biotechnology. 34 (9), 711-721 (2016).
- Guo, Y., et al. Are Hertwig's epithelial root sheath cells necessary for periodontal formation by dental follicle cells. Archives of Oral Biology. 94, 1-9 (2018).
- Sugaya, T., Tomita, M., Motoki, Y., Miyaji, H., Kawamami, M. Influence of enamel matrix derivative on healing of root surfaces after bonding treatment and intentional replantation of vertically fractured roots. Dental Traumatology. 32 (5), 397-401 (2016).
- Fong, H. K., Foster, B. L., Popowics, T. E., Somerman, M. J. The crowning achievement: getting to the root of the problem. Journal of Dental Education. 69 (5), 555-570 (2005).
- Bonczek, O., et al. Tooth agenesis: What do we know and is there a connection to cancer. Clinical Genetics. 99 (4), 493-502 (2021).
