Murin Deri nakli

Summary

Allojenik deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için bir standart model. Bu video-makale BALB/c--> C57BL / 6 deri nakli yapmak dahil her adım görsel bir öğretici sağlar.

Abstract

Biri olarak en sıkı ve en teknik açıdan zor modelleri, deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için standart bir yöntem. Bu video makalenin amacı, fare modeli kullanarak deri nakli adım adım görsel gösteri ile izleyici sağlamaktır. 2) nakli için alıcı hazırlanıyor; 3) deri nakli, 4) bandaj kaldırılması ve greft reddi izlenmesi; 5) yararlı ipuçları 1) hasat donör cilt: 5 ana bileşenleri protokol ayrılmıştır. Bir kez usta, prosedür kendisi gerçekleştirmek için <10 dakika sürer.

Protocol

Deney başlamadan önce:

• IACUC onayını alın
• Cerrahi aletler ve Q-ipuçları sterilize

I. Hasat Donör Doku

1. Donör fare Euthanize (kurumun SOP ile uygun)
2. Islak saç geri alkol ile kulak baz
3. Hasat bağış deri üssünde kulak keserek
4. Buz üzerinde plaka koyun doku
5. Split kulak: sıçan diş forseps ile kulağının dibinde doku tutam ventral ve dorsal taraf; nazikçe doku ayrı çekin; şamandıra dorsal doku, iç yüzeyi aşağı, PBS içinde buz üzerinde; kollajenöz ventral flep atın

II. Alıcı nakli için hazırlayın

1. Anestezisi fare Onaylanan prosedür kullanarak
2. Post-op ağrı kesici (yani 0.05-0.1 mg / g Bupernex ip) analjezik Yönetici
3. Lateral pozisyonda yerleştirin fare
4. Hayvan yeterli sedasyon sağlamak için ayak tutam yapın
5. Islak saç ve alkol ile toraks tıraş
6. Temiz alan alkollü bez ile silin

III. Deri Nakli

1. Sıçan dişli forseps ile çadır cilt ve forseps aşağıdaki ~ 0.25-0.5 cm kesme: ~ 1 cm'lik kesi olun
2. PBS bağış deri grefti yatak tepesinde yer (greft yatak karşı karşıya kulak cilt iç yüzeyi ile birlikte) çıkarın ve steril Q-tip aşırı PBS kaldırmak
3. Bu nakli (altında greft kenarları kıvrılmış ve greft alıcının gövde cilde akşamdan değildir olduğunu emin olun) greft yatak içinde kesin bir dille yalanlar o kadar dikkatlice uzakta fazla bağış deri Döşeme
4. Steril bandaj sarın alıcı (deri grefti üzerine yerleştirilen yapışkanlı olmayan gazlı segment)
5. Bu bandaj (hayvan nefes değerlendirmek) çok sıkı değildir sağlanması ve bu silah serbestçe cep
6. Güvenli bandaj tek bir 2-0 ipek sütür ile
7. Temiz bir kafes yerleştirin hayvan (hayvan kadar ısıtma lambası altında yeterince anestezi kurtarıldı)
8. Monitör alıcı sıkıntı belirtileri ve ağrı kesici için gerekli gibi analjezik yönetmek için 1-2/day

IV. Bandaj Kaldırma (6-7 gün transplantasyon sonrası)

1. Anestezisi fare Onaylanan prosedür kullanarak
2. Ipek sütür kesin ve kaldırma
3. Bandaj (greft bozmaya emin) ile dikkatlice kesilerek künt sonunda makas, kullanma ve hafifçe kaldırın
4. Temiz kafes fare dön
5. Kabuklanma ya da daralma belirtileri için bandaj çıkarıldıktan sonra greft ~ 8 saat kontrol edin. Varsa, greft vascularize başarısız olmuş ve teknik bir başarısızlık olarak kabul edilmelidir.
6. Reddedilme işaretleri (genellikle ~% 80 nekroz donör doku olarak tanımlanan) günlük Monitör
7. Allojenik deri nakli genellikle d8-12 post-op arasında reddedecektir

V. Yardımcı İpuçları

1. Kulak tabanına yakın donör doku Hasat: 1) greft boyutu en üst düzeye çıkarmak, ve 2) bölme kolaylaştırmak dengesiz bir ventral çıkıntı
2. Her zaman alıcı tıraş için yeni bir jilet kullanın
3. Analjezik ip verilecek ise, (greft kesintiye şansını en aza indirmek) post-op kullanımını en aza indirmek için prosedür nakli için önce yönetmek
4. Mümkünse, bandaj uygulamadan önce eldiven çıkarın. Eldiven bandaj sopa ve komplike uygulama eğilimindedir
5. Bandaj sonunda tek bir sütür yerleştirilmesi erken kaldırılması en aza indirecektir.
6. Sıkı izin ve dikiş yerleştirerek ÖNCE nefes değerlendirmek bandaj sarın. Bandaj çok sıkı ise, hayvan solunum durur. Bandaj çok gevşek ise, hayvan kaldıracak.

Discussion

Bu video-makale gösterdiği gibi, deri nakli modeli allojenik T hücre yanıtları izlenmesi için hızlı ve kolay bir yöntemdir. Allojenik deri nakli geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir ve tahlil için immünosupresif ajanlar ve tolerans protokolleri yanı sıra araştırmak için çeşitli engelleme antikorların biyolojik etkileri çeşitli verimlilik kullanılmıştır.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Micro-dissecting forceps (curved)	Sigma-Aldrich	F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight)	Fine Science Tools	11053-10	n=2
Strabismus scissors (blunt end)	Fine Science Tools	14074-11
Iris forceps (curved)	Fine Science Tools	11065-07
Spring scissors (angled)	Fine Science Tools	15006-09
Halsey micro needle holder	Fine Science Tools	12500-12
10 cm plates	Corning	430167
PBS	Cellgro	21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride)	Reckitt Benckiser	517201
Insulin syringes (29 Ga)	Monoject	8881 600145
Q-tips	Solon Manufacturing Company	362
Single edge razor blades (#9)	Smith & Nephew Inc.	67-0238
Silk suture (2-0; PS-2)	Ethicon Inc.	583H