Summary
Allogene Hauttransplantation ist ein Standard-Modell zum Testen Host T-Zell-Antworten auf MHC-disparate Spender-Antigene. Dieses Video-Artikel bietet eine visuelle Anleitung für jeden Schritt bei der Durchführung einer BALB/c--> C57BL / 6 Hauttransplantat beteiligt.
Abstract
Als einer der härtesten und am wenigsten technisch anspruchsvollen Modellen ist Hauttransplantation eine standardisierte Methode, um Test-Host T-Zell-Antworten auf MHC-disparate Spender-Antigene. Das Ziel dieses Video-Artikels ist es, den Betrachter mit einer Schritt-für-Schritt-visuelle Demonstration der Hauttransplantation am Mausmodell liefern. ; 2) vorzubereiten Empfänger für die Transplantation, 3) Hauttransplantat; 4) Bandage entfernt und Überwachung Abstoßung des Transplantats; 5) hilfreiche Hinweise 1) Ernte Spenderhaut: Das Protokoll ist in 5 Hauptkomponenten unterteilt. Sobald beherrschen, sollte das Verfahren selbst zu nehmen <10 min zu erfüllen.
Protocol
Vor Beginn des Experiments:
- Erhalten IACUC Genehmigung
- Sterilisieren Instrumente und Q-Tipps
I. Ernte Spendergewebe
- Euthanize Spender Maus (in Übereinstimmung mit Institution SOP)
- Nasses Haar zurück von der Basis des Ohres mit Alkohol
- Ernte Spenderhaut indem Ohr ab an der Basis
- Legen Gewebe in der Platte auf Eis
- Split Ohr: pinch ventralen und dorsalen Seiten des Gewebes an der Basis der Ohren mit Ratten-Zahn-Zange; vorsichtig auseinander ziehen Gewebe; float dorsal Gewebe, innere Oberfläche nach unten, in PBS auf Eis; verwerfen kollagenen ventralen Klappe
II. Bereiten Empfänger für Transplant
- Anesthetize Maus mit zugelassenen Verfahren
- Verwalten für post-op Schmerzlinderung (dh 0.05-0.1 mg / g Bupernex ip) analgetische
- Bewegen Sie die Maus in Seitenlage
- Führen Zeh kneifen, um zu gewährleisten, Tier ausreichend sediert
- Nasses Haar mit Alkohol und rasieren Thorax
- Wischen Sie den Bereich zu säubern mit Alkoholtupfer
III. Hauttransplantat
- Machen Sie ~ 1 cm Schnitt: Zelthaut mit Ratten-Zahn-Pinzette und schneiden ~ 0,25-0,5 cm unterhalb Zange
- Entfernen Spenderhaut von PBS, Platz oben auf graft Bett (mit inneren Oberfläche der Ohren Haut nach graft Bett), und entfernen Sie überschüssiges PBS mit einem sterilen Wattestäbchen
- Sorgfältig entfernt trim überschüssiger Haut, so dass Spender Transplantation liegt flach im Transplantat Bett (um sicherzustellen, dass Transplantat Kanten nicht unter eingerollt und das Transplantat nicht Kater auf Empfängers Stamm Haut)
- Wrap Empfänger in sterilen Verband (mit der nicht klebenden Gaze-Segment über die Hauttransplantation platziert)
- Stellen Sie sicher, dass Bandage ist nicht zu eng (zu beurteilen Tieres Atmung) und dass die Arme frei beweglich sind
- Sichere Bandage mit einem 2-0 Seidenfaden
- Tier in den Käfig sauber (unter Wärmelampe bis Tier hat genügend aus der Narkose erholt)
- Monitor-Empfänger 1-2/day für Anzeichen von Leiden und verwalten analgetische als zur Schmerzlinderung erforderlich
IV. Bandage Removal (6-7 Tage nach Transplantation)
- Anesthetize Maus mit zugelassenen Verfahren
- Cut und entfernen Seidennaht
- Mit stumpfen Ende einer Schere, vorsichtig durch Verband (achten Sie darauf nicht zu stören graft) geschnitten und schonend entfernen
- Zurück Maus zu reinigen Käfig
- Überprüfen Sie Transplantat ~ 8 Stunden nach dem Verband Entfernung auf Anzeichen von Schorfbildung oder Kontraktion. Falls vorhanden, kann Transplantat nicht vaskularisieren haben und sollte als ein technischer Defekt sein.
- Monitor täglich auf Anzeichen von Ablehnung (in der Regel als ~ 80% Nekrose des Spendergewebe definiert)
- Allogene Hauttransplantationen wird in der Regel zwischen d8-12 post-op ablehnen
V. Hilfreiche Tipps
- Harvesting Spendergewebe der Nähe der Basis des Ohres werden: 1) zu maximieren Transplantat Größe und 2) eine ungleichmäßige ventralen Überhang, dass die Aufspaltung erleichtern
- Verwenden Sie immer eine neue Rasierklinge zum Rasieren Empfänger
- Wenn Schmerzmittel gegeben ip werden, bevor verwalten, um den Vorgang Transplantation post-op Handhabung zu minimieren (Minimierung Chance Störung des Transplantats)
- Wenn möglich, entfernen Handschuhe vor dem Auftragen der Verband. Handschuhe neigen dazu, den Verband kleben und erschweren Anwendung
- Platzieren einer einzigen Naht an den Verband Ende minimiert vorzeitige Entfernung
- Wrap Bandage so fest wie erlaubt und bewerten Atmung Bevor Naht. Wenn Verband zu eng ist, wird Tier den Atem anhalten. Wenn Verband ist zu locker, wird Tieres zu entfernen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Wie in diesem Video-Beitrag gezeigt hat, ist die Hauttransplantationsmodell eine schnelle und einfache Methode zur Überwachung von allogenen T-Zell-Antworten. Allogene Hauttransplantation hat eine breite Palette von Anwendungen und hat Assay wurde die Effizienz einer Vielzahl von Immunsuppressiva und Toleranzinduktion Protokollen, sowie zur Untersuchung der biologischen Wirkungen der verschiedenen blockierende Antikörper eingesetzt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
NIH Immunologie Training Grant T32 AI 60573 (KRG) und NIH GM 41514 (MDC)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-dissecting forceps (curved) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) | Fine Science Tools | 11053-10 | n=2 |
| Strabismus scissors (blunt end) | Fine Science Tools | 14074-11 | |
| Iris forceps (curved) | Fine Science Tools | 11065-07 | |
| Spring scissors (angled) | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Halsey micro needle holder | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| 10 cm plates | Corning | 430167 | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser | 517201 | |
| Insulin syringes (29 Ga) | Monoject | 8881 600145 | |
| Q-tips | Solon Manufacturing Company | 362 | |
| Single edge razor blades (#9) | Smith & Nephew Inc. | 67-0238 | |
| Silk suture (2-0; PS-2) | Ethicon Inc. | 583H |
