Summary
خيفي زرع الجلد هو النموذج القياسي لفحص استجابات المضيف لمستضدات الخلايا التائية المانحة MHC - متباينة. هذا الفيديو مادة يوفر البرنامج التعليمي في كل خطوة البصرية المشاركة في تنفيذ عملية زرع> BALB/c-- C57BL / 6 الجلد.
Abstract
باعتبارها واحدة من النماذج الأكثر صرامة وأقل تحديا من الناحية التقنية ، وزرع الجلد هو طريقة قياسية لفحص استجابات المضيف لمستضدات الخلايا التائية المانحة MHC - متباينة. الهدف من هذه المادة عن طريق الفيديو هو تقديم المشاهد مع مظاهرة خطوة بخطوة البصرية زرع الجلد باستخدام نموذج الفأر. يتم تقسيم البروتوكول حيز 5 عناصر رئيسية هي : 1) حصاد الجلد المانحة ؛ 2) إعداد المتلقي للزرع ؛ 3) زرع الجلد ؛ 4) إزالة الضماد ورصد رفض الكسب غير المشروع ؛ 5) تلميحات مفيدة. يتقن مرة واحدة ، يجب أن تتخذ الإجراء نفسه <10 دقيقة للتنفيذ.
Protocol
قبل الشروع في التجربة :
- الحصول على موافقة IACUC
- تعقيم الأدوات الجراحية وQ - نصائح
أولا الأنسجة المانحة الحصاد
- الموت ببطء الماوس المانحة (وفقا للمؤسسة SOP)
- الرطب يعود الشعر من قاعدة الأذن مع الكحول
- حصاد الجلد المانحة بقطع الأذن في قاعدة قبالة
- نسيج اللوحة في المكان على الجليد
- الأذن تقسيم : قرصة الجانبين بطني وظهري من الأنسجة في قاعدة الأذن مع الفئران الأسنان ملقط ؛ برفق بعيدا الأنسجة ؛ الأنسجة تعويم الظهرية ، أسفل السطح الداخلي ، في برنامج تلفزيوني على الجليد ؛ تجاهل رفرف بطني كولاجيني
II. إعداد المتلقي للزراعة
- تخدير باستخدام الماوس الداخلي المعتمدة
- إدارة مسكن لتخفيف الألم بعد العملية (أي الملكية الفكرية ،05-0،1 Bupernex مغ / ز)
- الماوس مكان في موقف الوحشي
- أداء قرصة إصبع لضمان مخدرا الحيوان بما فيه الكفاية
- الشعر الرطب مع الكحول ويحلق الصدر
- مسح منطقة نظيفة مع مسحة الكحول
III. زرع الجلد
- ~ جعل شق الطول 1 : الجلد خيمة مع الجرذان وخفض سن ملقط ~ 0،25-0،5 سم تحت ملقط
- إزالة الجلد المانحة من برنامج تلفزيوني ، ومكان فوق السرير الكسب غير المشروع (مع السطح الداخلي للجلد الأذن التي تواجه السرير الكسب غير المشروع) ، وإزالة الزائدة مع برنامج تلفزيوني العقيمة Q - غيض
- تقليم بعناية بعيدا الجلد الزائد المانحة بحيث زرع تقع تماما داخل السرير الكسب غير المشروع (مع التأكد من أن ليست كرة لولبية من حواف الكسب غير المشروع في إطار الكسب غير المشروع ، وأنه لا مخلفات الجلد على الجذع المستلم)
- لف ضمادة معقمة في المتلقي (مع قطعة شاش غير لاصقة وضعت على مدى الكسب غير المشروع الجلد)
- تأكد من أن عصابة ليست ضيقة جدا (تقييم التنفس الحيوان) والتي أصبحت قادرة على الحركة بحرية الأسلحة
- آمنة مع ضمادة خياطة واحدة 2-0 الحرير
- (تعافى تحت مصباح التدفئة حتى الحيوان بما فيه الكفاية من التخدير) حيوان في قفص مكان نظيف
- رصد المتلقي 1-2/day عن علامات الضيق وإدارة مسكن حسب الحاجة لتخفيف الألم
رابعا. إزالة الضماد (6-7 أيام بعد الزرع)
- تخدير باستخدام الماوس الداخلي المعتمدة
- قطع وإزالة خياطة الحرير
- باستخدام مقص نهاية حادة ، وقطع بعناية من خلال عصابة (التأكد من عدم تعطيل الكسب غير المشروع) ، وإزالة بلطف
- عودة الماوس لتنظيف القفص
- الاختيار طعم ~ 8 ساعات بعد إزالة الضماد عن علامات scabbing أو الانكماش. إذا كان موجودا ، قد فشلت في الكسب غير المشروع يوعي وينبغي النظر فيها عطل فني.
- رصد يوميا بحثا عن علامات على الرفض (التي تعرف عادة بأنها نخر ~ 80 ٪ من أنسجة المانحة)
- وزرع الجلد خيفي ترفض عادة بين 12 - D8 - مرجع آخر
خامسا تلميحات مفيدة
- حصاد الأنسجة المانحة على مقربة من قاعدة للأذن : 1) زيادة حجم الكسب غير المشروع ، و 2) توفير عبء متفاوتة البطني الذي سيسهل تقسيم
- دائما استخدام شفرة الحلاقة الجديدة للحلاقة المستلم
- إذا كان المسكن هو أن تعطى للملكية الفكرية وإدارتها قبل إجراء عملية زرع للحد من التعامل مع مرحلة ما بعد المرجع (تقليل فرصة لتعطيل الكسب غير المشروع)
- إذا كان ذلك ممكنا ، إزالة القفازات قبل تطبيق ضمادة. قفازات تميل إلى أن العصا وتعقيد تطبيق ضمادة
- وسوف يضع خياطة واحدة في نهاية عصابة سابق لأوانه تقليل إزالة
- ضمادة التفاف كما هو مسموح به ضيق في التنفس وتقييم قبل وضع خياطة. إذا ضمادة ضيق جدا ، وسوف الحيوانات توقف التنفس. إذا ضمادة واهية جدا ، وسوف الحيوانات إزالته.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
كما هو موضح في هذه المقالة عن طريق الفيديو ، ونموذج زرع الجلد هو طريقة سريعة وسهلة لرصد ردود خيفي الخلايا التائية. خيفي زرع الجلد لديها مجموعة واسعة من التطبيقات وكانت تستخدم لفحص كفاءة مجموعة متنوعة من العوامل المثبطة للمناعة والبروتوكولات تحريض التسامح ، فضلا عن التحقيق في الآثار البيولوجية المختلفة من الأجسام المضادة حظر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
NIH المناعة التدريب المنحة 60573 T32 منظمة العفو الدولية (كردستان) ، والمعاهد الوطنية للصحة منح جنرال موتورز 41514 (MDC)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-dissecting forceps (curved) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) | Fine Science Tools | 11053-10 | n=2 |
| Strabismus scissors (blunt end) | Fine Science Tools | 14074-11 | |
| Iris forceps (curved) | Fine Science Tools | 11065-07 | |
| Spring scissors (angled) | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Halsey micro needle holder | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| 10 cm plates | Corning | 430167 | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser | 517201 | |
| Insulin syringes (29 Ga) | Monoject | 8881 600145 | |
| Q-tips | Solon Manufacturing Company | 362 | |
| Single edge razor blades (#9) | Smith & Nephew Inc. | 67-0238 | |
| Silk suture (2-0; PS-2) | Ethicon Inc. | 583H |
