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Biology

Transplante de pele murinos

doi: 10.3791/634 Published: January 16, 2008

Summary

Transplante alogênico de pele é um modelo padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. Este vídeo-artigo fornece um tutorial visual de cada etapa envolvida na realização de um transplante de BALB/c--> C57BL / 6 da pele.

Abstract

Como um dos modelos mais rigorosos e menos tecnicamente desafiador, transplante cutâneo é um método padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. O objetivo deste vídeo-artigo é proporcionar ao espectador com uma demonstração passo a passo-visual do transplante de pele usando o modelo de mouse. O protocolo é dividido em cinco componentes principais: 1) a colheita da pele do doador; 2) preparar receptor para transplante; 3) transplante de pele; 4) remoção de curativo e rejeição do enxerto de monitoramento; 5) dicas úteis. Uma vez proficiente, o procedimento em si deve ter <10 minutos para executar.

Protocol

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Antes do início do experimento:

  • Obter a aprovação IACUC
  • Esterilizar instrumentos cirúrgicos e Q-dicas

I. tecido do doador Colheita

  1. Euthanize camundongo doador (de acordo com SOP instituição)
  2. Trás os cabelos molhados da base da orelha com álcool
  3. Colheita da pele de doadores cortando orelha fora na base
  4. Tecido lugar na placa sobre o gelo
  5. Ouvido Split: pinch lados ventral e dorsal do tecido na base da orelha com dente-de-rato fórceps; puxe suavemente o tecido, tecido de flutuação dorsal, superfície interna para baixo, na PBS sobre o gelo; descartar flap ventral colágenas

II. Prepare Recipiente para Transplante

  1. Rato anestesiar usando procedimento aprovado
  2. Administrar analgésico para pós-operatório o alívio da dor (ou seja, 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex)
  3. Rato lugar na posição lateral
  4. Executar pitada dedo para garantir animal é suficientemente sedado
  5. Cabelos molhados com álcool e shave tórax
  6. Limpe área limpa com algodão embebido em álcool

III. Transplante de pele

  1. ~ Fazer incisão de 1 cm: pele tenda com ratos dente-forceps e cortar ~ 0,25-0,5 cm abaixo forceps
  2. Remover a pele de doadores de PBS, coloque em cima de cama de enxerto (com a superfície interna da pele da orelha enfrentando leito do enxerto) e remova o excesso com PBS estéril Q-Tip
  3. Cuidadosamente aparar a pele do doador, para que o excesso de transplante está terminantemente dentro leito do enxerto (certificando-se que as bordas do enxerto não são enroladas por baixo e que o enxerto não ressaca na pele destinatário tronco)
  4. Enrole destinatário no curativo estéril (com o segmento de gaze não-adesivo colocado sobre o enxerto de pele)
  5. Garantir que bandagem não está muito apertado (avaliar a respiração animal) e que as armas são livremente móveis
  6. Bandage seguro com um único fio de seda 2-0
  7. Coloque o animal em gaiola limpa (com lâmpada de aquecimento até animal tem suficientemente recuperado da anestesia)
  8. Monitorar destinatário 1-2/day para sinais de sofrimento e administrar analgésicos, conforme necessário para o alívio da dor

IV. Remoção de bandagem (6-7 dias após o transplante)

  1. Rato anestesiar usando procedimento aprovado
  2. Corte e retire fio de seda
  3. Com uma tesoura sem corte final, corte cuidadosamente através de bandagem (tomando cuidado para não perturbar enxerto) e remova cuidadosamente
  4. Retorno do mouse para gaiola limpa
  5. Verifique enxerto ~ 8 horas após a remoção do curativo de sinais de scabbing ou contração. Se presente, enxerto pode ter falhado a irrigar e deve ser considerada uma falha técnica.
  6. Monitorar diariamente para sinais de rejeição (normalmente definido como ~ 80% de necrose do tecido do doador)
  7. Transplantes alogênicos de pele geralmente rejeitam entre d8-12 pós-operatório

Dicas úteis V.

  1. A colheita de tecidos de doadores perto da base da orelha vai: 1) maximizar o tamanho do enxerto, e 2) fornecer uma saliência ventral desigual que irá facilitar a divisão
  2. Sempre use uma lâmina nova para barbear destinatário
  3. Se analgésico deve ser dado ip, administrar antes do transplante procedimento para minimizar pós-operatório de manipulação (minimizar chance de interromper o enxerto)
  4. Se possível, retire as luvas antes de aplicar o curativo. Luvas tendem a se ater a atadura e complicar a aplicação
  5. Colocação de uma sutura única no final bandage irá minimizar a remoção prematura
  6. Bandagem wrap tão apertado como permitido e avaliar a respiração ANTES de colocar sutura. Se bandage é muito apertado, animal vai parar de respirar. Se bandage é muito solta, animal irá removê-lo.

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Discussion

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Como demonstrado neste vídeo-artigo, o modelo de transplante de pele é um método rápido e fácil para monitorar respostas de células T alogênicas. Transplante alogênico de pele tem uma vasta gama de aplicações e tem sido utilizada para ensaio da eficiência de uma variedade de agentes imunossupressores e protocolos de indução de tolerância, bem como para investigar os efeitos biológicos de vários anticorpos de bloqueio.

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Acknowledgments

NIH Imunologia Training Grant T32 AI 60573 (KRG) e NIH conceder GM 41514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

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Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).More

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

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