Summary
覚醒した頭部固定ラットの機能的イメージングのための詳細な新しい手順が記載されている。
Abstract
前臨床および基礎科学研究で一般的に使用される麻酔薬は、脳の代謝、ニューロン、および血管機能に抑うつ影響を及ぼし、神経生理学的結果に悪影響を与える可能性があります。研究研究のために覚醒している動物を使用することは有利ですが、データ収集中のモーションアーチファクトを最小限に抑えるために動物を落ち着かせて静止させるという大きな課題をもたらします。より小さなサイズのげっ歯類(マウスなど)での覚醒イメージングは非常に一般的ですが、ラットはより大きく、より強く、イメージングに必要な長時間にわたって運動拘束と頭の固定に反対する傾向があるため、ラットでは乏しいままです。カスタマイズされた手縫いのスリング、3Dプリントされたヘッドインプラント、ヘッドキャップ、およびヘッドフレームを使用した、覚醒した頭部固定ラットのニューロイメージングの新しいモデルについて説明します。シングルウィスカー刺激の単一の試行の後に得られた結果は、誘発された機能的反応の強度の増加を示唆しています。覚醒した頭部固定ラットからの誘発機能応答の獲得は、麻酔をかけたラットからのそれよりも速く、信頼性が高く、再現性があり、繰り返しの縦断的研究に使用できます。
Introduction
基礎的、前臨床的、およびトランスレーショナルな科学的ニューロイメージング調査のほとんどは、麻酔をかけられた動物から取得されます1,2。麻酔薬は実験を容易にしますが、脳と体の代謝、血圧、心拍数に継続的に影響を与えます3。麻酔薬の種類と投与期間と投与経路は、再現性と翻訳障害に寄与する可能性のある交絡変数をデータ解釈に追加します4。覚醒、頭部固定ラットの神経画像研究の主なボトルネックは、準備およびデータ収集プロセス全体を通してラットを静止させ、落ち着かせ続ける必要があることです。小さな動きは不当なモーションアーティファクトを生成し、データの分析と解釈に悪影響を与える可能性があります。
カスタマイズされたスリング、3次元(3D)プリントされたヘッドインプラント、ヘッドキャップ、およびヘッドフレームを使用した、覚醒した頭部固定ラットからのニューロイメージングの新しいモデルが考案され、実験が容易になるいくつかの利点があります。3Dヘッドインプラントは軽量で、トランスフィックスに必要な頭蓋骨のごく一部をカバーしています。3Dプリントされたヘッドインプラントとキャップは、コンピューター支援設計(CAD)ソフトウェアを使用して設計されています。ウィスカ刺激、データ取得、データ分析、および麻酔をかけたラットからの結果のプロトコルは、以前の研究5、6、7で詳細に説明されています。
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Protocol
すべての手順は国立衛生研究所のガイドラインに準拠しており、カリフォルニア大学アーバイン校の動物管理および使用委員会によって承認されています。この研究では、7匹の雄と1匹の雌ラット(Sprague-Dawley、体重:185-350g)を使用しました。研究終了後、ラットを二酸化炭素の過剰摂取を用いて屠殺した。
1.さまざまなコンポーネントの設計
- ヘッドインプラントの設計:
- CADソフトウェア(図1C)を使用して頭部インプラントを作成し、体性感覚皮質を中心としたブレグマの後方および正中線に隣接する領域を画像化するように設計します。ヘッドインプラントが、イメージング領域から離れた頭蓋骨の0.9mmから1.9mmの領域をカバーしていることを確認してください。
- 3本のネジだけで、ヘッドインプラントをラットの頭蓋骨に固定します。画像化された半球の反対側の正中線の反対側に残るように、すべてのネジ穴を設計します。
- 図1Dに示すように、ヘッドインプラントの上部に内側からくり抜かれたバーを配置して、ワイヤーがヘッドキャップをヘッドインプラントに固定できるようにします。
- ヘッドキャップのデザイン:
- ヘッドキャップがイメージング領域を完全に覆い、 図1A、Bに示すように、あらゆる種類の外傷から保護していることを確認してください。ヘッドキャップに曲率を追加して、標準の濃縮ケージでの動物の日常の活動を妨げることなく、頭の形に合わせます。
- 図1Eに示すように、ヘッドインプラントの上部が収まるように、ヘッドキャップの内側をより広い長方形にカットします。この長方形に垂直に、他の2つの長方形領域を切り取り、ヘッドキャップをヘッドインプラントに固定します。
- 図1E-Gに示すように、ヘッドキャップをラットヘッドに固定するために、ヘッドインプラントの上部くぼんだバーに1本のワイヤーを通します。同じ方法で2番目のワイヤーを通過させます。
注意: これらのワイヤーは、ペンチまたは鉗子を使用して簡単に取り外すことができます。3D印刷ファイルは、補足 ファイル1 および 補足ファイル2として提供されます(ファイル形式:STL)。
- ヘッドフレームのデザイン:
- 1つのカット部分がヘッドインプラントの上部バーを通って移動できるようにヘッドフレームを設計し、クランプを使用して固定します。
- もう一方のカット部分を角度を付けて、ラットの頭を固定したままにして、反対側にイメージングに完全にアクセスできるようにするための追加の強度を提供します。この研究の目的のために、鋼板を錫の切り取りで切断してヘッドフレームを製造します(図1H、I)。
注:この部品は3Dプリントすることもできます。
2.最初のラットトレーニング
- ラットがケージ内のビバリウム環境に2〜3日間順応できるようにします。
- 静かな部屋でネズミの取り扱いを開始します。ケージを開き、実験者にラットの近くのケージの中に15〜20分間手を入れてもらい、ラットを慣れさせます。
- ラットが驚いたり、実験者の手から逃げたりして落ち着きを示したら、ラットをそっと持ち上げて取り扱います。スリングトレーニングの前に、毎日30〜45分間ラットを処理します。
3.スリングトレーニング
- ヘッドインプラントとヘッドキャップの外科的移植の前に、スリングで少なくとも2〜3日間ラットを訓練します。
- 図2Aに示すようにスリングセットアップを配置します。エタノールワイプを使用してスリングセットアップを清掃します。
注意: すべてのスリングは手縫いで、 図2A、Bに示すように、底面または両側にネット素材で作られています。 - スリングトレーニングでは、後足のピンチ反射がなくなるまで、誘導に4%、維持に1%のイソフルランを使用してラットに麻酔をかけます。
- イソフルラン麻酔下で、ラットを20 cm x 8 cm(長さx幅)の柔軟なプラスチックシートの上に置き、10 cm x 8 cmのプラスチックシートがベルクロの柔らかい部分で完全に覆われています。.
注:スリングトレーニングのためにラットを麻酔することはオプションのステップであり、主にストレスや不安を軽減するために使用されます。 - トレーニングの最初の2日間は、ラットをベビーソックス(サイズ0〜3か月)にぴったりと入れ、靴下の端に切開された小さな穴から頭を出します。
- 吸収パッドの小片を下半身に巻き付けて、ラットを乾いた状態に保ち、排泄物を収集します。
- ラットを通気性のある綿布(サイズ:25 cm x 25 cm)で包みます。ベルクロストリップが接着されているプラスチックシートの上にラットを置きます。
- さらに、幅0.5 cmのベルクロストリップを互いに3〜6 mmの距離で使用してラットをプラスチックシートに固定します。
- ラットをスリングに固定します。ガス麻酔を外します。ラットがスリングのガス麻酔から回復するのを待ちます。
- ラットが泡立て始めたら、10〜15分ごとに報酬として数滴の10%スクロース溶液を提供します。
- ラットをイメージング中に使用される感覚刺激(ここではウィスカー刺激、15〜25分ごと)をランダムに提示して、感覚刺激に慣れさせます。ランダムな間隔でひげを手動で刺激します。
- 図2Cに示すように、スリングでラットを1日目に1時間、2日目に2時間、3日目に3時間訓練します。
4.手術前の準備
- 3Dプリンタを使用してヘッドインプラントとヘッドキャップを印刷します(図1)。
- すべての手術器具とヘッドピース(インプラントとキャップ)をMetricide28殺菌剤に10時間浸して滅菌します。手術直前に滅菌水で道具をよくすすいでください。
- ラットを4%イソフルランにさらし、後足のピンチ反射がなくなるまで1%〜2%イソフルランに維持します。.この手術は、イソフルラン、ペントバルビタールナトリウム、ケタミン-キシラジンなど、さまざまな種類の麻酔下で行うことができます。
- アトロピン(0.05 mg / kg)を筋肉内に注射して粘液分泌を減らし、呼吸を助けます。
- ラットの頭を目の間から耳の後ろにかけて毛トリマーを使用して正中線を中心に5 mm剃ります。
- ラットの後肢に固定されたパルスオキシメータと心拍数モニタープローブを介して部分酸素飽和度と心拍数を監視します。
- ラットの頭とその周辺をベタジンと70%アルコールワイプを交互に3回拭きます。
- ラットを定位固定装置に固定する。
- ワセリンで潤滑された直腸プローブを挿入してラットの体温を測定し、麻酔薬投与後の低体温を避けるために加熱ブランケットのフィードバックシステムを通してそれを維持します。
- 局所麻酔薬塩酸リドカインを20 mg / ml、0.07 mg / kg +/-0.2体重の濃度で手術部位に皮下投与します。.
- 眼科用軟膏を両目に塗り、乾燥を防ぎます。
- 手術部位に2%局所麻酔薬を皮下投与します。.
- 室温で3mLの乳酸リンゲル溶液を皮下注射して、脱水を防ぎ、手術中に栄養を与えます。
5.手術
- 鋭利な手術用ハサミを使用して、手術部位(正中線と頭の中心を中心とした直径4mm)の上の皮膚の部分を取り除きます。頭の側頭部の耳と目の間の皮膚の一部(直径~2mm、左体性感覚皮質上)を解剖して除去します。
- メスを使用して、下にある皮膚(頭蓋周囲)組織を取り除き、頭蓋骨を露出させます。滅菌綿ガーゼを使用して頭蓋骨を清掃します。
- 側頭筋を収縮/切除して、イメージング領域の希望のサイズを露出させます[この研究では7.5 mm x 7.5 mm]。
- ヘッドインプラントの反対側の半球に頭蓋骨を露出させます。ヘッドインプラントを頭蓋骨に配置して、図2D-Fに示すように、インプラントの固定ネジの位置を確認します。
- ドリルビット1を備えたインディアインクを使用してネジをドリルするための頭蓋骨に印を付けます。歯科用ドリルビット3を使用してネジのバリ穴を開けます。ヘッドインプラントを所定の位置にねじ込みます。
- 滅菌ガーゼを使用して頭蓋骨を乾かします。ヘッドインプラントの周囲と下に組織接着剤の薄層を塗布して、頭蓋骨に接着します。歯科用セメントの層を適用してヘッドインプラントをさらに所定の位置に支え、セメントを2〜3分間乾燥させます。
注:歯科用セメントに加えてティッシュ接着剤を使用すると、強力なホールドが保証されます8。 - 歯科用ドリルビット3を使用して、頭蓋骨の左側にある7.5 mm x 7.5 mmの領域をブレグマのすぐ後方、正中線の外側に薄くします。 図3Aに示すように、頭蓋骨を~50μmに薄くします。
- 図3Bに示すように、手術部位に局所抗生物質軟膏を塗布し、シリコーンゴムの薄層で覆って、薄くなった頭蓋骨を保護します。図3Cに示すように、ヘッドキャップを使用して手術部位を覆います。図3D、Eに示すように、ヘッドインプラントとヘッドキャップの両方を通過する2本の小さなワイヤで所定の位置に固定します。図3Fに示すように、ヘッドキャップと頭蓋骨を覆うためにシリコーンゴムを塗布し、ヘッドキャップをさらにラットの頭の上で安定させます。
注意: シリコンゴムは、薄くなった頭蓋骨をさらに保護します。 - 痛みと炎症の管理のために、フルニキシンメグルミン(2.5 mg / kg)をラットに皮下注射します。.感染を防ぐために、エンロサイト系抗生物質エンロフロキサシン(22.7mg / ml、10mg / kg +/-.01)を腹腔内に注射します。.
- ラットを回復室に移動して、保温ブランケットとヒートランプで体温を維持します。ラットが意識を取り戻し、胸骨横臥を維持できるようになるまで、ラットを継続的に監視します。
- ラットが完全に回復したら、ラットを別のケージに戻します。
- 次の3日間は、フルニキシンとブプレノルフィンを投与して炎症と痛みを和らげ、感染を防ぐために1日2回投与します。
6.覚醒イメージング
- 後足のピンチ反射がない場合、誘導用に4%、維持用に1%のイソフルランでラットを麻酔します。.アセプロマジン(0.3-0.5 mg / kg)を皮下注射します。.
注:この濃度のアセプロマジンは軽度の鎮静レベルを下回っており、イメージングプロセス全体を通してラットを落ち着かせるのに役立ちます。 - カスタマイズされたベルクロのストリップを使用して、トレーニング手順中に使用されたプラスチックシートにラットを固定します。吸収パッドを使用して下半身を包み、ラットをスリングにぴったりと置きます。
- シリコンゴムを取り外します。固定ワイヤーを外してヘッドキャップを取り外します。 図2Gに示すように、ヘッドフレームをヘッドインプラントに固定します。
- ヘッドフレームをクランプでロックします( 図2H、Iを参照)。
- ガス麻酔を外します。イメージング領域を生理食塩水で3回洗い流し、湿ったガーゼできれいにします。イメージングエリアを乾燥させ、ワセリンを使用してイメージングエリアの周りに井戸を作ります。ウェルを滅菌生理食塩水で満たし、スライドガラスで覆います(図2E)。
- 以前に詳細に議論された固有信号光イメージングの取得手順、ウィスカ刺激プロトコル、およびデータ分析と提示を参照してください6,7。
- 実験を通して、ラットの目を柔らかい布またはガーゼ(オプション)で覆うことによってさらに減らすことができる興奮および落ち着きのなさの兆候についてラットを監視する。
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Representative Results
麻酔をかけたラットの1回の試行からの代表的な光学画像信号と、覚醒したラットの(収集された40回の試行のうち)合計応答を示します(図4)。覚醒ラットのシングルウィスカー刺激の信号強度は、麻酔をかけたラットよりも高い閾値で視覚化することができ、覚醒動物からのより強い信号を示す。ラットのC2ウィスカーを5Hzで1秒間刺激し、機能応答をベースラインと比較した分数変化として表示します。暗い領域(負の閾値より下)はニューロン活動の主要な領域であり、明るい白い領域(正の閾値より上)は刺激9に対する酸素化された血液応答を示す。画像は、矢印で示されているように、左から右が吻側から尾側(C)方向、上から下が内側から外側(L)方向になるように配置されています。
図1:ヘッドキャップ、ヘッドインプラント、およびヘッドフレーム。 (A)ヘッドキャップ(上面図):上面図の側面は、頭を保護するために頭の曲率に沿って整列する曲率を示しています。2つのくり抜かれた長方形の部分は、金属線がヘッドキャップを通過するためのものです。(B)ヘッドキャップ(底面図)は、ヘッドインプラントのトップバーに収まるように幅の広い長方形のカットと、ワイヤーがインプラントとヘッドキャップを通って移動して所定の位置に保持するための2つの垂直カットを示しています。(C)固定ネジ用の3つのカット穴を備えたヘッドインプラント。ヘッドインプラントの固定ネジの位置は、ラットの頭に応じて調整できます。(D)ヘッドキャップとヘッドインプラント(側面図)。ヘッドインプラントの側面図は、ワイヤーを通過させてヘッドキャップをヘッドインプラントに固定できるように、内側からくり抜かれた長方形のバーを示しています。(E-G)1本のワイヤー片を通してヘッドキャップに固定されたヘッドインプラントのビュー。底面図、側面図、および上面図:ヘッドインプラントがヘッドキャップ内にどのように取り付けられているかを示します。(H)ヘッドフレーム、(I)ヘッドフレームに固定されたヘッドインプラント。スケール上の2本の線の間の距離(青い長方形で示されているように)は1 mmです。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:スリング、ヘッドインプラント、および覚醒、頭部固定イメージングのためのヘッドフレームの固定 。 (A、B)底部のみまたは両側のネット材料を使用したカスタマイズされたスリング。(C)スリングトレーニング中に、ベルクロストリップで固定されたプラスチックシート上に置かれたラット;(D−F)対側半球上のラット頭蓋骨上の頭部インプラントの上面図および側面図。点線は撮像領域を示す。上面図と側面図は、固定ネジで頭蓋骨にヘッドインプラントを固定するための3つの穴を明確に示しています。(E)側面図は、ラットが画像化されていないときにヘッドキャップをヘッドインプラントに固定するためにワイヤーが通過する中空のバーを示しています。ヘッドフレームの片方の脚は、ラット皮質を画像化するためにヘッドインプラントの中空部分を通過した。(G)覚醒した頭部固定ラット用の頭部インプラントを通る頭部フレーム。(H)画像化セッション中の覚醒、頭部固定ラットの覚醒、頭部固定イメージング(I)のために固定された頭部インプラントを通る頭部フレーム。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:頭部インプラントの埋入。 (A)覚醒、頭部固定イメージングのための薄い頭蓋骨の準備。(B)ラットの頭蓋骨に固定された頭部インプラントと、ゴムシリコーンで覆われた薄い頭蓋骨の画像領域。(C)ヘッドインプラントに配置されたヘッドキャップ。(D,E)ヘッドキャップは、コーティングされた金属線を使用してヘッドインプラントに固定されています。(F)ヘッドキャップとその周辺は、頭蓋骨の固定と保護をさらにサポートするためにゴムシリコンで覆われています。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:C2ウィスカー刺激の機能応答 。 (A)5 Hz C2ウィスカー刺激の代表的な単一試行機能的反応 1秒間の覚醒、頭部固定ラットイメージング、各試行は7秒間続き、試行間隔は3秒±2秒。ベースラインからの分数変化のグレースケール表現のしきい値(−3.5 × 10−3 から3.5 × 10−3)。(B)麻酔をかけた(ペントバルビタールナトリウム)ラットの1秒間の5HzC2ウィスカー刺激の代表的な単一試験機能的反応。ベースラインからの分数変化のグレースケール表現のしきい値(−2.5 × 10−4 から2.5 × 10−4)。覚醒した頭部固定ラットの機能的反応は、麻酔をかけたラットの機能的反応の140倍強い。各フレームは0.5秒のフレームです。画像は、矢印で示されているように、左から右が吻側から尾側、上から下が内側から横方向になるように配置されています。暗い領域(負の閾値より下)はニューロン活動の主要な領域であり、明るい白い領域(正の閾値より上)は刺激に対する酸素化された血液反応を示す。スケールバー= 1 mm。 略語:C =尾側;L =横方向。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
補足ファイル1:頭部インプラント用の3D印刷ファイル。このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。
補足ファイル2:ヘッドキャップの3D印刷ファイル。このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。
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Discussion
覚醒、頭部固定ラットイメージングの使用は、容易さとカスタマイズの点で多くの利点を提供します。カスタム設計されたスリングにより、ラットを通気性のあるネット素材で包むことができ、動物を閉じたプラスチック製の拘束室に長時間囲む必要がなくなります10,11。ラットは、ラットの軽度の鎮静レベル(1.0-2.5 mg / kg)未満の非常に低用量のアセプロマジンを使用して、連続したイメージングセッションの長期間にわたって落ち着いてストレスのない状態に保たれます12。ラットを安定させ、イメージングセッション中のモーションアーチファクトをさらに排除するために、ベルクロストリップが使用されます。ベルクロストリップは、長時間の不必要な体のくびれを避けるために、互いに3〜6mmの位置に配置されます。ラットは、準備およびデータ取得中にスリングで落ち着いて快適に休むことができるように、若い年齢でスリングで訓練され、慣れています。予備的な結果に基づいて、体重が約150〜175 gの若いラットは、年配のラットよりも訓練が簡単で速いです。
ラットの頭部インプラントの重量はわずか0.174 gで、取り外し可能なヘッドキャップの重量は1.483 gです。ヘッドインプラントは、一方の半球の0.5cmから1.5cmの領域をカバーし、神経イメージングのためにもう一方の半球に完全にアクセスできるようにします。ヘッドキャップのサイズは、手術部位を完全にカバーします。ヘッドインプラントとヘッドキャップの重量は、可動性と日常生活を妨げないようであり、ラットは標準的なケージに一緒に収容することができます。この頭と体の拘束方法を使用して、縦断的研究のためにラットを異なる日に毎回2〜3時間画像化することができます。この設定を使用して、単一のラットで少なくとも最大3か月間、複数のイメージングセッションを実行できます。ヘッドインプラントとヘッドキャップを3Dプリントするには、合計25分かかります。部品はげっ歯類のサイズに応じて簡単にカスタマイズでき、マウスで使用するようにカスタマイズすることもできます。ラットの鑑別を必要とする研究では、異なる色および材料が容易な識別を提供することができる。さらに、キャップの上部をカスタマイズして、簡単に識別できるように記号、数字、または文字を追加できます。
着床とイメージングを成功させるためのいくつかの重要なステップがありますが、その中で最も重要なのはラットのトレーニングと慣れです。ラットには、画像結果に影響を与える可能性のある連想学習の可能性を最小限に抑えるために、感覚刺激がランダムに提示されます。手術とすべての手術器具は感染を防ぐために無菌である必要があり、局所抗生物質の使用が不可欠です。イメージングの開始時にアセプロマジンを使用することは、イメージングセッション中の不必要な動きを避けるために動物を落ち着かせて静かに保つために重要です。ラットの頭蓋骨は適切に固定するために乾燥している必要があり、堆積した歯科用セメントの層はヘッドキャップがヘッドインプラントに収まるのに十分な厚さである必要があります。
今回の研究では、画像領域は体性感覚皮質を中心としていました。間引きされた面積は約7.5 mm x 7.5 mmで、これは現在の研究で画像化できる領域の範囲です。ただし、必要に応じて、画像領域を11 mm x 11 mmに増やすことができます。この設計の別の利点は、皮質の湾曲にもかかわらず、薄くなった領域全体のイメージングを可能にすることです。
以前に報告された頭部インプラントは、頭部インプラントをラットの頭部に固定するためにほぼ7〜12本の固定ネジを必要とする13,14。これは、薄くなった頭蓋骨の準備によるより広い領域のイメージングを排除します。別の固定方法では、ヘッドスクリューを使用して広い領域に樹脂材料を固定する必要があり、画像化のために頭蓋骨にアクセスできないようにする14。MRIを使用したラットの覚醒イメージングでは、円筒形のチューブに動物を固定する必要があり、イメージング体験は動物にとってストレスになります11,15。他のいくつかのセットアップでは、ヘッドインプラントがヘッドから突き出ており、標準のケージに絡まる可能性があります16,17。ヘッドインプラントとヘッドキャップは、慢性的なイメージングのためのスライドガラスの固定と薄い頭蓋骨の平坦化の使用を排除します18,19。ヘッドインプラントのサイズとヘッドキャップの湾曲の使用は、他の慢性的な手順のように標準的なケージを変更する必要性を排除します18,19。マウスの頭部インプラントは、ラットがはるかに強く、安定を保つことがより困難であるため、ラットでは不可能な単一のナットとネジの構成のみが使用されるため、より簡単です20。
ヘッドインプラントの制限は、サイズが小さいにもかかわらず、ネジを使用してインプラントを頭蓋骨に固定する必要があることです。頭部インプラントは、動物の頭を安定させるために必要ですが、ラットの脳全体の画像化を制限します。しかし、このヘッドインプラントを使用する利点は、固有信号光学イメージング、ドップラー光コヒーレンストモグラフィ、レーザースペックルイメージングなどの様々なニューロイメージングモダリティを用いて、誘発感覚刺激のためのより広い領域をイメージングすることができることである。
覚醒、頭部固定ラットの固有の信号に基づく皮質機能表現は、同じウィスカー刺激プロトコルを使用する麻酔付きラットよりも強度が強い傾向があります。誘発された内因性シグナル応答の強度の同様の増加は、覚醒中のサル21,22で報告されている。現在の作業は、自然主義的な生息地23などのより困難な環境のためにヘッドインプラントとヘッドキャップの設計を改善するために進行中です。
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Disclosures
著者は開示する利益相反を持っていません。
Acknowledgments
クララ・ジョーンズ、ジェームズ・スターウォルト、リン・ホアン、ヨン・ジュンハ、アミルソヘイル・ザレがラットの訓練とスリングの準備に協力してくれたことに感謝します。資金提供は、国立衛生研究所(NIH、助成金番号:NS119852)およびLeducq財団(助成金番号:15CVD02)から提供されました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rats | Charles River | Sprague Dawley | |
| Isoflurane | Pivetal | 21295098 | General anesthetic |
| Lidocaine HCl 2% injection | Phoenix | L-2000-04 | Local anesthetic |
| Atropine sulfate injection | Vedco | 5098907512 | Help in respiration |
| Lactated Ringer's injection solution | Vedco | 50989088317 | |
| Flunixin injection | Vedco | 6064408670 | Pain management |
| Enrosite injection (Enrofloxacin 2.27%) | VetOne | 501084 | Avoid infection |
| PromAce injection (Acepromazine maleate) | Beohringer Ingelheim | 136059 | |
| Animax ointment | Dechra Veterinary Products | 122-75 | active ingredients of nystatin 1000units per gram, neomycin sulfate 2.5mg per gram, thiostrepton 2500 units per gram, and triamcinolone acetonide 1mg per gram |
| Puralube ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | 211-38 | |
| Povidone-iodine PVP prep pads | Medline | MDS093917 | Betadine generic |
| Isopropyl alcohol swabs | BD | 326895 | |
| Vetbond tissue adhesive | 3M | 1469SB | |
| Bur (drill bit), standard operatory carbide | SS White Burs | 14829 | #3 bur |
| Screws, 00-90 x 1/8 flat head stainless steel | J.I. Morris | F0090CE125 | Anchor screws |
| Stereotaxic system | Kopf Instruments | 1430 | |
| Homeothermic heating blanket | Harvard Apparatus | 50-7220-F | |
| Pulse oximeter & heart rate monitor | Kent Scientific | MouseStat Jr. | |
| Petrolatum | Fisher Scientific | P66-1LB | Vaseline generic |
| Wire, bare copper | Fisher Scientific | 15-545-2C | 20 gauge |
| Teets Cold Cure powder | Pearson Dental | C73-0054 | active ingredient: Methyl Methacrylate |
| Teets Cold Cure liquid | Pearson Dental | C73-0078 | active ingredient: Methyl Methacrylate |
| Silicone mold rubber | Smooth-On | Body Double Fast | silicon polymer |
| Metricide 28 (Germicide) | Metrex | Oct-05 | |
| India ink, black | Pelikan | 301051 | |
| Dental drill | NSK Dental | Ultimate XL-F | |
| 3D printer | Prusa Research | i3 MK3S+ | |
| Sew on fasteners | Velcro | 90030 | |
| Pet screening utility fabric | Joann | 10173334 | Netting material |
| Bur (drill bit), standard operatory carbide | SS White Burs | 14829 | #1 bur |
References
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