Summary
Presentert her er en protokoll for pålitelig kvantifisering av høyre og venstre ventrikkelfunksjon av donorhjerter etter kuldekonservering ved hjelp av et ex vivo perfusjonssystem.
Abstract
Primær transplantatdysfunksjon (PGD) er fortsatt den viktigste årsaken til tidlig død etter hjertetransplantasjon. Forlenget iskemisk tid under kuldekonservering er en viktig risikofaktor for PGD, og pålitelig evaluering av hjertefunksjonen er avgjørende for å studere donorhjertets funksjonelle responser etter kuldekonservering. Den medfølgende videoen beskriver en teknikk for å vurdere murine høyre og venstre ventrikkelfunksjon ved hjelp av ex vivo perfusjon basert på en Langendorff-modell etter kuldekonservering i forskjellige varigheter. Kort fortalt isoleres hjertet og lagres i en kald histidin-tryptofan-ketoglutarat (HTK) løsning. Deretter perfuseres hjertet med en Krib-buffer i en Langendorff-modell i 60 minutter. En silikonballong settes inn i venstre og høyre ventrikkel, og hjertefunksjonelle parametere registreres (dP / dt, trykk-volumforhold). Denne protokollen tillater pålitelig evaluering av hjertefunksjonen etter forskjellige hjertebevaringsprotokoller. Det er viktig at denne teknikken tillater studier av hjertebevarelsesresponser spesielt i innfødte hjerteceller. Bruken av svært små murinhjerter gir tilgang til et enormt utvalg av transgene mus for å undersøke mekanismene bak PGD.
Introduction
Hjertetransplantasjon bedrer overlevelse og livskvalitet hos pasienter med hjertesvikt i sluttstadiet1. Dessverre begrenser mangelen på hjertedonorer antall pasienter som kan ha nytte av denne behandlingen og begrenser klinikernes evne til å matche donorer optimalt med mottakere 2,3,4. Videre har det nye tildelingssystemet bidratt til lengre iskemiske tider og økt bruken av marginale givere betydelig siden 20185. Følgelig øker gjennomsnittsalderen for hjertedonorer og iskemisk tid over tid, noe som fører til en høyere forekomst av primær transplantatdysfunksjon (PGD) til tross for betydelige forbedringer i strategiene for hjertebevaring 6.
PGD kan ramme venstre, høyre eller begge ventriklene, og er fortsatt en livstruende komplikasjon som representerer den viktigste årsaken til tidlige dødsfall etter hjertetransplantasjon. Undersøkelse av mekanismene til PDG og utvikling av strategier for bedre hjertebevaring er viktige hensyn, gitt den potensielle livreddende effekten på hjertemottakere. Derfor er eksperimentelle modeller som muliggjør en robust og pålitelig vurdering av donorhjertefunksjon etter forlenget lagringstid, avgjørende for å øke vår forståelse av PGD og legge til rette for utvikling av nye terapier. Evnen til nøyaktig å vurdere hjertefunksjonen i musehjertet gir tilgang til et stort repertoar av transgene murinmodeller som nøyaktig kan identifisere PGD-mekanismer.
I fysiologiske og farmakologiske studier er Langendorff retrograd perfusjonsmodell mye brukt til å vurdere hjertefunksjon7. Spesielt oppdages hjerteytelsen av en silikonballong koblet til en trykktransduser i venstre ventrikkel (LV) hulrom. Et sentralt trekk ved PGD er utilstrekkelig sammentrekning og avslapning av ventrikkelmuskelen. Tidligere Langendorff-studier har fokusert på å bruke en LV-ballong for å produsere pålitelige og reproduserbare resultater i LV funksjonsvurdering 8,9,10. Imidlertid er bruken av en intrakavitær ballong for å vurdere høyre ventrikulær (RV) funksjon ved hjelp av ballongsystemet mindre godt anerkjent.
Gitt en signifikant PGD-rate som involverer RV etter transplantasjon11, vil eksperimentelle metoder for å studere både LV- og RV-funksjon bidra til å bestemme molekylære og fysiologiske mekanismer som bidrar til RV PGD. Denne protokollen viser at intrakavitære silikonballonger kan gi pålitelige vurderinger av LV- og RV-funksjon i samme murine heart12. For å evaluere den potensielle bruken av Langendorff-systemet i PGD-studien, undersøkte vi hjertefunksjonene med ulike lagringsperioder og fant nedsatt hjertefunksjon ved sammentrekning og relaksasjon med langvarig kuldelagring av murinhjerter. Interessant nok har LV en høyere funksjonsreduksjon enn RV. Oppsummert kan protokollen beskrevet her brukes til å vurdere effekten av et kandidatmedikament og molekylære veier på både LV- og RV-funksjon. Evnen til å bruke denne metoden på murine hjerter vil lette utførelsen av detaljerte mekanistiske studier.
Protocol
Alle dyreforsøk i denne protokollen ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee ved University of Michigan, Ann Arbor. Alle musene ble plassert på en 12:12 lyssyklus i patogenfrie rom. Se materialfortegnelsen for detaljer relatert til alle materialer, dyr og utstyr som brukes i denne protokollen.
1. Konstruksjon av silikonballongkateteret
MERK: Silikonballongen er laget som beskrevet tidligere13.
- Tilsett 9,5 ml destillert vann, 14,2 ml lett mais sirup og 33,8 g sukrose til et 100 ml beger. Varm opp og rør løsningen til sukkeret er helt oppløst.
- Forbered deigen ved å blande 10 g hvetemel og 5 g vann til en jevn konsistens oppnås og la den hvile i 10 minutter.
- Form et lite stykke deig til en oval "hodet" - og fest den til enden av en tørr spaghettistreng. Dypp deretter dette hodet i sukkeroppløsningen og fjern sakte fra løsningen, da hodet nå er helt belagt.
NOTAT: Deigen skal være glatt og ha jevn tekstur. Størrelsene på deigen kan varieres for å generere forskjellige størrelser av ballonger, fra 5 mm (kort diameter) til 7 mm (lang diameter). Prøv å dekke dem med en tynn film av sukkeroppløsning. - Heng spaghettistrengen på en isoporskumblokk eller andre holdere for å danne et blankt deksel jevnt over hodet og tørk over natten.
- Dypp formen i silikondispersjon (silikonelastomer dispergert i xylen). Legg spaghettitråden tilbake i isoporskumblokken ved 37 °C i 2 timer eller til den er tørr. Gjenta dette trinnet én gang.
MERK: Det er viktig å forhindre at silikondispersjonsgelen oksiderer på grunn av lufteksponering, da dette vil generere en ujevn ballongtykkelse. - Plasser formen i vannet for å skille og samle ballongen. Oppbevar ballongen i 0,02% natriumazid.
- Skjær en to-stump spiss fra en 22 G nål; monter en stump ende på silikonballongen og en annen stump ende på PE-slangen. Bruk 4-0 silke for å binde ballongen på plass på nålen.
MERK: Test ballongens integritet ved å injisere vann inn i den. Når ballongen er fylt, trykker du ballongen mykt for å teste om ballongen opprettholder spenningen på innsiden. Bruk en ny ballong hvis den lekker. De monterte ballongene kan lagres for fremtidig bruk.
2. Forberedelse av hjerteperfusjonssystemet
- Lag 1 liter Krebs-Henseleit (KH) perfusjonsbuffer og overfør den til vannreservoaret Langendorff-systemet.
- Koble luftrøret til vannbeholderen og slå på luftstrømmen for å balansere KH-bufferen med 5 % CO2 og 95 %O2 i minst 30 minutter.
- Sett vannbadet på 41,5 °C og sirkuler vannet i det ytre laget av Langendorff-systemet for å varme opp systemet og KH-bufferen.
MERK: Vannbadtemperaturen krever optimalisering for hvert system. For dette systemet vil vannbadets temperatur opprettholde KH ved 37-37,5 °C når den perfuserer inn i hjertet.
3. Isolasjon, montering og kanylering av musehjertet
- For antikoagulasjon, adminster 200 enheter heparin i saltvann ved intraperitoneal (i.p.) injeksjon i høyre kvadrant av C57/B6 mus abdomen. Aspirer sprøyten før injeksjon for å bekrefte at nålens skråning ikke er i blæren eller lumen i GI-kanalen. Bruk minst fire mus i hver eksperimentell tilstand (men vurder også størrelsen på behandlingseffekten).
- Etter 30 minutter administreres 80 mg/kg ketamin og 10 mg/kg xylazin i.p. for å bedøve musen. Sjekk om den bedøvede musen er bevisstløs ved å utføre en tåklemme og sikre at ingen respons blir observert. Acepromazin 2mg/kg kan tilsettes ket/xyl-cocktailen hvis den brukte stammen av mus ikke når et tilstrekkelig anestesinivå kun med ket/xyl.
- Lag et snitt rett under brystbenet. Bruk saks til å åpne brystet ved å kutte membranen og ribbeina. Brett den fremre brystveggen for å eksponere brystet helt. Kutt ved den synkende aorta (lukket til aortabuen). Overfør hjertet, lungene og thymus av musen til kald histidin-tryptofan-ketoglutarat (HTK) buffer. Isoler organene under iskald HTK-buffer. Eksponer aorta ved å fjerne bindevev.
MERK: Maksimere aorta lengde ved å inkludere både stigende aorta og aortabuen regionen i excision å tillate nok plass til å koble til en nål.
- Koble enden av aorta til en 22 G nål, og bind med en 6-0 silke sutur. Forsikre deg om at kanylen er over aortaroten for ikke å forstyrre aortaklaffen. Perfus aorta med 10 ml kald (4 °C) HTK-buffer over ca. 10 minutter.
MERK: Det tar mindre enn 15 min fra hjertefjerning til kanylering av aorta; Det er imidlertid viktig å holde perfusjonshastigheten på riktig nivå. Injeksjoner som er for raske og kraftige kan generere høyt trykk og forårsake vaskulær-/hjerteskade. - Oppbevar hjertet i et 50 ml rør med iskald HTK i 8 timer eller utfør perfusjonen umiddelbart (ikke oppbevar kontrollen) og unngå direkte kontakt med is.
MERK: Direkte kontakt av hjertevevet med is kan føre til kuldeskade. - Koble det nålmonterte hjertet til kanylen i Langendorff-apparatet og bind det med en silkeutur.
MERK: For å standardisere prosedyren, vent i totalt 3 minutter for kanyleringsprosessen før perfusjon. - Start perfusjonen med en konstant strømningsmodus ved 3 ml/min; bytt deretter til konstant trykkmodus ved 70-80 mmHg og juster hjertet til ~ 6 ml / min.
MERK: Palpere hjertet mykt kan bidra til å akselerere hjerte reanimation. Hvis perfusjonsstrømningshastigheten er mye høyere enn 6 ml / min ved konstant trykkmodus, kan det være en lekkasje i kanylasjonen eller aortaklaffen fungerer kanskje ikke som den skal. Juster tilkoblingene for å fikse lekkasjen. Den konstante strømningsmodusen overstyrer hjertets vaskulære tone-selvregulering. Den konstante trykkmodusen gjør at hjertet kan regulere sin koronar perfusjonsstrøm. Derfor vil den konstante trykkmodusen nøyaktig måle hjertefunksjonen og bevaringskvaliteten til hjertet. - Koble en deflatert, vannfylt ballong til en trykktransduser og en vannfylt sprøyte med en treveis kran. Etter en 15-20 min likevektsperiode, kutt høyre atrium (RA) og sett ballongen til bobilen gjennom RA. Bruk tape til å holde ballongen inne i bobilen. Minimer det åpne området av RA for å begrense ballongen i ventrikkelen (se figur 1 for oppsettet).
MERK: En periode med likevekt er nødvendig, da hjertekontraksjonen og avslapningen ikke er stabil i begynnelsen, og tiltaket er mindre nøyaktig og representativt. Hvis AV-knuten er skadet under åpningen av RA, vil hjertet vise hyppige arytmier. - Etter 20 min RV funksjonell datainnsamling, kutt venstre atrium (LA) og sett inn en deflatert vannfylt ballong til LV gjennom LA. Bruk tape for å holde ballongen inne i LV.
MERK: Hjertet bør opprettholde stabil hemodynamikk i mer enn 1,5 time.
4. Funksjonell dataregistrering
- Kalibrering av trykktransduseren
- Fyll en 10 ml sprøyte med varmt saltvann og koble sprøyten til kuppelen gjennom en treveis kran. Åpne kranen og fyll kuppelen sakte med saltvann, og lukk deretter alle kraner og fjern sprøyten. Fest den fylte kuppelen til transduseren; Koble trykkmåleren til den tredje enden av treveiskranen.
- I opptaksprogramvaren velger du Bridge Amp fra rullegardinmenyen til kanalen som kobles til transduseren. Gi nytt navn til kanalen som Perfused pressure. Klikk Null for å nullstille svingeren.
- Start opptaket ved å klikke Start slik at svingeren nå leser 0 mmHg. Etter flere sekunders opptak, skyv sprøyten sakte og øk trykket til 100. Klikk stopp for å stoppe opptaket.
- I dialogboksen Enhetskonvertering velger du et opptaksområde for 0 mmHg og klikker på pilen til punkt 1 og skriver 0 mmHg. Velg opptaksområde for 100 mmHg, klikk pilen til punkt 2, og skriv 100 mmHg. Klikk OK for å kalibrere svingeren.
- Gi nytt navn til kanalen som tilsvarer trykktransduseren med ballongen som Ventrikkeltrykk. Start opptaket når hjertet er koblet til systemet. Etter å ha satt ballongen inn i ventrikkelen, juster vannvolumet i ballongen ved hjelp av en mikrometersprøyte gjennom treveiskranen for å opprettholde det endediastoliske trykket ved 5-10 mmHg.
MERK: Den endediastoliske målingen kan reduseres under målingen, helst starte ved nær 10 mmHg. - Gi nytt navn til en tom kanal som dP/dt. Fra rullegardinmenyen velger du Derivative | source channel som Ventrikkeltrykk. Kanalen vil registrere forholdet mellom trykkendring i ventrikkelhulen i sammentrekningsperioden.
- Velg en stabil måleperiode, og klikk deretter på Innstilling på blodtrykksmodulen.
- Velg ventrikkeltrykket som inngangskanal og klikk valg for en beregningsperiode | OK.
- Klikk Klassifiseringsvisning for å fjerne den ytre hjertesyklusen (f.eks. unormal syklustid eller trykk).
- Klikk tabellvisning for å generere tabellene over gjennomsnittet av maks dP/dt (sammentrekning) og min dP/dt (avslapning) for den valgte perioden.
MERK: Lagre opptaksfilen for hver prøve og lagre tabellen over gjennomsnittlig hjertefunksjon for statistisk analyse.
Representative Results
Voksne C57Bl/6 musehjerter, 3 måneders alder, ble høstet og montert på Langendorff-systemet. Donorhjertet ble lagret i HTK i 0 og 8 timer, og deretter perfusjonert med oksygenert KH-buffer. En silikonballong som kobles til en trykktransduser ble brukt til å måle sammentrekning og avslapning av LV- og RV-funksjonen.
Aortatrykket ble opprettholdt i området 70-80 mmHg. Hjertefrekvensen var sammenlignbar i musehjerter med 0 og 8 timer lagringsplass. LV- og RV-funksjonen ble undersøkt ved å måle systolisk og diastolisk trykk. dP/dt, et derivat for å beregne forholdet mellom trykkendring, ble beregnet for å bestemme trykkdynamikken. Det absolutte antallet maks dP/dt og min dP/dt kan representere nivået av muskulær sammentrekning og avslapning. Ved 0 timers lagring hadde LV høyere systolisk trykk sammenlignet med RV (figur 2C og figur 3A). LV viste mer muskulær sammentrekning og relaksasjon enn bobilen etter perfusjon av 0 timers lagring (figur 2C og figur 3B,C). Etter 8 timers kjølelagring viste imidlertid både LV og RV en signifikant funksjonsreduksjon sammenlignet med en 0 h baseline (figur 2A-D og figur 3B, C). Reduksjonen i hjertekontraksjon var mer alvorlig i LV. Etter 8 timers lagring var sammentrekningen og relaksasjonen av LV 25,1 % og 30,7 % av baselinjen 0 timer, mens RV hadde 32,5 % og 29,1 % funksjon sammenlignet med baseline 0 timer (figur 3B,C). Disse resultatene viste at PGD for LV etter langvarig lagring hadde en mer signifikant hjertekontraksjonsreduksjon enn RV.
Figur 1: Montering og kanylering av musehjertet . (A) Generelt oppsett av perfusjonsoppsettet. 1. Perfusjonsreservoar. 2. Oksygeneringskammer. 3. Luftfellekammer. 4. Hjertekammer. 5. Verdibryter for konstant strømning og trykk. 6 og 7. Oksygentilførsel. (B) Kanylerte hjerter med bobilen foran. (C) Plassering av bobilen for å kutte for å åpne hulrommet. (D) Trykk på ballongrøret med kanylen. Forkortelse: RV = høyre ventrikkel. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Sammenligning av funksjonen til LV versus RV. (A) Sporingsregistrering av maks og min dP / dt i RV og LV i donorhjertet med 0 timers lagring. (B) Registreringen av maks og min dP / dt i RV og LV i donorhjertet med 8 timers lagring. (C,D) Detaljer om dP / dt, LV-trykk, hjertefrekvens og perfusjonstrykk i LV og RV ved 0 timer og 8 timer. Forkortelser: RV = høyre ventrikkel; LV = venstre ventrikkel; dP/dt = trykk-tid forhold. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Sammenligning av funksjonen til LV versus RV etter lagring og perfusjon. (A) Systolisk og diastolisk trykk av LV og RV etter 0 timer og 8 timers lagring. (B) Maks dP / dt og (C) Min dP / dt av LV og RV etter perfusjon med 0 timer og 8 timers lagring. Dette tallet er fra Lei et al.12. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Discussion
Denne protokollen beskriver retrograd perfusjon Langendorff-metoden via aortakanylering. Denne teknikken kan brukes til å evaluere LV- og RV-funksjonen til murinhjerter etter kald lagring. Resultatene viser at langvarig kjølelagring av donorhjerter fører til redusert hjertefunksjon i både LV og RV ved hjelp av denne protokollen.
Studiene av akutt og kronisk avstøtning etter hjertetransplantasjon fokuserer mye på immunbiologi14. Effekten av stedegne celler på PGD under kjølelagring er mindre godt undersøkt. PGD forekommer hos ~10%-20% av hjertetransplantasjoner og står for 66% av tidlig død innen 30 dager etter transplantasjon. Spesielt er forekomsten av PGD som påvirker LV versus RV forskjellig etter transplantasjon11. Uten bidrag fra mottakerens cellulære responser, fokuserer denne ex vivo-metoden på bidragene fra innfødte hjerteceller til PGD etter kuldekonservering av donorhjerter. Videre studier kan inkludere mottakerresponser i en murine hjertetransplantasjonsmodell.
I denne protokollen fokuserte Langendorff-perfusjonen av kaldbevarte donorhjerter på de opprinnelige hjerteresponsene på varm krystalloid perfusjon uten å infiltrere cellulær immunitet. For å oppnå reproduserbare resultater ble flere kritiske trinn standardisert. Musehjertene ble arrestert ved hjelp av HTK-løsning og lagret i iskald HTK, tilsvarende klinisk praksis. Perfusjonsvolumet og infusjonstiden for HTK-oppløsningen for hvert hjerte ble nøye overvåket med en timer. Donorhjertet ble oppbevart i forkjølte rør på is med HTK i et rom på 4 °C. Kanyleringstiden waas standardisert til ~ 3 min før perfusjon. Alle disse trinnene sørget for at kuldekonserveringsvarighet var den viktigste variabelen i studien.
En periode med uregelmessig hjertekontraktilitet i ~20 min ble ofte sett i begynnelsen av perfusjonen. Denne likevekts- og gjenopprettingsperioden ble tilrettelagt ved gradvis oppvarming og oksygenering av hjertevev. Det var ventet en relativt stabil periode etter de første 20 min. Ballongen ble satt inn i ventrikkelhulen ved ~18 min etter den første likevektsperioden. Vi begynte å registrere hemodynamikk etter at hjertet var stabilt i ~25 min, når ballongen ble satt inn. Perfusjon med KH-buffer opprettholdt stabil hjerteytelse i ~1,5-2 timer. Vi valgte derfor å registrere hemodynamikk i 20 min i hver av venstre og høyre ventrikler.
Det er flere begrensninger ved retrograd perfusjon for å studere hjertets PGD etter kald lagring. For det første, på grunn av ballongstørrelsen og mangel på plass i hvert ventrikkelhulrom (spesielt RV), er samtidig innsetting av to ballonger i både LV og RV svært utfordrende. Dermed måler vi funksjonen til RV og LV sekvensielt. Det er viktig å merke seg at interventrikulær septum bidrar betydelig til både venstre og høyre ventrikulær funksjon. Septum bidrar til ~ 50% av høyre ventrikulær funksjon, så det er interventrikulær avhengighet15. Det er også viktig å merke seg at mens prosedyrene for reperfusjon av murine hjertet i Langendorff-enheten tar ~ 3 min, tar kirurgisk implantasjon av det menneskelige hjertet i det relativt varme kirurgiske feltet ~ 45 min. Til sammenligning pådrar murine hjertet i dette Langendorff-systemet mindre iskemisk tid. Dette bør tas i betraktning ved vurdering av klinisk oversettelse.
Siden vi brukte KH-buffer til å perfusere hjertet uten blod, kan dette også ha mindre effektivitet i oksygentilførsel. Imidlertid er hjertefunksjonen relativt stabil gjennom de første 1,5-2 timer med perfusjon, og tillater dermed pålitelige hemodynamiske målinger. Dessverre er det for tiden ingen levedyktige fungerende hjerteperfusjonsmodeller for disse mindre murinhjertene, og effekten av ventrikkelbelastning kan ikke evalueres i dette systemet. Til tross for dette er perfusjonssystemet svært reproduserbart og mindre arbeidskrevende og tidkrevende enn transplantasjonsmodeller. Det er også mindre kostbart enn transplantasjonsstudier, noe som kan gjøre det mer egnet for screening av ulike terapeutiske alternativer og ulike molekylære veier. Med modifikasjoner av konserveringsløsninger ved å legge til kandidatmedisiner, kan denne plattformen brukes til å evaluere effekten av farmakologiske midler på å redusere PGD i både LV og RV.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter å opplyse.
Acknowledgments
Ingen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4-0 silk suture | Braintree Scientific | SUTS108 | |
| 6-0 Silk suture | Braintree Scientific | SUTS104 | |
| All purpose flour | Kroger | ||
| BD General Use and PrecisionGlide Hypodermic Needles 22 G | Fisher scientific | 14-826-5A | |
| BD Syringe with Luer-Lok Tips (Without Needle) | Fisher scientific | 14-823-16E | |
| Corn Syrup | Kroger | ||
| Custodiol HTK Solution | Essential Pharmaceuticals LLC | ||
| Dissecting Scissors | World Precision Instruments | 14393/14394 | |
| Falcon 50 mL conical tubes | Fisher scientific | 14-959-49A | |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H4784 | |
| Krebs Henseleit buffer | Sigma | K3753 | |
| Nusil silicone dispersions | Avantor | ||
| Perfusion system | Radnoti | 130101BEZ | |
| PowerLab | ADInstruments | PL3508 | |
| Sodium azide | Sigma | S2002 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Sucrose | Sigma | S0389 | |
| Sucrose | Sigma | S0389 | |
| Xylazine | Sigma | X1126 |
References
- Kim, I. C., Youn, J. C., Kobashigawa, J. A. The past, present and future of heart transplantation. Korean Circulation Journal. 48 (7), 565-590 (2018).
- Gaffey, A. C., et al. Transplantation of "high-risk" donor hearts: Implications for infection. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 152 (1), 213-220 (2016).
- Hsich, E. M. Matching the market for heart transplantation. Circulation: Heart Failure. 9 (4), 002679 (2016).
- Piperata, A., et al. Heart transplantation in the new era of extended donor criteria. Journal of Cardiac Surgery. 36 (12), 4828-4829 (2021).
- Huckaby, L. V., Hickey, G., Sultan, I., Kilic, A. Trends in the utilization of marginal donors for orthotopic heart transplantation. Journal of Cardiac Surgery. 36 (4), 1270-1276 (2021).
- Singh, S. S. A., Dalzell, J. R., Berry, C., Al-Attar, N. Primary graft dysfunction after heart transplantation: a thorn amongst the roses. Heart Failure Reviews. 24 (5), 805-820 (2019).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).
- Rossello, X., Hall, A. R., Bell, R. M., Yellon, D. M. Characterization of the Langendorff perfused isolated mouse heart model of global ischemia-reperfusion injury: impact of ischemia and reperfusion length on infarct size and LDH release. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 21 (3), 286-295 (2016).
- Matsuura, H., et al. Positive inotropic effects of ATP released via the maxi-anion channel in Langendorff-perfused mouse hearts subjected to ischemia-reperfusion. Frontiers in Cell Development Biology. 9, 597997 (2021).
- Tse, G., Hothi, S. S., Grace, A. A., Huang, C. L. Ventricular arrhythmogenesis following slowed conduction in heptanol-treated, Langendorff-perfused mouse hearts. The Journal of Physiological Sciences. 62 (2), 79-92 (2012).
- Kobashigawa, J., et al. Report from a consensus conference on primary graft dysfunction after cardiac transplantation. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (4), 327-340 (2014).
- Lei, I., et al. Differential inflammatory responses of the native left and right ventricle associated with donor heart preservation. Physiological Reports. 9 (17), 15004 (2021).
- Miller, A., Wright, G. L. Fabrication of murine ventricular balloons for the Langendorff heart preparation. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 1 (101), (2011).
- Madsen, J. C.
- Voelkel, N. F., et al. Right ventricular function and failure: report of a National Heart, Lung, and Blood Institute working group on cellular and molecular mechanisms of right heart failure. Circulation. 114 (17), 1883-1891 (2006).
