Summary
Detta protokoll beskriver en modifierad och förenklad teknik med en minimalt invasiv transversell aorta constriction (TAC) procedur med hjälp av en självtillverkad retractor. Denna procedur kan utföras utan ventilator eller mikroskop och introducerar trycköverbelastning, vilket så småningom leder till hjärthypertrofi eller hjärtsvikt.
Abstract
Transverse aorta constriction (TAC) är en ofta använd operation inom forskning om hjärtsvikt och hjärthypertrofi baserad på bildandet av trycköverbelastning i musmodeller. Den största utmaningen med denna procedur är att tydligt visualisera den tvärgående aortabågen och exakt band målkärlet. Klassiska tillvägagångssätt utför en partiell thorakotomi för att exponera den tvärgående aortabågen. Det är dock en öppen bröstmodell som orsakar ett ganska stort kirurgiskt trauma och kräver en ventilator under operationen. För att förhindra onödigt trauma och förenkla operationsproceduren närmar sig aortabågen via den proximala delen av bröstbenet, når och binder målkärlet med hjälp av en liten självtillverkad retraktor som innehåller en snara. Denna procedur kan utföras utan att komma in i pleurahålan och behöver inte en ventilator eller mikrokirurgisk operation, vilket lämnar mössen med fysiologiska andningsmönster, förenklar proceduren och minskar driftstiden avsevärt. På grund av det mindre invasiva tillvägagångssättet och mindre driftstid kan möss genomgå färre stressreaktioner och återhämta sig snabbt.
Introduction
Hjärtsvikt är ett komplext kliniskt symptom som beror på nedsatt struktur och funktion av ventrikulär fyllning eller utstötning av blod1. Sjukdomsstadiet definieras huvudsakligen via New York Heart Association funktionsklassificering baserat på svårighetsgraden av symtom och fysisk aktivitet2. För de patienter med en ejektionsfraktion på över 50 % höjde strukturella och/eller funktionella avvikelser natriuretiska peptider för att stödja diagnosen hjärtsvikt med bevarad ejektionsfraktion (HFpEF)2. Ischemisk hjärtsjukdom är en ledande orsak bland flera etiologier av hjärtsvikt. Således används myokardinfarktmodellen (såsom permanent koronarligering) ofta för att studera patofysiologi efter hjärthypoperfusion eller ischemi-reperfusionsskada 3,4. Förutom akut hjärtskada bidrar andra riskfaktorer som högt blodtryck, diabetes, fetma och en familjehistoria av kardiomyopati också till utvecklingen av hjärtsvikt. Efter att patienter passerar steg A (med risk för hjärtsvikt) och går in i steg B (före hjärtsvikt) inträffar strukturell modifiering1. Till exempel går hypertensiva patienter först genom adaptiv hypertrofi i vänster kammare och utvecklas sedan gradvis till maladaptiv hjärthypertrofi och transitering till hjärtsvikt genom patologisk ombyggnad5.
Som slutstadiet av olika hjärt-kärlsjukdomar har kronisk hjärtsvikt studerats i årtionden6. Flera musmodeller har använts i stor utsträckning inom hjärtsviktsforskning, inklusive läkemedelsinfusion (angiotensin II), metaboliska störningar (diabetes eller kaloririk kost) och aortaförträngning7. Bland dessa modeller åtföljs angiotensin II-perfusion av olika organbiverkningar, såsom njure7. Inducerande metaboliska störningar kräver vanligtvis en ganska lång tidsperiod. Stigande aortaförträngning har ansetts ha begränsad relevans för sjukdomhos människa 7.
TAC är en pålitlig modell som ökar efterbelastning och inducerar hjärthypertrofi samt hjärtsvikt8. Open-chest TAC-modellen beskrevs först av Rockman et al. och användes i många laboratorier runt om i världen9. Detta klassiska TAC-förfarande orsakar emellertid ett ganska stort trauma för möss och förändrar deras normala beteende, vilket kan ta lång återhämtningstid och störa ytterligare behandling10. Andra modifierade TAC-procedurer med slutna bröst minskade vissa invasiva steg men krävde mikrokirurgiska färdigheter eller mekanisk ventilation10,11.
Detta protokoll beskriver en steg-för-steg-metod med ett minimalt invasivt tillvägagångssätt för aortabågen med hjälp av en självtillverkad upprullningsdon via ett 3 mm mittlinjesnitt av bröstbenets övre kant. Denna modell behöver inte mikrokirurgisk skicklighet, mekanisk ventilation eller skärning genom revbenen, vilket ger ett snabbt, kirurgiskt traumabegränsat, okomplicerat och billigt sätt att utföra TAC-kirurgi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Det nuvarande protokollet är godkänt av etikkommittén vid Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Kina. Denna procedur utförs på vuxna manliga C57/BL6-möss (>10 veckors ålder). Alla kirurgiska instrument steriliserades genom autoklavering före operationen.
1. Förberedelse av kirurgiskt instrument
- Förbered en 5 ml spruta och nyp av nålspetsen med en nålhållare för att trubba den.
- Förbered en 27 G nål och trubba den med en nålhållare. Att klippa nålspetsen med oftalmisk sax är ett alternativt sätt att trubba nålen.
- Böj spetsen på 27 G nålen 90°.
OBS: Denna nål kommer att användas som en distans för att binda med aortan för kärlförträngning. - Använd en kommersiellt erhållen järntråd (medicinsk kvalitet, 0,5 mm i diameter, se materialförteckning) och garn runt nålen (figur 1A). Forma en liten snara eller ögla vid nålspetsens trubbiga spets (figur 1B).
OBS: Detta återanvändbara instrument fungerar som en speciell självtillverkad retraktor och gör att man kan passera silkesutur under aortan i de senare stegen. - Autoklavera alla kirurgiska verktyg före operationen (inklusive den speciella upprullningsdonet ovan) för att sterilisera dem.
2. Beredning av djur
- Bedöva musen via intraperitoneal injektion av pentobarbital natriumlösning (50 mg/kg, se Materialförteckning) beroende på kroppsvikt. Injicera subkutant 100 μL 0,5% lidokain lokalt i operationsområdet.
- Kontrollera att musen är helt bedövad genom att nypa musens tå med spetsen på pincetten.
- Applicera oftalmisk salva på båda ögonen för att förhindra torrhet under anestesi.
- Ta bort håret från halsen och övre bröstet med hårborttagningskräm eller en klippare.
- Desinficera det ohåriga området med tre alternerande skrubb av jod och 70% etanol i koncentriska cirklar som rör sig utåt.
- Placera musen i ryggläge på en värmedyna täckt med ett sterilt draperi med huvudet pekande mot operatören. Fäst extremiteterna med tejp och snedställningar med en 4-0 sutur (figur 2A).
- Sätt i en rektal sond (se Materialförteckning) för att övervaka kroppstemperaturen under operationen. Håll kroppstemperaturen vid 37 °C under hela operationen.
- Ta på dig ett par sterila handskar.
OBS: När de sterila handskarna har tagits på, rör inte vid andra osteriliserade områden eller föremål. - Skär ett hål (1-1,5 cm i diameter) i ett nytt sterilt engångsdraperi med steriliserad oftalmisk sax. Placera det sterila draperiet över musen och se till att det ohåriga arbetsfältet är synligt genom hålet.
OBS: Detta steg gör det möjligt för operatören att undvika att röra andra osteriliserade områden, vilket hjälper till att upprätthålla sterila förhållanden under operationen.
3. Förträngning av tvärgående aorta
- Gör ett 1,5 cm vertikalt hudsnitt i nivå med det suprasternala hacket (figur 2B) med skalpellblad. Expandera hudsnittet ner till bröstvinkelns nivå.
OBS: Det suprasternala skåran är ett hack som ligger på den övre kanten av manubrium sterni. Det är en ytsymbol som kan detekteras när mushår tas bort (figur 2B). Sternvinkeln är skarven mellan manubrium sterni och corpora sterni. När bröstbenet exponeras presenteras det som en horisontell vit linje på bröstbenet på samma nivå som costa secunda (figur 2C). - Separera försiktigt huden och ytlig fascia och exponera luftstrupen och proximal sternal. Gör försiktigt ett 3-4 mm längsgående mittlinjesnitt mot bröstbenet, från överkanten till bröstbensvinkeln (figur 2D).
OBS: Snittet får inte överstiga bröstvinkeln, eftersom det finns risk för att orsaka akut pneumotorax i musen. - Lyft försiktigt bröstbenet med pincett och thymus och arcus aortae under den. Använd försiktigt raka pincett och dissekera målkärlet och vävnaderna runt det.
- Håll i den tidigare självtillverkade upprullningsdonet (steg 1.4) som innehöll en snara på änden av användarens högra hand.
- För försiktigt snaran på den självtillverkade upprullaren under aortan mellan den vänstra gemensamma halspulsådern och ursprunget till den högra innominerade artären (figur 2E).
- För den självtillverkade upprullaren till vänster för att skona höger hand för andra instrument.
- Med mikroskopisk pincett i höger hand, passera en 7-0 silkesutur genom virveln på snaran i slutet och dra ut upprullningsdonet. Detta gör det möjligt att lämna silkesuturen runt artären för ytterligare ligering (figur 2F).
OBS: Var försiktig och dra inte aortabågen för mycket från sin ursprungliga position. - Placera en 27 G nål parallellt med aortan och bind suturen runt nålen och aortan (figur 2G,H).
OBS: Skenproceduren bör vara densamma, förutom att det inte finns någon aortaligering. - Håll fast vid 27 G-nålen med oftalmisk pincett och en annan pincett som håller knuten knuten till 27 G-nålen och aortan. Dra snabbt men försiktigt ut 27 G-nålen ur ligeringen (bild 2H).
OBS: Knuten får inte vara för hårt, annars blir det inte lätt att dra ut nålen. Var försiktig när du drar ut nålen vid bristning av aortan. - Suturera huden med 4-0 syntetisk monofilamentsutur i ett avbrutet suturmönster (figur 2I).
4. Postoperativ vård
- Placera musen på en varm dyna (se Materialförteckning) och vänta tills den återupplivas. I allmänhet återupplivas musen på cirka 60 minuter.
NOTERA: Djuret får inte lämnas utan uppsikt förrän det återfått tillräckligt medvetande för att kunna ligga kvar i den huvudsakliga liggytan. - Subkutant injicera 0,5 ml varm saltlösning och övervaka djurens flytande homeostas.
OBS: Detta steg förhindrar djur från uttorkning och hypovolemisk cirkulationsstatus. - Applicera erytromycinsalva på sårytan varje dag i 3 dagar.
- För postoperativ smärtbehandling, administrera 1 mg/l lokalbedövningsmedel av buprenorfin parenteralt till snittstället (se Materialförteckning).
- Postoperativt, övervaka musen för tecken på infektion och försämring (undernäring, böjd hållning och rufsig päls).
OBS: Djur som genomgått operation återlämnas inte till sällskap med andra djur förrän de är helt återställda.
5. Ultraljud
- Bekräfta framgångsrik ligering av tvärgående aorta genom att beräkna blodflödeshastigheten via ett ultraljudsavbildningssystem12,13 (24 MHz, se materialförteckning) 28 dagar efter operationen.
- Bedöva djuret med 4,5% isofluran i 20% syreberikad luft och behåll med 0,5% isofluran i 20% syreberikad luft.
- Placera musen i ryggläge och fixera dess extremiteter på elektroden med tejp.
- Använd hårborttagningskräm, ta bort brösthåret och applicera ett ultraljudskopplingsmedel på bröstet.
- Luta plattformen åt vänster så långt som möjligt. Medan du håller sonden i vertikalt läge, sänk den gradvis längs den högra parasternala linjen på bröstet med skåran som pekar på djurets haka.
- Under instrumentets B-läge, justera X- och Y-axeln tills aortabågen och förträngningsstället är tydligt synliga.
- Klicka på knappen Pulse Wave Doppler för att växla till pulsvågsläge.
- Justera den streckade markörprovsvolymrutan distalt till den trånga platsen och hitta den stenotiska strålen med högsta hastighet.
- Klicka på knappen Pulse Wave Doppler igen för att få vågformen för aortaflödet och mäta topphastigheten. Beräkna blodflödeshastigheten enligt vågmönstrets topp (figur 3A, B).
- Ställ in kameran på B-läge. Vila plattformen i horisontellt läge. Vrid sonden 30° till vänster parasternal linje.
- Justera X- och Y-axeln för att få en kort axelvy. Tryck på M-läge för att visa indikatorlinjen och klicka på Cine Store för att spara bilden för senare mätning av hjärtväggstjocklek, kammardimension och ejektionsfraktion.
OBS: Formeln för beräkning av ejektionsfraktion: 100% * ((LV Vol;d - LV Vol;s) / LV Vol;d). Formeln för beräkning av hjärtminutvolym: Slagvolym * Hjärtfrekvens (vid den första dragna ramen) / 1000. De flesta index som ejektionsfraktion och hjärtminutvolym kan mätas automatiskt via ultraljudsbildsystemets programvara. LV Vol;d: diastolisk volym av vänster kammare. LV Vol;s: systolisk volym av vänster kammare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter framgångsrik TAC-operation upptäcktes trycköverbelastning med hjälp av ett ultraljudsbildsystem. Fyra veckor efter operationen utvecklar möss nedsatt hjärtfunktion. I den aktuella studien validerades effekten av TAC-kirurgi via ejektionsfraktion (EF), fraktionerad förkortning (FS), vänster kammarmassa (LV-massa) och vänster ventrikulär innerdiameter (LVID) hos möss som genomgick TAC-kirurgi efter 4 veckor. EF reducerades signifikant hos TAC-möss efter 4 veckor jämfört med skenmöss (47 % ± 10 % jämfört med 78 % ± 4 %, p < 0,0001) (figur 4A). LV-massan var signifikant förhöjd hos TAC-möss (158,1 ± 50,5 jämfört med 91,8 ± 21,7 mg, p = 0,0226) (figur 4B). FS minskade signifikant hos TAC-möss (23 ± 5 jämfört med 46 % ± 3 %, p < 0,0001) (figur 4C). LVID var signifikant förhöjt hos TAC-möss (2,88 ± 0,39 jämfört med 1,81 ± 0,52 mm, p = 0,0044) (figur 4D). Data representerar sex möss vardera för TAC- och Sham-grupper. På grund av de små invasiva procedurerna är överlevnadsgraden ganska hög och huvudsakligen beroende av blödning, vilket kan minskas till mindre än 5% för en skicklig artist. När den är fullt behärskad är den allmänna överlevnaden hos C57BL / 6J-möss efter 4 veckor över 95%. Ett oparat t-test utfördes för att jämföra bluff- och TAC-grupperna. Alla data presenteras som medelvärde ± SEM (felstaplar).
Figur 1: Självgjord snara som innehåller upprullningsdon för att passera silkesutur runt aortabågen . (A) Översikt över upprullningsdonet. (B) Detalj av upprullningsdonet. Pilen indikerar snaran för siden att passera igenom. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Bilder av TAC-operationen . (A) Rygglägesmus fixerad med tejp och sutur. b) Sterilt draperi som endast visar operationsområdet. (C) 1,5 cm vertikalt snitt i huden. Den röda pilen indikerar en sternal ängel. (D) Längsgående snitt i mittlinjen som gjordes till bröstbenet. (E) Bild som visar snaran på det egentillverkade upprullningsdonet som passerar under aortan. (F) Bild som visar 7-0 silkesuturen som passerar genom virvelslingan. (G) En 27 G nål som placerades parallellt med aortan. H) Ligering av aortan med 27 G nål. Den vita pilen indikerar en ligeringsknut. (I) Suturerad hud med 4-0 sidensutur. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Representativ bild från ultraljudsavbildningssystem av sken- och TAC-möss efter 4 veckor . (A) Pulsad vågdoppleravbildning av skenaortabåge. (B) Pulsad vågdoppleravbildning av aortabågen efter TAC. (C) M-lägesbild av skenmus som beräknar EF, LV-massa, väggtjocklek och LVID. (D) M-lägesbild av TAC-mus som beräknar EF, LV-massa, väggtjocklek och LVID. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Hjärtfunktion mätt via ultraljudsbildsystem. a) Ejektionsfraktion (EF) hos mössen i två grupper. (B) Mössens vänstra kammarmassa (LV-massa) var i två grupper. (C) Fraktionerad förkortning (FS) av mössen i två grupper. (D) Mössens inre diameter (LVID) i vänster kammare i två grupper. *p < 0,05, **p < 0,005, ***p < 0,0005. Data representerar sex möss per grupp. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Induktionen av ihållande trycköverbelastning kan gradvis orsaka hjärthypertrofi och hjärtsvikt. Denna modell har använts i många laboratorier runt om i världen14,15,16. Protokollet gav en förbättrad TAC-metod som inte behöver mikrokirurgiska färdigheter eller mekanisk ventilation.
Det viktigaste steget i detta protokoll är att passera silkesutur under aortabågen. När snaran har hakat aortabågen måste alla rörelser vara försiktiga för att minska onödig dragkraft till artären. Suturen runt aortan får inte heller vara för snäv vid svårigheter när du drar ut distansen. Efter operationen är riklig mat och vatten också viktigt för musen att återhämta sig snabbt.
Tidigare manuskript har tillhandahållit andra metoder för TAC. Eichhorn et al. publicerade en sluten bröstmetod som ligerar den tvärgående aortan10. Hela proceduren gör att revbenen kan förbli intakta, vilket orsakar mycket litet trauma. Zaw et al. tillhandahöll en TAC-metod utan att komma in i pleurhålan17. Tavakoli et al. presenterade en minimalt invasiv tvärgående aortaförträngning som inte behöver intubering och ventilation11. Alla ovanstående tekniker kräver mikrokirurgiska färdigheter. Dessutom tillhandahöll Lao et al. en metod för att producera TAC-modeller med absorberbara suturer18. Protokollet i denna studie erbjuder ett alternativt sätt att snabbt (inom 10 min) genomföra TAC-kirurgi som inte behöver fungera under ett mikroskop. Att minimera kirurgiskt trauma gynnar mössen och minskar förvirrande faktorer under experimentet. Till skillnad från modellen med öppen bröstkorg är denna modell minimalt invasiv och påverkar inte musens normala andningsdynamik. När den är helt behärskad är överlevnadsgraden för denna teknik över 95%. Det behöver inte heller mekanisk ventilation och mikroskopisk kirurgi färdigheter; En självtillverkad återanvändbar upprullare kommer att göra allt trick och undvika systemiska inflammatoriska effekter inducerade av ventilation19. Alla dessa tillsammans förenklar driftsproceduren avsevärt.
Det finns vissa begränsningar med denna teknik. Den akuta ökningen av efterbelastning återspeglar inte helt den gradvisa utvecklingen av arteriell hypertoni. Skillnaderna i patofysiologi mellan multifaktoriella hjärtsviktsmusmodeller och kliniska hjärtsviktspatienter har väckt oro bland forskare20. Patofysiologin som presenteras hos möss kan inte tillämpas fullständigt på människor.
Sammanfattningsvis ger detta protokoll ett alternativt förfarande för att genomföra TAC, vilket kan underlätta utredare när de inducerar hjärtsvikt eller hjärthypertrofi hos möss.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarade att det inte finns några intressekonflikter.
Acknowledgments
Detta arbete finansieras av National Natural Science Foundation of China (NSFC 81822002). Vi tackar alla medlemmar som deltagit i detta arbete.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4-0 nonabsorbable suture | Jinhuan | HM403 | Used for suturing the skin |
| 5 mL syringe | Haifuda Technology Co., Ltd. | BD-309628 | Used for making snare containing retractor |
| 7-0 nonabsorbable suture | Jinhuan | HM701 | Used for aorta ligation |
| Animal temperature monitor | Kaerwen | FT3400 | Used for monitoring body temperature |
| Buprenorphine | Sigma | B-044 | Used for post-surgical pain treatment |
| Depilatory cream | Veet | N/A | Used for remove body hair from the surgical area |
| Heating Pad | Xiaochuangxin | N/A | Used for maintaining body temperature |
| Ibuprofen | MCE | HY-78131 | Used for post-surgical pain treatment |
| Iron wire (0.5 mm) | Qing Yuan | Iron wire #26 | Used for making snare containing retractor |
| Microscopic tweezers | RWD | F12006-10 | Used for penetrating and separating the tissue to open operation space |
| Needle holder | RWD | F12005-10 | Used for pinching off the tip of gauge needle and blunting it |
| Ophthalmic forceps | RWD | F14012-10 | Used for holding skin and other tissues |
| Ophthalmic scissors | RWD | S11001-08 | Used for making sking incision of mouse |
| Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | Used for mouse anesthesia |
| Sterile operating mat | Hale & hearty | 211002 | Used for placing animal during surgery |
| Ultra-sound imaging system | Fujifilm visualsonics | vevo1100 | Used for measure the blood flow velocity, left ventricular wall thickness and ejection fraction, https://www.visualsonics.com/product/imaging-systems/vevo-1100 |
References
- Heidenreich, P. A., et al. AHA/ACC/HFSA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Joint Committee on Clinical Practice Guidelines. Circulation. 145 (18), 895 (2022).
- McDonagh, T. A., et al. ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure. European Heart Journal. 42 (36), 3599 (2021).
- Lv, B., et al. Induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice. Journal of Visualized Experiments. (179), e63257 (2022).
- Curaj, A., Simsekyilmaz, S., Staudt, M., Liehn, E. Minimal invasive surgical procedure of inducing myocardial infarction in mice. Journal of Visualized Experiments. (99), e52197 (2015).
- Nakamura, M., Sadoshima, J. Mechanisms of physiological and pathological cardiac hypertrophy. Nature Reviews Cardiology. 15 (7), 387-407 (2018).
- Wang, H., et al. Bibliometric analysis on the progress of chronic heart failure. Current Problems in Cardiology. 47 (9), 101213 (2022).
- Riehle, C., Bauersachs, J. Small animal models of heart failure. Cardiovascular Research. 115 (13), 1838-1849 (2019).
- Melleby, A. O., et al. A novel method for high precision aortic constriction that allows for generation of specific cardiac phenotypes in mice. Cardiovascular Research. 114 (12), 1680-1690 (2018).
- Rockman, H. A., Wachhorst, S. P., Mao, L., Ross, J. ANG II receptor blockade prevents ventricular hypertrophy and ANF gene expression with pressure overload in mice. The American Journal of Physiology. 266, 2468-2475 (1994).
- Eichhorn, L., et al. A closed-chest model to induce transverse aortic constriction in mice. Journal of Visualized Experiments. (134), e57397 (2018).
- Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. Technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy. Journal of Visualized Experiments. (127), e56231 (2017).
- Lang, R. M., et al. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. Journal of the American Society of Echocardiography. 28 (1), 1-39 (2015).
- Li, L., et al. Assessment of cardiac morphological and functional changes in mouse model of transverse aortic constriction by echocardiographic imaging. Journal of Visualized Experiments. (112), e54101 (2016).
- Wang, X., et al. ATF4 protects the heart from failure by antagonizing oxidative stress. Circulation Research. 131 (1), 91-105 (2022).
- Li, J., et al. GCN5-mediated regulation of pathological cardiac hypertrophy via activation of the TAK1-JNK/p38 signaling pathway. Cell Death & Disease. 13 (4), 421 (2022).
- Syed, A. M., et al. Up-regulation of Nrf2/HO-1 and inhibition of TGF-beta1/Smad2/3 signaling axis by daphnetin alleviates transverse aortic constriction-induced cardiac remodeling in mice. Free Radical Biology and Medicine. 186, 17-30 (2022).
- Zaw, A. M., Williams, C. M., Law, H. K., Chow, B. K. Minimally invasive transverse aortic constriction in mice. Journal of Visualized Experiments. (121), e55293 (2017).
- Lao, Y., et al. Operating transverse aortic constriction with absorbable suture to obtain transient myocardial hypertrophy. Journal of Visualized Experiments. (163), e61686 (2020).
- Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines. European Respiratory Journal. 17 (3), 488-494 (2001).
- Withaar, C., Lam, C. S. P., Schiattarella, G. G., de Boer, R. A., Meems, L. M. G. Heart failure with preserved ejection fraction in humans and mice: embracing clinical complexity in mouse models. European Heart Journal. 42 (43), 4420-4430 (2021).
