עבודה זו נועדה להעריך ולסקור את הליך הבדיקה הביולוגית של Artemia salina קטלניות, המזוהה גם כבדיקת קטלניות של שרימפס מלח. שיטה פשוטה וזולה זו נותנת מידע על הרעילות הכללית (הנחשבת להערכת רעילות ראשונית) של דגימות, כלומר, מוצרים טבעיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
קטלניות ביואסאי באמצעות ארטמיה סלינה L.
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מוצרים טבעיים שימשו מאז ימי קדם לייצור תרופות. כיום, יש שפע של תרופות כימותרפיות המתקבלות ממקורות טבעיים ומשמשות נגד שפע של מחלות. למרבה הצער, רוב התרכובות הללו מציגות לעתים קרובות רעילות מערכתית ותופעות לוואי. על מנת להעריך טוב יותר את הסבילות של דגימות נבחרות שעשויות להיות פעילות ביולוגית, שרימפס תמלחת (Artemia salina) משמש בדרך כלל כמודל במחקרי קטלניות. מבחן A. salina מבוסס על היכולת של התרכובות הביו-אקטיביות שנחקרו להרוג את המיקרו-סרטנים בשלב הזחל שלהם (nauplii). שיטה זו מהווה נקודת התחלה נוחה למחקרי ציטוטוקסיות, כמו גם לבדיקת רעילות כללית של מוצרים סינתטיים, סמי-סינתטיים וטבעיים. זה יכול להיחשב בדיקה פשוטה, מהירה, ובעלות נמוכה, בהשוואה למבחנים רבים אחרים (תאי מבחנה או זני שמרים, דגי זברה, מכרסמים) המתאימים בדרך כלל למטרות הנ"ל; יתר על כן, זה יכול להתבצע בקלות גם ללא כל הכשרה ספציפית. באופן כללי, בדיקת A. salina מייצגת כלי שימושי להערכת רעילות ראשונית של תרכובות נבחרות ולפיצול מונחה ביולוגית של תמציות מוצרים טבעיים.
מבוא
מוצרים טבעיים מצמחים, בעלי חיים או מיקרואורגניזמים היו תחום עניין הולך וגדל לאורך השנים בפיתוח מולקולות ביו-אקטיביות חדשות בגלל מגוון הפעילויות הביולוגיות והפרמקולוגיות שלהם1. עם זאת, תופעות הלוואי הקשורות, עמידות לתרופות או ספציפיות לא מספקת של הסוכנים, במיוחד כאשר הם משמשים כתרופות נגד סרטן, מייצגים את הגורמים העיקריים שיכולים להוביל לטיפול לא יעיל 1,2.
במהלך העשורים האחרונים התגלו מספר חומרים ציטוטוקסיים ממקור צמחי, חלקם משמשים כחומרים אנטי-סרטניים 1,2,3. בהקשר זה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת ציוד
- רכשו ציוד בקיעה זמין מסחרית. בחר מקום מתאים להגדרת ציוד הבקיעה (איור 2A). הנח את המיכל בצורת משפך בתמיכה השחורה (הכלולה בסט) וסובב את המשפך בכיוון מתאים כדי לראות את סימן הרמה ואת הברז.
- כדי ליצור ציוד הגירה בעבודת יד, חתכו את החלק העליון של שני בקבוקי פלסטיק בקוטר 0.5 ליטר (5.8 ס"מ) כדי לקבל גובה סופי של 12 ס"מ. צרו חור בקוטר 1.5 ס"מ בצד אחד בגודל 7 ס"מ מתחתית כל בקבוק והכניסו צינור גומי בקוטר 13 ס"מ (1.3 ס"מ חיצוני ו-0.9 ס"מ קוטר פנימי) בין שני הפתחים. אוטמים את הפתחים בדבק חם (איור 2B) ומשאירים לייבוש למשך 15 דקות; שים את הבקבוקים על משטח שטוח ומלא אותם במים....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הרעילות הכללית של כמה מוצרים טבעיים שנחקרו לאחרונה על ידי הקבוצה שלנו הוערכה באמצעות bioassay קטלניות שרימפס תמלחת. ארבע תמציות (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; PC- P. cylindraceus; ו- Pe- P. ecklonii) מהסוג פלקטרנתוס , הידוע בפעילותו נוגדת החמצון (תוצאות שלא פורסמו), נבדקו. בנוסף, שתי תרכובות טבעיות (1 ו-2) המתקבלות מפלקטרנתוס spp., ושלוש נגזרות סינתטיות למחצה (3, 4, 5; איור 3), המתואר בעבודה אחרת3, נחקר גם הוא.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במהלך השנים האחרונות, הקהילה המדעית הגבירה את תשומת הלב שלה למודלים חלופיים לבדיקות רעילות21. לצד A. salina lethality bioassay, מתודולוגיות אחרות מבוצעות בדרך כלל להערכת סבילות הדגימה וכוללות בדיקות ביולוגיות של בעלי חוליות (כגון מכרסמים), חסרי חוליות (כגון דגי זברה), שיטות במבחנה באמצעות זני שמרים או תאים, ובשיטות סיליקו 22,23,24,25 . לכל השיט.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים, כספי או אחר.
תודות
לזכרו של פרופסור אמילקר רוברטו.
עבודה זו נתמכה כספית על ידי Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, פורטוגל) תחת פרויקטים UIDB/04567/2020 ו- UIDP/04567/2020 המיוחסים ל- CBIOS ומענק דוקטורט SFRH / BD / 137671 / 2018 (ורה איסקה).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צלחות 24 בארות | Thermo Fisher Scientific, דנמרק | 174899 | Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 |
| רדיד אלומיניום | Albal-ניתן | לרכוש בסופרמרקט | |
| Artemio Set | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen גרמניה | 61066000 | ניתן לרכוש בחנויות לחיות מחמד |
| מיקרוסקופ דו-עיני | Ceti, בלגיה | 1700.0000 | Flexum-24AED, 220-240 וולט, בקבוקי 50 הרץ |
| - | 0.5 ליטר קוטר: 5.8 ס"מ; גובה: 12 ס"מ | ||
| ציסטות שרימפס מלח | JBL GmbH ושות' KG, D-67141, נויהופן גרמניה | 3090700 | ניתן לרכוש בחנויות לחיות מחמד |
| מלח שרימפס מלח | JBL GmbH ושות' KG, D-67141, נויהופן גרמניה | 3090600 | ניתן לרכוש בחנויות לחיות מחמד |
| דימתיל סולפוקסיד (DMSO) | כימיקלים VWR | CAS: 67-68-5 | 99% |
| טוהר טיפים ניתנים לניתוק | יהלום | F171500 | טווח נפח: 100 - 1000 ומיקרו; |
| L Eppendorf microtubes | מותג | 7,80,546 | מיקרו-צינורות, PP, 2 מ"ל, ביו-תעודה PCR איכות |
| בקבוק Erlenmeyer | כימיקלים VWR | 4,47,109 | נפח: 100 מ"ל |
| זכוכית | Normax | 3.2111654N | נפח: 1000 מ"ל |
| כפפות | גואנטים Luna | GLSP3-GraphPad | |
| Prism | GraphPad Software, סן דייגו, קליפורניה, ארה" | ב-GraphPad Prism גרסה 5.00 עבור Windows, www.graphpad.com, גישה אליו ב-5 בפברואר 2021; סטטיסטיקה מסחרית תוכנת אנליזה | |
| תוצרת בית א. סלינה גרוור | - | - | תוצרת בית: שני בקבוקי פלסטיק המחוברים בצינור |
| דבק חם | Parkside | PHP500E3 | 230 וולט, 50 הרץ, 25 וואט |
| אינקובטור | היידולף אינסטרומנטס, דנמרק | - | ציוד אחד Heidolph Unimax 1010 ואחד Heidolph Inkubator 1006 |
| אור | Roblan | SKYC3008FE14 | נורת לד |
| Micropipettes | כימיקלים VWR | 613-5265 | טווח נפח: 100 - 1000 & מיקרו; L |
| אשלגן דיכרומט (K2Cr2O7) | כימיקלים VWR | CAS: 7778-50-9 | משאבת טוהר 99% |
| ProAir a50 | JBL GmbH ושות' KG, D-67141, Neuhofen גרמניה | -כלול בערכת Artemio + 1 | |
| ערכת צינור גומי | - | -- | 1.3 ס"מ חיצוני וקוטר פנימי 0.9 ס"מ |
| מוט ערבוב | VWR כימיקלים | 441-0147 |  6 מ"מ, 250 מ"מ |
| טרמומטר | כימיקלים VWR | 620-0821 | 0 - 100 & deg; ג |
מקורות
- Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
- Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
